葛曉霞

癲癇患者腦組織中SCG10的表達(dá)及其與耐藥的相關(guān)性分析

葛曉霞

目的 探討癲癇患者腦組織中SCG10的表達(dá)及其與耐藥的相關(guān)性。方法 選取本院收治的38例耐藥性癲癇患者作為觀察組, 同時(shí)選取18例神經(jīng)外科減壓或清創(chuàng)患者作為對照組, 對其臨床資料進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果 觀察組患者的SCG10及MAPK表達(dá)均明顯高于對照組(P＜0.05), 且癲癇患者腦組織中SCG10及MAPK表達(dá)位于同一細(xì)胞上。結(jié)論 耐藥性癲癇患者腦組織中的SCG10及MAPK表達(dá)增加, 且兩者間的共同表達(dá)表明, 耐藥性癲癇的發(fā)生發(fā)展可能與SCG10及MAPK的相互作用有關(guān)。

癲癇；腦組織；SCG10表達(dá)；耐藥

為探討癲癇患者腦組織中SCG10的表達(dá)及其與耐藥的相關(guān)性, 對收治的38例耐藥性癲癇患者的臨床資料進(jìn)行了回顧性分析, 并取得了良好的效果, 現(xiàn)將具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院自2010年12月～2011年12月收治的38例耐藥性癲癇患者作為觀察組, 患者均符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn), 其中男26例, 女12例, 年齡8～57歲, 平均年齡27.9歲；同時(shí)選取18例神經(jīng)外科減壓或清創(chuàng)患者作為對照組, 其中男12例, 女6例, 年齡9～51歲, 平均年齡28.3歲；兩組患者臨床資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本制備及隨機(jī)化處理 兩組患者腦組織取出后均及時(shí)利用濃度為4%的多聚甲醛進(jìn)行固定, 固定時(shí)間為48 h,然后利用石蠟進(jìn)行常規(guī)包埋, 保存?zhèn)溆?。取出石蠟塊, 利用石蠟切片機(jī)進(jìn)行冠狀切片, 且要保證其連續(xù)性, 切片厚度應(yīng)控制在5μm, 各標(biāo)本均制備10張切片, 隨機(jī)抽取兩張切片進(jìn)行免疫組化檢測及熒光染色檢測。

1.2.2 免疫組化檢測 組織切片后, 利用電吹風(fēng)進(jìn)行烘烤,烘烤時(shí)間為10 min, 然后利用乙醇進(jìn)行脫蠟, 利用自來水進(jìn)行浸泡, 浸泡時(shí)間為5 min, 并利用PBS緩沖液反復(fù)沖洗三次。利用蒸餾水配置雙氧水, 雙氧水濃度應(yīng)為3%, 室溫放置10 min；利用0.01M枸櫞酸鈉緩沖液進(jìn)行為期30 min的熱修復(fù)抗原, 溫度應(yīng)控制為95℃, 然后將抗原修復(fù)液I加入其中, 室溫放置10 min, 然后利用PBS緩沖液進(jìn)行沖洗, 每次沖洗時(shí)間為3 min, 共沖洗3次。將正常兔血清滴加其中, 室溫下放置30 min后將多余液體甩掉, 然后將適量稀釋后的一抗山羊抗人SCGl0加入其中, 陰性對照則應(yīng)利用PBS替代一抗室溫過夜。將冰箱溫度設(shè)置為4℃, 在其中過夜, 第二天在37℃的水浴箱中進(jìn)行30 min的孵育, 并利用PBS緩沖液進(jìn)行沖洗, 每次沖洗5 min, 共沖洗3次, 然后添加生物素化二抗,然后按上述方式進(jìn)行孵育及沖洗, 然后滴SABC, 同樣進(jìn)行孵育及沖洗, DAB顯色, 利用蘇木素進(jìn)行復(fù)染, 利用二甲苯進(jìn)行脫水、透明, 并利用中性樹膠封片。MAPK檢測步驟同SCGl0相同。

1.2.3 免疫熒光檢測 切片脫蠟后行抗原修復(fù), 然后將濃度為1%的牛血清蛋白及0.4%的ritonX-100滴加至其中, 室溫下反應(yīng)一小時(shí), 然后將兔血清封閉液添加至其中, 進(jìn)行為期5 h的封閉, 然后將MAPK小鼠抗人多克隆一抗及SCGl0山羊抗人多克隆一抗添加至其中, 陰性對照利用PBS代替.4℃下放置一夜。過夜后37℃的水浴箱中進(jìn)行30 min的孵育,并利用PBS緩沖液進(jìn)行沖洗, 每次沖洗5 min, 共沖洗3次。然后將FITC一兔抗小鼠二抗及RITC-兔抗羊二抗滴加至其中, 室溫下孵育3 h, 利用PBS緩沖液沖洗, 并利用油-PBS進(jìn)行封片。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本次研究所有患者的臨床資料均采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理。兩組間比較用χ2檢驗(yàn), P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

免疫組化檢測表明觀察組患者SCGl0表達(dá)為(0.4738±0.0249), MAPK表達(dá)為(0.4259±0.0139), 對照組患者SCG10表達(dá)為(0.3412±0.0218), MAPK表達(dá)為(0.3174±0.1331), 觀察組均明顯高于對照組(P＜0.05)；經(jīng)熒光雙標(biāo)檢測, 癲癇患者腦組織中SCG10及MAPK表達(dá)位于同一細(xì)胞上。

3 討論

癲癇是臨床上常見的一種神經(jīng)系統(tǒng)疾病, 其屬于慢性反復(fù)發(fā)作性短暫腦功能失調(diào)綜合征, 其主要特征為腦神經(jīng)元異常放電導(dǎo)致反復(fù)癇性發(fā)作［1］。該病具有較高的發(fā)病率, 據(jù)調(diào)查癲癇的發(fā)病率僅低于腦卒中, 且患者以嬰幼兒居多, 若不及時(shí)給予患者行之有效的治療極易對患者的身體健康造成威脅［2］?，F(xiàn)階段臨床上通常將藥物治療作為治療該病的主要方式, 然而因該病的發(fā)病機(jī)理尚未明確, 因此, 約有20%～30%的患者經(jīng)藥物治療不能取得良好的效果。因此, 及時(shí)明確癲癇的發(fā)病機(jī)制, 探討更加安全、有效的治療方式就顯得至關(guān)重要。

SCG10屬于神經(jīng)特異性蛋白的一種, 其在胚胎期神經(jīng)元發(fā)生的過程中生長錐部位具有較高的表達(dá), 而在嬰兒出生后其表達(dá)含量驟然減少, 然而其在成熟大腦神經(jīng)元突觸重塑部位依然有表達(dá), 這就說明CG10與神經(jīng)結(jié)構(gòu)重塑間有著一定的關(guān)系［3］。相關(guān)研究表明SCG10表達(dá)過高可在一定程度上促進(jìn)神經(jīng)延伸, 使得突觸重塑, 從而對神經(jīng)系統(tǒng)的可塑性產(chǎn)生影響。同時(shí)也有研究表明SCGl0的表達(dá)在動(dòng)物癲癇模型中明顯增高, 這就說明SCGl0于耐藥性癲癇的形成有著較大關(guān)系。此外, 也有研究表明SCGl0的激活和MAPK有著一定的關(guān)聯(lián), 而多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理過程均與MAPK信號傳導(dǎo)途徑有關(guān)。因此, 明確癲癇患者中SCGl0和MAPK的表達(dá)情況對提高癲癇患者的治療效果有著非常重要的作用。

本次研究表明觀察組患者的SCG10及MAPK表達(dá)均明顯高于對照組(P＜0.05), 且經(jīng)免疫熒光雙標(biāo)法檢測, 癲癇患者腦組織中SCG10及MAPK表達(dá)位于同一細(xì)胞上。這就說明耐藥性癲癇患者腦組織中的SCG10及MAPK表達(dá)增加, 且兩者間的共同表達(dá)表明, 耐藥性癲癇的發(fā)生發(fā)展可能與SCG10及MAPK的相互作用有關(guān)。

［1］ 楊柳. ROCK1, TRAF3mRNA在耐藥性癲癇患者海馬組織中的表達(dá)及意義.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào).2011.2(6):176-177.

［2］ 韓璞. ATP-結(jié)合相關(guān)基因mRNA在耐藥性癲癇患者腦組織中的表達(dá).中華醫(yī)學(xué)雜志.2011.2(33):198-199.

［3］ 賴永秀.癲癇發(fā)作的兩種模式.電子科技大學(xué)學(xué)報(bào).2010.2(3).113-115.

450000 河南省鄭州市第二人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科