陳 劍, MANGELINCKX Sven, 李維林, 王崢濤, De KIMPE Norbert

〔1. 江蘇省·中國科學(xué)院植物研究所(南京中山植物園) 江蘇省抗糖尿病藥物篩選技術(shù)服務(wù)中心, 江蘇 南京 210014;2. 根特大學(xué)生命科學(xué)工程學(xué)院, 根特 9000; 3. 中國藥科大學(xué)生藥學(xué)教研室, 江蘇 南京 210009〕

紅鳳菜〔Gynurabicolor(Willd.) DC.〕為菊科(Compositae)菊三七屬(GynuraCass.)植物，又名觀音莧和補(bǔ)血菜等。紅鳳菜是傳統(tǒng)山野菜，營養(yǎng)豐富，在東亞一些國家(如中國和日本)常用于制作蔬菜沙拉和天麩羅等供食用；而且在中國南方的部分地區(qū)還將其作為治療糖尿病的草藥[1]。據(jù)記載[2]，紅鳳菜全草可入藥，味甘、辛，性涼，具有涼血止血、清熱消腫的功效；內(nèi)服治咳血、血崩、痛經(jīng)、血?dú)馔?、支氣管炎、盆腔炎、中暑和阿米巴痢疾；外用治?chuàng)傷出血、潰瘍久不收口、療瘡癰癤和甲溝炎等。

目前，對紅鳳菜化學(xué)成分的研究報(bào)道較少，Shimizu等分別報(bào)道了其揮發(fā)性成分[3-4]及3個(gè)花色苷成分[5]。為進(jìn)一步明確紅鳳菜的活性成分，合理利用和開發(fā)該植物資源，作者對其地上部分的化學(xué)成分進(jìn)行了分離和鑒定。

1 材料和方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)用紅鳳菜地上部分(葉和莖)于2010年7月采自南京中山植物園內(nèi)，由江蘇省·中國科學(xué)院植物研究所任冰如研究員鑒定。

實(shí)驗(yàn)用主要儀器和試劑包括：X-6顯微熔點(diǎn)測定儀(北京泰克儀器有限公司)；JEOL Eclipse 300 MHz核磁共振儀(日本電子株式會社)；Agilent 1100 LC-MSD高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國安捷倫公司)；Grace RevelerisTM全息快速純化閃速色譜系統(tǒng)(美國格雷斯公司)；Agilent Preparative-HPLC 1100制備型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；柱層析硅膠和薄層色譜硅膠板均購自美國格雷斯公司；LiChroprep RP-18反相C-18填料(40～63 μm)購于德國Merck公司； Sephadex LH-20葡聚糖凝膠填料購于美國GE醫(yī)療公司；MCI GEL CHP20P購于日本三菱化學(xué)株式會社；HPLC使用試劑為色譜純，其他試劑均為分析純。

1.2 方法

紅鳳菜地上部分經(jīng)曬干后稱取2.9 kg，用體積分?jǐn)?shù)80%乙醇于70 ℃回流提取2次，減壓回收溶劑后得浸膏295 g。浸膏經(jīng)硅膠拌樣后依次用正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯和甲醇加熱回流提取，減壓回收溶劑后分別得到正己烷提取物0.8 g、二氯甲烷提取物3.4 g、乙酸乙酯提取物7.7 g和甲醇提取物121.3 g。

用硅膠柱層析對二氯甲烷提取物進(jìn)行進(jìn)一步分離，以二氯甲烷-甲醇混合液(體積比100∶1～90∶10)梯度洗脫得到6個(gè)組分(B1～B6)；組分B1經(jīng)反相硅膠柱層析，以水-甲醇混合液(體積分?jǐn)?shù)20%～100%)梯度洗脫得到4個(gè)組分(B1-1～B1-4)。其中，組分B1-2經(jīng)全息快速純化閃速色譜系統(tǒng)分離得到化合物1(7.3 mg)；組分B1-1經(jīng)MCI膠柱層析，水-甲醇混合液(體積分?jǐn)?shù)20%～100%)梯度洗脫后的流分經(jīng)硅膠柱層析再次純化，用二氯甲烷-甲醇混合液(體積比100∶1～90∶10)梯度洗脫，最后通過制備型高效液相色譜分離分別得到化合物2(5.4 mg)和化合物3(6.7 mg)；組分B1-3經(jīng)MCI膠柱層析色譜分離，再經(jīng)硅膠柱層析純化后分別得到化合物4(3.1 mg)和化合物5(2.8 mg)。

乙酸乙酯提取物經(jīng)反相硅膠柱層析，以水-甲醇混合液(體積分?jǐn)?shù)20%～100%)梯度洗脫得到5個(gè)組分(C1～C5)。其中，組分C2反復(fù)經(jīng)全息快速純化閃速色譜系統(tǒng)分離得到化合物6(13.6 mg)；組分C3反復(fù)經(jīng)全息快速純化閃速色譜系統(tǒng)純化以及葡聚糖凝膠(LH-20)柱層析分離得到化合物7(12.5 mg)和化合物8(6.3 mg)。

結(jié)合MS和NMR數(shù)據(jù)并參考相關(guān)文獻(xiàn)，對化合物1～8進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

化合物1： 無色油狀物；ESI-MSm/z：126.9[M+H]+。1H-NMR(DMSO-d6， 300 MHz)δ： 4.49(2H， d，J=6.0 Hz， CH2OH)，6.59(1H，d，J=3.8 Hz，H-4)，7.48(1H，d，J=3.3 Hz，H-3)，9.53(1H，s，CHO)。13C-NMR(DMSO-d6，75 MHz)δ：178.6(CHO)，162.8(C-5)，152.3(C-2)，125.0(C-4)，110.3(C-3)，56.5(CH2OH)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的一致，鑒定此化合物為5-羥甲基糠醛〔5-(hydroxymethyl) furfural〕。

化合物2：白色粉末；mp：118 ℃～119 ℃；ESI-MSm/z：121.3[M-H]-。1H-NMR(CDCl3，300 MHz)δ：7.46-7.52(2H，m，Harom)，7.60-7.65(1H，m，Harom)，8.12(2H，d，J=7.2 Hz， Harom)。13C-NMR(CDCl3， 75 MHz)δ： 171.7(COOH)， 133.9(C-4)，130.3(C-2,6)，129.3(C-1)，128.6(C-3,5)。綜合以上數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)[7]比對，鑒定此化合物為苯甲酸(benzoic acid)。

化合物3：白色粉末；mp：108 ℃～109 ℃；ESI-MSm/z：121.3[M-H]-。1H-NMR(MeOH-d4， 300 MHz)δ： 6.89(2H，d，J=8.3 Hz，H-3，5)，7.76(2H，d，J=8.8 Hz，H-2,6)，9.74(1H，s，CHO)。13C-NMR(MeOH-d4，75 MHz)δ： 190.9(CHO)，161.4(C-4)，132.4(C-2，6)，130.1(C-1)，116.0(C-3，5)。綜合以上數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)[7]比對，鑒定此化合物為4-羥基苯甲醛(4-hydroxybenzaldehyde)。

化合物4：白色粉末；mp：210 ℃～211 ℃；ESI-MSm/z：167.3[M-H]-。1H-NMR(MeOH-d4， 300 MHz)δ： 3.90(3H， s， OCH3)， 6.84(1H， d，J=8.3 Hz，H-5)， 7.55(1H，d，J= 1.8 Hz， H-2)， 7.56(1H， dd，J=8.3， 1.8 Hz， H-6)。13C-NMR(MeOH-d4，75 MHz)δ： 170.0(COOH)，152.7(C-4)， 148.7(C-3)，125.2(C-6)，123.0(C-1)，115.8(C-2)，113.7(C-5)，56.4(OCH3)。綜合以上數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)[8]比對，鑒定此化合物為香草酸(vanillic acid)。

化合物5：白色粉末；mp：202 ℃～203 ℃；ESI-MSm/z：199.0[M+H]+。1H-NMR(DMSO-d6， 300 MHz)δ： 3.78(6H， s，2×OCH3)，7.17(2H，s，H-2，6)，9.12(1H，s，OH)，12.58(1H， s， COOH)。13C-NMR(DMSO-d6， 75 MHz)δ： 167.2(COOH)，147.5(C-3， 5)， 140.3(C-4)， 120.5(C-1)， 107.0(C-2，6)，56.1(2×OCH3)。綜合以上數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)[9]比對，鑒定此化合物為丁香酸(syringic acid)。

化合物6：白色粉末；mp：209 ℃～210 ℃；ESI-MSm/z：137.3[M-H]-。1H-NMR(MeOH-d4， 300 MHz)δ： 6.71(2H， d，J=8.3 Hz，H-3，5)，7.77(2H，d，J=8.3 Hz，H-2，6)。13C-NMR(MeOH-d4，75 MHz)δ： 169.0(COOH)，161.9(C-4)，131.7(C-2，6)，121.7(C-1)，114.7(C-3，5)。綜合以上數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)[8]比對，鑒定此化合物為4-羥基苯甲酸(4-hydroxybenzoic acid)。

化合物7：白色粉末；mp：194 ℃～195 ℃；ESI-MSm/z：153.3[M-H]-。1H-NMR(MeOH-d4，300 MHz)δ： 7.34(1H，s，H-2)，7.32(1H，dd，J=7.2，1.7 Hz，H-6)，6.69(1H，d，J=8.8 Hz，H-5)。13C-NMR(MeOH-d4，75 MHz)δ： 168.9(COOH)，150.2(C-4)，144.8(C-3)，122.6(C-6)，121.7(C-1)，116.4(C-2)，114.4(C-5)。綜合以上數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)[8]比對，鑒定此化合物為原兒茶酸(protocatechuic acid)。

化合物8：黃色粉末；mp：267 ℃～268 ℃；ESI-MSm/z：287.3[M+H]+。1H-NMR(DMSO-d6，300 MHz)δ： 12.48(1H，s，5-OH)，10.80(1H， brs， 3′-OH)，10.12(1H， brs， 7-OH)，9.42(1H，brs，3-OH)，8.04(2H，d，J=9.4 Hz，H-2′，6′)，6.91(2H， d，J=8.8 Hz， H-3′，5′)，6.42(1H，d，J=1.7 Hz，H-8)，6.18(1H， d，J=2.2 Hz， H-6)。13C-NMR(DMSO-d6，75 MHz)δ： 176.4(C-4)，164.5(C-7)，161.3(C-9)，159.8(C-4′)，156.7(C-5)，147.3(C-2)，136.2(C-3)，130.1(C-2′，6′)，122.2(C-1′)，116.0(C-3′，5′)，103.5(C-10)，98.8(C-6)，94.0(C-8)。綜合以上數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)[10]比對，鑒定此化合物為山柰酚(kaempferol)。

應(yīng)用多種色譜分離純化技術(shù)并用體積分?jǐn)?shù)80%乙醇提取紅鳳菜地上部分，從其二氯甲烷提取物和乙酸乙酯提取物中分離得到8個(gè)化合物，化合物1～5和化合物7均為首次從該植物中分離得到。從化合物類型來看，以酚酸類化合物(化合物2～7)為主，表明紅鳳菜的藥用活性可能與該類成分有關(guān)。本文的研究結(jié)果可為紅鳳菜藥用功效(抗炎和止血等方面)的開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

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