李 杏 黃小民 蔣旭宏△ 周晶晶

（1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，浙江 杭州 310053；2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，浙江 杭州 310006）

內(nèi)毒素血癥是臨床急診常見(jiàn)的危重病。心肌損傷是內(nèi)毒素血癥的常見(jiàn)并發(fā)癥，死亡率極高［1］。研究發(fā)現(xiàn)脫氫紫堇堿（DHC）有明顯的抗心肌缺氧缺血作用，減少心肌細(xì)胞鈣超載，有效擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，改善循環(huán)、降低耗氧量［2］。本研究旨在探討DHC防治內(nèi)毒素血癥性心肌損傷的作用機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試劑 DHC為大連美侖生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；脂多糖（LPS）為 Sigma 公司產(chǎn)品；心肌酶（CK）、心肌同工酶（CK-MB）、心肌肌鈣蛋白（TnI）試劑為北京利德曼有限公司產(chǎn)品；腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）ELISA檢測(cè)試劑盒為杭州誠(chéng)維生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.2 動(dòng)物及分組 健康雄性Wistar大鼠50只，體質(zhì)量200～220 g，SPF級(jí)，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。按隨機(jī)數(shù)字隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、DHC低、中、高（2.5、5、10mg/kg）劑量組，每組 10 只。

1.3 造模及給藥 采用一次性尾靜脈注射LPS溶液的方法，制備大鼠內(nèi)毒素血癥模型。LPS模型組、DHC各組均注射LPS溶液5mg/kg，用生理鹽水稀釋至1mL。對(duì)照組、模型組注射等容積生理鹽水。造模結(jié)束后，DHC各組予尾靜脈注射相應(yīng)劑量DHC溶液。

1.4 標(biāo)本采集與檢測(cè) 給藥1 h后25%水合氯醛溶液麻醉大鼠，取左心室心肌組織，以10%甲醛固定，用于制作常規(guī)病理組織切片；腹主動(dòng)脈取血，分離血清，采用酶學(xué)速率法進(jìn)行測(cè)定CK、CK-MB、TnI，根據(jù)吸光度的變化，計(jì)算出酶的活性。ELISA法測(cè)定TNF-α、IL-1β，操作過(guò)程嚴(yán)格按試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包。計(jì)量資料以（±s）表示。各組均數(shù)比較采用單因素方差分析，均數(shù)間兩兩比較用最小的顯著差異法分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

圖1 各組心肌組織變化觀察

2.1 心肌組織病理學(xué)觀察 見(jiàn)圖1。HE染色后鏡下觀察提示對(duì)照組大鼠心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，心肌纖維完整，排列整齊，未見(jiàn)明顯的炎細(xì)胞及滲出物。模型組可見(jiàn)心肌細(xì)胞水腫明顯，心肌纖維結(jié)構(gòu)紊亂，心肌組織內(nèi)布滿炎性細(xì)胞，部分壞死灶。DHC低、中劑量組心肌細(xì)胞輕度水腫，結(jié)構(gòu)可辨，心肌組織內(nèi)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，少量壞死灶；DHC高劑量組心肌細(xì)胞水腫情況及壞死狀況介于模型組與中劑量組之間。

2.2 血清中CK、CK-MB、TnI含量的測(cè)定 見(jiàn)表1。與對(duì)照組相比，模型組CK、CK-MB、TnI的含量增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。而在DHC各組中CK、CK-MB、TnI的含量增加相對(duì)較少，低、中劑量組與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），而高劑量組與LPS模型組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表 1 大鼠血清中 CK、CK-MB、TnI水平比較（±s）

表 1 大鼠血清中 CK、CK-MB、TnI水平比較（±s）

與對(duì)照組比較， *P＜0.05， **P＜0.01； 與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。下同。

組 別 n TnI（μg/L）對(duì)照組 10 0.016±0.005模型組 10 0.256±0.018**DHC低劑量組 10 0.116±0.309**##CK（U/L） CK-MB（U/L）1121.1±252.3 924.8±174.6 2216.2±412.1**2007.1±435.9**1802.9±376.7**#1613.0±401.6**#DHC中劑量組 10 0.067±0.012**##1475.7±349.8*##1328.3±362.2*##DHC 高劑量組 10 2035.8±468.3**1741.3±383.9**0.251±0.026**

2.3 血清中TNF-α、IL-1β含量的測(cè)定 見(jiàn)表2。與對(duì)照組相比較，模型組、DHC干預(yù)組的大鼠血清中TNF-α、IL-1β 的含量均有顯著增加 （P＜0.01）。 而在DHC低、中、高劑量組中TNF-α、IL-1β的含量增加與模型組相比顯著減少（P＜0.01），中劑量減少最明顯。

表 2 大鼠血清中 TNF-α、IL-1β 的測(cè)定結(jié)果（pg/mL，±s）

表 2 大鼠血清中 TNF-α、IL-1β 的測(cè)定結(jié)果（pg/mL，±s）

組 別 n對(duì)照組 10模型組 10 DHC低劑量組 10 TNF-α IL-1β 141.45±3.49 29.35±1.62 221.24±7.81** 40.09±1.55**179.48±7.54**## 35.73±1.47**##DHC 中劑量組 10 167.76±7.19**## 32.98±1.38**##DHC 高劑量組 10 189.25±10.77**## 36.93±1.37**##

3 討 論

研究表明，內(nèi)毒素血癥早期即存在心血管功能異常，臨床表現(xiàn)為心室擴(kuò)張、心肌收縮功能及射血分?jǐn)?shù)降低，并伴有嚴(yán)重外周血管舒張、血容量反應(yīng)性降低［3］。臨床實(shí)踐中，心肌酶可反映心肌細(xì)胞的完整性，故常用心肌酶檢測(cè)法來(lái)測(cè)定心肌受損程度。CK、CK-MB及TnI是目前常用的與心肌損害有關(guān)的酶學(xué)檢查，CK主要分布在骨骼肌、心肌中，而CK-MB絕大部分存在于心肌細(xì)胞內(nèi)，心肌以外的組織含量甚微，因而能更特異性的反映心肌損害嚴(yán)重程度；TnI對(duì)心肌損傷的敏感性和特異性都較高，是目前診斷心肌損傷的確定標(biāo)志物，血清心肌酶濃度與心肌損害范圍呈正相關(guān)。

內(nèi)毒素血癥心肌損傷的機(jī)制復(fù)雜多樣，TNF-α、IL-1β已被證實(shí)是內(nèi)毒素血癥發(fā)病過(guò)程中重要的炎性介質(zhì)，共同參與膿毒癥心肌功能障礙的病理生理改變［3］，其機(jī)制主要是通過(guò)抑制鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)、刺激病理學(xué)NO增多、心肌能量代謝障礙［4］、影響心肌細(xì)胞興奮收縮偶聯(lián)，使心肌收縮力降低。Calson等［5］發(fā)現(xiàn)TNF-α亦能誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，從而促進(jìn)心功能障礙。IL-1β可由內(nèi)毒素直接刺激產(chǎn)生，也可由TNF-α誘導(dǎo)產(chǎn)生，產(chǎn)生相同的協(xié)同作用。

延胡索味苦、辛，性溫，歸心、肝、脾經(jīng)，主要功效為活血、行氣、止痛，臨床多用于氣血瘀滯痛證。《雷公炮炙論》稱“心痛欲死，速覓延胡”。DHC為其生物堿提取物，為其主要生物堿之一，近代臨床多用于心腦血管疾病的治療。本研究采用DHC干預(yù)內(nèi)毒素血癥心肌損傷大鼠，實(shí)驗(yàn)表明DHC低、中、高劑量組均能顯著降低TNF-α、IL-1β含量，但在心肌損傷方面，低、中劑量組明顯降低心肌酶的表達(dá)，對(duì)內(nèi)毒素心肌損傷有保護(hù)作用，其保護(hù)機(jī)制可能與下調(diào)炎癥因子TNF-α、IL-1β有關(guān)，提示抑制炎癥因子可以很好的保護(hù)心肌組織。高劑量組并沒(méi)有降低心肌酶的表達(dá)，其作用機(jī)制還不明確，有待進(jìn)一步研究。

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