王 琳 陸 毅 傅敏剛 何繼銀 黃一雄 范志宏

兩種細(xì)胞輔助脂肪移植隆乳的臨床效果觀察

王 琳 陸 毅 傅敏剛 何繼銀 黃一雄 范志宏

目的觀察兩種細(xì)胞輔助脂肪移植技術(shù)（Cell-assisted lipotransfer，CAL）隆乳的臨床療效。方法CAL技術(shù)隆胸30例，根據(jù)術(shù)中提取的基質(zhì)血管成分細(xì)胞（Stromal vascular fraction，SVF）來源分為兩組，來源于脂肪組織的稱為固相組（S組，n=24），來源于吸脂液的為液相組（L組，n=6）。術(shù)后均隨訪12個(gè)月。流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩種來源SVF中脂肪干細(xì)胞（Adipose-derived stem cells，ADSCs）比例，MRI檢測(cè)術(shù)前及術(shù)后6、12個(gè)月的乳房體積，計(jì)算移植脂肪組織的吸收率。結(jié)果兩組新鮮分離的SVF細(xì)胞群中，ADSCs平均比例分別為S組40.73%、L組3.75%。MRI測(cè)量及統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，S組術(shù)后6、12個(gè)月時(shí)乳房體積均明顯大于術(shù)前（P＜0.05），術(shù)后6個(gè)月與12個(gè)月時(shí)無明顯差異（P＞0.05）。12個(gè)月時(shí)脂肪吸收率為（51.83±15.28）%，與6個(gè)月時(shí)相比無明顯差異（P＞0.05）；L組12個(gè)月時(shí)脂肪吸收率為（75.47±12.20）%，與6個(gè)月時(shí)相比無明顯差異（P＞0.05）；MRI影像見囊腫2例，均來自S組。結(jié)論脂肪組織相比吸脂液，其SVF細(xì)胞群中ADSCs含量明顯更高；CAL輔助脂肪移植技術(shù)隆乳術(shù)安全有效，術(shù)后6個(gè)月乳房體積即可保持基本穩(wěn)定。

細(xì)胞輔助脂肪移植技術(shù)隆乳術(shù)乳房體積

2008年,細(xì)胞輔助的脂肪移植技術(shù)（Cell-assisted lipotransfer，CAL）隆乳被首次報(bào)道。此技術(shù)旨在利用基質(zhì)血管成分（Stromal vascular fraction，SVF）中含有的脂肪干細(xì)胞（Adipose derived stromal/stem cells，ADSCs）降低移植脂肪組織的吸收率。根據(jù)術(shù)中SVF來源于固相的脂肪組織或液相的吸脂液，可分為固相CAL和液相CAL[1]。我科自2009年6月至2014年5月共進(jìn)行了CAL隆胸30例，我們通過MRI測(cè)量術(shù)后6、12個(gè)月的乳房體積，計(jì)算移植脂肪組織的吸收率，對(duì)比手術(shù)前后乳房MRI影像的變化，對(duì)兩種CAL隆乳術(shù)的臨床效果進(jìn)行觀察比較。

1 一般資料

共30例健康女性，按術(shù)中提取SVF細(xì)胞來源分為固相組（S組，n=24）（離心后脂肪組織250 mL）和液相組（L組，n=6）（靜置后吸脂液500 mL）。無其他乳房疾病。手術(shù)在全麻下進(jìn)行，供脂部位為大腿后方、側(cè)腰和下腹部。所有患者隨訪12個(gè)月。

主要試劑和儀器：0.075%膠原酶（Wako Pure Chemical Industries，日本）；CD29、CD34、CD31、CD73、CD105、CD45、CD90及IgG同型對(duì)照（eBioscience公司，美國）；Lipokit吸脂離心機(jī)（韓國）。

2 方法

2.1 SVF成分的獲取

取常規(guī)吸脂術(shù)中的離心后脂肪組織250 mL或靜置后吸脂液500 mL送細(xì)胞分離室。0.075%膠原酶消化脂肪組織45 min，離心，棄上層液，DMEM重懸下層混合的細(xì)胞沉淀。離心，重懸，反復(fù)洗滌3次去除膠原酶。吸脂液500 mL經(jīng)800 g離心5 min，棄上層液，吹打，加生理鹽水200 mL，震蕩30 sec，22.2 mL的10×PBS恢復(fù)等張，離心，重懸，共3次。每組各取50 μL，加M199培養(yǎng)基200 μL，100目濾網(wǎng)過濾，細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞數(shù)至1×107cells/mL。

2.2 SVF中ADSC的含量檢測(cè)

獲取的細(xì)胞數(shù)達(dá)1×107cells/mL的SVF留樣每組各1 mL，分為每份1～3×105個(gè)細(xì)胞，加抗體CD29 -PE、CD34-PE、CD31-FITC、CD73-FITC、CD105-FITC、CD45-APC、CD90-PECy5，IgG同型對(duì)照。4℃孵育30 min，含4%FBS的PBS洗滌后用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析檢測(cè)，結(jié)果取平均值。

2.3 CAL技術(shù)隆胸

脂肪組織700 g離心3 min，收集中間部分的脂肪于合適的無菌容器中，置于冰水混合物中保存。將2.1中提取的SVF成分與離心后脂肪組織充分混勻，靜置15 min，吸去表面油脂，剪碎條索，移入18 g內(nèi)徑1 mm的特制注射針管中。以乳房外下象限6、7、8、9點(diǎn)為進(jìn)針點(diǎn)，多隧道注射，注射平面和體積比例為深層的胸大肌內(nèi)∶淺層皮下=1∶1，避免刺穿胸膜。

2.4 療效觀察

①大體觀察：查體并參照術(shù)前術(shù)后照片，對(duì)乳房體積改變、組織柔軟度、有無硬結(jié)、供脂區(qū)有無凸凹不平等方面進(jìn)行綜合評(píng)估；②MRI測(cè)量乳房體積：術(shù)前、術(shù)后6、12個(gè)月行雙側(cè)乳房平掃，由本院放射科3位專業(yè)技師對(duì)所得影像資料進(jìn)行體積測(cè)量，反復(fù)3次，取平均值，分別記為V（S/L）0、V（S/L）6及V（S/L）12。按公式計(jì)算吸收率，記為R（S/L）6及R（S/ L）12；數(shù)據(jù)采用Student's t-test進(jìn)行分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；③評(píng)價(jià)乳房MRI影像的變化：主要觀察有無結(jié)節(jié)、囊腫或鈣化。

R=1-(V6/12-V0)/注入脂肪體積×100%

3 結(jié)果

3.1 流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果

S組SVF中ADSCs相關(guān)表面標(biāo)志CD29、CD34、CD73、CD90、CD105高表達(dá)，而內(nèi)皮細(xì)胞表面標(biāo)志CD31及造血細(xì)胞表面標(biāo)志CD45低表達(dá)（圖1A），ADSCs平均占40.73%（圖1B）。L組SVF中ADSCs相關(guān)表面標(biāo)志低表達(dá)，而內(nèi)皮細(xì)胞及造血細(xì)胞表面標(biāo)志高表達(dá)（圖2A），ADSCs平均僅占3.75%（圖2B）。

3.2 MRI測(cè)量及統(tǒng)計(jì)結(jié)果

S組和L組的脂肪注射體積分別為每側(cè)（253.67±17.40）mL和每側(cè)（208.37±13.38）mL。MRI測(cè)量及統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，術(shù)后12個(gè)月，兩組移植脂肪吸收率分別為（51.83±15.28）%和（75.47±12.20）%。S組術(shù)后6個(gè)月乳房體積較術(shù)前明顯增大，但術(shù)后6～12個(gè)月間，乳房體積無顯著變化。L組各時(shí)間點(diǎn)間乳房體積無顯著變化。術(shù)后6個(gè)月MRI檢測(cè)，S組2例患者檢測(cè)到囊腫，直徑分別約1.2 cm和0.7 cm，術(shù)后12個(gè)月MRI未見囊腫增大，密切隨訪中。所有患者未見鈣化改變（表1、圖3、圖4）。

圖1 S組SVF的細(xì)胞成分Fig.1 The components of SVF in group S

圖2 L組SVF的細(xì)胞成分Fig.2 The components of SVF in group L

表1 兩組各時(shí)間點(diǎn)MRI測(cè)量的乳房體積及移植脂肪吸收率Table1 Breast volume and the resorption rate of transplanted adipose tissue at each time point of the 2 groups

圖3 典型病例Fig.3 Typical case

圖4 MRI影像Fig.4 MRI images

4 討論

研究表明，以ADSCs為主的活性細(xì)胞成分的缺乏和丟失，是傳統(tǒng)脂肪移植成活率低的主要原因[2]。Sterodimas等[3]認(rèn)為，與完整脂肪組織相比，抽吸得到的脂肪組織中ADSCs的數(shù)量只有原來的一半。盡管大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)證明，ADSCs能增加游離移植脂肪組織內(nèi)的血管密度，提高移植物的成活率[4]，但由于ADSCs無特異性的表面標(biāo)志，而高純度的ADSCs的富集需要經(jīng)過體外培養(yǎng)、擴(kuò)增和誘導(dǎo)鑒定等步驟，臨床應(yīng)用的安全性和可行性無法保障。

CAL技術(shù)因無需體外培養(yǎng)擴(kuò)增即能提供含有ADSCs的SVF成分，因此具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。根據(jù)術(shù)中SVF來源于固相的脂肪組織或液相的吸脂液，可分為固相CAL和液相CAL[1]。其中液相CAL技術(shù)有望將以往廢棄的吸脂液“變廢為寶”，成為ADSCs的來源之一，但由于所獲得的ADSCs含量較低，液相CAL技術(shù)用于較大體積的脂肪移植（如隆胸）的效果尚有待評(píng)估。

MRI技術(shù)對(duì)軟組織分辨率高，且三維實(shí)體的計(jì)算機(jī)數(shù)字化取樣已臻完備[5]。本研究采用MRI為檢測(cè)手段，測(cè)量乳房體積，通過對(duì)比手術(shù)前后乳房軟組織的影像學(xué)變化并觀察有無結(jié)節(jié)、囊腫、鈣化等并發(fā)癥的發(fā)生，評(píng)估兩種CAL技術(shù)隆乳的安全性和有效性。本研究結(jié)果顯示，術(shù)后6、12個(gè)月時(shí)乳房體積均明顯大于術(shù)前（P＜0.05），術(shù)后6個(gè)月與術(shù)后12個(gè)月時(shí)無明顯差異（P＞0.05），說明與術(shù)前相比，S組術(shù)后乳房體積明顯增大，外觀有明顯改善。但L組各時(shí)間點(diǎn)乳房體積差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明液相CAL技術(shù)未能有效增大乳房體積。術(shù)后6、12個(gè)月的移植脂肪吸收率均無明顯差異（P＞0.05），說明術(shù)后6～12個(gè)月間，乳房體積未見明顯縮小，結(jié)果與大體觀察一致，即至術(shù)后6個(gè)月乳房體積基本穩(wěn)定。MRI影像未見鈣化，但2例S組患者于皮下脂肪層內(nèi)發(fā)現(xiàn)直徑1 cm左右的囊腫，未見增大趨勢(shì)，予以密切隨訪。上述研究結(jié)果表明，固相CAL技術(shù)隆乳安全有效，但仍有約（51.83±15.28）%的吸收率，相較于傳統(tǒng)脂肪移植隆乳術(shù)40%～60%的吸收率[6]，未見明顯優(yōu)勢(shì)。主要原因可能是：相較于較大的注射脂肪體積每側(cè)（253.67±17.40）mL，ADSCs的數(shù)量仍不足夠。盡管S組SVF中的ADSCs占40.73%，遠(yuǎn)高于L組的3.75%，但250 mL脂肪獲得的ADSCs數(shù)量?jī)H為107～108個(gè)[7]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，移植后4周，固相CAL組的移植物重量高于單純脂肪移植組，并有較好的血管化，但提供SVF的脂肪體積：注射脂肪體積為4∶1[8]。按此體積比計(jì)算，相對(duì)于S組平均每側(cè)約250 mL的注射脂肪，用于提取SVF的脂肪體積將達(dá)2 000 mL，而本研究中僅為250 mL?？梢?，應(yīng)用固相CAL技術(shù)隆乳時(shí)，提供SVF的脂肪與注射脂肪的體積比應(yīng)盡可能增大。對(duì)于脂肪儲(chǔ)備充足的患者，有望獲得1∶1甚至是2∶1的體積比。L組乳房體積無顯著改善，術(shù)后12個(gè)月時(shí)的脂肪吸收率為（75.47±12.20）%，除液相CAL技術(shù)提取的SVF中ADSCs含量較低外，還可能的原因是，相較于S組患者，L組患者均為體型偏瘦者，乳房皮膚張力較高，加重了移植脂肪的缺血缺氧情況。與單純脂肪移植技術(shù)相似，對(duì)于脂肪儲(chǔ)備不足、乳房發(fā)育較差的患者，液相CAL隆乳術(shù)有一定的局限性。

本研究證實(shí)了固相CAL技術(shù)隆胸的有效性，為CAL技術(shù)的臨床應(yīng)用提供了一定的參考。但如何進(jìn)一步降低術(shù)后移植脂肪的吸收率，尚需大量深入的基礎(chǔ)及臨床研究。

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Evaluation on Two Kinds of Cell-assisted Lipotransfer for Breast Augmentation

WANG Lin,LU Yi,FU Mingang,HE Jiyin,HUANG yixiong,FAN Zhihong.

Department of Aesthetic and Plastic Surgery,Renji Hospital,Shanghai Jiaotong University School of Medicine,Shanghai 200127,China.Corresponding author:FAN Zhihong(E-mail:fanzhihong0815@163. com).

ObjectiveTo evaluate the effect of two kinds of cell-assisted lipotransfer for breast augmentation.Methods Thirty patients accepted breast augmentation using cell-assisted lipotransfer(CAL),and completed 12-month follow-up. According to the stromal vascular fraction(SVF)distilled from adipose tissue or aspirated liquid,the patients were divided into 2 groups:S group and L group.Flow-cytometry was used to detect the percentage of adipose-derived stem cells(ADSCs) in distilled SVF.The breast volumes and images were evaluated by MRI pre-operative,6 and 12 months post-operative.The data of breast volume were markedandthe resorption rate of transplanted adipose tissue was calculated.Results Averagely,the percentage of ADSCs in freshly distilled SVF in S group is 40.73%and 3.75%in L group.MRI showed that the breast volume 6－month post-operative and 12－month post-operative were both larger than that of preoperative in S group (P＜0.05),while no significant difference between the breast volume 6－month post-operative and 12－month post-operative were observed(P＞0.05),neither the resorption rate of 6 and 12-month post-operative(P＞0.05),and the resorption rate of transplanted adipose tissue 12－month post-operative in S group was(51.83±15.28)%.However,there were no significant difference of breast volume among three time points in L group(P＞0.05),neither the resorption rate of 6 and 12-month postoperative(P＞0.05),and the resorption rate of transplanted adipose tissue 12－month post-operative in L group was(75.47± 12.20)%.In addition,no calcification was seen in all MRI images but cysts were found in two cases of S group.Conclusion In process of breast augmentaion using cell-assissted lipotransfer,the distilled SVF from adipose tissue contains more ADSCs than that from aspirated liquid.The cell-assisted lipotransfer for breast augmentation is effective,safe,and the shrinkage stalls at 6-month post-operative.

Cell-assissted lipotransfer;Breast augmentation;Breast volume

R622

A

1673－0364（2014）06－0339－04

2014年7月4日；

2014年8月13日）

10.3969/j.issn.1673-0364.2014.06.010

200127上海市上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院整形外科。

范志宏（E-mail：zhihongfan0815@163.com）。