蔡鵬威

(福建醫(yī)科大學(xué)省立臨床醫(yī)學(xué)院福建省立醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建福州350001)

·檢驗(yàn)與臨床·

中性粒細(xì)胞CD64定量檢測在感染性疾病檢測中的應(yīng)用

蔡鵬威

(福建醫(yī)科大學(xué)省立臨床醫(yī)學(xué)院福建省立醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建福州350001)

目的探討中性粒細(xì)胞CD64定量檢測在感染性疾病檢測中的應(yīng)用。方法選取382例ICU住院患者，將其分為非細(xì)菌感染組、局部感染組和膿毒血癥組，同期選取30例健康體檢，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測中性粒細(xì)胞CD64，同時檢測外周血白細(xì)胞計數(shù)(WBC)及中性粒細(xì)胞比例(NE%)、C反應(yīng)蛋白(CRP)和降鈣素原(PCT)。結(jié)果局部感染組和膿毒血癥組的中性粒細(xì)胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%均高于健康對照組及非細(xì)菌感染組(P＜0.05)，膿毒血癥組的中性粒細(xì)胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%高于局部感染組(P＜0.05)，中性粒細(xì)胞CD64的ROC曲線下面積最大(0.903)，當(dāng)其臨界值取1500 MESF時，敏感性為94.5%，特異性為90.6%。結(jié)論與PCT、CRP、WBC及NE%相比，中性粒細(xì)胞CD64可作為檢測和監(jiān)測感染性疾病的敏感指標(biāo)。

CD64；中性粒細(xì)胞；C反應(yīng)蛋白；降鈣素原；感染性疾?。涣魇郊?xì)胞術(shù)

DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.025

感染性疾病是臨床最常見的疾病之一，也是導(dǎo)致ICU病人死亡的主要原因之一，而在臨床診療過程中，細(xì)菌感染和非細(xì)菌感染性疾病常依靠外周血白細(xì)胞計數(shù)(WBC)及中性粒細(xì)胞比例(NE%)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、降鈣素原(PCT)等實(shí)驗(yàn)室檢查加以判斷。近年來，多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞CD64定量分析是早期診斷和鑒別細(xì)菌感染的可靠的敏感指標(biāo)。本研究通過對本院重癥ICU 382例標(biāo)本的中性粒細(xì)胞CD64進(jìn)行定量分析，探討中性粒細(xì)胞CD64對細(xì)菌感染的診斷價值。

1 材料與方法

1.1 研究對象選取本院2013年8月至2014年6月入院48 h內(nèi)ICU住院患者為研究對象，共382例，依據(jù)臨床癥狀和血培養(yǎng)結(jié)果分為3組：⑴非細(xì)菌感染組123例，男75例，女48例，年齡19～68歲；⑵局部感染組174例，男100例，女74例，年齡16～70歲，平均年齡44.1±10.3歲；⑶膿毒血癥組85例，年齡20～73歲，平均年齡43.7±12.5歲。正常對照組為我院健康體檢者30例，男18名，女12名，年齡16～69歲，平均年齡40.7±10.5歲。

1.2 標(biāo)本采集清晨采集空腹靜脈血4ml，其中2 ml于促凝管中，3000r/min離心10min，分離血清用于檢測CRP和PCT；采集2ml EDTA－K2抗凝靜脈血用于進(jìn)行血常規(guī)和中性粒細(xì)胞CD64的測定。

1.3 儀器與試劑中性粒細(xì)胞CD64檢測使用美國BD FACS Calibur流式細(xì)胞儀；CRP檢測使用西門子公司BNⅡ全自動特定蛋白儀；血常規(guī)采用日本Sysmex公司XE 5000型血液分析儀進(jìn)行分析，PCT檢測使用法國梅里埃公司的mini-VIDAS。QuantiBRITE PE標(biāo)準(zhǔn)微球和中性粒細(xì)胞CD64檢測試劑由美國BD公司生產(chǎn)；CRP檢測試劑為西門子公司配套試劑；血常規(guī)試劑為日本Sysmex公司配套產(chǎn)品，PCT為法國梅里埃公司配套試劑，都嚴(yán)格按照操作說明書操作。

1.4 中性粒細(xì)胞CD64的檢測方法QuantiBRITE PE標(biāo)準(zhǔn)微球是用PE標(biāo)記使用的，當(dāng)在同一臺流式細(xì)胞儀檢測QuantiBRITE PE標(biāo)準(zhǔn)微球后，因?yàn)橐阎總€抗體上和微球上標(biāo)記PE熒光分子的數(shù)量，就可將FL2坐標(biāo)軸上的熒光強(qiáng)度換算為每個細(xì)胞所結(jié)合PE分子的數(shù)量，故可通過每個細(xì)胞上PE熒光分子的數(shù)量而得出每個細(xì)胞結(jié)合抗體的數(shù)量，即單個細(xì)胞抗原結(jié)合數(shù)量(ABC)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法所有數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理。結(jié)果以x±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。繪制受試者工作特征(ROC)曲線，計算感染指標(biāo)的敏感性和特異性。

2 結(jié)果

2.1 非細(xì)菌感染組、局部感染組、膿毒血癥組及健康對照組中性粒細(xì)胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%檢測結(jié)果見表1。

局部感染組和膿毒血癥組的中性粒細(xì)胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%均高于健康對照組及非細(xì)菌感染組(P＜0.05)，膿毒血癥組的中性粒細(xì)胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%高于局部感染組(P＜0.05)，非細(xì)菌感染組的WBC、NE%高于健康對照組(P＜0.05)。

2.2 繪制中性粒細(xì)胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%評價感染性疾病的ROC曲線圖見圖1。

表1 非細(xì)菌感染組、局部感染組、膿毒血癥組及健康對照組中性粒細(xì)胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%檢測結(jié)果s)

表1 非細(xì)菌感染組、局部感染組、膿毒血癥組及健康對照組中性粒細(xì)胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%檢測結(jié)果s)

注：與健康對照組及非細(xì)菌感染組比較，*P＜0.05；非細(xì)菌感染組與健康對照組比較；**P＜0.05，膿毒血癥組組與局部感染組比較，▲P＜0.05。

組別n C D 6 4 / ( M E S F ) P C T / ( n g / m l ) C R P / ( m g / L ) W B C / ( 1 0 × 1 09/ L ) N E / ( % )健康對照組非細(xì)菌感染組局部感染組膿毒血癥組3 0 1 2 3 1 7 4 8 5 5 0 9 . 5 ± 2 8 4 . 2 5 2 5 . 5 ± 3 5 5 . 7 3 1 1 3 . 8 ± 3 7 1 0 . 7*4 8 5 4 . 9 ± 4 5 8 2 . 2*▲0 . 1 7 ± 0 . 2 6 0 . 2 1 ± 0 . 1 3 5 . 5 0 ± 2 6 . 6 7*1 3 . 8 9 ± 2 9 . 1 1*▲2 . 3 ± 1 . 7 3 4 . 8 ± 3 8 . 3 7 4 . 8 ± 6 6 . 3*1 3 2 . 3 ± 8 4 . 7*▲5 . 9 6 ± 1 . 9 1 9 . 9 5 ± 4 . 1 5**1 1 . 3 ± 5 . 7 8*1 3 . 9 ± 7 . 9 8*▲5 5 . 0 5 ± 2 . 2 7 6 . 2 ± 9 . 9**7 8 . 3 ± 1 2 . 8*8 3 . 3 ± 1 1 . 3*▲

圖1 中性粒細(xì)胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%評價感染性疾病的ROC曲線圖

從ROC曲線圖中可以計算出中性粒細(xì)胞CD64、PCT、CRP、WBC及NE%曲線下面積分別為0.903、0.896、0.816、0.618及0.677。

2.3 分別計算中性粒細(xì)胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%評價感染性疾病的敏感性和特異性結(jié)果見表2。

表2 中性粒細(xì)胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%評價感染性疾病的敏感性和特異性

3 討論

感染性疾病可以分為細(xì)菌感染和非細(xì)菌感染，細(xì)菌感染是ICU病人常見的病因之一，也是ICU病人常見的并發(fā)癥之一。細(xì)菌培養(yǎng)是診斷細(xì)菌感染的金標(biāo)準(zhǔn)，但由于細(xì)菌培養(yǎng)檢測周期較長，敏感性較低，加之現(xiàn)在抗生素的廣泛使用，細(xì)菌培養(yǎng)的陽性率都比較低，因此，臨床迫切需要新的細(xì)菌感染檢測指標(biāo)，CRP、PCT和中性粒細(xì)胞CD64先后應(yīng)用于臨床，為細(xì)菌感染診斷提供了較好的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

CRP是由肝細(xì)胞合成的，能與肺炎鏈球菌C多糖反應(yīng)形成復(fù)合物的急性時相反應(yīng)蛋白，半衰期為5～7h，CRP在感染后6～12h升高，48h左右達(dá)到高峰，炎癥消退后迅速下降，因此CRP水平與炎癥反應(yīng)程度呈正相關(guān)，本研究顯示：膿毒血癥組和局部感染組的CRP高于健康對照組和非細(xì)菌感染組(P＜0.05)，而且膿毒血癥組的CRP也高于局部感染組(P＜0.05)。此外CRP不受性別、年齡、抗生素等其它因素影響，因此常作為細(xì)菌感染的診斷和療效判定的指標(biāo)之一，雖然CRP敏感性較高，但特異性有限[1]。本研究顯示：當(dāng)CRP的臨界值定為5 mg/ L時，敏感性為88.3%，高于WBC和NE%，卻低于PCT和中性粒細(xì)胞CD64；特異性為76.5%，僅高于WBC，卻低于NE%、PCT和中性粒細(xì)胞CD64，CRP的ROC曲線下面積為0.816，也比PCT和中性粒細(xì)胞CD64低，因此CRP作為細(xì)菌感染檢測的指標(biāo)不如PCT和中性粒細(xì)胞CD64好。

PCT是降鈣素的前肽物質(zhì)，是無激素活性的糖蛋白，由116個氨基酸組成，相對分子量為13× 103，PCT在甲狀腺C細(xì)胞中生成并裂解出降鈣素，正常人體含量極低。當(dāng)機(jī)體受到非細(xì)菌感染時，體內(nèi)的PCT不升高或僅輕度升高，但當(dāng)機(jī)體受到細(xì)菌感染時，體內(nèi)的PCT可迅速升高，而且感染程度越重，升高越明顯，其機(jī)制可能是細(xì)菌內(nèi)毒素脂多糖或細(xì)胞因子等誘導(dǎo)體內(nèi)甲狀腺外組織產(chǎn)生大量的PCT，因而，PCT是一種較為敏感和特異的細(xì)菌感染檢測指標(biāo)[2-4]。本研究顯示：局部感染組和膿毒血癥組的PCT高于健康對照組及非細(xì)菌感染組(P＜0.05)，而且膿毒血癥組的PCT高于局部感染組(P＜0.05)，故PCT與細(xì)菌感染的程度呈正相關(guān)。PCT的ROC曲線下面積為0.896，僅次于中性粒細(xì)胞CD64，但優(yōu)于CRP、WBC、NE%，其診斷的敏感性(89.2%)和特異性(87.3%)也較高，故PCT是一種不錯的細(xì)菌感染檢測指標(biāo)，但目前PCT檢測的費(fèi)用還比較高，限制了其應(yīng)用。

CD64即IgG受體Fcγ RI，是Fc受體之一，F(xiàn)c受體屬于免疫球蛋白超家族，分布于白細(xì)胞表面，它們參與先天及后天免疫應(yīng)答。它們在吞噬細(xì)菌和免疫復(fù)合物的過程起著非常重要的作用。FcγR (CD64)Ⅰ為一種相對分子量為72000的跨膜糖蛋白，屬Ig超家族，是IgG高親和力受體，是介導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫的橋梁。正常生理情況下CD64表達(dá)于巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞表面，中性粒細(xì)胞不表達(dá)或低表達(dá)。而當(dāng)中性粒細(xì)胞受到微生物細(xì)胞壁成份(如：脂多糖、補(bǔ)體物質(zhì))和某些細(xì)胞因子(如：IFN-γ，TNF-α，IL-8，IL-12)刺激4～6h后，CD64表達(dá)就會增加，增加的程度與細(xì)胞因子刺激的強(qiáng)度相關(guān)，而且CD64的表達(dá)量與細(xì)菌感染的嚴(yán)重程度、預(yù)后及患者的死亡密切相關(guān)，同時CD64表達(dá)水平不受性別和年齡等因素影響[5-12]。因此，中性粒細(xì)胞CD64是細(xì)菌感染檢測的理想指標(biāo)。本研究結(jié)果表明：局部感染組和膿毒血癥組的中性粒細(xì)胞CD64高于健康對照組及非細(xì)菌感染組(P＜0.05)，而且膿毒血癥組的中性粒細(xì)胞CD64高于局部感染組(P＜0.05)，故細(xì)菌感染的程度越重，中性粒細(xì)胞CD64表達(dá)量越高，而且中性粒細(xì)胞CD64的ROC曲線下面積最大，達(dá)到0.903，說明中性粒細(xì)胞CD64的診斷價值最高，加上中性粒細(xì)胞CD64的敏感性(94.5%)和特異性(90.6%)優(yōu)于其它指標(biāo)，所以中性粒細(xì)胞CD64是檢測細(xì)菌感染的最佳指標(biāo)。

綜上所述，中性粒細(xì)胞CD64在細(xì)菌感染的檢測和監(jiān)測中具有重要的作用，其ROC曲線下面積、敏感性和特異性均優(yōu)于PCT、CRP、WBC和NE%。因此，對ICU患者進(jìn)行中性粒細(xì)胞CD64檢測，能夠較早判斷和發(fā)現(xiàn)細(xì)菌感染，及時采取合理的治療措施，改善ICU患者的預(yù)后，也有助于防止因?yàn)E用抗生素而導(dǎo)致耐藥菌的產(chǎn)生。臨床上應(yīng)將以上幾個項(xiàng)目進(jìn)行聯(lián)合檢測，以提高陽性率，同時還需結(jié)合臨床表現(xiàn)綜合加以評價。由于所選病例均為ICU患者，故中性粒細(xì)胞CD64對臨床其它疾病患者的應(yīng)用價值還需進(jìn)一步研究。

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R446.62,R446.11+1

A

1674-1129(2014)06-0719-03

2014-08-06；

2014-09-19)