王林元 陳紹紅 屈勝勝 李 偉 黃銀峰 張建軍

（北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京，100029）

巴西莓對(duì)急性酒精中毒小鼠的解酒及保肝作用研究

王林元 陳紹紅 屈勝勝 李 偉 黃銀峰 張建軍

（北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京，100029）

目的：研究巴西莓解酒防醉及對(duì)急性酒精性肝損傷的影響。方法：急性酒精中毒實(shí)驗(yàn)：小鼠按0.15 mL/10 g灌胃50%乙醇，建立急性酒精中毒動(dòng)物模型，觀(guān)察小鼠活動(dòng)狀況，醉酒潛伏期，醒酒時(shí)間。急性酒精性肝損傷實(shí)驗(yàn)：小鼠按0.12 mL/10 g灌胃50%乙醇，建立小鼠急性酒精性肝損傷模型，觀(guān)察巴西莓對(duì)小鼠肝細(xì)胞膜通透性，肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)等的影響。結(jié)果：巴西莓可以延長(zhǎng)醉酒潛伏期（P＜0.05），縮短醉酒動(dòng)物睡眠時(shí)間，且可降低血清ALT、AST（P＜0.01），升高肝臟GSH（P＜0.05）、SOD水平，降低肝臟MDA、TG含量（P＜0.05），結(jié)論：巴西莓具有解酒防醉作用，且對(duì)酒精性肝損傷具有一定的保護(hù)作用。

巴西莓；酒精中毒；肝損傷；抗氧化

巴西莓（英文名：Acai，阿薩伊）來(lái)源于棕櫚科植物阿薩伊棕櫚樹(shù)（Euterpe Oleraceae Mart.）的新鮮果實(shí)。巴西莓原產(chǎn)于南美，秘魯傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)用該植物治療糖尿病、發(fā)燒、脫發(fā)、出血、肝炎、黃疸、腎臟疾病、肝臟疾病、瘧疾、月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)期疼痛和肌肉酸痛等［1］。研究表明巴西莓主要具有降低氧化應(yīng)激、抗炎、調(diào)節(jié)免疫力、降低血脂、降低血糖等作用。目前巴西莓在世界范圍內(nèi)引起廣泛關(guān)注，具有巨大的開(kāi)發(fā)前景。

巴西莓已于2013年作為新資源食品引入我國(guó)［2］。鑒于國(guó)外有用巴西莓的相關(guān)產(chǎn)品減輕飲酒后的不適癥狀，本研究擬探討巴西莓的防醉及保肝作用，為將其開(kāi)發(fā)為解酒保肝產(chǎn)品提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 巴西莓凍干粉，由蒙維（上海）貿(mào)易有限公司提供，用蒸餾水調(diào)成糊狀置于膠體磨研磨，稀釋成0.16 g/mL、0.08 g/mL、0.04 g/mL的溶液；鹽酸納洛酮注射液，北京凱因科技有限公司（批號(hào)：20120107）；聯(lián)苯雙酯滴丸，北京協(xié)和藥廠(chǎng)（批號(hào)：11090203），用蒸餾水配成濃度為20 mg/mL的溶液。

1.2 試劑及儀器 95%乙醇，分析純，北京化工廠(chǎng)，批號(hào)：20110918，用時(shí)用蒸餾水稀釋到50%；GOT測(cè)定試劑盒，購(gòu)自南京建成生物研究所（批號(hào)：20121121）；GPT測(cè)定試劑盒，購(gòu)自南京建成生物研究所（批號(hào)：2121119）；GSH測(cè)定試劑盒，南京建成生物研究所（批號(hào)：20120629）；SOD測(cè)定試劑盒，購(gòu)自南京建成生物研究所（批號(hào)：20121119）；TG測(cè)定試劑盒，購(gòu)自北京北化康泰臨床試劑有限公司（批號(hào)：20121105）；JMS膠體磨，廊坊市冠通機(jī)械有限公司；752-C紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)：上海第三分析儀器廠(chǎng)；WD-2102A型自動(dòng)酶標(biāo)儀：北京六一儀器廠(chǎng)；CM1850冰凍切片機(jī)，上海徠卡儀器有限公司；Nikon Eclipse Ti-SR倒置熒光顯微鏡，日本尼康。

1.3 動(dòng)物 健康雄性昆明種小鼠，體重（20±2）g，由斯貝福（北京）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK（京）2011-0004。

1.4 方法

1.4.1 巴西莓對(duì)急性酒精中毒小鼠翻正反射的影響

雄性小鼠隨機(jī)均分成模型組，鹽酸納洛酮組，巴西莓凍干粉0.4 g/kg，0.8 g/kg，1.6 g/kg 3個(gè)劑量組，每組16只。實(shí)驗(yàn)前12 h禁食不禁水，模型組按0.1 mL/10 g灌胃給予生理鹽水，巴西莓凍干粉組按0.1 m L/10 g灌胃給予不同濃度巴西莓凍干粉（0.4 g/kg，0.8 g/kg，1.6 g/kg），30 min后，模型組與巴西莓凍干粉組小鼠按0.15 mL/10 g分別灌胃給予50%乙醇，30 min后陽(yáng)性藥組腹腔注射鹽酸納洛酮2 mg/kg。觀(guān)察小鼠活動(dòng)狀況，以翻正反射消失時(shí)間為醉酒潛伏期，翻正反射恢復(fù)時(shí)間為醒酒時(shí)間。

1.4.2 巴西莓對(duì)急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用 所用動(dòng)物隨機(jī)分成正常對(duì)照組、模型組，聯(lián)苯雙酯組，巴西莓凍干粉0.4 g/kg，0.8 g/kg，1.6 g/kg組，每組10只。正常對(duì)照組和乙醇模型對(duì)照組均0.1 mL/10 g給予蒸餾水，陽(yáng)性對(duì)照組給予聯(lián)苯雙酯200 mg/kg，巴西莓凍干粉組按0.1 mL/10 g灌胃給予不同濃度巴西莓凍干粉（0.4 g/kg，0.8 g/kg，1.6 g/kg），連續(xù)30 d。末次經(jīng)口灌胃給予受試物0.5 h后，陽(yáng)性藥、巴西莓各劑量組和乙醇模型對(duì)照組經(jīng)口1次給予50%乙醇0.12 mL/10 g［3］，正常對(duì)照組給予蒸餾水。禁食16 h后，摘眼球取血，3 500 r/min離心10 min分離血清，按試劑盒方法檢測(cè)ALT、AST。取肝臟左葉，OCT包埋，并運(yùn)用冰凍組織切片油紅O染色技術(shù)對(duì)肝細(xì)胞進(jìn)行染色，觀(guān)察肝細(xì)胞脂肪滴的變化，利用Image Pro Plus 6.0軟件測(cè)定陽(yáng)性細(xì)胞累積光密度（IOD值），分析肝臟的脂肪病變程度［4］。取部分肝組織勻漿按試劑盒方法測(cè)定GSH、SOD、MDA、TG含量［5］。

1.5 統(tǒng)計(jì)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，結(jié)果以（±s）表示，數(shù)據(jù)采用采用單因素方差分析（One-WayANOVA）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和Dunnet t檢驗(yàn)，以P＜0.05作為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 巴西莓對(duì)急性酒精中毒小鼠翻正反射的影響

與模型組相比，巴西莓0.4 g/kg、0.8 g/kg、1.6 g/kg醉酒潛伏期延長(zhǎng)，巴西莓0.8 g/kg具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與模型組相比，巴西莓0.8 g/kg、1.6 g/kg的醒酒時(shí)間有所縮短（見(jiàn)表1）。

表1 巴西莓對(duì)急性酒精中毒小鼠翻正反射的影響（±s）

表1 巴西莓對(duì)急性酒精中毒小鼠翻正反射的影響（±s）

注：藥物組與模型組比較，△為P＜0.05。

組別劑量（g/kg）例數(shù)醉酒潛伏期（min）例數(shù)醒酒時(shí)間（min）15 16.4±13.5 6 298.1±66.6鹽酸納洛酮組0.002 13 22.8±19.7 13 232.7±40.6巴西莓低劑量組0.4 16 19.2±17.6 9 300.9±59.5巴西莓中劑量組0.8 13 36.2±24.0△6 297.1±33.4巴西莓高劑量組模型組1.6 15 23.7±16.7 9 261.1±85.5

2.2 巴西莓對(duì)急性酒精性肝損傷小鼠血清ALT、AST的影響 實(shí)驗(yàn)期間小鼠活動(dòng)正常，精神狀態(tài)、進(jìn)食以及排便情況未見(jiàn)異常。模型組的ALT、AST均明顯高于空白組（P＜0.01）。與模型組相比，巴西莓3個(gè)劑量組ALT值均顯著降低，其中0.4 g/kg（P＜0.01）、0.8 g/kg（P＜0.05）、1.6 g/kg（P＜0.01）；巴西莓0.4 g/kg、0.8 g/kg、1.6 g/kg AST值均顯著降低（P＜0.01），見(jiàn)表2。

表2 巴西莓對(duì)急性酒精性肝損傷小鼠血清ALT、AST的影響（±s，N＝10）

表2 巴西莓對(duì)急性酒精性肝損傷小鼠血清ALT、AST的影響（±s，N＝10）

注：模型組與空白組比較，**為P＜0.01；藥物組與模型組比較，△為P＜0.05，△△為P＜0.01。

組別劑量（g/kg）ALT（卡門(mén)氏單位）AST（卡門(mén)氏單位）27.9±1.3 31.5±4.3模型組51.7±19.9**51.1±6.5**聯(lián)苯雙酯組0.2 41.1±5.4△44.5±10.3△巴西莓低劑量組0.4 38.2±11.8△△39.6±8.6△△巴西莓中劑量組0.8 39.9±4.3△40.0±6.2△△巴西莓劑量組1.6 38.7±9.6△△39.8±3.6空白組△△

2.3 巴西莓對(duì)急性酒精性肝損傷小鼠肝臟勻漿GSH、SOD、MDA、TG的影響 模型組的GSH明顯低于空白組（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比巴西莓0.8 g/kg、1.6 g/kg GSH明顯升高，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。模型組的SOD低于空白組；與模型組相比巴西莓0.4 g/kg、0.8 g/kg、1.6 g/kg SOD具有一定的升高趨勢(shì)，但不明顯。模型組的MDA及TG均明顯高于空白組（P＜0.01）；與模型組相比，巴西莓0.4 g/kg、0.8 g/kg、1.6 g/kg MDA及TG明顯降低（P＜0.05）見(jiàn)表3。

2.4 巴西莓對(duì)急性酒精性肝損傷小鼠肝組織病理改變的影響 油紅O染色結(jié)果顯示，模型組大量棕色脂滴浸潤(rùn)到肝細(xì)胞中，肝細(xì)胞脂肪變性，模型組陽(yáng)性染色細(xì)胞的IOD值明顯高于空白組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）（見(jiàn)表4）。巴西莓各劑量具有一定的改善作用，巴西莓0.4 g/kg、0.8 g/kg、1.6 g/kg與模型組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.01）（見(jiàn)圖1）。

表3 巴西莓對(duì)急性酒精性肝損傷小鼠肝臟GSH、SOD、MDA、TG的影響（±s，N＝10）

表3 巴西莓對(duì)急性酒精性肝損傷小鼠肝臟GSH、SOD、MDA、TG的影響（±s，N＝10）

注：模型組與空白組比較，*為P＜0.05，**為P＜0.01；藥物組與模型組比較，△為P＜0.05。

組別劑量（g/kg）GSH（mgGSH/gprot）SOD（U/mgprot）MDA（nmol/mgprot）TG（nmol/L）3.79±0.85 462.0±95.2 1.24±0.36 0.54±0.24模型組2.49±0.58*402.8±58.6 4.75±2.03**1.22±0.42**聯(lián)苯雙酯組0.2 2.64±1.01 469.3±129.6 3.16±1.09△0.76±0.29△巴西莓低劑量組0.4 2.89±1.32 459.3±140.8 3.50±1.108△0.86±0.28△巴西莓中劑量組0.8 3.46±1.07△421.6±123.7 3.61±1.04△0.87±0.23△巴西莓高劑量組1.6 3.42±0.70△436.1±91.0 3.06±1.35△0.85±0.18空白組△

表4 巴西莓對(duì)急性酒精性肝損傷小鼠病理改變的影響（±s，N＝6）

表4 巴西莓對(duì)急性酒精性肝損傷小鼠病理改變的影響（±s，N＝6）

注：模型組與空白組比較，**為P＜0.01；藥物組與模型組比較，*為P＜0.05，△△為P＜0.01。

組別劑量（g/kg）IOD值44660.1±4890.1模型組71000.3±10092.6**聯(lián)苯雙酯組0.2 47525.6±3003.3△△巴西莓低劑量組0.4 63267.5±12470.7*巴西莓中劑量組0.8 61206.0±9089.0△△巴西莓高劑量組1.6 53071.9±14717.6空白組△△

圖1 巴西莓對(duì)急性酒精性肝損傷小鼠病理改變的影響

3 討論

回歸自然的熱潮使得各國(guó)競(jìng)相挖掘本民族的天然植物用于醫(yī)療保健。數(shù)百年來(lái)南美土著使用植物治療疾病成為一種傳統(tǒng)，而這些傳統(tǒng)草藥也越來(lái)越多的進(jìn)入國(guó)際市場(chǎng)，是傳統(tǒng)藥物學(xué)將科研轉(zhuǎn)化成生產(chǎn)力的成功范例［6］。近年來(lái)我國(guó)相繼引入了一些南美藥食兩用品種如巴西莓（阿薩伊果）、瑪咖等。它們做為新資源食品合法進(jìn)入我國(guó)，經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的檢驗(yàn)和審批，其安全性有充分的保證，如在我國(guó)成功引種，對(duì)繁榮我國(guó)經(jīng)濟(jì)具有重要意義。

隨著人民生活水平的提高，酒精的消費(fèi)逐年增加，酒精中毒造成的神經(jīng)及消化系統(tǒng)損害也與日俱增［7］，如何能利用世界各種植物資源開(kāi)發(fā)解酒保肝的藥物及保健品受到醫(yī)藥及食品行業(yè)的廣泛關(guān)注。進(jìn)入人體的乙醇對(duì)人體的損害是多方面的，一方面，大量飲酒后酒精的吸收大于代謝，過(guò)量的乙醇就會(huì)通過(guò)循環(huán)作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)而導(dǎo)致生理及行為異常，另一方面，乙醇在肝臟氧化代謝時(shí)產(chǎn)生大量的自由基，可引起肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，使肝細(xì)胞膜及細(xì)胞器結(jié)構(gòu)遭到破壞從而引起肝細(xì)胞代謝和功能的障礙，導(dǎo)致轉(zhuǎn)氨酶升高。乙醇在代謝過(guò)程中產(chǎn)生大量的乙醛，可以直接與肝臟內(nèi)的抗氧化物質(zhì)如還原型谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）結(jié)合降低其活性，造成內(nèi)源性抗氧化劑耗竭，產(chǎn)生大量的丙二醛（MDA）等氧化物，肝臟進(jìn)一步損傷，其脂肪代謝隨之發(fā)生紊亂，三酰甘油（TG）升高［8］。

巴西莓富含花青素，原花青素，黃酮，植物甾醇等成分［9］，其活性主要為抗氧化，抗炎，降脂作用等［10-12］。本研究顯示小鼠服用酒精前給予巴西莓可以延長(zhǎng)急性酒精中毒小鼠醉酒潛伏期，并縮短其昏睡時(shí)間，具有一定的解酒作用。巴西莓可以顯著降低急性酒精性肝損傷小鼠血清ALT、AST，改善肝功能。同時(shí)，可以升高SOD、GSH活性，且能降低MDA、TG含量，說(shuō)明巴西莓可以增強(qiáng)機(jī)體清除自由基能力，使肝臟受自由基攻擊程度降低，脂代謝趨于正常。病理結(jié)果也顯示巴西莓對(duì)急性酒精性肝損傷造成的肝臟脂代謝紊亂具有一定的改善作用。

我國(guó)傳統(tǒng)中藥很多具有保肝作用，如五味子，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，有收斂固澀，益氣生津，補(bǔ)腎寧心之功效［13］，是常用中藥之一。本研究保肝實(shí)驗(yàn)所用陽(yáng)性對(duì)照藥聯(lián)苯雙酯是合成五味子中木質(zhì)素類(lèi)成分五味子丙素的中間體，是我國(guó)研究五味子時(shí)創(chuàng)制的一種治療肝炎的降酶藥物［14］。

巴西莓是南美洲地區(qū)常用草藥［1］，其引入極大豐富了我國(guó)藥食同源原料資源。加強(qiáng)對(duì)這些品種的活性成分，藥理作用等方面的基礎(chǔ)研究，可以促進(jìn)傳統(tǒng)植物資源的有效利用，同時(shí)也促進(jìn)國(guó)外天然資源與我國(guó)特有中藥資源相融合，進(jìn)行更加合理的應(yīng)用。本研究表明巴西莓具有一定的解酒及保肝作用，其機(jī)制有待深入研究。

［1］許利嘉，肖偉，馬培，等.具開(kāi)發(fā)前景的南美洲常用草藥簡(jiǎn)介［J］.現(xiàn)代藥物與臨床，2011，26（2）：84-90.

［2］申海鵬.衛(wèi)生部關(guān)于批準(zhǔn)茶樹(shù)花等7種新資源食品的公告［J］.食品安全導(dǎo)刊，2013（1）：19-19.

［3］曾濤，王倩，于麗華，等.大蒜油對(duì)急性乙醇處理小鼠某些生化指標(biāo)的影響［J］.毒理學(xué)雜志，2008，22（1）：48-49.

［4］王聰，許玉芳，孫華毅，等.二氧化硫?qū)Ω咧曫B(yǎng)大鼠肝組織膽固醇水平的影響［J］.中華老年心腦血管病雜志，2010，12（6）：548-551.

［5］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范［S］.保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范，2003：135-139.

［6］肖培根，劉勇，肖偉.瑪卡-全球矚目的保健食品［J］.中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2006（4）：396.

［7］蘆志雁，李麗.解酲四逆散治療酒精性肝病的療效觀(guān)察［J］.中國(guó)藥物與臨床，2008，8（2）：155-156.

［8］Dey A，Cederbaum A I.Alcohol and oxidative liver injury［J］.Hepato，2006，43（S1）：S63-S74.

［9］Schauss A G，Wu X，Prior R L，et al.Phytochemical and nutrient composition of the freeze-dried Amazonian palm berry，Euterpe oleraceae Mart.（Acai）［J］.Journal of Agricultural and Food Chemistry，2006，54（22）：8598-8603.

［10］Kang J，Xie C，Li Z，et al.Flavonoids from acai（Euterpe oleracea Mart.）pulp and their antioxidant and anti-inflammatory activities［J］.Food Chem，2011，128（1）：152-157.

［11］Kang J，Li Z，Wu T，et al.Anti-oxidant capacities of flavonoid compounds isolated from acai pulp（Euterpe oleraceaMart.）［J］.Food Chem，2010，122（3）：610-617.

［12］Feio C A，Izar M C，Ihara SS，et al.Euterpe oleracea（acai）modifies sterolmetabolism and attenuates experimentally-induced atherosclerosis［J］.Jathero thro，2011，19（3）：237-245.

［13］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典.一部［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出報(bào)社，2010：61.

［14］劉耕陶.從五味子的研究到聯(lián)苯雙酯的發(fā)現(xiàn)［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1983，18（9）：714-720.

（2014-06-25收稿 責(zé)任編輯：張文婷）

The Detoxication and Protective Effect of Acai Against Acute A lcohol Toxication and Acute A lcohol Liver Injury in M ice

Wang Linyuan，Chen Shaohong，Qu Shengsheng，LiWei，Huang Yinfeng，Zhang Jianjun
（Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China）

Objective：To study the effects of Acai（Euterpe Oleraceae Mart.）on acute alcohol toxication and protective effecton acute alcohol liver injury inm ice.Methods：Acute alcohol toxication animalmodelwas established by alcohol gavaged（50%at15 mL/kg）. The acute liver injury animalmodelwasestablished by alcohol gavaged（50%at12mL/kg）.The serum levels of ALT，AST and the content ofMDA，TG，the activity of GSH，SOD in liver of themice weremeasured.Results：Acai can shorten the recovery time of rightening reflex compared with themodel groups（P＜0.05）.The groups of Acai significantly reduced the levels of serum ALT，AST（P＜0.01）which were induced by ethanol，and the content of MDA，TG（P＜0.05），the activity of GSH in liver were significantly different compared with those of themodel groups（P＜0.05）.Conclusion：Acaihas effectof relieving alcohol toxicity and a protectiveeffecton acute alcohol liver injury inmice and itsmechanism may relate to the capacity of anti-oxidant.

Acai；Ethanol；Toxication；Liver injury；Anti-oxidant

R285.5；R575

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.10.024

王林元（1961.10—），男，碩士，副教授，中藥開(kāi)發(fā)與產(chǎn)業(yè)化，Tel：（010）64287912，E-mail：wangly＠bucm.edu.cn