王倩倩，魏 平，孟景紅

強直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)是一種慢性進行性炎癥性脊柱關節(jié)病，其發(fā)病機制尚不明確，多種炎性細胞因子在疾病發(fā)展過程中發(fā)揮了重要的作用。Th9細胞主要分泌白介素9(interleukin-9，IL-9)[1-2]，該因子通過其受體IL-9R介導連接蛋白/信號轉導子和轉錄激活子(JAK/STAT)信號通路，是參與免疫應答和免疫調(diào)節(jié)的重要細胞因子，在自身免疫疾病中的作用受到廣泛關注。已有研究表明，Th9細胞及IL-9在類風濕性關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、系統(tǒng)性硬化癥等風濕性疾病中均表達異常[3-5]。本研究旨在測定AS患者血清中IL-9的表達水平，初步探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年10月—2013年4月在河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院免疫風濕科住院及門診治療的AS患者40例為AS組，診斷標準符合2010年國際脊柱關節(jié)病評價工作組(ASAS)脊柱關節(jié)炎新分類標準，其中男33例，女7例；年齡19～56歲，平均(31±9)歲；病程1個月～40年，平均(8.2±8.0)年。記錄患者的病程、C反應蛋白(CRP)、紅細胞沉降率(ESR)、Bath強直性脊柱炎活動性指數(shù)(BASDAI)等臨床指標。排除標準：合并其他結締組織?。蝗焉锘虿溉槠趮D女；合并心血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴重疾?。灰郧敖邮苣[瘤壞死因子α(TNF-α)藥物治療；精神病患者；正處于急慢性感染期間；惡性腫瘤患者。將患者根據(jù)BASDAI分為(BASDAI≤4)穩(wěn)定組12例、(BASDAI>4)活動組28例。另選擇同時期門診體檢的健康者24例為對照組，其中男18例，女6例；年齡23～41歲，平均(28±4)歲。兩組年齡及性別具有均衡性。

1.2 主要試劑和儀器 人IL-9酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒購于RD生物科學公司。主要儀器：全自動定量酶標儀(芬蘭Labsystems Multiskan MS 352型)、臺式離心機(北京離心機廠LDZ5-2)、電熱恒溫水溫箱(成都賽可隆機械設備有限公司HH-501)、加樣器槍頭、加樣器、計時器、紙巾、蒸餾水等。

1.3 方法

1.3.1 標本收集 AS組、對照組均于夜間禁食8 h以上，于清晨空腹坐位時經(jīng)肘靜脈采血約3 ml，室溫靜置20 min后離心分離血清,3 000 r/min,20 min(離心半徑135 mm)，收集上清液，放置于-20 ℃冰箱內(nèi)凍存待測。

1.3.2 ELISA法檢測血清IL-9水平 取上述凍存待測樣本放置于室溫下復融，通過ELISA雙抗體夾心法檢測IL-9水平。具體操作步驟嚴格按照ELISA說明書操作。

2 結果

2.1 血清IL-9水平比較 穩(wěn)定組和活動組患者血清IL-9水平高于對照組，活動組患者血清IL-9水平高于穩(wěn)定組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表1)。

2.2 AS患者血清IL-9水平與臨床指標的相關性 AS患者IL-9水平與CRP(r=0.529，P=0.000)、ESR(r=0.339，P=0.033)、BASDAI(r=0.623，P=0.000)均呈正相關，與病程無相關性(r=0.233,P=0.148)。

表1 各組血清IL-9水平比較

注：IL-9=白介素9；與對照組比較，*P<0.05；與穩(wěn)定組比較，△P<0.05

3 討論

目前國內(nèi)外關于IL-9的研究主要集中在過敏性疾病、系統(tǒng)性硬化癥等自身免疫疾病，與AS的臨床相關性研究報道較少。最初研究認為，IL-9是Th2類細胞因子，但其調(diào)節(jié)作用和生物活性不同于白介素4(IL-4)、白介素5(IL-5)、白介素13(IL-13)等Th2細胞因子。其受體IL-9R，主要分布在肥大細胞、T或B淋巴細胞、巨噬細胞、中性粒細胞、嗜酸粒細胞及支氣管上皮細胞等，因此IL-9在免疫系統(tǒng)里是一個多效的細胞因子，如感染時可與IL-13協(xié)同促進肥大細胞的募集和增殖，加重炎性反應[6]；誘導原始CD4+T細胞分化為Th17細胞[7]；與IL-4共同作用刺激B淋巴細胞分泌IgG和IgE型抗體等，在過敏性疾病(尤其是過敏性哮喘)中發(fā)揮著重要作用[8-9]。2008年12月，Veldhoen等[1]和Dardalhon等[2]兩個研究小組同時報道，CD4+初始T細胞在IL-4和轉化生長因子β(TGF-β)的共同刺激作用下分化為IL-9+白介素10(IL-10)+Foxp3-效應性T細胞，因此類細胞主要分泌IL-9，將其命名為Th9，之后研究證實，Th9細胞也可由TGF-β誘導分化的Th2細胞轉化而來。Dardalhon等[2]研究小鼠腸炎模型發(fā)現(xiàn)，Th9細胞不具有抑制炎癥功能，而是通過IL-9與各類效應性T細胞和細胞因子相互作用發(fā)揮調(diào)節(jié)免疫作用，使炎性細胞的數(shù)量上升并分泌一些炎性遞質(zhì)促進炎癥反應。目前IL-9與自身免疫疾病的發(fā)病機制關系尚不明確，本研究通過檢測AS患者外周血中IL-9的表達水平，初步探討其在AS疾病進展中可能發(fā)揮的作用，并分析該細胞因子與疾病活動及臨床指標的相關性。

本研究發(fā)現(xiàn)，AS患者血清IL-9水平明顯高于對照組，且AS活動組IL-9水平高于穩(wěn)定組，故推測IL-9水平的上調(diào)可能與AS的發(fā)病機制密切相關，并且能促進疾病炎癥進展。Tan等[10]試驗證實，過敏性哮喘患者體內(nèi)IL-9的表達水平明顯高于健康對照組，提出IL-9促進過敏炎癥反應，與哮喘呼吸道炎癥、氣道高反應性等特征有關。Sato等[3]研究系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠模型提出，在TGF-β存在的條件下，IL-9可以促進原始CD4+T細胞向Th17細胞分化，致Th17細胞顯著升高，推測IL-9可能通過對Th17細胞的調(diào)節(jié)在系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用，之后Yanaba等[4]研究表明，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血中IL-9的表達水平是增高的，但其與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的免疫學機制尚待進一步研究。崔冉等[5]研究類風濕關節(jié)炎患者外周血中Th9細胞的表達率及IL-9的表達水平時發(fā)現(xiàn)，患者體內(nèi)的含量明顯高于健康對照組，且隨著疾病的活動度增強而升高，推測Th9細胞的增多可能是類風濕關節(jié)炎發(fā)病的一個重要原因，并與疾病活動度一致，本研究得出的結果與之一致。

本研究結果還發(fā)現(xiàn)，IL-9水平與AS患者的BASDAI及CRP、ESR等炎性指標呈正相關，說明IL-9水平的上調(diào)可能導致病情活動，這也證實了IL-9具有促進炎癥反應的功能。而IL-9水平與病程無明顯相關性，表明該細胞因子參與了AS的整個疾病發(fā)展過程。Khan等[11]研究表明，類風濕關節(jié)炎患者在基線和不同時間點(3、6、9個月)接受利妥昔單抗治療后，對其血清樣本進行測定，結果顯示利妥昔單抗可以顯著下調(diào)IL-9的表達水平，減輕炎癥，緩解疾病進展，這一結論可以解釋IL-9不僅參與了疾病的炎癥反應，而且貫穿疾病的始終，推測IL-9是調(diào)節(jié)自身免疫疾病炎癥和高反應性的一種新的治療靶向。

綜上所述，AS患者外周血中IL-9水平明顯高于對照組，提示IL-9是一個與AS免疫發(fā)病機制密切相關的致炎細胞因子，且該細胞因子在AS患者中的表達水平與疾病活動度及臨床炎性指標呈正相關，表明IL-9在促進AS疾病炎癥進展中發(fā)揮了重要作用。

1 Veldhoen M,Uyttenhove C,van Snick J,et al.Transforming growth factor-beta′reprograms′the differentiation of T helper 2 cells and promotes an interleukin-9-producing subset[J].Nat Immunol,2008,9(12): 1341-1346.

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3 Sato K,Suematsu A,Okamoto K,et al.Th17 functions as an osteoclastogenic helper T cell subset that links T cell activation and bone destruction[J].J Exp Med,2006,203(12): 2673-2682.

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