李燕瓊

免疫學(xué)檢驗(yàn)是指將免疫學(xué)方法應(yīng)用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域, 通過抗原和抗體的反應(yīng)原理, 利用各種標(biāo)記和示蹤技術(shù)來檢測和分析人體的免疫功能和疾病的一門學(xué)科［1］。傳統(tǒng)的免疫學(xué)檢驗(yàn)即血清學(xué)實(shí)驗(yàn), 在鑒定病原菌和檢測血清抗體方面有出色表現(xiàn), 但由于操作步驟繁瑣, 耗時較長, 易受干擾而出現(xiàn)誤判［2］。為了克服這些缺點(diǎn), 人們不斷改進(jìn)血清試驗(yàn), 并將分子生物學(xué)等各種科學(xué)理論和技術(shù)應(yīng)用到免疫學(xué)檢驗(yàn)中來, 使免疫學(xué)快速檢驗(yàn)技術(shù)得到了極大的發(fā)展。作者就此做一些總結(jié)和回顧, 現(xiàn)報告如下。

1 傳統(tǒng)的免疫學(xué)快速檢驗(yàn)技術(shù)

傳統(tǒng)的免疫學(xué)檢驗(yàn)采用的抗體來源和檢測標(biāo)本多是血清, 故也稱血清學(xué)試驗(yàn), 是通過觀察和測定待測樣品中沉淀物的形成、擴(kuò)散、凝集及溶血現(xiàn)象, 來分析抗原或抗體的有無及含量［3］。傳統(tǒng)的免疫學(xué)快速檢驗(yàn)技術(shù)有很多種, 其中比較有代表性的是梅毒快速診斷試驗(yàn), 比如快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)和甲胺苯紅不加熱血清反應(yīng)素實(shí)驗(yàn)(TRUSR)。這些實(shí)驗(yàn)方法簡單快速, 應(yīng)用性好, 但容易受到其他疾病的干擾而呈現(xiàn)假陽性, 因此需要做確證試驗(yàn)后才可做最后的診斷。

2 免疫膠體金技術(shù)

膠體金的原理是利用膠體金的吸附功能, 蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面, 從而完成膠體金標(biāo)記。膠體金對各種蛋白質(zhì)都有很好的吸附效果, 試驗(yàn)不需要特殊設(shè)備、操作簡單、檢測快速、靈敏度高。但膠體金技術(shù)只能定性,不能定量, 容易出現(xiàn)假陰性；嚴(yán)重溶血、脂血標(biāo)本、黃疸等疾病會對結(jié)果產(chǎn)生干擾, 影響判斷, 因此應(yīng)注意試劑的質(zhì)量控制和確證試驗(yàn)。較常見的免疫膠體金技術(shù)有快速免疫層析試驗(yàn)(ICA)(如早孕診斷條)和快速斑點(diǎn)免疫滲濾試驗(yàn)(DIFA)。

3 化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)(CLTA)

傳統(tǒng)的化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)(CLTA)是用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體的檢測分析方法。該技術(shù)有靈敏度高、特異性強(qiáng)、線性范圍寬, 標(biāo)記物穩(wěn)定、無放射性污染、檢測速度快等優(yōu)點(diǎn)。但因化學(xué)分析本身的不特異性, 制約了整個方法的使用。

電化學(xué)發(fā)光免疫分析(ECLIA)直接以［Ru(bpy)3］2+標(biāo)記抗體, 反應(yīng)時標(biāo)記物在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)反應(yīng)發(fā)光, 且此反應(yīng)過程可以周而復(fù)始進(jìn)行, 從而實(shí)現(xiàn)循環(huán)發(fā)光和多次發(fā)光, 具有控制精確、重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)［4］。而且該方法使用電磁場自動分離結(jié)合態(tài)和游離態(tài), 從而簡化了檢測步驟, 明顯提高了檢測速度。不足的是試劑價格偏高,很難在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)中普及開來。

4 免疫熒光技術(shù)

免疫熒光技術(shù)又稱熒光抗體技術(shù), 是將熒光物標(biāo)記在抗體上, 在抗原抗體反應(yīng)后, 呈現(xiàn)熒光反應(yīng), 從而對抗原進(jìn)行定位的技術(shù)。其與化學(xué)發(fā)光的區(qū)別在于：化學(xué)發(fā)光是利用化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生光, 無需光源；熒光是光致發(fā)光, 需要外加光源。熒光抗體技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高、速度快。但因存在非特異性染色, 影響判定結(jié)果的客觀性, 且實(shí)驗(yàn)步驟復(fù)雜, 推廣上還有一定難度。

5 免疫酶技術(shù)

免疫酶技術(shù)是以酶為標(biāo)記物, 在抗原抗體反應(yīng)后, 加入底物, 使底物與酶發(fā)生顯色反應(yīng), 以此對抗體或抗原進(jìn)行定性和定量分析。最常用的免疫酶技術(shù)是酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA), 它將抗原或抗體固定到某種固相載體表面, 使抗原抗體反應(yīng)在載體表面進(jìn)行, 使步驟簡化, 靈敏度提高。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)是目前免疫法快速檢驗(yàn)領(lǐng)域的前沿課題。

6 生物傳感器技術(shù)

生物傳感器是一門將生物活性材料與物理化學(xué)換能器有機(jī)結(jié)合的交叉學(xué)科。生物傳感器用感受器感應(yīng)生物物質(zhì)并將其濃度用轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換為電信號, 根據(jù)電信號進(jìn)行快速、微量的分析。生物傳感器具有靈敏度高、速度快、成本低等優(yōu)點(diǎn),得到了廣泛的應(yīng)用。目前常見的生物傳感器有酶電極傳感器、DNA傳感器等。

7 生物芯片技術(shù)

生物芯片技術(shù)是通過微縮技術(shù), 將大量生物識別分子按預(yù)先設(shè)置的排列固定于硅芯片或玻璃芯片等載體表面, 利用生物分子的特異性的相互作用(如核酸雜交反應(yīng), 抗原抗體反應(yīng)等), 對蛋白質(zhì)、細(xì)胞等生物分子進(jìn)行準(zhǔn)確、快速的分析,以測定其組分和存量的檢測技術(shù)。生物芯片技術(shù)常用于疾病篩查和早期診斷。

綜上所述, 隨著科學(xué)的進(jìn)步, 各種新技術(shù)新材料被運(yùn)用到醫(yī)學(xué)領(lǐng)域, 免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)也得到了飛快的發(fā)展。更快速、更準(zhǔn)確、更簡單的免疫學(xué)快速檢驗(yàn)技術(shù)將不斷涌現(xiàn)并得到廣泛的臨床應(yīng)用。

［1］ 惠小夏, 王東霞.免疫學(xué)快速檢驗(yàn)技術(shù)的應(yīng)用與進(jìn)展.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥, 2011, 10(15):104-109.

［2］ 李曉軍, 武建國.關(guān)于免疫學(xué)檢驗(yàn)定位的思考.臨床檢驗(yàn)雜志,2011, 33(05):114-119.

［3］ 尹東光, 賀佑豐, 劉一兵, 等.標(biāo)記免疫分析技術(shù)的發(fā)展點(diǎn)評.標(biāo)記免疫分析與臨床, 2011, 15(21):47-51.

［4］ 譚順蓮, 莊健海.羅氏MODULAR全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀應(yīng)用評價.國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報, 2010, 14(5):44-47.