王國玉 李 偉 趙 翠 王浩宇

（河北省承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，承德，067000）

馬齒莧水提取物的平喘作用研究

王國玉 李 偉 趙 翠 王浩宇

（河北省承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，承德，067000）

目的：觀察馬齒莧水提取物（Water Extractof Portulaca Oleracea L，WEPO）平喘作用及對氣管平滑肌張力的影響。方法：采用超聲霧化磷酸組胺-氯化乙酰膽堿誘發(fā)豚鼠喘息模型，選取引喘潛伏期＜120 s豚鼠，隨機分為WEPO 1.25 g/kg、2.5 g/kg、5.0 g/kg（生藥）劑量組，陽性對照組（氨茶堿20 mg/kg）和空白對照組。以引喘潛伏期及因呼吸困難、窒息發(fā)生抽搐跌倒動物比率為指標(biāo)，評價WEPO的平喘作用；采用豚鼠離體完整氣管毛細管法，以毛細管液面高度的變化值（Δh）和為指標(biāo)，觀察WEPO對氣管平滑肌張力的影響。結(jié)果：WEPO低、中、高3個劑量組豚鼠引喘潛伏期分別為（108.2±19.1）s，（211.3± 45.2）s和（226.9±41.5）s，均明顯長于空白對照組（59.5±10.8）s（P＜0.05或P＜0.01），WEPO中、高劑量組發(fā)生抽搐跌倒動物比率分別為40%和30%，顯著低于空白對照組100%（P＜0.05）。WEPO低、中、高劑量組Δh值分別為（-5.02±1.03），（-8.78±2.04），（-10.32±2.24），與空白對照組（-0.5±0.21）比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；WEPO低、中、高劑量組值分別為（2.24±1.01），（2.96±1.42），（3.21±1.49）高于空白對照組（0.71±0.45）。結(jié)論：WEPO對豚鼠喘息模型有顯著的平喘作用，其作用與松弛氣管平滑肌，改善通氣量有關(guān)。

馬齒莧；水提取物；平喘；氣管平滑肌

馬齒莧是馬齒莧科馬齒莧屬一年生草本植物，分布廣泛，生長迅速［1］，營養(yǎng)豐富，含有多種營養(yǎng)物質(zhì)，為天然保健食品［2-3］；對于多種致病菌有較強的抑制作用，稱之為“天然抗生素”?！吨腥A人民共和國藥典》收載馬齒莧具有清熱解毒、涼血止血、止?。?］等作用，對于小兒百日咳、病毒性肝炎、扁平疣有治療作用，亦有升血鉀及收縮子宮的作用［5］，對于皮膚粗糙干燥、夜盲癥、矽肺、肺結(jié)核、皮炎、各種癰腫等治療有效?，F(xiàn)代藥理研究表明馬齒莧具有抗菌、抗病毒［6］、降血脂、降血糖、抗動脈硬化［7-8］，抗衰老、抗氧化、提高機體免疫力等多種作用［9］。民間應(yīng)用馬齒莧治療咳嗽、哮喘有明顯療效，且無不良反應(yīng)。目前未見關(guān)于馬齒莧平喘作用研究的報道，本研究采用超聲霧化磷酸組胺-氯化乙酰膽堿誘發(fā)的豚鼠哮喘模型觀察馬齒莧的平喘作用；采用離體氣管平滑肌實驗，初步探討馬齒莧對氣管平滑肌張力的影響，為其臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物 馬齒莧干燥地上部分采自河北省承德市，經(jīng)承德醫(yī)學(xué)院藥用植物研究室趙春穎副研究員鑒定為馬齒莧科植物Portulaca oleracea L.的干燥地上部分。藥材標(biāo)本保存于承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所藥理毒理研究室。WEPO的制備［10］：取干燥馬齒莧50 g，加入8倍量的蒸餾水浸泡3 h，煎煮30 min，過濾。濾渣加適量蒸餾水再煎煮30 min，過濾，合并濾液，減壓濃縮至100 mL，得馬齒莧水提取液（含生藥0.5 g/mL），備用，臨用時用蒸餾水稀釋為適當(dāng)濃度。

1.2 試劑 磷酸組胺（Histamine Diphospate，His），上海恒盛生物科技有限公司生產(chǎn)，批號：20100224：氯化乙酰膽堿（Acetylcholine Chloride，AchC），上海藍源生物科技有限公司生產(chǎn)，批號：20101024：氨茶堿溶液（Aminophylline，Ami）：內(nèi)蒙古蒙欣藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：100904。

1.3 實驗儀器 MacLab/4e生理記錄儀，恒溫離體浴槽，張力換能器均為澳大利亞AD Instrument生產(chǎn)。

1.4 實驗動物 豚鼠，雌雄兼用，體重160～180 g（平喘實驗）、300～350 g（離體氣管實驗）。由承德醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。

1.5 方法

1.5.1 平喘實驗［11］幼年豚鼠，體重160～180 g，雌雄兼用，分別置于4 000 m L容積的密閉鐘罩內(nèi)，以超聲霧化器噴霧2%氯化乙酰膽堿和0.1%磷酸組胺等容積混合液15 s，立即取出豚鼠，記錄豚鼠的引喘潛伏期（從噴霧開始到哮喘發(fā)作、呼吸極度困難，直至抽搐跌倒的時間），選取引喘潛伏期＜120 s豚鼠50只供試驗用。第2天將引喘潛伏期合格的豚鼠隨機分為5組：WEPO 5.0 g/kg、2.5 g/kg、1.25 g/kg組，Ami 20 mg/kg組及空白對照組。每組10只，灌胃給藥（ig），空白對照組ig等容積蒸餾水。連續(xù)給藥3 d，末次給藥后45 min，以藥前同樣方法引喘。記錄引喘潛伏期及發(fā)生抽搐跌倒動物數(shù)。不喘者引喘潛伏期以360 s計。

1.5.2 離體完整氣管實驗（毛細管法）［12］取體重300～350 g豚鼠60只，雄雌兼用，處死，快速取下從喉頭至氣管分叉處的整條氣管，置于盛有氧飽和Krebs-Henseleit營養(yǎng)液中，輕輕剝?nèi)テ渫庵芙M織，用營養(yǎng)液沖凈管腔內(nèi)容物，按照文獻方法［8］，將氣管固定于離體完整氣管描記裝置上。用注射器將整個系統(tǒng)充滿營養(yǎng)液，排出氣泡。將整個描記裝置放入20 mL恒溫麥?zhǔn)显〔蹆?nèi)，恒溫為37℃，從浴槽底部通入95%O2+5% CO2，15～20個氣泡/min，待毛細管內(nèi)液面恒定20 min，將此時液面作為藥前液面高度。分別給予不同劑量的WEPO（終濃度分別為300μg/mL，150μg/M l，75 μg/mL）；Ami（終濃度為30μg/mL）和His（終濃度為0.01μg/mL），空白對照組給等體積的營養(yǎng)液。記錄用藥后毛細管檢壓計內(nèi)液面高度，按文獻方法［13］計算給藥前后液面高度的變化值（Δh）及。

2 結(jié)果

2.1 WEPO對Ach-His誘發(fā)豚鼠喘息潛伏期的影響WEPO各劑量組動物的引喘潛伏期均顯著長于空白對照組（P＜0.05或P＜0.01），并有一定的劑量依賴關(guān)系，提示W(wǎng)EPO對氯化乙酰膽堿和磷酸組胺誘發(fā)豚鼠的喘息模型有抑制作用，結(jié)果見表1。

表1 WEPO對Ach-His誘發(fā)豚鼠喘息潛伏期的影響（n＝10，±s）

表1 WEPO對Ach-His誘發(fā)豚鼠喘息潛伏期的影響（n＝10，±s）

注：與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

分組劑量（g/kg）潛伏期（s）藥前A藥后潛伏期延長（%）空白對照-45.3±8.1 59.5±10.8 31.35 WEPO 1.25 41.8±5.7 108.2±19.1 158.85*WEPO 2.5 42.9±6.5 211.3±45.2 168.4**WEPO 5.0 45.2±7.4 226.9±41.5 181.3**Ami 0.02 45.6±8.1 278.0±33.9 232.4**

2.2 WEPO對喘息動物抽搐跌倒比率的影響 WEPO 2.5 g/kg和5.0 g/kg劑量組動物抽搐跌倒比率分別為40%和30%，顯著低于空白對照組（100%）；WEPO 1.25 g/kg組動物抽搐跌倒的比率為70%，低于空白對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。提示W(wǎng)EPO可減輕模型動物喘息的嚴(yán)重程度，結(jié)果見表2。

表2 WEPO對喘息動物跌倒比率的影響（n＝10，±s）

表2 WEPO對喘息動物跌倒比率的影響（n＝10，±s）

注：與空白對照組比較，*P＜0.05；與Ami組比較，△P＜0.05。

分組劑量（g/kg）跌倒動物數(shù)（n）跌倒比率（%）空白對照-10△20 100 WEPO 1.25 7△70 WEPO 2.5 4*40 WEPO 5.0 2*30 Ami 0.02 2*

2.3 WEPO對離體完整氣管環(huán)狀肌張力的影響

表3 WEPO對豚鼠離體完整氣管環(huán)狀肌張力的影響（n＝10，±s）

表3 WEPO對豚鼠離體完整氣管環(huán)狀肌張力的影響（n＝10，±s）

注：藥前與藥后比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與His比較，△△P＜0.01。

藥物劑量（μg/mL）液面高度（mm）藥前藥后Δh（mm）△■?h營養(yǎng)液對照3.48±1.60 24.76±5.1 24.24±3.71-0.5±0.21 0.71±0.45 WEPO 75 25.1±4.5 20.1±3.2-5.02±1.03*△△2.24±1.01 WEPO 150 24.6±3.7 15.8±4.1-8.78±2.04**△△2.96±1.42 WEPO 300 23.9±4.3 13.6±3.1-10.32±2.24**△△3.21±1.49 Ami 30 25.3±5.1 12.1±2.5-13.23±3.42**△△3.64±1.85 His 0.01 24.8±5.2 36.9±5.3 12.13±2.56**-

WEPO可濃度依賴性降低毛細管液面的高度，各濃度組Δh和均顯著低于空白對照組，提示W(wǎng)EPO具有顯著的松弛氣管環(huán)狀肌的作用，結(jié)果見表3。

3 討論

聯(lián)合應(yīng)用His和Ach誘發(fā)哮喘是一種常用哮喘模型，豚鼠是一種過敏體質(zhì)的動物，易于誘發(fā)哮喘，His和Ach通過引起豚鼠支氣管痙攣，誘發(fā)喘息，嚴(yán)重的致使動物窒息，導(dǎo)致抽搐跌倒，具有松弛氣管平滑肌作用的藥物可減輕喘息的程度，減少動物由于支氣管痙攣引起的窒息、抽搐跌倒的發(fā)生率。本研究結(jié)果顯示，WEPO延長引喘潛伏期，減少抽搐跌倒動物數(shù)，證明WEPO可抑制His、Ach誘發(fā)的支氣管痙攣，減輕支氣管痙攣的程度，說明馬齒莧對支氣管痙攣性喘息有明顯的抑制作用。

離體完整氣管毛細管實驗的基本原理是氣管的環(huán)狀肌張力改變時，氣管腔道容積發(fā)生改變，氣管的長度基本保持恒定。所以，毛細管檢壓計液面的高度變化（Δh）與腔道容積變化值（ΔC2）呈正比（Δh∝ΔC2）。環(huán)狀肌松弛時腔道容積增大，液面下降，反之，環(huán)狀肌收縮時，腔道容積減小，液面升高。因此，氣管環(huán)狀肌反應(yīng)與Δh的平方根（）呈比例變化，可更客觀的反應(yīng)腔道容積變化與液面改變的比例關(guān)系［13］。結(jié)果顯示，WEPO各濃度組檢壓計液面的高度顯著下降，Δh和值顯著大于空白對照組，說明其具有松弛氣管環(huán)狀肌，降低氣管平滑肌張力，擴大氣管腔道，改善氣管的通氣量，產(chǎn)生緩解喘息的作用。綜上結(jié)果證明馬齒莧具有較強的平喘作用，其作用與松弛氣管環(huán)狀肌密切相關(guān)。

哮喘是嚴(yán)重危害人類健康的常見病和多發(fā)病，哮喘病因復(fù)雜，包括病毒，細菌感染；過敏；某些藥物或刺激性物質(zhì)誘發(fā)的支氣管痙攣等，發(fā)病機制至今尚未完全明確［14］。目前臨床用于治療哮喘的藥物主要是β受體激動劑，M受體阻斷劑、磷酸二酯酶抑制劑等［15］，均通過興奮或抑制受體而產(chǎn)生松弛氣管平滑肌的作用，療效可靠，但作用單一，不良反應(yīng)較多，有許多禁忌證，限制其臨床應(yīng)用。

馬齒莧具有清熱解毒、抗病毒、抗菌、抗過敏，清除超氧自由基、提高機體免疫力等多種功效，近期研究證明，馬齒莧有明顯的鎮(zhèn)咳、祛痰、抗炎等作用，對哮喘可產(chǎn)生多環(huán)節(jié)、多層次的綜合性治療作用，且無明顯的不良反應(yīng)，資源豐富，價格低廉，是一種值得深入研究可開發(fā)的藥物。

［1］胡宗進.馬齒莧的開發(fā)利用［J］.中國野生植物資源，1996，15（2）：278-290.

［2］譚麗霞，周求良，尹建國，等.馬齒莧的營養(yǎng)成分分析及其開發(fā)利用［J］.中國野生植物資源，2000，19（21）：49-50.

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（2014-01-24收稿 責(zé)任編輯：王明）

Study on Anti-asthma of W ater Extract of Portulaca O leracea

Wang Guoyu，LiWei，Zhao Cui，Wang Haoyu
（Affiliated Hospital of Chengde Medical College Hebei Province，Chengde067000，China）

Objective：To evaluate the effects ofWEPO on the anti-asthma and on tension of tracheal smooth muscle.Methods：Asthmatic model was induced by ultrasonic atomization inhalation of histamine phosphate-acetylcholine chloride in guinea pig.The guinea pigswhose incubation period of asthmawas less than 120swere selected and divided randomly they into5 groupswhich were1.25 g/kg，2.5 g/kg，5.0 g/kg ofWEPO group，Am i20 mg/kg group and control group.To evaluate anti-asthma the latentperiod induced asthma，the numbers of tracheal smooth muscle，the height of liquid in the capillary was recorded，and the difference of height of liquid between before and after treated by WEPO（Δh）andwere computed.Results：The latent period induced asthma in low，medium and high -dose group were（108.2±19.1）s，（211.3±45.2）s and（226.9±41.5）s Respectively and these were lower than（59.5±10.8）s control group（P＜0.05 or P＜0.01）.In WEPOmedium and high-dose group the rate of asphyxia of animalswere 40%and 30%respectively，and thesewere significantly lower than in control group（P＜0.05）.In low，medium and high dose group，Δh were（-5.02 ±1.03），（-8.78±2.04），（-10.32±2.24）respectively and these were significantly lower than（-0.5±0.21）in control group（P＜0.05 or P＜0.01）.In low，medium and high-dose groupwere（2.24±1.01），（2.96±1.42），（3.21±1.49），these were significantly lower than（0.71±0.45）in control group（P＜0.05 or P＜0.01）.Conclusion：WEPO has significant anti-asthmatic effect and the effects are related with relaxation of tracheal smooth muscle and improve ventilation.

Portulaca oleracea L；Water extract；Relieving asthma；Tracheal smoothmuscle

R285.5

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.10.025

承德市科技局資助項目（編號：20122158）

王國玉（1980—），女，河北省承德市人，醫(yī)學(xué)碩士，承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院主治醫(yī)師，主要研究方向：哮喘的治療，E-mail：wgy031213＠163.com

王浩宇（1978—），主治醫(yī)師，承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，主要研究方向：哮喘的治療