高建峰 謝中華 章海華 汪鐵軍 鄭元秀 杭州市余杭區(qū)第二人民醫(yī)院 杭州 311121

非酒精性脂肪性肝病患者血清增食欲素A水平變化及其與胰島素抵抗的關(guān)系

高建峰 謝中華 章海華 汪鐵軍 鄭元秀 杭州市余杭區(qū)第二人民醫(yī)院 杭州 311121

目的 觀察非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）患者血清增食欲素A（Orexin A）水平變化及其與胰島素抵抗的關(guān)系。方法 測定103例非酒精性脂肪性肝病患者及99名健康體檢者的體質(zhì)指數(shù)（BMI）及腰臀比（WHR），采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測其血清增食欲素A、血脂、空腹胰島素及空腹血糖值，計算胰島素抵抗指數(shù)，分析血清增食欲素A水平與胰島素抵抗的關(guān)系。結(jié)果 與健康對照組比較，NAFLD患者BMI、WHR、HOMA-IR及血清TC、TG、FFA水平均明顯增高（P＜0.05，P＜0.01）；血清HDL-C及Orexin A水平則顯著降低（P＜0.05）；Orexin A與BMI、WHR、TG、FFA、HOMAIR均呈明顯負相關(guān)（r分別為-0.689、-0.741、-0.438、-0.377、-0.611，P＜0.01）；與TC無明顯相關(guān)性；Orexin A與HDL-C呈明顯正相關(guān)（r＝0.832，P＜0.01）。結(jié)論 非酒精性脂肪性肝病患者存在脂代謝異常及胰島素抵抗，Orexin A可能通過調(diào)控胰島素抵抗參與NAFLD的發(fā)生發(fā)展。

非酒精性脂肪性肝病；增食欲素A；胰島素抵抗

近年來，隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變，肥胖、糖脂代謝紊亂相關(guān)的非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）發(fā)病率不斷升高，且有年輕化的趨勢[1]。NAFLD與胰島素抵抗（insulin resistance，IR）、肥胖、脂代謝紊亂、糖尿病等代謝綜合征（metabolic syndrome，MS）密切相關(guān)，被認為是MS在肝臟的表現(xiàn)[2]，其發(fā)生發(fā)展的分子機制尚不完全清楚，IR是其形成的核心環(huán)節(jié)[3]。增食欲素A（Orexin A）是由下丘腦組織中合成并分泌的一種神經(jīng)肽，通過其受體調(diào)節(jié)攝食、應(yīng)激等多種生理過程。近年來，越來越多的基礎(chǔ)與臨床研究[4-6]發(fā)現(xiàn)，Orexin A可通過促進IR參與肥胖、2型糖尿病等形成，而其在NAFLD中的作用尚不清楚。本研究通過檢測NAFLD患者外周Orexin A水平，分析其與IR的關(guān)系，初步探討其在NAFLD中的作用，以期為NAFLD的防治提供新思路。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇2010年4月—2012年2月本院門診和住院患者103例為觀察組，男56例，女47例，平均年齡（43.17±10.23）歲，均符合：①中華醫(yī)學會肝病分會脂肪肝酒精肝學組制定的NAFLD診斷標準[7]；②年齡18～70歲，就診前1個月未用過氧化物酶增殖體激活受體（PPAR）-γ激動劑、降脂藥。③排除病毒性肝炎、藥物性肝炎、自身免疫性肝病、糖尿病、營養(yǎng)不良、甲狀腺功能異常、腫瘤及自身免疫性疾病、妊娠哺乳期婦女、患有精神系統(tǒng)疾病，無法與醫(yī)生進行正常交流的患者。對照組選自我院99名健康體檢者（體質(zhì)指數(shù)均在正常范圍），男53例，女46例，平均年齡（42.66±13.12）歲，均無嚴重心腦腎疾病、病毒性肝炎、脂肪肝及其他肝臟疾病、腫瘤、精神疾病、糖尿病和長期服藥史等。兩組性別、年齡分布差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 觀察指標及方法 所有受試者均禁食8h以上，于次日清晨空腹采肘靜脈血，用于相關(guān)指標的測定。

1.2.1 體質(zhì)指數(shù)（BMI）及腰臀比（WHR） 要求全部入選對象脫鞋、免冠、僅穿內(nèi)衣，由專人測量身高、體質(zhì)量、腰圍、臀圍，分別以kg、cm為單位記錄，精確到0.1cm、0.1kg，BMI＝體質(zhì)量（kg）/身高（m）2，WHR＝腰圍/臀圍。

1.2.2 血清Orexin A水平測定 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法（enzyme linked immuno-sorbent assay，ELISA）進行。試劑盒由美國DSL公司提供，批號：M64608。用Bio-Tek酶標儀在450nm波長下讀取各孔吸光度（A）值，并根據(jù)繪制的標準曲線計算出相對應(yīng)的濃度。

1.2.3 胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR） 采用HITACHI 7600-110大型生化分析儀檢測空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）水平，放射免疫法檢測空腹胰島素（fasting blood insulin，F(xiàn)BIn）水平，根據(jù)空腹血糖、胰島素值計算胰島素抵抗程度（采用穩(wěn)態(tài)模型評價法（homeostatic model assessment，HOMA），公式如下：胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）＝（FBG×FBIn）/22.5?？崭挂葝u素放射免疫分析藥盒為濰坊三維生物工程集團有限公司提供，批號：3V-20120102。

1.2.4 游離脂肪酸（free fatty acids，F(xiàn)FA）測定 采用改良比色法測定，試劑盒由北京普利萊基因技術(shù)有限公司提供，批號：20120116。

1.2.5 血脂指標測定 采用HITACHI7600-110大型生化分析儀檢測。

1.3 統(tǒng)計學方法 應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計軟件，性別比采用χ2檢驗，其余數(shù)據(jù)行描述性分析﹑正態(tài)性檢驗及方差齊性檢驗，在描述性分析中,對于正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，以均數(shù)±標準差（±s）表示，正態(tài)分布數(shù)據(jù)經(jīng)方差齊性檢驗后采用獨立樣本的t檢驗，相關(guān)性分析采用sperman檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組BMI及WHR比較 觀察組BMI及WHR均較健康對照組明顯升高（P＜0.05），見表1。

表1 兩組BMI及WHR比較（±s）

表1 兩組BMI及WHR比較（±s）

注：與健康對照組比較，*P＜0.05

組別健康對照組觀察組n/例99 103 BMI/（kg/m2）22.15±2.56 27.26±2.23* WHR 0.68±0.03 0.88±0.11*

2.2 兩組生化指標比較 觀察組血清TC、TG、FFA水平及HOMA-IR均明顯高于健康對照組（P＜0.05），血清HDL-C及Orexin A水平則顯著低于健康對照組（P＜0.01，P＜0.05），見表2。

表2 兩組生化指標比較（±s）

表2 兩組生化指標比較（±s）

注：與健康對照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01

組別健康對照組觀察組n/例99 103 TC/（mmol/L）4.04±0.38 5.75±0.77* TG/（mmol/L）1.18±0.38 2.42±1.47* HDL-C/（mmol/L）1.52±0.32 1.04±0.27* FFA/（umol/L）440.69±95.31 756.63±101.38** Orexin A/（ng/mL）0.69±0.11 0.31±0.07* HOMA-IR 2.69±0.79 7.63±1.38*

2.3 相關(guān)性分析 sperman相關(guān)性分析表明，Orexin A與BMI、WHR、TG、FFA、HOMA-IR均呈明顯負相關(guān)（r分別為-0.689、-0.741、-0.438、-0.377、-0.611，P＜0.01）；與TC無明顯相關(guān)性；Orexin A與HDL-C呈明顯正相關(guān)（r＝0.832，P＜0.01）。

3 討論

NAFLD的發(fā)病機制是近些年學術(shù)界研究熱點之一，盡管其發(fā)病機制尚不完全清楚，但目前廣泛接受的是Day和James在1998年提出的“二次打擊”學說[3]，即指從單純性脂肪肝進展至非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NASH）甚至肝纖維化、肝硬化來源于二次打擊。肝內(nèi)脂質(zhì)蓄積是NASH發(fā)生、發(fā)展過程中的第一次打擊，而脂肪變性的肝細胞對損害因素非常敏感；第二次打擊來自氧化應(yīng)激及脂質(zhì)過氧化、炎癥、免疫攻擊因素與防御因素不平衡。近年來對NAFLD發(fā)病機制的研究進展主要集中在IR，因為IR是大多數(shù)患者潛在的異常因素，IR是NAFLD形成的始動及核心環(huán)節(jié)，并可能貫穿于NAFLD的全過程[8]。因此，研究IR的分子機制對于NAFLD的防治具有重要意義。

導致IR形成的分子機制極其復雜，涉及多種生物因子及信號通路。近年來，越來越多的研究[4-6]發(fā)現(xiàn)，增食欲素A（Orexin A）可通過調(diào)節(jié)IR參與肥胖、脂代謝紊亂等代謝綜合征的發(fā)生發(fā)展。Orexin是1998年發(fā)現(xiàn)的一種由大鼠下丘腦外側(cè)區(qū)（lateral ypothalamic area，LHA）合成并分泌的小分子神經(jīng)肽[9]，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)外均廣泛分布，除經(jīng)典的調(diào)節(jié)攝食和睡眠/覺醒狀態(tài)之外，還參與多種內(nèi)分泌代謝的調(diào)控。Orexin系統(tǒng)包括Orexin A、Orexin B和Orexin 1/2受體（OX1R，OX2R），其中Orexin A可以劑量依賴方式增加攝食[10]，是機體能量平衡調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中的重要物質(zhì)，因此受到了廣泛關(guān)注。Switońska等[11]研究顯示，Orexin A對胰島素的刺激呈劑量依賴性，且Orexin A和胰島素的作用存在時相上的差異。國內(nèi)趙玉紅等[6]發(fā)現(xiàn)在脂代謝異常狀態(tài)下，Orexin A是IR及肥胖發(fā)生的重要標志。

目前，在NAFLD中，Orexin A是否與IR有關(guān)尚不清楚。已知Orexin A能自由擴散通過血腦屏障[12]，因此，血清Orexin A的水平至少部分反映了下丘腦Orexin A的產(chǎn)生情況。本研究結(jié)果顯示，NAFLD患者血清Orexin A水平較健康體檢者明顯減少，NAFLD患者肥胖度的各項指標（BMI及WHR）及血脂指標TG、FFA、TC較健康體檢者顯著升高，HDL-C水平明顯降低，且NAFLD患者較健康體檢者有更為明顯的胰島素抵抗，提示NAFLD患者存在一定程度的肥胖、脂代謝異常及IR。相關(guān)性分析表明，血清Orexin A水平與BMI、WHR、TG、FFA、HOMA-IR均呈明顯負相關(guān)，與HDL-C呈明顯正相關(guān)，提示在NAFLD中，Orexin A水平的減少與脂代謝異常及IR密切相關(guān)。脂質(zhì)代謝異常作為IR的一項重要標志是如何參與Orexin A的調(diào)控目前尚不清楚。Beck等[13]報道，Orexin的表達與TG負相關(guān)，本組結(jié)果也支持這一結(jié)論。高脂血癥可通過誘導胰島B細胞凋亡[14]等多種途徑引起胰島素介導的葡萄糖攝取和利用減少，以及肝臟葡萄糖輸出增加，導致IR的形成。Orexin系統(tǒng)可能是參與調(diào)節(jié)脂肪-胰島軸的重要因素。

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The Changes of Serum Orexin A in Nonalcoholic Fatty Liver Disease Patients and the Relationship between Orexin A and Insulin resistance

GAO Jianfeng，XIE Zhonghua，ZHANG Haihua，WANG Tiejun，ZHENG Yuanxiu.Yuhang District Second People's Hospital of Hangzhou,Hangzhou(311121),China

ObjectiveTo investigate the changes of the level of serum orexin A in nonalcoholic fatty liver disease（NAFLD）patients and the relationship between orexin A and insulin resistance.MethodsBody mass index（BMI）and waist-hip ratio（WHR）of 103 patients with NAFLD and of 99 individuals having general physical examination were measured.Fast blood glucose（FBG）and fast insulin（FINS）were determined for calculating the insulin resistance index（HOMA-IR）.The level of serum orexin A was detected by ELISA.The relationship of serum orexin A with insulin resistance was statistically analyzed.ResultsCompared with healthy control group,the BMI,WHR, HOMA-IR,and the levels of serum total cholesterol,triacylglycerol,free fatty acid were significantly higher（P＜0.05）,but the levels of serum high density lipoprotein cholesterol（HDL-C）and orexin A were significantly decreased（P＜0.01,P＜0.05）.The level of serum orexin A was negatively correlated with BMI,WHR,triacylglcerol,free fatty acid,and HOMA-IR（r＝-0.689,-0.741,-0.438,-0.377,-0.611;P＜0.01）,but the level of serum orexin A was posi tively correlated with HDL-C（r＝0.832,P＜0.01）.Conclusions Lipid metabolism disorder and insulin resistance were observed in NAFLD patients;orexin A may play an important role in occurrence and development of NAFLD by modulating insulin resistance.

nonalcoholic fatty liver disease；orexin A；insulin resistance

2013-06-20