曾江，羅一鈞，彭海英

(贛州市第五人民醫(yī)院，江西贛州34100)

·檢驗(yàn)與臨床·

沉降式制片技術(shù)在痰找抗酸桿菌中的應(yīng)用

曾江，羅一鈞，彭海英

(贛州市第五人民醫(yī)院，江西贛州34100)

目的探討沉降式制片技術(shù)在痰找抗酸桿菌中的應(yīng)用優(yōu)勢。方法取晨痰標(biāo)本應(yīng)用沉降式制片技術(shù)與傳統(tǒng)痰涂片方法檢測做比較。結(jié)果在本次實(shí)驗(yàn)收集的93例痰找抗酸桿菌標(biāo)本中，通過沉降式制片技術(shù)診斷的陽性標(biāo)本為44例，陽性率為47.3%，而傳統(tǒng)方法制片技術(shù)診斷的陽性標(biāo)本為22例，陽性率為23.7%，經(jīng)卡方檢驗(yàn),χ2=11.37,P＜0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明沉降式制片技術(shù)診斷的陽性率高于傳統(tǒng)方法制片技術(shù)的陽性率。結(jié)論沉降式制片技術(shù)痰抗酸染色可避免紅細(xì)胞等干擾，使制片為較標(biāo)準(zhǔn)化，且其陽性率明顯高于傳統(tǒng)痰涂片法。

沉降式制片技術(shù)；痰涂片；抗酸桿菌

DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.038

結(jié)核桿菌屬分枝桿菌屬，傳統(tǒng)的抗酸桿菌檢查方法有厚涂片、薄涂片、漂浮法集菌涂片和培養(yǎng)法。痰涂片抗酸染色，鏡檢因其快速、簡便、費(fèi)用低，而成為臨床上常用的病原菌檢查方法[1-4]。有報(bào)道顯示血痰標(biāo)本涂片陽性率高達(dá)32.3%[5]，但疾控中心反復(fù)強(qiáng)調(diào)制片時勿挑取含血標(biāo)本，因?yàn)楹迈r血液的標(biāo)本中可見到被染色的紅細(xì)胞，易干擾痰涂片的鏡檢結(jié)果[6,7]。有文獻(xiàn)表明沉降式制片技術(shù)在痰脫落細(xì)胞檢查中可以有效的避免痰液中血液、口腔雜物等的影響[8]，因此本文就沉降式制片技術(shù)在痰找抗酸桿菌中的作用進(jìn)行觀察。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源2011年1月-2011年6月各科室痰找抗酸桿菌標(biāo)本共計(jì)93例。其中男52例，女41例，年齡17～80歲(36.5±8.56)歲，對每例患者標(biāo)本同時采取傳統(tǒng)方法制片和沉降式制片技術(shù)進(jìn)行抗酸桿菌檢查。

1.2 儀器與試劑LBP—2801自動樣本轉(zhuǎn)移機(jī)、OLYMPUS CX41、離心機(jī)、震蕩器及制片染色機(jī)，痰細(xì)胞專用保存液，Tris緩沖液，1，4-二硫代蘇糖醇，石炭酸復(fù)紅，3%鹽酸酒精，呂氏美蘭液。

1.3 傳統(tǒng)痰涂片抗酸染色方法

1.3.1 涂片用竹簽折斷的毛茬面挑取痰標(biāo)本，于玻片正面靠右端2/3處中央均勻涂抹成卵圓形痰膜，待自然干燥后做抗酸染色。

1.3.2 抗酸染色初染石炭酸復(fù)紅2～3滴，加熱3～5min，待標(biāo)本冷卻后用水沖洗；脫色3%鹽酸酒精脫色30s～1min；用水沖洗，復(fù)染堿性美蘭溶液復(fù)染1min，水洗，用吸水紙吸干即可。

1.4 沉降式技術(shù)制片制作

1.4.1 痰液處理方法(1)黏液稀釋液，加2毫升1，4-二硫蘇糖醇(DDT)化痰液于痰細(xì)胞保存瓶當(dāng)中,震蕩器震蕩15min左右,置痰液全部液化。(2)過濾標(biāo)本∶用LBP—2801自動樣本轉(zhuǎn)移機(jī)處理，除去痰液中的黏液絲及口腔中附帶的雜物。(3)收集樣品：將過濾標(biāo)本2600r/min離心5min,去上清液,震蕩細(xì)胞塊至充分混勻，靜置10min,如痰中帶有血液可多次緩沖液洗滌。

1.4.2 沉降制片將免涂玻片(廠家已制作的成品，玻片表面附有黏附劑)放置制片染色板上，并扣上制片染色艙。制成直徑大小為13mm的薄片。

1.4.3 抗酸染色在沉降式制片染色機(jī)設(shè)定好染色時間及順序。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，率的比較采用卡方檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

涂片背景比較：沉降式制片技術(shù)，背景清晰，染色深，抗酸桿菌分辨高且避免了紅細(xì)胞對制片染色干擾的問題。制片大小，厚薄均一致，無分層(圖1)。傳統(tǒng)涂片中含有黏液絲，雜物的干擾，大小不一致且有分層(圖2)。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：在本次實(shí)驗(yàn)收集的93例痰找抗酸桿菌標(biāo)本中，通過沉降式制片技術(shù)診斷的陽性標(biāo)本為44例，陰性標(biāo)本為49例，陽性率為47.3%，而傳統(tǒng)方法制片技術(shù)診斷的陽性標(biāo)本為22例，陰性標(biāo)本為71例，陽性率為23.7%，經(jīng)卡方檢驗(yàn),χ2=11.37,P＜0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說明沉降式制片技術(shù)診斷的陽性率高于傳統(tǒng)

圖1 沉降式制片技術(shù)涂片(抗酸染色，1×)(佳能5D2單反相機(jī)拍攝)

圖2 傳統(tǒng)制片技術(shù)涂片(抗酸染色1×)(佳能5D2單反相機(jī)拍攝)

3 討論

痰涂片抗酸桿菌鏡檢結(jié)果對診斷傳染性結(jié)核病是一項(xiàng)重要指標(biāo)。但由于傳統(tǒng)痰涂片方法受技術(shù)操作等多方面因素的影響。如含血液的痰標(biāo)本，口腔中的雜物，人為染色的差異性等。會造成結(jié)果的差異及假陰陽性的出現(xiàn)[9]。應(yīng)用沉降式制片技術(shù)制片染色，可避免人為制片的差異化，消除痰液中血液、口腔雜物等帶來的染色效果的影響[8,10,11]。從而提高痰抗酸桿菌的檢出率，充分發(fā)揮痰抗酸桿菌對結(jié)核病診斷作用的關(guān)鍵。

沉降式制片技術(shù)雖優(yōu)于傳統(tǒng)常規(guī)制片技術(shù)，但因需沉降式制片染色機(jī)及自動樣本轉(zhuǎn)移機(jī)等儀器，尚不能普及基層。但在結(jié)核病、傳染病等專科醫(yī)院筆者推薦此方法可以提高檢出的陽性率。

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R378.91+1,R446.5

B

1674-1129(2014)06-0746-02

2014-09-02；

2014-10-10)