李玉棠 薩仁圖雅 烏云格日勒 王月紅 阿日嘎太 水 靈 烏力吉木仁 斯楞格 薩其拉

（內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬人民醫(yī)院，呼和浩特，010020）

蒙醫(yī)溫針對局灶性腦缺血早期腦組織VEGF含量和腦水腫的影響

李玉棠 薩仁圖雅 烏云格日勒 王月紅 阿日嘎太 水 靈 烏力吉木仁 斯楞格 薩其拉

（內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬人民醫(yī)院，呼和浩特，010020）

目的：探討蒙醫(yī)溫針對大鼠局灶性腦缺血再灌注后腦組織VEGF水平、腦梗死體積，腦含水量的影響。方法：將雄性SD大鼠隨機(jī)分為蒙醫(yī)溫針組、針刺組、尼莫地平組、假手術(shù)組、模型組5組。采用改良線栓法建立大鼠中動脈阻塞再灌注模型，各組在造模成功1 h時進(jìn)行治療，1次d，假手術(shù)組和模型組不給于治療。各組大鼠在術(shù)后24 h進(jìn)行神經(jīng)功能評分及測腦組織VEGF水平和腦梗死體積及腦含水量。結(jié)果：假手術(shù)組無神經(jīng)功能缺損癥狀，蒙醫(yī)溫針組與各組比較腦組織VEGF含量有統(tǒng)計學(xué)意義，各組腦梗死體積、腦含水量與假手術(shù)組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義，蒙醫(yī)溫針組腦梗死體積、腦含水量與模型組比較有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：蒙醫(yī)溫針有改善大鼠局灶性腦梗死后的神經(jīng)功能和減輕腦水腫、降低腦梗死體積作用。蒙醫(yī)溫針治療缺血性腦卒中進(jìn)行早期干預(yù)具有十分重要的臨床意義。

蒙醫(yī)溫針療法；大腦中動脈阻塞再灌注；神經(jīng)功能；血管內(nèi)皮生長因子；腦水腫

缺血性腦卒中是主要的卒中類型，約占70～80%，而且我國缺血性腦卒中病例逐年增加和年輕化趨勢［1］。蒙醫(yī)溫針對缺血性腦血管病的治療作用好，能夠改善腦卒中后神經(jīng)功能缺損癥狀［2-6］。為進(jìn)一步了解蒙醫(yī)溫針早期治療缺血性腦卒中的機(jī)制，本次研究通過蒙醫(yī)溫針治療大鼠腦缺血早期作用，探討其對神經(jīng)功能缺損、腦梗死體積及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）表達(dá)的影響，為臨床應(yīng)用蒙醫(yī)溫針早期治療缺血性腦血管病提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物 將SD雄性大鼠［體重（280±20）g］，由中國解放軍醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗動物中心提供，動物許可證號：SCXK-（軍）2007-004。大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、模型組、藥物對照組、常規(guī)針刺組、蒙醫(yī)溫針組，16只組。

1.2 儀器與試劑 蒙醫(yī)溫針MYL-I治療儀，由內(nèi)蒙古中蒙醫(yī)科學(xué)技術(shù)責(zé)任有限公司提供；德國徠卡RM2016輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)；日本OlympusBX51顯微鏡；VEGF試劑盒、免疫組化試劑盒SP-9000購自北京環(huán)亞泰生物技術(shù)有限公司。

1.3 模型制備 采用Zea Longa［6］方法并加以改進(jìn)，制備急性腦缺血再灌注大鼠模型。假手術(shù)組只分離動脈，不結(jié)扎、插線。大鼠蘇醒后參照Zea Longa［7］方法評分。0分：未見神經(jīng)病學(xué)征象，無神經(jīng)功能缺損癥狀。1分：大鼠被提尾倒懸時，病灶右側(cè)前肢呈屈曲、抬高狀態(tài)，不能伸展右側(cè)前爪。2分：有向癱瘓側(cè)旋轉(zhuǎn)的征象，即行走右側(cè)轉(zhuǎn)圈。3分：有向病灶對側(cè)跌倒的征象，即行走困難并向右側(cè)傾倒。4分：不能自發(fā)行走，意識水平呈下降狀態(tài)。達(dá)到1～3分為造模成功，采用差額補(bǔ)充的方法以保證每組實(shí)驗動物例數(shù)。

1.4 干預(yù)方法 大鼠清醒后1 h進(jìn)行治療。蒙醫(yī)溫針組，選取頂會穴（位于從兩眉正中與兩耳葉上緣正中線，在頭頂?shù)慕徊嫣帲?、赫依穴（位于背部正中，第七頸椎與第一胸椎間，下凹正中以及左右兩側(cè)約5 mm處各有一穴位，），銀針刺入5mm，連接電熱針治療儀（電流為100 mA，溫度控制為40℃左右），留針30 min；常規(guī)針刺組，選取大椎、氣海、命門穴位，分別毫針直刺5 mm、2 mm、4 mm，留針30 min，留針期間每隔10 min行針1次；藥物對照組，按照尼莫地平片10.8 mg（kg· d）劑量，灌胃給藥1次。模型組、假手術(shù)組：常規(guī)飼養(yǎng)于籠內(nèi)，不進(jìn)行任何干預(yù)治療。

1.5 指標(biāo)檢測

1.5.1 神經(jīng)功能評定 參照Zea Longa［7］神經(jīng)功能評分標(biāo)準(zhǔn)評分。在造模成功24 h時進(jìn)行神經(jīng)功能評分，觀察大鼠的精神狀態(tài)、活動情況、飲食及毛發(fā)光澤度等。

1.5.2 標(biāo)本采集與檢測 腦梗死體積、腦組織含水量及腦指數(shù)的測定：各組大鼠神經(jīng)功能評分后隨機(jī)取8只，用水合氯醛腹腔內(nèi)注射麻醉后，迅速斷頭取腦，剔除嗅腦、低位腦干及小腦，稱重。-20℃冷凍10 min，腦組織做冠狀切片，厚度為2 mm左右，切成5片。腦片置于2%TTC溶液中，37℃避光孵育30 min。取出腦片用生理鹽水沖洗2次，10%甲醛固24 h后掃描，應(yīng)用IPP 6.0圖像分析軟件分析計算每張切片梗死面積和切片對側(cè)正常半球的面積，梗死嚴(yán)重程度定義為梗死面積對側(cè)半球面積，將各腦片的梗死面積與厚度的乘積進(jìn)行累加，獲得梗死體積，結(jié)果用百分?jǐn)?shù)表示。

將染色后的腦組織用濾紙吸干水分，立即稱取濕重，置于105℃烤箱內(nèi)烘干24 h至恒重后稱取干重。腦組織含水量（%）＝（腦濕重-腦于重）腦濕重× 100%。腦指數(shù)（%）＝腦重體重×100%。

腦組織勻漿制的備與VEGF的測定：動物麻醉后，迅速斷頭在冰盤上取腦，取缺血側(cè)大腦，去除小腦和延髓部分，距額極2.5 mm向后切取約10 mm腦組織，稱重后移入玻璃勻漿管中，按1∶9（wv）比例加入9倍體積的預(yù)冷生理鹽水，冰盤上勻漿。制備好的10%勻漿，4℃，500 rmin離心10 min，提取上清液，按照VEGF試劑盒說明操作，用ELISA法測定大鼠腦組織VEGF含量。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，成組、成對資料均數(shù)比較采用t檢驗，多組間比較采用oneway ANOVA分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠神經(jīng)功能評分比較 見表1，假手術(shù)組大鼠無神經(jīng)功能缺損癥狀。模型組和蒙醫(yī)溫針組比較，神經(jīng)功能評分有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 各組大鼠缺血再灌注后1 h、24 h神經(jīng)功能評分比較（n＝8，±s）

表1 各組大鼠缺血再灌注后1 h、24 h神經(jīng)功能評分比較（n＝8，±s）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與藥物對照組、常規(guī)針刺組比較，▲P＜0.05。

組別神經(jīng)功能評分（1 h、治療前）神經(jīng)功能評分（24 h、治療后）腦組織VEGF含量（pgm L）54.241 2±11.902 2模型組3.17±0.71 3.00±0.60 78.855 4±4.623 2*藥物對照組3.12±0.78*2.76±0.56△122.182 2±6.524 5△常規(guī)針刺組3.10±0.72*1.70±0.80△△154.891 0±14.284 4△蒙醫(yī)溫針組3.15±0.81*1.55±0.76△△181.117 8±23.252 6假手術(shù)組——△▲

2.2 各組大鼠缺血再灌注后腦梗死體積、腦組織含水量、腦指數(shù)及血清VEGF比較 見表2。

表2 各組大鼠腦組織含水量、腦指數(shù)、腦梗死體積及腦組織VEGF比較（n＝8，±s）

表2 各組大鼠腦組織含水量、腦指數(shù)、腦梗死體積及腦組織VEGF比較（n＝8，±s）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別含水量（%）腦指數(shù)腦梗死體積（%）假手術(shù)組0.761 2±0.009 1 0.757 0±0.034 6—模型組0.775 2±0.006 6△△0.842 2±0.056 4*77.30±2.62藥物對照組0.768 0±0.008 9△0.761 7±0.062 4△△74.33±2.36常規(guī)針刺組0.773 4±0.006 2 0.798 4±0.048 4 55.65±4.12△蒙醫(yī)溫針組0.768 2±0.005 6△0.782 8±0.062 2△34.93±3.23△△

3 討論

缺血性腦卒中在蒙醫(yī)學(xué)上屬薩病范疇，多見于老年人，主要因赫依偏盛引起，赫依與血相搏，氣滯、血瘀，導(dǎo)致氣血運(yùn)行與流通障礙為本病病機(jī)，繼而損傷腦部的黑脈并引起白脈之?！X之缺血、受損而致?。?］。由于老年人屬赫依偏盛型體質(zhì)，容易大腦、心臟等器官缺血，人體的三根和七素之間的動態(tài)平衡關(guān)系失調(diào)［9］。蒙醫(yī)溫針療法是用特制的銀針在人體的固定部位或其它部位給予針刺加溫灸刺激，達(dá)到預(yù)防、康復(fù)和治療疾病目的的一種蒙醫(yī)傳統(tǒng)療法［10］。本療法具有改善氣血運(yùn)行、散積消聚、改善臟腑功能、神志清明、改善氣血循行、調(diào)節(jié)赫依巴達(dá)干的功能失調(diào)等功效，且有療效快而簡便易行等優(yōu)點(diǎn)［8-10］。長期的臨床實(shí)踐可驗證其減輕腦損傷，促進(jìn)神經(jīng)功能康復(fù)，改善患者臨床癥狀等作用［5-6，11-12］。本次研究選用了會穴、赫依穴，頂會穴：主治巴達(dá)干、赫依性頭痛、青啞癥、神志不清、婦女赫依瘀癥、癲狂，由于赫依情志抑郁、熱邪竄于心及命脈等病癥，治療腦及心、命脈病多用此穴［10］；赫依穴：主治癲狂、顫抖、心悸、啞結(jié)、耳聾、頸項強(qiáng)直等各種赫依病，對心、腦、脊髓白脈病有獨(dú)特療效［10］。

蒙醫(yī)溫針療法有針刺與溫?zé)岽碳ぷ饔?。資料顯示，熱刺激作用于機(jī)體局部，可使組織溫度上升，在一定范圍內(nèi)血管擴(kuò)張，血流加速［13］。具有改善氣血循行、調(diào)節(jié)赫依巴達(dá)干的功能失調(diào)、提高機(jī)體免疫功能，激發(fā)調(diào)動和增強(qiáng)機(jī)體的抗病能力等作用［14］，具有抗炎、止痛，調(diào)節(jié)神經(jīng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)作用［15-16］。實(shí)驗性急性腦缺血時，腦內(nèi)可有大量微血栓形成，造成與急性腦血管疾病病理生理學(xué)相似的改變［17］。本實(shí)驗結(jié)果示大鼠腦缺血再灌注后腦指數(shù)、腦組織含水量和VEGF均明顯增加，腦組織形態(tài)學(xué)發(fā)生改變；而蒙醫(yī)溫針療法早期干預(yù)缺血性腦卒中可使減小腦指數(shù)、緩解腦水腫，促進(jìn)VEGF的產(chǎn)生；從而促進(jìn)腦組織的血液供應(yīng)，改善腦梗死后的神經(jīng)功能，有助于臨床癥狀的改善。這正與蒙醫(yī)溫針的傳統(tǒng)理論及臨床作用相吻合。

VEGF是促進(jìn)血管增生的重要因子，不僅可以誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、促進(jìn)微血管的形成，還能直接作用于多種類型的神經(jīng)細(xì)胞，發(fā)揮神經(jīng)營養(yǎng)及保護(hù)作用，可增強(qiáng)細(xì)胞活性和存活能力，并能促進(jìn)軸突再生［18-19］，蒙醫(yī)溫針作用于頂會穴、赫依穴，減輕腦水腫、腦組織梗死及神經(jīng)功能缺損，這可能與蒙醫(yī)溫針誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)VEGF，促進(jìn)腦微循環(huán)血液灌流，改善腦組織的缺血狀態(tài)，減輕半暗帶腦組織的缺血性損傷有關(guān)。

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（2014-09-14收稿 責(zé)任編輯：徐穎）

Effects on Mongolian Warm Acupuncture on VEGF Levels and Cerebral Edema of Brain Tissue in Early Focal Cerebral Ischemia

Li Yutang，Sarentuya，Wuyungerile Wangyuehong，Arigatai，Shuiling，Wulijimuren，Silengge，Saqila
（People's Hospital Affiliated to Inner Mongolia Medical University，Huhhot 010020，China）

Objective：To explore the effect of the Mongolian warm acupuncture on VEGF levels in brain tissue，infarct volume，brain water content in rats with cerebral ischemia after reperfusion.Methods：Male SD rats were randomly divided into Mongolian warm acupuncture group，acupuncture group，nimodipine group，sham operation group，and model group.Modified suture method was used to set up artery occlusion in rats occlusion and reperfusion model.Rats in each group except sham group and model group were treated for one hour once a day after being successfully modelled.The nerve function，VEGF levels in brain tissue，infarct volume and brain water content after24 hours of surgery were measured.Results：The sham operation group had no nerve functional defect symptoms，and Mongolian warm acupuncture group showed significantly different outcomes in VEGF levels in the brain tissue compared with other groups；infarct volume and brain water content in each group were significantly different from those of the sham operation group，and Mongolian warm acupuncture group had significant differences in terms of infarct volume and brain water content compared with the model group.Conclusion：Mongolian warm acupuncture can improve rat neurological function after focal cerebral infarction and ease cerebral edema and reduce infarct volume effect.Mongolian warm acupuncture has very important clinical significance to treat ischemic stroke early intervention.

Mongolian Warm Acupuncture Therapy；Middle cerebral Artery Occlusion and Reperfusion；Nerve Function；Vascular Endothelial Growth Factor

R246

A

10.3969j.issn.1673-7202.2014.12.022

內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金項目（編號：2012MS1148）