2014年9月26－29日,浙江溫州

第十六屆全國神經(jīng)精神藥理學學術會議論文摘要

2014年9月26－29日,浙江溫州

專題1:痛疼與離子通道藥理學

T1－01

T1－02

Paeoniflorin exerts analgesic and hypnotic effects via adenosine A1receptors in a mouse neuropathic pain model

YIN Dou1，2，LIU Yuan-yuan1，WANG Tian-xiao1，CHEN Neng-neng2，QU Wei-min1，HUANG Zhi-li1

(1.Department of Pharmacology，School of Basic Medical Science，2.Department of Pharmacology，College of PharmaceuticalScience， Fudan University， Shanghai 200032，China)

Abstract:Sleep disturbance is closely associated with chronic pain.Given the bidirectionalrelationship between pain and sleep，treatment must focus on alleviation of both the pain and sleep disturbance.Paeoniflorin，a main active compound of the total glucosides of paeony，has been well documented to exhibit neuroprotective effects.In this study，we prepared a mouse model of neuropathic pain by partial ligation of sciatic nerve in mice and investigated the analgesic and hypnotic effects of paeoniflorin.We also examined whether adenosine A1receptors (A1Rs)involved in the analgesic and hypnotic activities of paeoniflorin.Finally，c-Fos expression in the brain was analyzed by immunohistochemistry.The results showed that intraperitoneally administration ofpaeoniflorin at50，100 mg·kg－1significantly increased the mechanical threshold and prolonged the thermal latency in partial sciatic nerve ligation(PSL)mice.Treatment with paeoniflorin at 50，100 mg·kg－1increased non-rapid eye movement (non-REM，NREM)sleep by 38%and 58%，and concomitantly decreased wakefulness by 36%and 52%during the 2 h after administration，respectively.However，pretreatment with 8-cyclopentyl-1，3-dimethylxanthine(CPT)，a specific adenosine A1R antagonist，abolished the analgesic and hypnotic effects of paeoniflorin.Moreover，there was no significant difference in mechanical threshold，thermal latency and NREM sleep amount after the administration of paeoniflorin at 100 mg·kg－1in A1R KO PSL mice. The elevated level of c-Fos expression in the cingulate cortex and PAG induced by PSL was remarkably inhibited by paeoniflorin.These results indicate that paeoniflorin exerts analgesic and hypnotic effects via adenosine A1Rs in a mouse neuropathic pain model.

Key words:adenosine A1receptor；neuropathic pain；paeoniflorin；sleep disturbance

T1－03

Auxiliary proteins promote modal gating of AMPA-and kainate-type glutamate receptors

ZHANG Wei

(Institute of Chinese Integrative Medicine，Hebei Medical University)

Abstract:The gating behavior of α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid(AMPA)and kainate receptors is modulated by association with the auxiliary proteins: transmembrane AMPA receptor regulatory proteins(TARPs)and neuropilin tolloid-like(Netos)，respectively.Although the mechanisms underlying receptor modulation differ for both AMPA and kainate receptors，association with these auxiliary subunits results in the appearance of a slow component in the decay of ensem-ble responses to rapid applications of saturating concentrations of glutamate.We show here that these components arise from distinct gating behaviors，characterized by substantially higher open probability(Popen)，which we only observe when core subunits are associated with their respective auxiliary partners.We refer to these behaviors as gating modes，because individual receptors switch between the low-and high-Popen gating on a time-scale of seconds.At any given time，association of AMPA and kainate receptors with their auxiliary subunits results in a heterogeneous receptor population，some of which are in the high-Popenmode and others that display gating behavior similar to that seen for receptors formed from core subunits alone.While the switching between modes is infrequent，the presence of receptors displaying both types of gating has a large impact on both the kinetics and amplitude of ensemble currents similar to those seen at synapses.

Key words:auxiliary protein；receptors，glutamate

T1－04

鉤吻素子抗神經(jīng)病理性疼痛作用與脊髓背角膠質(zhì)細胞及TSPO的關系

金桂林，黃慧慧，劉 銘，林少梅，俞昌喜

(福建醫(yī)科大學藥學院藥理學系，福建福州 350004)

目的探討鉤吻素子的抗神經(jīng)病理性疼痛作用與其調(diào)節(jié)脊髓膠質(zhì)細胞及TSPO的關系。方法建立大鼠坐骨神經(jīng)慢性束縛損傷(CCI)神經(jīng)病理性疼痛模型，運用免疫熒光組織化學的方法觀察在CCI模型上不同時程以及持續(xù)給與鉤吻素子后脊髓背角小膠質(zhì)細胞、星形膠質(zhì)細胞、神經(jīng)元及TSPO的表達變化；并采用免疫組織化學雙標法結合熒光顯微技術，觀測TSPO在神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞(包括小膠質(zhì)細胞、星形膠質(zhì)細胞)上的表達與分布狀況。在CCI模型上，觀察單次給予鉤吻素子后的鎮(zhèn)痛效應，并在此基礎上，鞘內(nèi)給予TSPO受體特異性拮抗劑PK11195，觀察其對鉤吻素子鎮(zhèn)痛效應的拮抗作用。最后，觀察鉤吻素子對C6膠質(zhì)細胞瘤分泌孕烯醇酮的影響。結果脊髓背角小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞在外周神經(jīng)損傷致神經(jīng)病理性疼痛過程中均呈現(xiàn)動態(tài)活化，而且小膠質(zhì)細胞活化早于星形膠質(zhì)細胞。在這過程中，給予鉤吻素子在發(fā)揮鎮(zhèn)痛效應同時，可顯著抑制脊髓背角星形膠質(zhì)細胞的活化，而對小膠質(zhì)細胞的活化未有顯著影響，提示抑制脊髓星形膠質(zhì)細胞的活化可能是鉤吻素子抗神經(jīng)病理性疼痛的作用機制之一。在大鼠機械痛閾值顯著升高的同時，TSPO表達顯著下調(diào)。提示在神經(jīng)病理性疼痛中TSPO的表達隨著鉤吻素子發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用而下調(diào)。在神經(jīng)病理性疼痛狀態(tài)下，TSPO在小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞中表達，且在星形膠質(zhì)細胞中表達程度較高。鞘內(nèi)注射TSPO特異性拮抗劑PK11195可顯著拮抗鉤吻素子鎮(zhèn)痛效應，提示鉤吻素子可能直接或間接作用與脊髓背角TSPO。在C6膠質(zhì)瘤細胞上觀察到鉤吻素子顯著增加C6膠質(zhì)瘤細胞孕烯醇酮的含量，提示鉤吻素子可能促進TSPO生成神經(jīng)甾體發(fā)揮藥理作用。結論鉤吻素子抗神經(jīng)病理性疼痛作用與其抑制脊髓背角星形膠質(zhì)細胞活化有關，TSPO可能為鉤吻素子抗神經(jīng)病理性疼痛的作用靶點之一。

鉤吻素子；神經(jīng)病理性疼痛；小膠質(zhì)細胞；星形膠質(zhì)細胞；TSPO；PK11195；藥物作用靶點

T1－05

鉤吻素子膜控緩釋微丸的制備及其體內(nèi)外評價

蘇燕評，廖凱君，俞昌喜

(福建醫(yī)科大學藥學院，福建福州 350004)

摘要:目的優(yōu)化制備鉤吻素子膜控緩釋微丸并對其體內(nèi)外釋藥特性進行評價。方法以乙基纖維素水分散體蘇麗絲(Surelease)作為緩釋材料，以微丸的收率、圓整度和鉤吻素子體外釋放速率為指標，采用液相層積法制備鉤吻素子膜控緩釋微丸；考察高溫、高濕及光照等因素對其穩(wěn)定性的影響；采用LC-MS/MS法測定鉤吻素子緩釋微丸膠囊比格犬單次口服給藥后血藥濃度-時間曲線，評價其在比格犬體內(nèi)的釋藥特性。結果Surelease包衣增重30%，黏合劑為羥丙甲基纖維素(HPMC 5cps)且濃度為15 g·L－1，隔離層HPMC 5cps用量為1%時，鉤吻素子膜控緩釋微丸工藝重現(xiàn)性和釋放均一性良好，其在12 h內(nèi)體外釋藥穩(wěn)定、緩慢、完全；其穩(wěn)定性受高溫、高濕及光照等因素影響較大；比格犬體內(nèi)的釋藥特性表明，鉤吻素子緩釋微丸膠囊與其普通片生物等效，但緩釋效果不顯著。結論本鉤吻素子緩釋微丸具有良好的體外緩釋效果，在比格犬體內(nèi)與鉤吻素子普通片生物等效，但未有顯著的緩釋效果。

關鍵詞:鉤吻素子；乙基纖維素水分散體；緩釋微丸；體外釋放度；穩(wěn)定性；血藥濃度

基金項目:福建省自然科學基金(2013J01374)

通訊作者:俞昌喜,E-mail:changxiyu＠m(xù)ail.fjmu.edu.cn

T1－06

鼻腦通鼻用噴霧劑對血管活性肽、炎癥因子及致痛物質(zhì)的影響

侯虹麗，孫芳玲，艾厚喜，張 麗，王 文

(首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院藥物研究室，教育部神經(jīng)變性病學重點實驗室，北京市老年病醫(yī)療研究中心，北京 100053)

摘要:目的闡述鼻腦通的鎮(zhèn)痛作用機制。方法實驗分兩部分即整體動物實驗和細胞水平實驗。整體動物實驗:分為對照組、模型組、鼻腦通(低、中、高劑量組)，采用硝酸甘油皮下注射制備小鼠實驗性偏頭痛模型，造模后20 min開始記錄小鼠前肢搔頭的次數(shù)，記錄10 min；造模4 h后腹主動脈取血，測定血漿中血管活性肽ET-1和CGRP指標。細胞水平實驗:分為空白組、損傷組和損傷加藥(低、中、高劑量組)，培養(yǎng)的人神經(jīng)母細胞瘤細胞系SH-SY5Y細胞給予鼻腦通(0.04，0.4和4 mg·L－1)預孵育24 h后，加入H2O21000 μmol·L－1作用18 h誘導產(chǎn)生損傷，測定細胞上清液中血管活性肽內(nèi)皮素1(ET-1)、降鈣素基因相關肽(CGRP)；炎癥因子白細胞介素1α(IL-1α)、IL-8；致痛物質(zhì) P物質(zhì)(SP)、5-羥色胺(5-HT)、一氧化氮(NO)的含量。結果整體動物實驗:與對照組相比，模型組動物搔頭次數(shù)顯著增多(P＜0.001)；提前給予鼻腦通鼻用噴霧劑3個劑量后造模小鼠的搔頭次數(shù)均比模型組顯著減少(P＜0.05，P＜0.01)。與對照組相比，模型組動物血漿 ET-1含量顯著升高(P＜0.001)、CGRP含量升高(P＜0.01)；而與模型組相比，提前給予鼻腦通鼻用噴霧劑3個劑量后造模的動物血漿中、高劑量組ET-1含量顯著降低(P＜0.01)，CGRP含量均降低(P＜0.05)。細胞水平實驗:與對照組相比，損傷組細胞上清液血管活性肽ET-1和CGRP含量顯著增多(P＜0.01，P＜0.05)；炎癥因子IL-8含量顯著增多(P＜0.01)；致痛物質(zhì)SP，5-HT和NO含量顯著增多(P＜0.01)。而與損傷組相比，鼻腦通中、高劑量組細胞上清液血管活性肽ET-1含量降低(P＜0.05)，且炎癥因子IL-8含量也降低(P＜0.05，P＜0.01)；鼻腦通中、高劑量組致痛物質(zhì)SP含量比損傷組減少(P＜0.05)，高劑量組5-HT和NO含量比損傷組減少(P＜0.05)。結論整體動物實驗:鼻腦通鼻用噴霧劑能減少實驗性偏頭痛動物的搔頭次數(shù)，其治療偏頭痛的機制可能與降低動物血漿ET-1和CGRP含量有關。細胞水平實驗:鼻腦通治療偏頭痛的機制可能與降低H2O2誘導的SH-SY5Y細胞損傷后血管活性肽ET-1、炎癥因子IL-8釋放以及抑制致痛物質(zhì)SP，5-HT和NO的釋放有關。

關鍵詞:鼻腦通；鎮(zhèn)痛；血管活性肽

T1－07

磷酸肌醇正向調(diào)控重組于人工脂雙層膜上的瞬態(tài)感受器電位陽離子通道子類V1

孫曉輝

(蘇州大學醫(yī)學部藥學院，江蘇蘇州 215123)

摘要:目的研究磷酸肌醇對瞬態(tài)感受器電位陽離子通道子類V成員1(TRPV1)通道活性的影響。方法通過免疫沉淀的方法將TRPV1通道蛋白從穩(wěn)定表達TRPV1通道的人胚腎HEK293細胞中分離提取，然后重組在中性的人工脂雙層膜〔由1-palmitoyl-2-oleoyl-glycero-3-phosphocoline(POPC)和1-palmitoyl-2-oleoyl-glycero-3-phosphoethanolaminein(POPE)(3∶1，V/V)組成〕上來考察磷酸肌醇對TRPV1通道活性的直接影響。結果在沒有外加刺激比如辣椒素或是加熱的情況下，重組于人工脂雙層膜上的TRPV1通道幾乎沒有開放，而單獨的辣椒素或是加熱的刺激(不另加磷酸肌醇)也幾乎不能激活通道。然而，當溶液中含有磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸鹽〔PI(4，5)P2〕2.5 μmol·L－1時，辣椒素顯著激活TRPV1通道，增加PI(4，5)P2的濃度可以進一步增加辣椒素引起的通道開放，說明PI(4，5)P2正向調(diào)節(jié)通道活性。另外，和細胞體系中記錄到的TRPV1單通道特性一樣，重組在人工膜上的TRPV1通道也表現(xiàn)出較高的外向電導和開放幾率。在2.5 μmol·L－1PI(4，5)P2和2 μmol·L－1辣椒素的刺激下，TRPV1通道的平均外向電導為(98.4±1.8)pS而內(nèi)向電導為(48.4±2.4)pS。同時，在對磷酸肌醇對TRPV1通道熱激活特性的影響的研究中，我們發(fā)現(xiàn)不同的磷脂對TRPV1通道的熱激活有不同的影響，在42℃時，PI(4，5)P2幾乎使通道完全開放，然而PI(4)P只能引起非常低的開放幾率，有趣的是，帶負電的脂質(zhì)POPG也能使通道完全開放，但是開放電導只有正常電導的1/3。結論磷酸肌醇對TRPV1通道的活性調(diào)控是正向的。

關鍵詞:磷酸肌醇；TRPV1通道；辣椒素；熱激活

通訊作者:孫曉輝,E-mail:sunxiaohui＠suda.edu.cn

T1－08

抗癌止痛肽鎮(zhèn)痛作用的鈉離子通道機制

朱倩如1，劉息芳1，李桂霞1，張景海2，李春莉1，吳春福1(沈陽藥科大學1.藥學院藥理教研室，2.制藥工程學院生化教研室，遼寧沈陽 110016)

摘要:目的探討抗癌止痛肽(AGAP)的止痛作用機制，考察了其鎮(zhèn)痛作用是否與調(diào)節(jié)鈉離子通道相關，以期為闡述抗癌止痛肽的鎮(zhèn)痛作用與機制提供理論依據(jù)。方法應用原代培養(yǎng)和急性分離的方法獲得大鼠背根神經(jīng)節(jié)(DRG)神經(jīng)元，應用MTT法考察AGAP對大鼠DRG神經(jīng)元存活率的影響；采用膜片鉗全細胞記錄模式結合分子生物學實驗考察抗癌止痛肽的鎮(zhèn)痛作用的離子通道機制。結果實驗結果表明，抗癌止痛肽對原代培養(yǎng)和急性分離的大鼠DRG神經(jīng)元鈉離子通道電流均能顯著抑制。進一步分型研究結果表明，抗癌止痛肽能以濃度依賴和電壓依賴的方式顯著抑制TTX-R Na＋電流，使TTX-R Na＋的激活曲線向負向移動。進一步的研究結果表明，抗癌止痛肽對急性分離的CCI模型大鼠DRG神經(jīng)元Na＋電流具有顯著地抑制作用。結論提示抗癌止痛肽的鎮(zhèn)痛作用可能是通過調(diào)節(jié)DRG神經(jīng)元鈉離子通道的實現(xiàn)的。

關鍵詞:抗癌止痛肽；鈉離子通道；DRG

基金項目:國家自然科學基金面上項目(81073081)；中國博士后基金特別資助項目(201104427)；哈爾濱醫(yī)科大學生物醫(yī)藥工程省部共建教育部重點實驗室開放課題

通訊作者:李春莉,E-mail:lichunli＿2012＠126.com；吳春福,E-mail:chunfuw＠gmail.com

T1－09

TREK-2雙孔鉀離子通道的內(nèi)門調(diào)控機制

馬曉蕓?，卓仁恭?，張 康 ，劉曉燕，魏曉莉，鄭建全(軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，北京 100850)

摘要:目的探討 TREK-2通道的內(nèi)門調(diào)控機制。方法采用分子生物學定點突變、爪蟾卵母細胞表達和雙電極電壓鉗技術，以TREK-2激動劑(2-APB)為工具，探討TREK-2通道的內(nèi)門調(diào)控機制。結果電生理特征分析表明，2-APB對TREK-2的激動作用不受胞外鉀離子濃度變化的影響，同時鉀離子結合位點4突變體與野生型對2-APB的反應相似。定點突變實驗表明，位于內(nèi)門螺旋中間位置的甘氨酸鉸鏈突變體對2-APB的敏感性下調(diào)。進一步的研究表明，缺失TREK-2位于胞內(nèi)區(qū)的C末端遠側區(qū)可導致該通道對2-APB的敏感性上調(diào)，而缺失近側區(qū)則明顯降低了通道對該化合物的敏感性。結論2-APB通過調(diào)控TREK-2通道的內(nèi)門來實現(xiàn)其刺激通道開放功能；TREK-2通道胞內(nèi)區(qū)的C末端近側區(qū)在內(nèi)門調(diào)控過程中發(fā)揮重要作用。

關鍵詞:雙孔鉀通道；TREK-2；2-APB；內(nèi)門調(diào)控機制

基金項目:國家自然科學基金青年項目(31200797)；國家科技重大專項(2014ZX09507-003)；國家科技重大專項(2012ZX09301003-001)

通訊作者:鄭建全,E-mail:jqzheng2012＠163.com

?共同第一作者.

T1－10

神經(jīng)病理性疼痛對囊泡谷氨酸轉運體表達的影響

王洪升，俞 綱，王志桐，伊首璞，蘇瑞斌，宮澤輝

(軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，北京 100850)

摘要:目的觀察神經(jīng)損傷過程中囊泡谷氨酸轉運體(VGLUT)時空依賴性的表達變化，探討VGLUT與神經(jīng)病理性疼痛的相關性。方法建立大鼠坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷模型(SNI)，應用實時定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測術后不同時間點VGLUT1、VGLUT2以及兩種相關蛋白(突觸結合蛋白和GADPH)在脊髓和背根神經(jīng)節(jié)的表達變化。結果SNI術后VGLUT1和VGLUT2 mRNA水平顯著升高；SNI術后第7天和14天，VGLUT2蛋白水平在損傷側脊髓囊泡組分中特異性升高，而VGLUT1在囊泡和膜結合組分中均無顯著改變。VGLUT2蛋白水平上調(diào)并不伴隨囊泡突觸結合蛋白和GAPDH的表達變化。結論VGLUT，尤其是VGLUT2的表達隨神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)展而改變。VGLUT2的變化可能是神經(jīng)病理疼痛條件下谷氨酸失衡的新機制。

關鍵詞:囊泡谷氨酸轉運體；疼痛；脊髓；背根神經(jīng)節(jié)

T1－11

特異阻斷α9α10乙酰膽堿受體的新穎芋螺毒素

羅素蘭1，長孫東亭1，吳 勇1，朱曉鵬1，胡遠艷1，David J.CRAIK2，J.Michael MCLNTOSH3

〔1.熱帶生物資源教育部重點實驗室(海南大學)，?？谑泻Ｑ笏幬镏攸c實驗室(海南大學)海南?？?70228；2.Institute for Molecular Bioscience， The University of Queensland，Brisbane，QLD 4072；3.Departments of Biology and Psychiatry，University of Utah，Salt Lake City，UT 84112 USA〕

摘要:煙堿型乙酰膽堿受體(nAChR)是由5個亞基組成的五聚體跨膜蛋白，分為肌肉型和神經(jīng)型兩大類，其中神經(jīng)型nAChRs異常復雜，它們由不同的α和β亞基組成異源或同源型的功能性受體亞型，在脊椎動物中，至少有12個亞基，即α2～α10，β2～β4。雖然這些亞型的藥理學功能截然不同，但其結構非常相似，極難區(qū)分，以致各個亞型的生理功能和藥理學作用至今尚不清楚。發(fā)現(xiàn)和開發(fā)各個亞型的特異性分子探針，將有利于揭示和闡釋它們在生命體內(nèi)的功能，同時有可能研發(fā)出針對上述不同疾病的治療藥物。近年來，神經(jīng)型α9α10乙酰膽堿受體亞型(α9α10nAChR)備受關注。研究表明，α9α10nAChR是治療神經(jīng)痛、癌癥化療、乳腺癌、肺癌、傷口愈合、實驗性自身免疫性腦脊髓炎等的新靶點。α9α10nAChR阻斷劑具有治療神經(jīng)痛的效果，具有阻止神經(jīng)受傷和加速受傷神經(jīng)恢復的功能。角化細胞上的α9α10nAChR在傷口愈合的病理生理學過程中起著很重要的作用。α9nAChR亞基在乳腺癌組織中過表達。α9亞基變體影響支氣管細胞的轉化與增殖，該亞基在乳腺癌與肺癌的治療中具有非常重要的意義。我們從海南產(chǎn)的將軍芋螺(Conusgeneralis)中鑒定出一個新家族(αO－)芋螺毒素基因，其編碼產(chǎn)生的成熟肽含有4個半胱氨酸(Cys)殘基。我們合成了該芋螺毒素可能存在的3個二硫鍵異構體。過去發(fā)現(xiàn)的O-超家族芋螺毒素，例如由美國FDA批準的芋螺毒素治療新藥，奇考諾肽(ziconotide)，含有6個Cys，是鈣離子通道的強阻斷劑。然而，本研究發(fā)現(xiàn)的這個芋螺毒素并不阻斷鈣離子通道，卻是 nAChRs的強阻斷劑，對 α9α10 nAChR亞型的活性最強，其半阻斷劑量僅為3.8 nmol·L－1。對毒素受體解離動力學進行了研究，結果表明它與α9α10 nAChR的結合位點與競爭性結合的α-芋螺毒素RgIA結合的位點沒有交疊。對它的3個異構體NMR結構進行了解析。在CCI神經(jīng)痛模型上，該新穎芋螺毒素顯示出極強的鎮(zhèn)痛活性。該αO-新家族芋螺毒素是α9α10 nAChR的選擇性強阻斷劑，結構新穎，是研究該受體結構與功能的寶貴分子探針，也是很難得的治療神經(jīng)痛、癌癥化療等的原創(chuàng)先導藥物。它的作用靶點清楚，活性強，選擇性高，是開發(fā)新型鎮(zhèn)痛藥的寶貴候選藥物，蘊涵著巨大的經(jīng)濟價值和社會效益。

關鍵詞:αO-新家族芋螺毒素；α9α10乙酰膽堿受體；NMR空間結構；神經(jīng)痛；鎮(zhèn)痛

通訊作者:羅素蘭,E-mail:luosulan2003＠163.com

T1－12

新型鈉離子通道阻斷劑ZP-21的鎮(zhèn)痛作用

梁曉南，俞 綱，蘇瑞斌

(軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，北京 100850)

摘要:目的鈉離子通道是神經(jīng)病理性疼痛治療的重要靶標，本研究在多種動物模型上對新結構鈉離子通道阻斷劑ZP-21的鎮(zhèn)痛作用和不良反應進行了初步評價。方法在小鼠坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷(SNI)和紫杉醇致外周神經(jīng)損傷模型上觀察ZP-21對神經(jīng)病理性疼痛的影響；在小鼠熱板和醋酸扭體模型上觀察ZP-21對急性疼痛的影響；觀察ZP-21對動物自發(fā)活動的影響。結果ZP-21(1.25，5和10 mg·kg－1，po)劑量依賴性地抑制SNI和紫杉醇所致神經(jīng)痛，高劑量組有效時間超過5 h，但ZP-21(10 mg·kg－1，po)在熱板和醋酸扭體模型上未表現(xiàn)出顯著的鎮(zhèn)痛作用。ZP-21(20，40和80 mg·kg－1，po)對小鼠自發(fā)活動無顯著影響。結論ZP-21對神經(jīng)病理性疼痛有特異性鎮(zhèn)痛作用，藥效強、有效時間長，在實驗劑量下未觀察到顯著不良反應。

關鍵詞:鈉離子通道阻斷劑；ZP-21；神經(jīng)病理性疼痛；鎮(zhèn)痛

T1－13

神經(jīng)元活動調(diào)控Kv7/KCNQ通道在細胞膜的分布

李 彩，黃鵬程，呂 青，郭蓮軍，徐旭林

(華中科技大學同濟醫(yī)學院基礎醫(yī)學院藥理學系，湖北武漢 430030)

摘要:目的研究大鼠海馬神經(jīng)元Kv7/KCNQ通道的活動依賴性轉運及其調(diào)控機制。方法海馬神經(jīng)元(E18天)原代培養(yǎng)12～14 d進行藥物處理，通過Western blot檢測KCNQ2和KCNQ3總蛋白與膜蛋白的變化情況。結果①谷氨酸(10 μmol·L－1，10 min)和KCl(50 mmol·L－1，20 min)對KCNQ2和KCNQ3總蛋白的表達沒有影響，但是使細胞膜上的KCNQ2和KCNQ3降低。② NMDA (20 μmol·L－1，10 min)和AMPA(100 μmol·L－1，15 min)使細胞膜上的KCNQ2和KCNQ3表達降低；使海馬神經(jīng)元M電流的幅度明顯降低；NMDA和AMPA受體拮抗劑AP-5 (100 μmol·L－1，15 min)和CNQX(100 μmol·L－1，15 min)可阻斷谷氨酸下調(diào)細胞膜上KCNQ2和KCNQ3的作用。③無鈣和CdCl2(200 μmol·L－1，15 min)可抑制谷氨酸下調(diào)細胞膜上KCNQ2和KCNQ3的作用。④PKA激動劑forskolin(10 μmol·L－1，20 min)不影響細胞膜上KCNQ2和KCNQ3水平；PKC激動劑PMA(1 μmol·L－1，30 min)使細胞膜上的KCNQ2和KCNQ3蛋白水平降低，并且PKC拮抗劑GF 109203X(1 μmol·L－1，30 min)可抑制谷氨酸下調(diào)細胞膜上KCNQ2和KCNQ3的作用。結論離子型谷氨酸受體介導海馬神經(jīng)元Kv7/KCNQ通道蛋白的活動依賴性轉運，鈣離子和PKC的激活參與了此轉運過程。

關鍵詞:Kv7/KCNQ通道；轉運；谷氨酸受體；興奮性；海馬神經(jīng)元

基金項目:國家自然基金課題(81173038,81001425, 81001432)

通訊作者:徐旭林,E-mail:xulinxu＠hust.edu.cn

T1－14阿魏酸對CCl誘導的小鼠神經(jīng)病理性疼痛的改善作用及機制

俞雪鋒，謝昫珮，吳 凡，嚴奇植，許笑笑，吳飛燕，潘建春

(溫州醫(yī)科大學藥學院腦科學研究所，浙江溫州 325035)

摘要:目的探討阿魏酸(FA)對坐骨神經(jīng)慢性壓迫模型(CCI)誘導的小鼠神經(jīng)病理性疼痛的改善作用及機制研究。方法實驗小鼠分為假手術組，CCI模型組，不同劑量的藥物組。采用坐骨神經(jīng)結扎方法構建慢性神經(jīng)痛模型，手術后恢復5 d，采用行為學評價CCI小鼠的機械痛敏和熱痛敏，確定CCI動物模型建立成功后，開始連續(xù)21 d給予不同劑量的FA。給藥期間采用相同的行為學評價藥物的治療效果。第22天，結束行為學測試后，斷頭取腦和脊髓，檢測腦內(nèi)及脊髓內(nèi)單胺遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物含量和單胺氧化酶活性。結果給藥2周后，與CCI模型組相比，高劑量FA給藥組痛覺增敏現(xiàn)象明顯改善；高劑量FA給藥組海馬，額葉和脊髓中5-羥色胺，去甲腎上腺素含量顯著上升，杏仁核內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量變化無明顯差異；同時進一步發(fā)現(xiàn)，高劑量FA給藥組海馬，額葉和脊髓中單胺氧化酶A型活性顯著減低，單胺氧化酶B型活性變化無明顯差異。結論阿魏酸可以改善CCI誘導的慢性神經(jīng)性疼痛，其機制可能與抑制海馬，額葉和脊髓的單胺氧化酶A活性，增加海馬，額葉和脊髓內(nèi)5-羥色胺和去甲腎上腺素水平升高有關。

關鍵詞:阿魏酸；抑郁；單胺遞質(zhì)；單胺氧化酶

專題2:抑郁焦慮與精神分裂癥

T2－01

Anxiolytic of YL-lPA08，a potent ligand for the translocator protein(18 ku)in animal models of posttraumatic stress disorder

ZHANG Li-ming1， ZHAO Nan1， CHEN Hong-xia1，ZHANG You-zhi1，YANG Ri-fang2，LI Yun-feng1

(1.Department of New Drug Evaluation，2.Department of Medicinal Chemistry，Institute of Pharmacology and Toxicology，Academy of Military Medical Sciences，Beijing 100850，China)

Abstract:OBJECTlVETo detect whether YLIPA08，a new TSPO ligand designed and synthesized by our institute，may be effective in the treatment of PTSD.METHODSWe first assessed the effects of YL-IPA08 in alleviating the enhanced anxiety and fearresponse induced in the inescapable electric foot shock-induced mouse model of PTSD and the time-dependent sensitization(TDS)procedure，a rat PTSD animal model.In an effort to explore the role of TSPO in mediating the anti-PTSD effect of YL-IPA08，we then tested whether blocking the TSPO ligand with a TSPO antagonist，PK11195；either alone or in combination with YL-IPA08 treatment，affected the behavioral effect of YL-IPA08 in post-TDS rats.Furthermore，the changes of Allo in the serum and prefrontal cortex after chronic YL-IPA08 administration were also assessed in TDS-treated rats.RESULTSIn the present study，we showed that chronic treatment with YL-IPA08 caused significant suppression of the enhanced anxiety and contextual fear induced in the inescapable electric foot-shock induced mouse model of PTSD and the TDS procedure in rats；these effects were completely blocked by the TSPO antagonist PK11195.Furthermore，YL-IPA08 treatment increased the levels of Allo in the prefrontal cortex and serum of post-TDS rats and these effects were antagonized by PK11195.CONCLUSlONIn summary，the findings from the current study showed that YL-IPA08，a potent and selective TSPO ligand，had a clear anti-PTSD-like effect，which might be partially mediated by binding to TSPO and the subsequent synthesis of allopregnanolone.

Key words:the translocator protein 18 ku；posttraumatic stress disorder； allopregnanolone； YL-IPA08；neurosteroids

Foundation item:The project supported by the National Natural Science Foundation of China(81001653，30973516，81102423，81072624 and 81173036)；and the National Key New Drug Creation Program (2012ZX09102101-004， 2012ZX09J12110-02C， and 2012ZX09J12201-004)

Corresponding author:LI Yun-feng，E-mail:lyf619＠aliyun.com

T2－02

基于小膠質(zhì)細胞的抑郁癥病理研究進展

夏聰媛，陳乃宏

(中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院藥物研究所，北京100050)

摘要:小膠質(zhì)細胞作為大腦中主要的免疫細胞，在維持大腦穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用。近來，很多研究認為小膠質(zhì)細胞狀態(tài)與抑郁癥的發(fā)生發(fā)展有緊密聯(lián)系，慢性應激可有效的增加大鼠前額皮質(zhì)小膠質(zhì)細胞激活，很多抗抑郁藥對小膠質(zhì)細胞有直接作用，但其作用機制仍不明確。本文總結了小膠質(zhì)細胞與抑郁癥的相關研究，討論了小膠質(zhì)細胞參與抑郁癥發(fā)展的作用機制。首先，精神疾病主要被認為是由神經(jīng)元網(wǎng)絡的突觸和神經(jīng)遞質(zhì)等引起的。精神科藥物如抗精神病藥和抗抑郁藥已了解到通過受體和神經(jīng)遞質(zhì)轉運蛋白(如多巴胺和血清素)調(diào)節(jié)突觸。最近的研究發(fā)現(xiàn)小膠質(zhì)細胞參與突觸功能調(diào)節(jié)。此外，慢性炎癥已發(fā)現(xiàn)與抑郁癥的發(fā)展有緊密聯(lián)系?？股孛字Z環(huán)素，小膠質(zhì)細胞M1表型的選擇性抑制劑，抑制小膠質(zhì)細胞激活外有效的改善應激動物的認知能力，并且在獲得性依賴的大鼠模型表現(xiàn)出抗抑郁藥類似的作用。最后，我們建議調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細胞狀態(tài)可能是抑郁癥的治療的關鍵。

關鍵詞:抑郁癥；小膠質(zhì)細胞；炎癥；突觸

通訊作者:陳乃宏,E-mail:chennh＠imm.ac.cn

T2－03

FKBP5參與糖皮質(zhì)激素介導的抑郁樣行為的發(fā)生

陳 姣1，楚世峰1，李 婧2，陳乃宏

(1.中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院藥物研究所，北京100050；2.天津中醫(yī)藥大學，天津 300193)

摘要:目的探討FKBP5是否參與糖皮質(zhì)激素介導的抑郁樣行為的發(fā)生。方法分別采用慢性輕度應激(CMS)和皮下注射皮質(zhì)酮40 mg·kg－1誘導抑郁大鼠模型；行為學采用強迫游泳實驗、糖水偏好實驗、新奇覓食潛伏期實驗、高架十字迷宮檢測大鼠的無助絕望、興趣缺失抑郁樣行為和焦慮樣行為；ELISA法檢測大鼠血漿中糖皮質(zhì)激素的水平；Western blot檢測大鼠海馬和額前皮質(zhì)中FK506結合蛋白51(FKBP5)的表達變化。結果CMS組大鼠在強迫游泳中表現(xiàn)出不動時間明顯增加；糖水偏好實驗中糖水消耗下降；新奇覓食潛伏期試驗中覓食潛伏期延長；高架十字中停留在閉臂中的時間明顯增加；CMS后海馬和額前皮質(zhì)中FKBP5表達上調(diào)，糖皮質(zhì)激素水平升高。皮下注射皮質(zhì)酮40 mg·kg－1，21 d)，大鼠表現(xiàn)出糖水偏好明顯降低的抑郁樣行為，PFC區(qū)FKBP5蛋白表達上調(diào)。結論FKBP5可能參與了糖皮質(zhì)激素介導的抑郁樣行為的發(fā)生。

關鍵詞:CMS；抑郁；FKBP5；糖皮質(zhì)激素

基金項目:國家自然科學基金資助項目(81274122, 81102831)；北京市自然基金重點項目(7131013)；教育部博士點基金重點項目(20121106130001)

通訊作者:陳乃宏,E-mail:chennh＠imm.ac.cn

T2－04

代謝組學研究復方柴歸方超臨界CO2提取物抗抑郁作用及其機制

劉 歡1，2，陳 磊1，2，鄭曉芬1，2，田俊生1，秦雪梅1

(山西大學1.中醫(yī)藥現(xiàn)代研究中心，山西太原 030006；2.化學化工學院，山西太原 030006)

摘要:目的應用不同抑郁癥動物模型評價復方柴歸方超臨界CO2提取物(FFCGF)的抗抑郁作用；通過核磁共振(1H-NMR)代謝組學技術結合多元統(tǒng)計分析方法研究抑郁癥模型大鼠尿液中內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的變化規(guī)律，探討FFCGF抗抑郁的作用機制。方法小鼠懸尾實驗(TST)、強迫游泳實驗(FST)是給藥14 d后，通過動物行為視頻分析系統(tǒng)觀察箱，記錄6 min內(nèi)小鼠行為，分析后4 min內(nèi)小鼠的行為絕望時間。大鼠慢性不可知應激(CUMS)模型對大鼠進行為期28 d的CUMS程序造模，藥物干預28 d，與CUMS造模同時進行，造模過程中觀察大鼠體重、糖水偏愛、穿越格數(shù)和直立次數(shù)的變化，造模結束后收集大鼠尿液，應用1H-NMR技術結合多元統(tǒng)計分析方法分析大鼠尿液內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的變化規(guī)律，尋找潛在的生物標志物。結果FFCGF能明顯減少小鼠懸尾實驗和強迫游泳實驗的行為絕望時間，改善CUMS模型大鼠的體重、糖水偏愛、穿越格數(shù)和直立次數(shù)；代謝組學結果表明FFCGF能夠明顯抑制CUMS程序引起的6種生物標志物的含量變化，使其恢復正常。結論通過3個不同的抑郁癥動物模型，說明FFCGF具有明確的抗抑郁作用；通過對生物標記物的分析，推測FFCGF可能通過調(diào)節(jié)能量代謝、脂質(zhì)代謝和氨基酸代謝發(fā)揮抗抑郁作用。

關鍵詞:復方柴歸方超臨界CO2提取物；代謝組學；抑郁癥；核磁共振

基金項目:國家自然科學基金項目(81102833, 81173366)；國家國際科技合作計劃項目(2011DFA32630)；“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項課題(2012ZX09103201-035)；山 西 省 科 技 攻 關 項 目(20130313015-1)；山西省普通高校特色重點學科建設項目

通訊作者:田俊生,E-mail:jstian＠sxu.edu.cn；秦雪梅,E-mail:qinxm＠sxu.edu.cn

T2－05

氯比普蘭抗抑郁的藥效學

甘丹娜，程玉芳，牛 波，王燦茂，吳金剛，徐江平

(南方醫(yī)科大學藥學院神經(jīng)藥理學科，廣東廣州 510515)

摘要:目的利用行經(jīng)典的慢性不可預知溫和應激CUMS抑郁模型，對氯比普蘭進行抗抑郁的藥效學評價。方法①60只雄性Wistar大鼠隨機分為正常對照組、CUMS模型組、氯比普蘭(0.05，0.15和0.45 mg·kg－1)給藥組、艾司西酞普蘭陽性對照組(5.0 mg·kg－1)。CUMS處理6周，給藥28 d后進行糖水偏愛實驗、曠場實驗、高架迷宮實驗、強迫游泳實驗測試。② 將動物處死后取腦，檢測海馬組織中 PKA， P-CREB 和 BDNF 蛋白變化。結果①糖水偏愛實驗中各給藥組大鼠糖水偏愛度均高于模型組，其中高劑量給藥組及陽性對照組具有顯著性差異；強迫游泳實驗中，各給藥組動物不動時間均不同程度的降低，其中高劑量組及陽性對照組動物的不動時間明顯低于模型組；高架迷宮實驗中，模型組大鼠開臂停留時間百分比及進入開臂次數(shù)百分比明顯降低，各給藥組大鼠開臂停留時間百分比及進入開臂次數(shù)百分比顯著增加；在曠場實驗中，各給藥組大鼠的水平運動得分，垂直運動得分及理毛次數(shù)相對于模型組大鼠均顯著增多；② Western blotting檢測結果表明，CUMS組海馬PKA，P-CREB和BDNF蛋白含量明顯降低，各給藥組均能不同程度的提高PKA，P-CREB和BDNF蛋白含量，其中高劑量組及陽性對照組作用尤為顯著。結論新型PDE4抑制劑氯比普蘭可通過增加CUMS模型大鼠海馬PKA，P-CREB和BDNF的含量，增強cAMP信號通路，產(chǎn)生抗焦慮抗抑郁作用。

關鍵詞:氯比普蘭；抑郁；海馬；蛋白激酶

基金項目:國家自然科學基金-廣東省聯(lián)合基金重點項目(U1032006/L02)；國家自然科學基金(81373384；81301099)

T2－06

糖原合成酶激酶3β在阿姆西汀抗抑郁中的作用及其機制

薛 瑞，陳 嵐，張亭亭，陳紅霞，范瓊尹，龔正華，仲伯華，李云峰，張有志

(軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，北京 100850)

摘要:目的以糖原合成酶激酶3β(GSK3β)為切入點，探討阿姆西汀發(fā)揮速效強效抗抑郁作用的精細分子機制進行。方法① 建立大鼠嗅球切除模型(OB)和小鼠獲得性無助模型(LH)，在模型成功的基礎上，采用Western blotting方法，檢測抑郁模型動物海馬GSK3β、pGSK3β、Wnt/β-鏈蛋白通路及PI3K/Akt通路重要信號分子的表達；②評價阿姆西汀慢性給藥在OB和LH模型中的抗抑郁活性，在行為學有效的基礎上，檢測阿姆西汀對模型動物海馬GSK3β、pGSK3β、Wnt/β-鏈蛋白通路及PI3K/Akt通路重要信號分子的表達的影響。結果①OB大鼠和LH小鼠分別出現(xiàn)活動性增強或逃避失敗次數(shù)增多等抑郁樣表現(xiàn)，提示模型建立成功；OB和LH模型動物pGSK3β水平顯著降低，Wnt和pβ鏈蛋白表達降低，pAKT、pCREB和BDNF表達降低，但總GSK3β、β-鏈蛋白、AKT和CREB水平無改變；② 阿姆西汀在OB和LH模型中顯示強效、速效抗抑郁活性，起效時間分別為3 d和1 d，最低有效劑量為5 mg·kg－1；阿姆西汀慢性給藥可顯著逆轉抑郁動物模型導致的 GSK3β過度激活(pGSK3β表達降低)和相關通路重要信號分子磷酸化水平的下調(diào)，但對總GSK3β、β-鏈蛋白、AKT和CREB水平無影響；結論阿姆西汀在大鼠OB和小鼠LH模型中具有強效、速效的抗抑郁作用，阿姆西汀的抗抑郁作用可能與激活Wnt/β-鏈蛋白通路及PI3K/Akt通路，從而抑制GSK3β過度激活有關。

關鍵詞:阿姆西??；抗抑郁劑；抑郁模型；糖原合成酶激酶3β；信號通路

基金項目:國家科技重大專項新藥創(chuàng)制專項(2009ZX09103-025)；國家自然科學基金項目(81302761, 81274117,30973516)

T2－07

柴胡抗抑郁活性成分的篩選與活性

劉佳麗1，2，方 媛1，2，高曉霞1，秦雪梅1

(山西大學1.中醫(yī)藥現(xiàn)代研究中心，2.化學化工學院，山西太原 030006)

摘要:目的分離制備柴胡多炔化合物并研究其抗抑郁活性。方法采用傳統(tǒng)提取分離方法與高效液相色譜跟蹤法，從柴胡中提取分離得到4種多炔類化合物(RB1～RB4)，通過NMR(1H-NMR，13C-NMR和1H-1H-COSY)、UV和MS等方法對其結構進行鑒定；采用體外5-HT，NA和DA單胺遞質(zhì)再攝取抑制試驗，以氟西汀、地昔帕明和6-羥多巴為陽性藥研究其抗抑郁活性，并同時與逍遙散及柴胡石油醚部位抗抑郁活性進行比較。結果① 化合物制備結果顯示，4個化合物不能單獨穩(wěn)定存在，濃縮過程中RB1與RB2，RB3與 RB4發(fā)生互變現(xiàn)象，當順反式比例為1∶1～4時，于4℃避光條件下較穩(wěn)定，故合并為RB1～2和RB3～4。②體外單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的再攝取抑制實驗顯示:組合物1和組合物2能有效抑制5-HT，NA和DA的再攝取，其抑制率高于逍遙散和柴胡的石油醚部位，甚至高于陽性對照藥物氟西汀、地昔帕明和6-羥多巴。結論柴胡中多炔成分組合物有明顯的體外抗抑郁活性。

關鍵詞:柴胡；活性成分；抑郁

通訊作者:高曉霞,E-mail:gaoxiaoxia＠sxu.edu.cn

T2－08

5-HT1A部分激動和5-HT重攝取抑制雙靶標抗抑郁新藥鹽酸羥哌吡酮的效應和機制

李云峰

(軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，北京 100850)

摘要:目的系統(tǒng)評價鹽酸羥哌吡酮(YL-0919)的抗抑郁、抗焦慮和促認知作用，并明確其作用特點，同時闡明其作用靶標和神經(jīng)生物學機制。方法與結果①YL-0919作用靶標研究:采用放射配體競爭結合抑制實驗、GTPγS結合實驗發(fā)現(xiàn)，YL-0919不僅與5-HT轉運蛋白(SERT)和5-HT1A有高親和力和高選擇性結合，同時抑制5-HT重攝取并部分激動5-HT1A，靶標活性強于一線藥物和同靶標上市藥物維拉佐酮。②YL-0919急性給藥的抗抑郁作用研究:YL-0919(1.25～5 mg·kg－1)單次灌胃給藥，在行為絕望模型(小鼠懸尾、大小鼠強迫游泳)及藥理學模型上(小鼠5-HTP甩頭、利血平拮抗模型)具有顯著的抗抑郁作用，且與腦5-HT神經(jīng)功能增強有關，而與NE神經(jīng)功能無明確相關性。③YL-0919慢性和亞慢性給藥的抗抑郁作用研究:YL-0919(1. 25～5 mg·kg－1)慢性和亞慢性灌胃給藥，在小鼠新奇抑制攝食模型上，起效時間較氟西汀快速(1周vs.2周)；在小鼠獲得性無助模型、大鼠慢性不可預知應激模型和大鼠嗅球切除模型上具有顯著的抗抑郁作用，并具有快速起效的優(yōu)勢。④YL-0919的抗焦慮作用:YL-0919(0.625～2.5 mg·kg－1)急性或慢性灌胃給藥，在大鼠0-迷宮、高架十字迷宮、Vogel飲水沖突、新奇抑制攝食實驗上，具有顯著的抗焦慮作用。⑤YL-0919的促認知功能研究:灌胃給予YL-0919(0.625～2.5 mg·kg－1)在大小鼠新物體識別、小鼠Morris水迷宮、和跳臺實驗上具有顯著的促認知作用，而臨床一線抗抑郁藥氟西汀(5和10 mg·kg－1)和度洛西汀(5和10 mg·kg－1)則無此作用。⑥YL-0919與維拉佐酮抗抑郁、抗焦慮活性比較:在小鼠新奇抑制攝食實驗，小鼠懸尾實驗和強迫游泳實驗，YL-0919與維拉佐酮抗抑郁和抗焦慮效應相當，但YL-0919起效劑量較之維拉佐酮低2～3倍。⑦YL-0919的性功能副反應評價:YL-0919和維拉佐酮亞慢性和慢性給藥在其抗抑郁有效劑量范圍內(nèi)對雄性大鼠性功能無影響，而氟西汀可導致大鼠性功能障礙，與其臨床副作用表現(xiàn)一致。⑧ 信號轉導通路研究:采用ELISA和免疫印跡技術發(fā)現(xiàn)，YL-0919可增強大鼠前額皮層和海馬突觸膜激活腺苷酸環(huán)化酶(AC)活性以及蛋白激酶A(PKA)活性，以及海馬pCREB和pERK表達，且YL-0919抗抑郁作用可被低劑量5-HT1A拮抗劑WAY100635或腦室注射PKA阻斷劑H89完全阻斷。⑨神經(jīng)可塑性研究:采用大鼠活體LTP記錄技術證實，YL-0919重復灌胃5 mg·kg－1(7 d)顯著增加神經(jīng)可塑性，表現(xiàn)為PS和EPSP顯著增加，而氟西汀給藥7 d在其有效劑量下(10 mg·kg－1)無此作用；二者給藥21 d均可增加海馬神經(jīng)可塑性，提示YL-0919起效較氟西汀更快速，并且可增加神經(jīng)可塑性。結論YL-0919是強效且選擇性的5-HT1A部分激動劑和5-HT重攝取抑制劑，靶標活性強。不僅具有顯著的抗抑郁、抗焦慮活性，而且具有兼有促認知活性、無性功能障礙、起效更迅速等特點，較之臨床一線抗抑郁藥表現(xiàn)出明確的潛在優(yōu)勢。其機制與激動5-HT1A受體，增強cAMP-CREB信號通路功能，進而增加神經(jīng)可塑性密切相關。該藥物有可能成為一個較理想的特色抗抑郁新藥。

關鍵詞:鹽酸羥哌吡酮；抗抑郁藥物；神經(jīng)可塑性；信號轉導通路

T2－09

新型5-HT1A受體激動和5-HT重攝取抑制雙靶標抗抑郁劑YL-0919對慢性應激模型大鼠的抗抑郁作用

胡曉旭1，2，王玉露1，陳 力1，喻子眈1，仇志坤1，陳紅霞1，張有志1，劉化俠2，李云峰1

(1.軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，北京 100850；2.泰山醫(yī)學院，山東泰安 271000)

摘要:目的應用大鼠慢性應激模型探討5-HT1A受體激動和5-HT重攝取抑制雙靶標抗抑郁劑YL-0919抗抑郁作用。方法連續(xù)5周交替采用多種不可預知的刺激方式，以建立大鼠的慢性不可預知性應激模型，同時給予不同劑量(1.25，2.5和 5 mg·kg－1)YL-0919或鹽酸氟西汀(10 mg·kg－1)灌胃，采用蔗糖飲水實驗、開場實驗、新奇攝食實驗和高架十字迷宮實驗對YL-0919抗抑郁作用進行行為學評價；采用酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測大鼠血清皮質(zhì)酮含量。結果慢性灌胃給予YL-0919(1.25～2.5 mg·kg－1ig，5周)能明顯提高應激大鼠糖水偏嗜度(P＜0.05)，改善因慢性應激造成的“快感缺失”狀態(tài)，顯著增加應激大鼠的開場試驗模型中的活動性(P＜0.05)，明顯逆轉應激大鼠的在新奇抑制攝食實驗中攝食潛伏期延長(P＜0.05)，在不影響入臂總時間和總次數(shù)的情況下YL-0919可增加應激大鼠在高架十字迷宮模型進入開臂次數(shù)百分比和開臂停留時間百分比(P＜0.05)，顯著降低應激大鼠血清皮質(zhì)酮含量(P＜0.05)。結論在大鼠慢性不可預知性應激模型上，慢性灌胃給予YL-0919具有顯著的抗抑郁作用，其機制可能與抑制下丘腦-垂體-腎上腺軸的過渡激活有關。

關鍵詞:抑郁癥；抗抑郁藥；5-HT1A受體激動劑；5-HT重攝取抑制；YL-0919

基金項目:國家自然科學基金資助項目(81102423, 81173036,81001653)

通訊作者:李云峰,E-mail:ly619＠aliyun.com.cn；劉化俠,E-mail:huaxia66＠163.com

T2－10

精神分裂癥神經(jīng)發(fā)育障礙模型中空間偏好及認知功能的改變

何 馨，沈昊偉

(北京大學中國藥物依賴研究所，北京 100000)

摘要:產(chǎn)前感染和精神分裂癥發(fā)病風險增高密切相關。因此，孕期注射病毒抗原poly(I∶C)導致免疫應答被認可為制作子代精神分裂癥神經(jīng)發(fā)育障礙模型的成熟途徑。這種模型的成年后代表現(xiàn)出精神分裂癥的核心癥狀，即認知功能障礙。然而，注射poly(I∶C)孕鼠的后代未成年期所表現(xiàn)的行為異常與成年期表現(xiàn)出來的認知障礙兩者之前是否存在關聯(lián)還未可知。在實驗中，我們于兒童期(生后35 d)和青春期(生后60 d)進行了新奇環(huán)境自發(fā)活動測試，并在成年期(生后90～120 d)評估了注意力和社會交往能力等認知功能。我們發(fā)現(xiàn)與鹽水組動物相比，注射poly(I∶C)動物的后代兒童時期在曠場實驗中表現(xiàn)出對中央?yún)^(qū)的明顯偏愛，但兩組動物在所有區(qū)域的總活動度沒有明顯差異。青春期時，注射poly(I∶C)動物的后代在角落停留的時間要明顯長于鹽水組動物的后代，但是它們在角落的活動度以及總區(qū)域的活動度沒有明顯差異。值得注意的是，poly(I∶C)組動物的成年后代表現(xiàn)出了社交能力的下降，同時在五孔注意力轉移實驗中該組動物表現(xiàn)出了注意力準確度的下降。這些結果為以神經(jīng)發(fā)育障礙動物作為精神分裂癥的研究模型提供了證據(jù)，并提示該模型在兒童時期被擾亂的空間偏愛行為可能與其成年時期長期存在的認知障礙有關。產(chǎn)前感染導致個體兒童時期的行為變化能否預測該個體的認知功能，以及這些精神分裂癥樣異常的神經(jīng)生物學脆性仍需要進一步研究。

關鍵詞:精神分裂癥；空間偏好；認識功能

通訊作者:沈昊偉,E-mail:shenhw＠hsc.pku.edu.cn

T2－11

YL-lPA08的抗抑郁作用

王玉露，胡曉旭，陳 力，喻子眈，仇志坤，陳紅霞，張黎明，張有志，李云峰

(軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，北京 100850)

摘要:目的探討YL-IPA08的抗抑郁作用及可能作用機制。方法連續(xù)5周以每日一次的頻率給予大鼠一系列不可預知的應激刺激以建立慢性應激模型，每次刺激前給予AC5216或YL-IPA08，在應激結束后檢測大鼠糖水偏嗜度、開場活動、新奇攝食和高架十字迷宮；每組取部分動物整腦進行免疫熒光檢測以驗證YL-IPA08對大鼠神經(jīng)元再生的影響；其余動物取腦分區(qū)，用Western blotting法檢測海馬區(qū)p-CREB和BDNF的含量；取血清用ELISA法檢測皮質(zhì)酮的含量。結果在動物實驗中，慢性應激導致大鼠糖水偏嗜度降低、開場活動減少、攝食潛伏期延長及高架十字迷宮中開臂加閉臂總次數(shù)、開臂次數(shù)比例、開臂時間比例和向下探究次數(shù)減少，伴隨給予YL-IPA08和陽性對照組AC5216均能逆轉這種改變；免疫熒光結果顯示慢性應激模型組BrdU數(shù)量顯著減少，伴隨給予YL-IPA08和陽性對照組AC5216均能逆轉這種改變；用Western blotting法檢測到慢性應激大鼠海馬區(qū)p-CREB和BDNF的含量顯著降低，伴隨給予YLIPA08和陽性對照組AC5216均能逆轉這種改變；ELISA法檢測出慢性應激大鼠血清中皮質(zhì)酮含量顯著降低，伴隨給予YL-IPA08和陽性對照組AC5216均能逆轉這種改變。結論YL-IPA08在慢性應激大鼠動物模型上具有抗抑郁作用，其作用機制可能是通過增強神經(jīng)元再生、促進BDNF合成及抑制HPA軸來實現(xiàn)的。

關鍵詞:抑郁；慢性應激

基金項目:國家自然科學基金(81173036)

通訊作者:李云峰,E-mail:ly619＠aliyun.com.cn

T2－12

基于糖原合成酶激酶3β及其相關信號通路的小補心湯總黃酮抗抑郁機制

陳 力，薛 瑞，王玉露，胡曉旭，仇志坤，徐江平，李云峰，張有志

(軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，北京 100850)

摘要:目的研究小補心湯總黃酮(XBXT-2)調(diào)控糖原合成酶激酶3β(GSK3β)及其相關信號通路的機制。方法①建立小鼠慢性不可預知性應激模型，采用開場實驗、蔗糖飲水實驗評價XBXT-2的抗抑郁作用；②應用小鼠獲得性無助模型進一步評價XBXT-2的抗抑郁作用；③采用Western blot方法檢測XBXT-2對慢性應激小鼠海馬區(qū)Wnt2、β-鏈蛋白、蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)的表達和磷酸化表達的影響。結果① XBXT-2(25，50和100 mg·kg－1)慢性給藥可顯著提高慢性應激小鼠的糖水偏嗜度，增加小鼠開場水平活動次數(shù)和垂直活動次數(shù)；②XBXT-2(25 mg·kg－1)從測試第1天到第4天均可顯著減少獲得性無助小鼠的逃避失敗次數(shù)，并縮短逃避潛伏期；XBXT-2(50 mg·kg－1)從測試第3天均可顯著減少獲得性無助小鼠的逃避失敗次數(shù)，并縮短逃避潛伏期；③ Western blot結果顯示，XBXT-2(25和50 mg·kg－1)能顯著增加慢性應激小鼠海馬區(qū)Wnt2、β-鏈蛋白、p-Akt、p-GSK3β蛋白的表達。結論XBXT-2在多種抑郁動物模型上具有明確的抗抑郁行為效應，其可能的抗抑郁作用機制與激活Wnt/β-鏈蛋白和PI-3K/Akt/GSK3β信號通路密切相關。

關鍵詞:抗抑郁劑；XBXT-2；抑郁模型；GSK3β；信號轉導通路

基金項目:國家科技重大專項新藥創(chuàng)制專項(2009ZX09103-025)；國家自然科學基金項目(81302761, 81274117,30973516)

T2－13

抑郁模型下藥物代謝酶和藥物動力學

徐 峰

(上海交通大學第六人民醫(yī)院南院，上海 200000)

摘要:采用慢性不可預見性溫和應激(CUMS)方法構建抑郁大鼠模型，研究長期慢性應激導致的抑郁對肝藥物代謝酶和藥物動力學的影響。初步結果發(fā)現(xiàn)，在慢性不可預見溫和應激誘導的抑郁大鼠中，甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、環(huán)磷酰胺和他克莫司的藥物代謝動力學，與正常大鼠相比有顯著差異。抑郁大鼠肝組織藥物代謝酶CYP450總酶濃度/活性與正常大鼠相比有顯著增加。提示應激可能對肝酶有誘導作用，加快藥物的代謝。

關鍵詞:抑郁；藥物代謝酶

T2－14

阿魏酸抗抑郁樣作用及機制

嚴奇植，吳 凡，許笑笑，吳飛燕，潘建春

(溫州醫(yī)科大學藥學院腦科學研究所，浙江溫州 325035)

摘要:目的探討阿魏酸對急性應激模型小鼠抑郁樣行為的影響及可能的作用機制。方法通過強迫游泳測試和懸尾測試造急性抑郁小鼠模型，測試前急性給藥給予不同劑量的阿魏酸，測試前0.5 h給予丙咪嗪，行為學測試結束后取小鼠海馬、額葉、紋狀體、下丘腦，分別檢測個腦區(qū)單胺遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物含量、單胺氧化酶活性。結果與溶媒組相比，強迫游泳和懸尾測試中阿魏酸40和80 mg·kg－1組不動時間顯著減少；40和80 mg·kg－1組海馬和額葉中5-羥色胺，去甲腎上腺素含量顯著上升，紋狀體、下丘腦無差異；40和80 mg·kg－1組海馬和額葉中單胺氧化酶A型活性顯著減低，單胺氧化酶B型活性各腦區(qū)無差異。結論阿魏酸可以改善急性應激小鼠模型造成的抑郁樣行為，其機制可能與降低海馬和額葉單胺氧化酶A活性，增加5-羥色胺和去甲腎上腺素水平有關。

關鍵詞:阿魏酸；抑郁；單胺遞質(zhì)；單胺氧化酶

T2－15

阿魏酸和胡椒堿聯(lián)合用藥對抑郁樣行為的改善作用

謝昫珮，俞雪峰，吳飛燕，許笑笑，潘建春

(溫州醫(yī)科大學藥學院腦科學研究所，浙江溫州 325035)

摘要:目的探討低劑量阿魏酸和胡椒堿閾下劑量聯(lián)用對小鼠抑郁樣行為的改變及其可能的機制。方法根據(jù)單用阿魏酸與單用胡椒堿急性治療抑郁樣小鼠所得ID50值選取低劑量阿魏酸以及胡椒堿閾下值。閾下劑量胡椒堿與低劑量阿魏酸聯(lián)合給藥，30 min后進行強迫游泳和懸尾試驗。行為學實驗后殺鼠取腦，檢測額葉、海馬、下丘腦單胺遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物水平，以及單胺氧化酶活性。結果域下劑量胡椒堿與低劑量阿魏酸聯(lián)合用藥在強迫游泳和懸尾測試中均產(chǎn)生顯著的協(xié)同作用。神經(jīng)化學(額葉、海馬和下丘腦)和生物化學(單胺氧化酶活性)實驗進一步表明了聯(lián)合用藥對增強單胺功能具有協(xié)同作用。結論阿魏酸與胡椒堿聯(lián)合用藥能有效的改善小鼠抑郁樣行為并減少藥物劑量。因此，組合策略可能是預防精神疾病中高療效，低副作用的替代療法。

關鍵詞:阿魏酸；胡椒堿；抑郁；單胺遞質(zhì)；單胺氧化酶

專題3:神經(jīng)退行性疾病

T3－01

Attenuation of Scutellaria barbata flavonoids on cortical cytoplasm apoptotic factors disorders induced by complex Aβ25－35in rats

GUO Ke，ZHAO Hong-xiang，WU Xiao-guang，SHANG Ya-zhen

(Hebei Province Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Research and Development/Institute of Traditional Chinese Medicine，Chengde Medical College，Chengde 067000，China)

Abstract:OBJECTlVETo investigate the effect of SBF on cortical cytoplasm apoptotic factors disturbances induced by complex Aβ25－35in rats.METHODSThe cerebral injuries model was establised by rats received intracere-broventricular injection of RHTGF-β1，Aβ25－35and AlCl3and then accepte SBF trestment.All the rats were sacrificed by decapitation for indicators detection at last the drug treatment.Western blotting method was for cysteinyl aspartate specific protease-3(caspase-3)protein expression and RT-PCR method detected cytochrome C，apoptotic protease activating factor-1(Apaf-1)，cysteinyl aspartate specific protease-9(caspase-9)mRNA expression in cortical cytoplasm.RESULTSThe protein expression of caspase-3 in cortical cytoplasm of rats by Western blotting. The results indicated that compared with the sham group，the caspase-3 protein expression of cortical cytoplasm in Aβ group was significantly increased(P＜0.01).However，the increased expression can be obviously reversed by SBF at does of 35，70 and 140 mg·kg－1，as compared with model group(P＜0.01).The Cyt-C，Apaf-1 and caspase-9 mRNA expressions in cortical cytoplasm of rats by RT-PCR.The results indicated that compared with the sham group，the Cyt-C Apaf-1 and caspase-9 mRNA relative expressions of cortical cytoplasm in Aβ group was significantly increased(P＜0.01).However，these increased expressions can be differently reversed by SBF 35，70 and 140 mg·kg－1，as compared with model group(P＜0.01).CONCLUSlONSBF can definitly improve rats′cortical cytoplasm apoptotic factors disorders induced by complex Aβ25－35，which maybe benefit for treatment of degenerative disease.

Key words:Scutellaria barbata flavonoids；caspases；cytoplasm；apoptosis

Corresponding author:SHANG Ya-zhen，E-mail: shangyz1018＠sina.com

T3－02

α-Synuclein，exosomes and Parkinson′s disease

ZHENG Mou，YUAN Yu-he，CHEN Nai-hong

(State Key Laboratory of Bioactive Substances and Functions of Natural Medicines，Department of Pharmacology，Institute of Materia Medica，Chinese Academy of Medical Sciences andPekingUnionMedicalCollege，Beijing 100050，China)

Abstract:Parkinson′s disease(PD)is a chronic progressive neurodegenerative disease which was first described in 1817，affecting 1%of population over 60 years old.And it is a part of a subset of diseases classified as protein－misfolding disorders(PMDs)，which also includes Alzheimer′s disease，Huntington disease，and amyotrophic lateral sclerosis(ALS).PMDs share common pathological features，characterized by the accumulation of abnormal protein inclusions and oligomers of an underlying protein.α-synuclein，as the first gene identified in PD is the main component of the neuropathological hallmark of the intracellular inclusions called Lewybobies(LBs).Many studies have suggested that α-synuclein acts as a molecular chaperoneintercellularly.For example，it can promote SNARE-complex assembly in vivo and in vitro by binding to the SNARE-protain synaptobrevin-2/vesicle-associated membrane protain 2(VAMP 2).Also，the N-terminal domain(residues 1－65)of α-synuclein can adopt an α-helical conformation and interact with the surface of micells and membranes.Since human α-synucleinpurieied from red blood cells as a tetramer，it maybe work as a regulator of membrane fluidity.However，the real physiological and pathological functions of α-synuclein remain unknown.Exsomes，the small membranous vesicles released from many typies of mammalian cells，have played an necessary role in cell-cell signaling，removingnonnecessaryprotains and trandferring pathogens for instance，prions，betweencells.Exosome biogenesis involves the inwarding budding of endosomes to form multivesicular bodies(MVB).When fused with the plasma membrane，the MVB releases the vesicles into the extracellular spaces as exsomes.However，El-Agnaf et al.showed that α-synuclein species can be detected in human plasma and CSF and also in the medium of cultured neuronal cells.So many attentions are paid to the function and mechanism of the secreted α-synuclein by exsomes.Evangeliaetal.suggested that α-synuclein could be secreted via exsomes constitutively and physiologically.And in this study，they supported a calcium-dependent manner through which α-synuclein was secreted into extracellular environment.Since calcium is fundamental in regulating exocytosis，early endosome fusion，and exosome-mediated release，it maybe an important factor in the mechanism of secretion.They also proved that the level of calcium，especially the level of intracellular calcium affected the secreted α-synuclein by exosomes.Furthermore，the medium containing secreted α-synuclein was toxic to recipient neuronal cells，which perhaps supported the hypothesis that neurodegeneration results from the progressive propagation of pathogenic events，cell by cell，throughout brain area.In addition，the main dopaminergic midbrain subpopulation affected in PD is a subpopulation of′A9′nigrostriatal neurons，which are calbindin D28K-negative but G-protein-coupled inwardly-rectifying potassium channel 2(GIRK2)-positive，andthe pacemaker activity of adult SNc dopaminergic neurons is driven by L-type CaV1. 3 calcium channels，in contrast to sodium channels in VTA neurons，which could place SNc neurons under higher risk from calcium-dependent neurotoxic processes than those of VTA.By an interesting coincidence，α-synuclein is secreted in a calcium-dependent manner，which maybe indicate the degeneration is，at least in part，related to the decreased ability to buffer cytosolic calcium levels.Also，Lydia et al.demonstratede that lysosomal dysfunction through ammonium chloride or bafilomycin A1 led to an increase in the release of α-synuclein in exosomes and a concomitant increase in α-synuclein transmission to recipient cells.In a way，this study proved the importance of exosomes in the release of α-synuclein and its transmission between cell and cell.To supplement the circuit of α-synuclein′secretion and internalization，researches about the mechanism of internalization of α-synuclein have supported that glucosyltransferase inhibitor or proteinase K inhibited the internalization of extracellular monomeric α-synuclein into BV-2 cells，and that monosialoganagliosideGM1 improved the inhibition.Moreover，they also observed the mechanism was a lipid raft－dependent pattern，but the exact mechanism is unclear.In conclusion，secreted α-synuclein in exosomes may be one of the cardinal factors involved in PD.Exosomes release with cytocolicnonnecessary proteins into extracellular spaces，there，some of the protein are internalized by neighouboringcells.In a sense，dysfunction of each part of the secretion and internalization pathway potentially leads to the accumulation of proteins intracellular or extracellular.So，it should be greatly helpful to discovery the pathogenesis of PD，if the real mechanism has been found out.

Key words:α-synuclein；exsomes；Parkinson disease

T3－03

Traditional Chinese medicine for depression in Parkinson′s disease:A systematic review

ZHANG Yi1?，WANG Zhen-zhen2?，SUN Hong-mei1，LI Ping3，LI Yun-feng4，CHEN Nai-hong2

(1.Department of Anatomy，School of Preclinical Medicine，Beijing UniversityofChinese Medicine， Beijing 100029，China；2.State Key Laboratory of Bioactive Substances and Functions of Natural Medicines，Institute of Materia Medica，Neuroscience Center，Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College，Beijing 100050，China；3.Department of Pharmacology，Institute of Clinical Medical Sciences，China-Japan Friendship Hospital，Beijing 100029，China；4.Department of New Drug Evaluation，Beijing Institute of Pharmacology and Toxicology，Beijing 100850，China)

Abstract:Depression is the most common non-motor syndrome of Parkinson′s disease(PD).Recent clinical trials have evaluated effectiveness of traditional Chinese medicine(TCM)in the treatment of depression in PD (dPD).However，the results remain conflicting rather than conclusive.To investigate the effectiveness of TCM for the treatment of dPD，a systematic review was conducted.Literature searches and collection were performed to identify studies addressing the treatment of TCM for dPD.The methodological quality and risk of bias of included studies were evaluated.Weighted mean difference(WMD)with 95%confidence interval(CI)was used as the effect measure.Finally，a total of 10 studies involving 582 patients were identified.The pooled results revealed that TCM combined with conventional drug significantly improved the total scores of Unified Parkinson′s Disease Rating Scale(WMD＝－7.35，95%CI:－11.24 to－3.47)and the score of Hamilton rating scale for depression(WMD＝－4.19，95%CI:－5.14 to－3.24)compared with conventional drug，respectively.Conclusively，there is evidence that TCM may be beneficial to the treatment of dPD in spite of methodological weakness of the included studies.

Key words:Parkinson′s disease；non-motor syndrome；depression；traditional Chinese medicine；systematic review

Corresponding author:ZHANG Yi，E-mail:yizhang＠bucm.edu.cn

?Co-first author.

T3－04

lmprovement of Scutellaria flavonoids on memory deficits induced by compolex Aβ25－35in rats

CHENG Jian-jun，ZHAO Hong-xiang，ZHANG Xiao-feng，GUO Ke，SHANG Ya-zhen

(Hebei Province Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Research and Development/Institute of Traditional Chinese Medicine，Chengde Medical College，Chengde 067000，China)

Abstract:OBJECTlVETo establish the model of memory impaired and neurologicdamaged by intracerebroventricular injection of amyloid beta protein 25－35 (Aβ25－35)in combination with AlCl3and rhTGF-β1 in rats and detect the effects of Scutellaria flavonoids(SSF)on memory impaired and neurologicdamaged with this complex Aβ25－35rats.METHODS300－350 g male SD rats were adaptive feeding for one week in clean animal lab before the operation.The rats received intracere-broventricular injection of rhTGF-β1 on the day 1 of operation，and ten intracerebroventricularly injected Aβ25－35and AlCl3from the day 2 of operation.Aβ25－35and AlCl3were injected in every morning for consecutive 14 d and in every afternoon for consecutive 5 d，respectively.Sham control rats were conducted the same operation，but intracerebroventricularly injected the equal volume saline.On the day 45 of operation，all rats were performed the Morris water maze training for successful memory impairment model screening. The swimming scores of every operated rat and sham con-trol rats on the day 4 of water maze training were used for calculating the successful model screening ratio(SR). When SR of any rat was more than 0.2，the rat was confirmed to be a successful model rat.On the day 49 of operation，all successful model rats were randomly divided into 4 groups，model control(model control group)and 3 doses of SSF group rats.The SSF group rats were administered 35，70 and 140 mg·kg－1SSF for 38 d，and model control and sham control rats were given an equal volume of saline.On the day 31 administered of drug that is on the day 79 operation，all the rats were carried out the consecutive 7 d Morris water maze task for memory ability detection.The positioning navigation task on the day 1 and 2 of Morris water maze training was used to evaluate the rats′memory acquirement，the probe trial on the day 3 of Morris water maze was used to detect the memory retention，the reversal trial on the day of 4，5 and 6 of Morris water maze was used to evaluate the rats′memory reproducibility and visible platform trial was used to test the rats′swimming speed.On the second day of the last water maze task，that was the 86 d after operation，all the rats were decapitated，the microanatomy of brain was observed with naked eye and the morphologic structure/substructure of neuron were examined with light/electron microscope by hematoxylin-eosin(HE)/thiamine or uranyl acetate and lead nitrate-sodium citrate staining，respectively.RESULTSIn the 4 d successful model rats′screening by Morris water maze task，the time taken in finding the hidden platform (latency)progressively declined in all rats.If the SR＞0.2 according to the latency of each model control and sham control rats taken for finding the hidden platform at the day 4 training in Morris water maze task.The rat was confirmed as successful model rat.The successful rate of memory impairment model in the present study was 94.7%.In the positioning navigation experiment，model control rats always took longer latency to find the hidden platform on the day 1 and 2 test in the water maze task，as compared with the sham control(P＜0.01).However，SSF can significantly shorten the time to reach the platform as compared with model control rats(P＜0.01).In the probe trial，the model control rats took decreased time，distance and crossing number in target quadrant(the first quadrant) within 60 s，as compared with sham control rats(P＜0.01).While the three dose of SSF at 35，70 and 140 mg·kg－1have differently attenuated the above decreases in swimming time，swimming distance and crossing number of model control rats in target quadrant(P＜0.05，P＜0.01).In the reversal trial，the model control rats always spent longer time to find the hidden platform on the day 4，5 and 6 of Morris water maze test(P＜0.01).Interestingly，SSF 35，70 and 140 mg·kg－1can significantly shorten latency onto the platform of model control rats(P＜0.05，P＜0.01).In the visible platform test，that was the 7th Morris water maze training，the time of all rats in each group spent to reach the visible platform was no significantly difference.The result indicated that swimming speed of each group rats were approximate in water maze，which may eliminate disturbance of swimming score as their swimming speed discrepancy.On the 86 d of operation，all the rats were sacrificed by decapitation，the conspicuous histological changes of model control rats were viewed by naked vision，including lessened weight of brain，yellow surface of cerebral cortex，and cortical thinned or collapsed in some rats.The neuron of hippocampus and cerebral cortex was found a markedly pathological change by HE and thionine staining under light microscope observation，such as neuron loss，cell swelling and Nissl bodies decrease.Some neuron of cerebral cortex in model control rats occurred typical colliquative necrosis，including cell membrane broken，nucleus dissolved and a great inflammatory cell infiltrated in necrosis region.Electron microscopy found that the hippocampus neuron pyknosis，nuclear membrane pit，nucleolus margination，chromatin condensation，ribosome separation in cytoplasm，a large lipofuscin deposition，mitochondria swelling，endoplasmic reticulum expansion，astrocyte foot processes edema，myelin sheath lamellar damage，axon and myelinated nerve loss，a large excitatory neurotransmitter at presynaptic membrane.However，different dose of SSF by administration for 38 d differently reversed the above neuronal pathological changes induced by complex Aβ25－35which the neuron and Nissl body count increase，the typical colliquative necrosis and subcellular structure damages absents.CONCLUSlONIntracerebroventricular injection of Aβ25－35combined with AlCl3and RHTGF-β1 can result in an impairment of memory and damages of neuro-structure.Then，SSF was found that has markedly ameliorations on memory impaired and neuron damaged using this rats′model.

Key words:Scutellaria flavonoids；memory

Corresponding author:SHANG Ya-zhen，E-mail: shangyz1018＠sina.com

T3－05lnhibition of Scutellaria flavonoids on brain's Aβ and NFT abnormal generation induced by compolex Aβ25－35in rats

MIAO Hong，GUO Ke，ZHANG Shu-feng，ZHANG Xiaofeng，WU Xiao-guang，SHANG Ya-zhen

(Hebei Province Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Research and Development/Institute of Traditional Chinese Medicine，Chengde Medical College，Chengde 067000，China)

Abstract:OBJECTlVETo determine the abnormal generation of Aβ and NFT in brain induced by complex Aβ25－35using the complex Aβ25－35successful model rats. And elucidate the improvement and effective mechanism of Scutellaria flavonoids(SSF)on memory impaired and neuronal damaged through the inhibition of Aβ and NFT abnormal generation and regulation of three secretases α-，β-and γ-level.METHODSThe cerebral injuries model was establised by rats received intracere-broventricular injection of RHTGF-β1，Aβ25－35and AlCl3and then accepte SSF trestment.The all rats were decapitated 60 min after the last drug administered，and then the brain was gently separated on ice.The Congo red and silver nitrate staining was used for Aβ and NFT determination，respectively，and quantitative real－time polymerase chain reaction(qPCR)method was used for determination of α，β and γ secretases mRNA expression levels.RESULTSCompared with sham control，the cells number of Aβ congo red stained and NFT silver nitrate stained in model control were significantly increased(P＜0.01).NFT cells in cerebral cortex presented the neurofibril thicken and disordered all over the cytoplasm and even extended the dendrite，and finally to form a deep staining and tailing state.However，SSF 35，70 and 140 mg·kg－1were differently inhibited Aβ and NFT formation in the brain by daily and orally administration for 38 d(P＜0.05，P＜0.01).The determination of three secretases α-，β-and γ-expression found that the mRNA expressions of β-and γ-secestase significantly increased(P＜0.01)and decreased(P＜0.05)in model control，respectively，as compared with sham control.However，the two doses of SSF 70 and 140 mg·kg－1can strongly reversed the increase in β-secretase mRNA expression(P＜0.01)，and the two doses of SSF 35 and 140 mg·kg－1further lowered γ-secretase mRNA expression(P＜0.05，P＜0.01).CONCLUSlONIntracerebroventricular injection of Aβ25－35combined with AlCl3and TGF-β1 can dramatically cause Aβ and NFT abnormal generation，raise β-secretase expression and lower γ-secretase expression in rats′brain. SSF can inhibit Aβ and NFT overproduction and positively regulate β-and γ-secretases expressions，which suggested that SSF improved the rats′memory deficits and neuronal damages induced by complex Aβ25－35partly derive from suppressing the Aβ and NFT disorders.

Key words:Scutellaria flavonoids；NTF

Corresponding author:SHANG Ya-zhen，E-mail: shangyz1018＠sina.com

T3－06

lnhibition of Scutellaria flavonoids on brain′s neurogliocyte proliferation and activation induced by compolex Aβ25－35in rats

SHANG Ya-zhen，GUO Ke，ZHANG Shu-feng，ZHANG Xiao-feng，WU Xiao-guang

(Hebei Province Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Research and Development/Institute of Traditional Chinese Medicine，Chengde Medical College，Chengde 067000，China)

Abstract:OBJECTlVETo confirm the brain′s neurogliocyte proliferation and activation induced by complex Aβ25－35using the successful model rats.And，through examination of neurogliocyte number and related to activated proteins to define the improvement of Scutellaria flavonoids (SSF)on memory impairment and neuropathological disorder induced by complex Aβ25－35on account of inhibition of neurogliocyte proliferation and activation.METHODSThe cerebral injuries model was establised by rats received intracere-broventricular injection of rhTGF-β1，Aβ25－35and AlCl3and then accepte SSF trestment.All the rats were decapitated 60 min after the last SSF administered，and then the brain was gently separated on ice.SABC immunohistochemical method were used to detect astrocyte (AS)，neuronal nitric oxide synthase(nNOS)and induced nitric oxide synthase(iNOS)protein expressions， the silver carbonate was used for microglia(MG)number measurement，quantitative real-time polymerase chain reaction(qPCR)method was used for endothelial nitric oxide synthase(eNOS)mRNA expression，Western blotting method was for determination of glial fibrillary acidic protein (GFAP)，leukocyte common antigen(CD45)，heat shock protein(HSP)protein expressions，RT-PCR method was used for detecting ApoE mRNA expression and ELISA methods were for measurement of interleukin-1 beta(IL-1β)，tumor necrosis factor-alpha(TNF-α)，IL-6，IL-8 and IL-10 levels，respectively.RESULTSThe number of AS and MG，the protein expressions of GFAP/CD45/HSP70 and iNOS，the mRNA expressions of ApoE and eNOS，and the levels of TNF/IL-6/IL-8 were all significantly increased(P＜0.01)，and the protein expression of nNOS and the levels of IL-1β and IL-10 were dramatically lowered (P＜0.01)in model control rats′brain，respectively，as compared with sham control.Interestingly，SSF 35，70 and 140 mg·kg－1can differently reverse the above detrimental changes induced by complex Aβ25－35in rats′brain.CONCLUSlONThe complex Aβ25－35can cause neurogliocyte proliferation and activation and accompanied by the abnormal expressions of GFAP/CD45HSP70/iNOS/NOS and aberrant levels of IL-1β，TNF-α，IL-6，IL-8 and IL-10. SSF can significantly reverse the above detrimental changes，which suggested that the improvement of SSF on memory deficits and neurologicdamages derived from suppressing the neurogliocyte proliferation and activation induced by complex Aβ25－35.

Key words:Suctellaria flavonoids；neurons；proliferaiton；nitric oxide sythase；heat shock protein

Corresponding author:SHANG Ya-zhen，E-mail: shangyz1018＠sina.com

T3－07

Scutellaria flavonoids inhibit abnormal changes of apoptotic factors in mitochondrial apoptotic pathway induced by composite Aβ25－35in rats

ZHAO Hong-xiang，KUO Ke，WU Xiao-guang，SHANG Ya-zhen

(Hebei Province Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Research and Development/Institute of Traditional Chinese Medicine，Chengde Medical College，Chengde 067000，China)

Abstract:OBJECTlVETo study the apoptotic factors abnormalities of mitochondrial apoptotic pathway in cerebral corex of rats injected β-amyloid beta protein 25－35(Aβ25－35) in combination with aluminum trichloride (AlCl3)and recombinant human transforming growth factor-β1(rhTGF-β1)by the lateral cerebral ventricle，and to explore the effective mechanism of Scutellaria flavonoids (SSF)against AD by inhibiting the apoptotic factors′abnormalities in mitochondrial apoptosis pathway.MEHTODSMale SD rats received intracerebroventricular injection of rhTGF-β1 1 μl(10 ng)on the day 1 of operation，and then intracerebroventricularly injected Aβ25－35and AlCl3from the day 2 of operation.Aβ25－354 μg·d－1and 1%AlCl33 μL·d－1were injected in every morning for consecutive 14 d and inevery afternoon for consecutive 5 d，respectively.On the day 45 of operation，all rats were performed the Morris water maze training for successful memory impairment model screening.On the day 49 of operation，the successful model rats were randomly divided into 4 groups，model control and 3 doses of SSF group rats.The SSF group rats were daily administered SSF 35，70 and 140 mg·kg－1for 36 d.On the last administration 60 min，all the rats were decapitated.Western blotting method was used to detected the protein expressions of B cell lymphoma(Bcl-2)，Bcl-2 associated X protein(Bax)，B-cell lymphoma/leukemia-xL (Bcl-xL)，Bcl-2 antagonist/killer(Bak)on the mitochondrial membrane of rats′cerebral cortex.RESULTSThe composite Aβ25－35can dramatically cause the deleterious changes in Bcl-2，Bax，Bcl-xL and Bak on mitochondrial membrane of rats′cerebral cortex.Compared with sham control，the protein expressions of BCl-2 and Bcl-xL markedly lowered(P＜0.05，P＜0.01)，and protein expressions of Bax and Bak significantly increased(P＜0.01，P＜0.05)，respectively in model control group.However，SSF 35，70 and 140 mg·kg－1treated rats for 36 d can differently reverse the above disorders induced by composite Aβ25－35.CONCLUSlONThe composite Aβ25－35can result in abnormal of apoptotic factors in mitochondrial apoptosis pathway and SSF has improvement on above disturbances，which indicated that the amelioration of SSF on abnormal apoptotic factors in mitochondrial apoptosis pathway is one of effective mechanisms of SSF against AD.

Key words:Scutellaria flavonoids；apoptosis；mitochondrial

Corresponding author:SHANG Ya-zhen，E-mail: shangyz1018＠sina.com

T3－08

Clk1 participates in neuroglial activation and neurotoxicity in MPTP mouse model of Parkinson′s disease

GU Rui-nan，ZHANG Fa-li，ZHENG Long-tai，ZHEN Xue-chu

(Department of Pharmacology，College of Pharmaceutical Sciences，Soochow University，Suzhou215000，China)

Abstract:OBJECTlVETo investigate the effect of clk1 gene in MPTP mouse model to identify the function of clk1 gene in Parkinson′s disease.METHODSSubchronic MPTP mouse model(MPTP，30 mg·kg－1，5 d)was employed in male Mclk1＋/－mutant mice and wide type C57BL/J mice(WT).Behavioral tests were performed 7 d after MPTP injection，immunological histochemistry(IHC) was carried on after behavioral tests.Primary astrocyte of WT and Mclk1＋/－mutant was used to investigate the role of clk1 in inflammatory response.The expression of inflammatory cytokines and proinflammatory factors were assessed by real-time PCR，ELISA and NO assay.The role of clk1 in the intracellular level of reactive oxygen species (ROS)generation and mitochondrial membrane potential were also investigated by using fluorescent probe DCFHDA and JC-1，respectively.MTT assay were used to detect the neuronal viability in glial conditioned medium/neuron co-culture system.The expression of HIF-1α，TH and GFAP in brain tissue and astrocyte were detected by western blotting.RESULTSIn vivo，at the basal level，Mclk1＋/－mutant appeared no obvious differences compared with WT.However，in the subchronic MPTP mouse model，Mclk1＋/－mutant mice showed more neuron loss and increased glial cells compared with wild－type mice consistentwith the behavioralappearance.In vitro，Mclk1＋/－glial cells treated with LPS/IFN-γexpressed increased amounts of the proinflammatory cytokines，produced higher intracellular ROS and had lower mitochondrial membrane potential probably via HIF-1α，and conditioned media from these cells promoted death of cultured neurons.CONCLUSlONThese findings suggest that the exacerbated neuron loss was likely due to vulnerability of Mclk＋/－neurons to MPTP，as well as an increased neuroglial inflammatory response.

Key words:Parkinson′s disease；glial cells；clk1

T3－09

Perturbation of inhibitory transmission in the vestibular nuelcus during an early postnatal stage impacts on the thalamic spatial map and spatial cognitive behaviors

CHEN Wen-qiang1，MA Chun-wai1，2，F(xiàn)rancisco Paulo BOTELHO1，NG Ka-pak1，2，HU Hui-jing1，2，BAI Zhantao1，LAI Chun-hong1，Daisy Kwok-yan SHUM2，CHAN Ying-shing1

(1.Departments of Physiology，2.Departments of Biochemistry，Li Ka Shing Faculty of Medicine，The University of Hong Kong，Hong Kong SAR，China)

Abstract:OBJECTlVE AND METHODSTo understand how the capabilities of neural coding of spatial cognition is formed during the development of neural circuitry，the role of the inhibitory neurotransmission within the neonatal vestibular nucleus(VN)in the establishment of a spatial map waits to be studied.RESULTSUsing wholecell patch-clamp recording in brainstem slices，we found that most VN neurons of postnatal day(P)3－5 rats exhibited long-term depression of GABAA receptor-mediated evoked-postsynaptic current.At this stage，these currents were excitatory in nature.By P14，only a small proportion of VN neurons exhibited long-term depression but these currents became inhibitory.These results indicate a postnatal period during which the efficacy of GABAergic VN synapses is altered.To further assess the role of GABAergictransmission in VN on developmental acquisition of spatial recognition，we implanted above the VN of rats with Elvax slice loaded with GABAAreceptor antagonist(bicuculline)at various developmental stages，P1，P8 or P14. These pups were allowed to recover and tested for dead reckoning，a path integration task at the adult stage.Derangement of a vestibular-related spatial map in thalamus，an upstream relay of the neural circuitry for balance，was observed in adult rats pre-treated withbicuculline at P1 but not in the other age groups.When tested with a path integration task at the adult stage，rats pretreated with bicuculline at P1 had significantly prolonged training time and deficiency in behavioral parameters(including searching time，returning time，heading angle，and number of errors in dark/new location probe tests).Comparable deficits were also observed with selective lesion of vestibular-related subnuclei in the adult thalamus.Rats pretreated at P14 however showed no significant difference in different probe tests，whereas rats pretreated at P8 showed moderate deficiency in－between the rats pretreated with bicuculline at P1 and P14.Together，these data indicate that inhibitory transmission in neonatal VN determines the expression of spatial navigation atthe adultstage.CONCLUSlONBased on these findings，we conclude that there is a postnatal critical period for developmental establishment of a neural circuitry for spatial reference and acquisition of spatial navigation.

Key words:spatial recognition；neural circuitry；neurotransmission

Foundation item:The project supported by RGC 761711M

T3－10

Naringenin protects against 6-OHDA-induced neurotoxicity via activation of the Nrf2/ARE signaling pathway

LOU Hai-yan，JING Xu，WEI Xin-bing，SHI Huan-ying，ZHANG Xiu-mei

(Department of Pharmacology，School of Medicine，Shandong University，Jinan 250012，China)

Abstract:OBJECTlVETo investigate the neuroprotective role of naringenin and delineate its mechanism of action against 6-hydroxydopamine(6-OHDA)-induced neurotoxicity in models of Parkinson′s disease(PD)both in vitro and in vivo.METHODSUsing the dopaminergic (DA)toxin 6-OHDA to model PD in SH-SY5Y cells and in C57BL/6 mice，we determined whether naringenin protects against 6-OHDA-induced neurotoxicity via activating Nrf2/ARE signalingpathway.RESULTSNaringenin treatment resulted in increase in nuclear factor E2-related factor 2(Nrf2)protein levels and subsequent activation of antioxidant response element(ARE)pathway genes in SH-SY5Y cells and in mice.Exposure of SH-SY5Y cells to naringenin provides protection against 6-OHDA-induced oxidative insults.The neuroprotective effect of naringenin against 6-OHDA neurotoxicity was dependent on Nrf2，since treatment with Nrf2 siRNA failed to block against 6-OHDA neurotoxicity and induce Nrf2-dependent cytoprotective genes in SH-SY5Y cells.Oral administration of naringenin resulted in significant protection against 6-OHDA-induced nigrostriatal dopaminergic neurodegeneration and oxidative damage in mice.CONCLUSlONOur results indicate that activation of Nrf2/ARE signaling by naringenin is strongly associated with its neuroprotective effects against 6-OHDA neurotoxicity and suggest that targeting the Nrf2/ARE pathway is a promising approach for therapeutic intervention in PD.

Key words:naringenin；6-OHDA；Nrf2；Parkinson disease；oxidative stress

Foundation item:The project supported by National Natural Science Foundation(81200982)

Corresponding author:ZHANG Xiu-mei，E-mail: zhangxm＠sdu.edu.cn

T3－11

Neuroprotection of ligustilide by regulating both production and clearance of β-amyloid in APP/PS1miceKUANG Xi，ZENG Yi，HE Qian，SANG Na，LIU Xiao-jiao，HAN Li，ZHOU Hong-jing，CHEN Xi-nan，LI Ling-jiao，DU Jun-rong

(Department of Pharmacology，West China School of Pharmacy， and TranslationalNeuroscience Center，Sichuan University，Chengdu 610041，China)

Abstract:OBJECTlVETo investigate the effect and underlying mechanism of Ligustilide on learning and memory in a double-transgenic AD mouse model(APP/PS1) that develops cognitive deficits as well as pathological hallmarks.METHODSThe APP/PS1 mice were treated with Ligustilide 30 mg·kg－1for 14 weeks，starting at 8.5 months of age and ending at 12 months of age.Learning and memory deficits were examined with Y－maze test and Step down avoidance test.Immunohistochemistry was used to assay AD-like neuropathologies in APP/PS1 mice such as Aβ1－42，NeuN，GFAP，F(xiàn)4/80，the key enzymes in the non-amyloidgenic pathway of APP including ADAM10，ADAM17.ADAM enzymatic activity was examined by fluorescencespectrophotometry and the levels of sAppα in the brain of APP/PS1 mice were quantified using ELISA kit. The mRNA level of APP，ADAM10 and ADAM17 was determined by Real-time PCR.To verify the mechanism of LIG on regulate both production and clearance of β-amyloid in APP/PS1 mice，western blot assay was applied into the signal pathway Akt/mTOR measurement.RESULTSThe results show that treatment of LIG highly decreased Aβ formation and senile plaques and efficiently ameliorated memory impairment in APP/PS1 transgenic AD model mice. LIG decreased percentage of alternation in Y-maze test and increased the Step-down latencyin the passive avoidance test(P＜0.01)，pathological hallmarks of AD including Aβ，APP，GFAP，F(xiàn)4/80 were decreased and NeuN，ADAM10，ADAM17 were increased by LIG，the treatment showed a significant therapeutic effect compared with the vehicle-treated APP/PS1 group(P＜0.01)；LIG increased the ADAM enzymatic activity and sAppα level in APP/PS1 brain tissue(P＜0.01)；And Real-time PCR results showed the LIG significantly decreased about 30%reduction of APP level and increased about 80%elevation of ADAM10 level in PCR(P＜0.01)but LIG treatment had no effect on ADAM17 levels.Moreover，Ligustilide promoted Aβ clearance by enhancing autophagy through Akt/mTOR signaling inhibition through Western blotting assay in mice brain tissue.CONCLUSlONbased on the above-mentioned facts，we expected LIG with dual-functional activities in both Aβ production and clearance might be a promising therapeutic candidate for the treatment of neurodegenerative diseases，such as AD.

Key words:neurodegenerative diseases；ligustilide；autophagy；Akt/mTOR signaling

Foundation item:The project supported by the National Science Foundation of China(81072636)；the Science Foundation from the Science＆Technology Department of Sichuan Province，China(2009SZ0142)

Corresponding author: DU Jun-rong， E-mail: dujr＿1＠163.com

T3－12

lnvolvement of CysLT1R in Aβ1－42-induced neurotoxicityin vitroandin vivo

TANG Su-su，CHEN Lan，MEI Zhen-lin，JI Miao-jin，XIANG Guo-qing，LI Ning，JI Hui，HONG Hao

(DepartmentofPharmacology，China Pharmaceutical University，Nanjing 210009，China)

Abstract:To investigated the roles of cysteinyl leukotriene receptor 1(CysLT1R)in Aβ1－42-induced neurotoxicity in vitro or in vivo.In vitro exposure of mouse primary neurons to Aβ1－42caused gradual increases in CysLT1R expression.In vivo bilateral intrahippocampal injection of Aβ1－42also elicited time-dependent increases of CysLT1R expression in either hippocampus or cortex of mice.Cys-LT1R antagonist pranlukast not only reversed Aβ1－42-induced upregulation of CysLT1R，but also suppressed Aβ1－42-triggered neurotoxicity evidenced by increased NF-κB p65，activated caspase-3，decreased Bcl-2，reduced cellular viability and impaired memory.Furthermore，chronic treatment with pranlukast produced similar beneficial effects on memory behavior and hippocampal LTP to memantine or donepezil in intrahippocampal Aβ1－42-injected mice.Our data indicate that CysLT1R is involved in Aβ1－42-induced neurotoxicity and blockade of CysLT1R，such as application of CysLT1R antagonist，could be a novel and promising strategy for treatment of AD.

Key words:cysteinyl leukotriene receptor 1；Aβ1－42；neurotoxicity；NF-κB；caspase-3；Bcl-2；memory

Corresponding author:HONG Hao，E-mail:haohongchina＠hotmail.com

T3－13

Chemokine-like factor 1 promotes the migration of rat primary cortical neurons via the induction of actin polymerization

WANG Zhen-zhen1，YUAN Yu-he1，ZHANG Yi2，WANG Xiao-feng1，CHU Shi-feng1，HAN Ning1，CHEN Nai-Hong1

(1.State Key Laboratory of Bioactive Substances and Functions of Natural Medicines，Institute of Materia Medica，Neuroscience Center，Chinese Academy of Medical Sciences andPekingUnion MedicalCollege，Beijing 100050，China；2.Department of Anatomy，School of Preclinical Medicine，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China)

Abstract:OBJECTlVETo investigate the potential roles of chemokine-like factor 1(CKLF1)，a newly cloned chemotactic cytokine，in the cortical neuronal migration.METHODSThe organotypic brain slice cultures at 14 DIV were treated with CKLF1 alone or plus anti-CKLF1 antibody.By measuring the distance between the margin of brain slices and the leading population of migrating cells，we observed the effects of CKLF1 on the migration of cerebral cortical cell populations in rats.Wound-healing assays were further used to detect the chemotaxis of CKLF1 on the cortical neurons.Finally，actin polymerization in the cortical neurons was assessed by immunofluorescence staining.RESULTSOn the brain slices，the extent of cell migration was markedly enhanced from 146.27 μm to 369.57 μm in response to CKLF1 treatment，which was neutralized by anti-CKLF1 antibody.As evidenced by wound－h(huán)ealing assays on the cortical neurons，the percentage of relative migration distance treated with CKLF1 at 200 nmol·L－1and 2000 nmol·L－1increased from 13.70%to 56.14%and 68.00%，respectively.By contrast，CKLF1 treatment at 20 nmol·L－1failed significantly increased wound closure.F－actin immunostaining was present in neurons，which was identified by MAP2，a neuronspecific marker.Furthermore，the F-actin immunoreactivity was enhanced by 1.42 fold and F-actin was organized into thick bundles that formed filopodia in response to CKLF1 stimulation.CONCLUSlONCKLF1 promotes the migration of rat primary cerebral cortical neurons in a concentration-dependent manner via the induction of actin polymerization.

Key words:chemokine-like factor 1；cell migration；primary cortical neuron；actin polymerization

Foundation item:The project supported by National NaturalScience Foundation ofChina (81274122，81202507，81202939，81373997，81373998)；National High-Tech R＆D Program (863 Program) (2012AA020303)；the Specialized Research Fund for the Doctoral Program of Higher Education of China (20121106130001，20120013120007)；Beijing Natural Science Foundation(7131013，7142115)；Beijing Key Laboratory of New Drug Mechanisms and Pharmacological Evaluation Study(BZ0150)

Corresponding author:CHEN Nai-Hong，E-mail: chennh＠imm.ac.cn

T3－14

MicroRNA-195protects against dementia induced by chronic brain hypoperfusionvia its anti－amyloidogenic effect in rats

AI Jing?，SUN Li-hua?，CHE Hui，YANG Bao-feng

(Department of Pharmacology，Harbin Medical University，Harbin 150081，China)

Abstract:OBJECTlVETo evaluate the effect of microRNA on memory impairment of chronic brain hypoperfusion(CBH)rats generated by bilateral common carotid artery occlusion(2VO).METHODSMorris water mazewas performed to evaluate cognitive ability.Expression of miR-195，BACE1 and APP in hippocampus and cortex were evaluatedafterrats performed by 2VO，injected by lentiviral vector-mediated overexpression of miR-195(lenti-pre-miR-195)and/or antisense molecule(lenti-pre-AMO-miR-195).RESULTSWe show here CBH significantly decreased the learning and memory ability and upregulated expression of APP and BACE1 proteins in the hippocampus and cortex of rats，as evaluated by western blot and immunofluorescence.In reciprocal，qRT-PCR analysis showed that microRNA-195(miR-195)was downregulated in both the hippocampus and cortex of rats following CBH，and in the plasma of dementia patients.APP and BACE1 proteins were downregulated by miR-195 overexpression，upregulated by miR-195 inhibition，and unchanged by binding-site mutation or miR-masks，indicating that APP and BACE1 are two potential targets for miR-195.Knockdown of endogenous miR-195 by elicited dementia in rats，whereas overexpression of miR-195 using lenti-pre-miR-195 reduced dementia vulnerability triggered by 2VO.Additionally，chromatin immunoprecipitation analysis showed that NF-κB was bound to the promoter region of miR-195 and inhibited its expression.CONCLUSlONMiR-195 may play a key role in determining dementia-susceptibility in 2VO rats by regulating APP and BACE1 expression at the post－transcriptional level，and exogenous complement of miR-195 may be a potentiallyvaluable anti-dementia approach.

Key words:chronic brain hypoperfusion；miR-195；APP；BACE1

Corresponding author:AI Jing，E-mail:aijing＠ems.hrbmu.edu.cn；YANG Bao-feng，E-mail:yangbf＠ems.hrbmu.edu.cn

?Co-first author.

T3－15

lMM-H004 prevents toxicity induced by delayed treatment of tPA in a rat model of focal cerebral ischemia involving PKA-and Pl3K-dependent Akt activation

ZUO Wei，CHEN Nai-hong

(State Key Laboratory of Bioactive Substances and Functions of Natural Medicines，Department of Pharmacology，Institute of Materia Medica，and Neuroscience Center，Key Laboratory of New Drug Mechanisms and Pharmacological Evaluation Study，Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union MedicalCollege， Beijing 100050，China)

Abstract:OBJECTlVEIschemic stroke is currently treated with thrombolytic therapy with a drawback to induce hemorrhagic transformation if applied beyond its relatively narrow treatment time window.The present study was designed to examine the role of IMM-H004，a derivative of coumarin，in recombinant tissue plasminogen activator (tPA)-induced HT.METHODSRats subjected to 6 h thromboembolic occlusion or middle cerebralartery occlusion received tPA with or without IMM-H004.Delayed tPA intervention drastically increased the risk of HT and exaggerating the ischemic injury.To assess the effect of IMM-H004 on delayed treatment of tPA-induced toxicity after ischemia and reperfusion，various approaches were used including behavior test，TTC-staining，determination of cerebral hemorrhage，laser speckle imaging，western blot，gelatin zymogram，immunohistochemistry and immunofluorescence staining.Experiments were also conducted in vitro in human brain microvascular endothelial cells and PC12 cells to explore the mechanism for the role of IMMH004.RESULTSCombination therapy of tPA and IMMH004 prevented the development of HT，reduced the mortality rate，infarct volume and brain edema.IMM-H004 also exerted protective role by decreasing matrix metalloproteinases，the colocalization of matrix metalloproteinase-2 with astrocytes and increasing occludin.Experiments in HBMEC and PC12 revealed an elevation in ATP level and a PKA-and PI3K-dependent activation of Akt by IMM-H004 after tPA administration.CONCLUSlONThese results suggest IMM-H004 as a promising adjuvant to alleviate the detrimental side effect of tPA in therapy of ischemic stroke in clinic，and contribute to better understanding the mechanism for the beneficial role of this novel remedy.

Key words:astrocytes，microvascular endothelial cells，vascularization，blood brain barrier

Foundation item:The project supported by National Natural Science Foundation of China Grants(81274122，81102831，81073078，81373997，81173578)；Special Purpose for New Drug Development(2012ZX09301002-004，2012ZX09103101-006)；Studies on Structure and function of Bioactive Substabces from Natural Medicines (IRT1007)； Beijing Natural Science Foundation (7131013)；Research Fund for the Doctoral Program of Higher Education of China(20121106130001)；Beijing Key Laboratory of New Drug Mechanisms and Pharmacological Evaluation Study(BZ0150)

Corresponding author:CHEN Nai-hong，E-mail: chennh＠imm.ac.cn

T3－16

N-stearoyl-L-tyrosine via CB2 receptor inhibits senescence of neural stem/progenitor cells induced by Aβ42

LI Wen-qing，WANG Ze-jian，ZHAO Wen-juan，YIN Ming

(School of Pharmacy，Shanghai Jiaotong University，Shanghai 200240，China)

Abstract:Alzheimer disease，one of the neurodegenerative diseases，shows the progressive senescence of neural stem/progenitorcells (NSPCs) in the brain. N-stearoyl-L-tyrosine(NsTyr)，a derived compound from N-fatty-acyl amino acids，showed neuroprotective effect against chronic cerebral ischemia.In the present study，we report the effects of NsTyr on the senescence of NSPCs in vitro.The viability was significantly decreased and the positive rate of SA-β-gal staining was increased in NSPCs after incubation with 1 μmol·L－1of Aβ42for 2 weeks，and meanwhile phosphorylation of mTOR decreased correspondently.NsTyr(0.3－3 mol·L－1)attenuated Aβ42induced NSPCs senescence dose-dependently.AM251(1 mol·L－1；an antagonistofCB1 cannabinoid receptor) or AM630 (1 mol·L－1；CB2 antagonist of cannabinoid receptor)was used to offset the anti-senescence effects afforded by NsTyr.The anti-senescence effect of NsTyr was complete-ly abolished by AM630.NsTyr dose-dependently increased the expression of CB1 and CB2 receptor after 2 w incubation.NsTyr also dose-dependently increased the expression of phosphorylation of mTOR.These results suggest that NsTyr may be effective against the senescence of NSPCs caused by the hostile microenvironment in brain. Its anti-senescence effect may be mainly mediated by CB2 receptor.

Key words:N-stearoyl-L-tyrosine；receptors，CB2；progenitor cells

Foundation item:Theprojectsupportedbythe Shanghai Jiao Tong University Fund(grants number: AE170004)；National Natural Science Foundation of China (81270432)

T3－17

Neuroprotective effects of American ginseng extract on neurodegenerative disease in rats:Neurochemical studies

WANG Jian-yu，YANG Jing-yu，WANG Fang，WU Chun-fu

(Department of Pharmacology，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China)

Abstract:American ginseng extract(AGE)has been shown to have a lot of beneficial effects on disorders of central nervous system.In this paper，the neuroprotective effect of AGE on neurodegenerative disease in rats and the potential mechanism were investigated.AGE was orally administered at 3，6，12 mg·kg－1once daily for 3 weeks. The levels of striatal dopamine(DA)，ascorbic acid(AA) and hydroxy radical(·OH)were measured by using high performance liquid chromatography(HPLC)with electrochemical detection.The results showed that AGE markedly prevented the depletion of striatal DA and AA in rats with neurodegenerative disease.On the contrary，the elevated level of·OH was reduced significantly in AGE treated group rats.We suggest that AGE has neuroprotective effect probably via inhibiting the formation of·OH and stimulating the release of endogenous antioxidant.

Key words:American ginseng extract；neurodegenerative disease；dopamine；ascorbic acid；hydroxy radical

Foundation item:The project supported by Grants from Specialized Research Fund for the Doctoral Program of Higher Education of China(20102134110003)

Corresponding author:WU Chun-fu，E-mail:wucf＠syphu.edu.cn；E-mail:chunfuw＠gmail.com

T3－18

連翹提取物對魚藤酮誘導的大鼠帕金森病模型的保護作用

張 帥，陳乃宏

(中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院藥物研究所天然藥物活性物質(zhì)與功能國家重點實驗室，北京 100050)

摘要:目的探討連翹提取物對魚藤酮誘導的大鼠帕金森病(PD)模型的保護作用，為連翹提取物治療PD提供實驗依據(jù)。方法實驗分為假手術組，模型組，連翹提取物10，50和250 mg·kg－1和陽性對照組司來吉蘭10 mg·kg－1，灌胃給藥7 d后造模。采用一次性定位注射魚藤酮(30 μg·kg－1)溶液至大鼠腦右側黑質(zhì)部，損傷多巴胺神經(jīng)元，造成PD模型，造模后繼續(xù)給藥7 d。結果造模后，模型組大鼠向左側旋轉，與模型組相比，連翹10和50 mg·kg－1無改善作用，司來吉蘭組癥狀減輕，連翹250 mg·kg－1組大鼠減輕更明顯。免疫組化結果顯示，模型組和連翹10 mg·kg－1組大鼠黑質(zhì)部位TH表達明顯減少，而50和250 mg·kg－1組和司來吉蘭組均得到顯著改善。Western blot結果顯示，與假手術組相比，模型組中TH表達顯著降低，而α突觸核蛋白類表達顯著升高，50和250 mg·kg－1組及司來吉蘭組中TH表達顯著高于模型組，此外3個劑量組及陽性組均顯著降低α突觸核蛋白類的蛋白表達。結論連翹提取物可以保護黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元，抵抗魚藤酮對神經(jīng)元的損傷，改善PD癥狀。

關鍵詞:連翹提取物；魚藤酮；α突觸核蛋白類

T3－19

瓜子金皂苷己通過NF-κB信號通路抑制炎癥因子的釋放

閆文芬，陳乃宏，苑玉和

(中國醫(yī)學科學院＆北京協(xié)和醫(yī)學院藥物研究所，北京100050)

摘要:目的研究瓜子金皂苷己的抗炎機制。方法采用ELISA的方法檢測瓜子金皂苷已對于炎癥因子的釋放的影響。Western blot方法檢測瓜子金皂苷己對于炎癥相關蛋白iNOS，p38和p65的表達水平及磷酸化水平的影響；采用免疫熒光技術觀察NF-κB的核轉位情況。結果瓜子金皂苷己可以抑制由LPS導致的炎癥因子TNF-α和NO的釋放，降低iNOS的表達。對于MAPK信號通路，瓜子金皂苷己僅對于p38蛋白激酶的磷酸化水平有抑制作用，對于JNK和ERK1/2蛋白激酶的磷酸化水平升高無明顯的影響；瓜子金皂苷己可以劑量依賴性的降低NF-κB的核轉位，與免疫熒光結果一致；此外，瓜子金皂苷己可以抑制LPS-條件培養(yǎng)基(LPS-CM)對PC12細胞造成的細胞毒性，可劑量依賴性的提高PC12細胞的存活率。結論瓜子金皂苷己通過抑制NF-κB信號通路來發(fā)揮神經(jīng)保護作用。

關鍵詞:瓜子金皂苷己；帕金森??；神經(jīng)炎癥；NF-κB

T3－20

人參提取物抗腦內(nèi)氧化應激作用

高 巖，陳乃宏

(中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院 藥物研究所，北京100050)

摘要:人參是一種經(jīng)典的促智利體的補益藥物，具有很好的神經(jīng)保護作用。之前的研究發(fā)現(xiàn)人參具有抗凋亡作用，但是其在抗氧化應激作用上的機制尚不完全明確?；谏鲜鲈颍覀冊诖笫竽X內(nèi)研究了人參提取物對抗氧化應激作用的一些初步機制。在造模前1周給予3個劑量的人參提取物，造模后同時給予人參提取物。取材后通過免疫組織化學，免疫熒光，抗氧化應激試劑盒以及免疫印跡的方法檢測，我們發(fā)現(xiàn)人參提取物表現(xiàn)出了對大鼠腦組織的保護作用，并呈現(xiàn)了一定的劑量依賴性，降低了組織損傷保護了神經(jīng)元，上調(diào)了抗氧化應激通路的各項蛋白和酶的活性。根據(jù)我們的結果，可以初步推斷人參提取物在保護神經(jīng)元的過程中可能是通過了抗氧化應激的方式，這可以作為一種潛在的藥物開發(fā)方向。

關鍵詞:人參提取物；抗氧化應激；神經(jīng)元

通訊作者:陳乃宏,E-mail:chennh＠imm.ac.cn

T3－21

rAAV介導的α-突觸核蛋白類過表達導致黑質(zhì)紋狀體神經(jīng)變性并提高了小鼠對MPTP的敏感性

宋連昆，馬開利，苑玉和，牟 正，宋修云，牛 非，韓 寧，陳乃宏

(中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院藥物研究所，北京100050)

摘要:目的探討α-突觸核蛋白類與帕金森病(PD)發(fā)病的關系。方法本研究利用腺相關病毒載體(rAAV1/2)在小鼠黑質(zhì)部位定位過表達α-突觸核蛋白類，在定位注射9個月的時間內(nèi)對小鼠運動功能及黑質(zhì)紋狀體病理變化進行檢測。結果免疫熒光及免疫印跡結果顯示，α-突觸核蛋白類在病毒注射1個月后在黑質(zhì)部位維持了高水平表達。黑質(zhì)部位的TH陽性神經(jīng)元和紋狀體部位的TH陽性纖維出現(xiàn)進行性丟失，中腦部位的酪氨酸羥化酶和多巴胺轉運體水平也明顯減少，病理結果顯示3個月時損傷最為顯著。除了病理改變，在曠場、爬桿及游泳實驗中，過表達α-突觸核蛋白類的小鼠出現(xiàn)一定運動功能減退，在第3個月時出現(xiàn)顯著的運動行為障礙，這與病理結果相一致。雖然在病毒感染9個月后，α-突觸核蛋白類能夠維持較高的表達，但黑質(zhì)紋狀體病理損傷比3個月時出現(xiàn)部分恢復(TH陽性神經(jīng)元數(shù)目約增加10%)，紋狀體部位的多巴胺及其代謝物水平?jīng)]有顯著改變。為了研究遺傳與環(huán)境的共同作用，注射rAAV1/2-α-syn 2個月后給予小鼠神經(jīng)毒性劑 MPTP，發(fā)現(xiàn) MPTP和α-突觸核蛋白類的共同作用比單一影響導致了更為嚴重的病理損傷:多巴胺能神經(jīng)元大量丟失、紋狀體多巴胺及其代謝物水平顯著減少，代謝物與多巴胺比值明顯增加；同時免疫熒光結果發(fā)現(xiàn)α-突觸核蛋白類在核周出現(xiàn)明顯聚集，在核內(nèi)的α-突觸核蛋白類分布增多，這些提示α-突觸核蛋白類在黑質(zhì)過表達提高了小鼠對神經(jīng)毒性劑MPTP的敏感性。結論高水平的α-突觸核蛋白類導致了黑質(zhì)紋狀體變性并提高了多巴胺能神經(jīng)元對神經(jīng)毒性劑的易感性，有利于PD發(fā)病機制的研究和相關治療方法發(fā)展。

關鍵詞:α-突觸核蛋白類；帕金森病

T3－22

Claulansine F促進NSC向神經(jīng)元分化及其機制

黃菊陽，馬寅仲，陳乃宏

(中國醫(yī)學科學院藥物研究所，北京 100050)

摘要:目的觀察Claulansine F對NSC分化的影響及其機制的研究。方法分離孕期14 d SD大鼠胚胎腦隔區(qū)消化分散為單細胞在體外懸浮培養(yǎng)。擴增至第三代對其進行分化和增殖能力評價。分別以nestin，TUJ-1，MAP-2作為神經(jīng)干細胞，新生神經(jīng)元，成熟神經(jīng)元的標志物進行免疫熒光觀察。通過Western blot和反轉錄PCR法觀察四條涉及干細胞分化和增殖信號通路的激活情況。結果體外NSC具有高度增殖活力，并在特定分化條件刺激下，能夠向神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞分化，證明了其可以作為本實驗的細胞模型。Claulansine F能夠在96 h內(nèi)顯著促進NSC的TUJ-1的表達，同時降低nestin的陽性表達率，提示其可能具有促進NSC向神經(jīng)元分化的能力。而持續(xù)刺激7 d后與空白對照相比出現(xiàn)更多MAP-2，TUJ-1陽性細胞，提示其可能具有促進NSC成熟的作用。β連環(huán)蛋白降解酶GSK3β的降解活性受到抑制，AKT與ERK呈現(xiàn)激活狀態(tài)，說明了Wnt通路的激活，提示其可能參與到Claulansine F的促分化作用。Claulansine F能夠顯著抑制NSC的增殖活力與多能標志物的表達，且細胞中Notch通路的下游Math1和Dll1的轉錄水平顯著增加，而Hes5則呈現(xiàn)顯著地下降。說明該通路處于未激活狀態(tài)，而作為該通路受體復合物組件之一的Notch1的轉錄水平并無變化。結論Claulansine F可能是通過影響NICD復合物的形成進而阻止其核轉位來阻斷Notch信號傳導，從而細胞增殖，促進NSC的分化。

關鍵詞:Claulansine F；NSC；Wnt；Notch

通訊作者:陳乃宏,E-mail:chennh＠imm.ac.cn

T3－23

EGCG通過抑制TNFR1調(diào)控Lipocalin2對APP/PS1轉基因小鼠腦內(nèi)神經(jīng)炎性反應的影響

劉明妍，姚維范，鐘 欣，楊時倫，杜 可，趙海山，魏敏杰

(中國醫(yī)科大學藥學院藥理學教研室，遼寧沈陽 110001)

摘要:目的探討EGCG抑制APP/PS1轉基因小鼠腦內(nèi)神經(jīng)炎性反應和細胞凋亡作用及其調(diào)節(jié)TNFR1影響Lipocalin2分泌的抗炎抗凋亡機制。方法以2 mg·kg－1EGCG灌胃給予APP/PS1鼠4周，以等劑量雙蒸水灌胃給予C57 BL/6J鼠(WT組)和APP/PS1鼠(APP/PS1組)，連續(xù)4周；Western blot法及免疫熒光組織化學法檢測動物腦內(nèi)Aβ1－42及GFAP的相對定位及表達水平；TUNEL法檢測小鼠海馬細胞凋亡情況；Western blot法及ELISA法檢測動物腦內(nèi)TNFα表達，Western blot法檢測小鼠海馬 TNFR1、Lipocalin2及24p3R等相關蛋白的表達水平。結果EGCG可明顯抑制APP/PS1轉基因小鼠海馬及皮質(zhì)Aβ斑塊周圍的膠質(zhì)細胞增生，抑制Aβ1－42沉積及星形膠質(zhì)細胞標志物GFAP的表達水平；EGCG顯著抑制其腦內(nèi)神經(jīng)細胞的凋亡；EGCG顯著抑制其可腦內(nèi)炎性介質(zhì)的TNFα表達水平，并降低其受體TNFR1的表達水平；EGCG可通過降低TNFα/TNFR1顯著抑制Lipocalin2及其受體24p3R的表達水平，進而抑制其下游凋亡相關蛋白BIM的表達水平，從而抑制細胞凋亡，發(fā)揮神經(jīng)保護作用。結論EGCG通過降低APP/PS1轉基因小鼠海馬炎性介質(zhì)TNFα及其受體TNFR1表達，抑制Lipocalin2介導的細胞凋亡，發(fā)揮神經(jīng)保護作用。

關鍵詞:EGCG；Lipocalin2；TNFα；TNFR1；細胞凋亡；神經(jīng)炎性反應；阿爾茨海默病

基金項目:國家科技部科技重大專項子課題(2013ZX09103001-003)；遼寧省科學技術計劃項目(2011415052,2013225079)；遼寧省教育廳科學研究一般項目(L2012279)

通訊作者:魏敏杰,E-mail:minjie＿wei＠163.com

T3－24

瓜子金皂苷己對MPP＋誘導PC12細胞凋亡的保護作用

苑玉和，吳苗苗，陳乃宏

(中國醫(yī)學科學院藥物研究所天然藥物活性物質(zhì)與功能國家重點實驗室，北京 100050)

摘要:目的觀察瓜子金皂苷己對MPP＋誘導的PC12細胞損傷的影響，并且探討其保護作用機理。方法采用MTT法檢測細胞存活率，AnnexinⅤ/PI染色流式細胞術(FCM)檢測PC12細胞凋亡，JC-1染色檢測細胞線粒體膜電位，Western blotting檢測蛋白的水平。結果MPP＋500 μmol作用PC12細胞48 h，細胞存活率降至60%左右(P＜0.001)，細胞凋亡率由空白組的2.68%增加到54.81%，有(76.71±4.31)%細胞線粒體膜電位降低；在正常細胞中沒有活性胱天蛋白酶3的表達，經(jīng)MPP＋損傷后胱天蛋白酶3的表達顯著升高；給予瓜子金皂苷己 0.10，1.00和10.00 μmol·L－1處理，PC12細胞存活率顯著增加，其中1.00和10.00 μmol·L－1濃度組與MPP＋處理組比較有顯著性差異(P＜0.01)；瓜子金皂苷己0.10，1.00和10.00 μmol·L－1組早期凋亡率分別為39.04%，33.43%和29.73%，呈劑量依賴性降低，從而使活細胞比例增加；線粒體膜電位降低分別為(55.19±2.84)%，(36.75±1.47)%和(23.61±2.23)%，表明瓜子金皂苷己能濃度依賴性的抑制MPP＋損傷線粒體膜電位的降低；同時活性胱天蛋白酶3蛋白水平降低(P＜0.01)。結論瓜子金皂苷己能夠?qū)筂PP＋誘導的PC12細胞凋亡，其作用機制可能與維持線粒體正常膜電位，穩(wěn)定線粒體功能，降低胱天蛋白酶3表達有關。

關鍵詞:瓜子金皂苷己；1-甲基-4-苯基吡啶離子；細胞凋亡；線粒體功能

通訊作者:陳乃宏,E-mail:chennh＠imm.ac.cn

T3－25

(－)表沒食子兒茶素沒食子酸酯調(diào)節(jié)NGF-TrkA/p75NTR平衡對APP/PS1轉基因小鼠學習記憶障礙的改善作用

魏敏杰，劉明妍，鐘 欣，杜 可，楊時倫，姚維范，趙海山

(中國醫(yī)科大學藥學院藥理教研室，遼寧沈陽 110001)

摘要:目的探討(－)表沒食子兒茶素沒食子酸酯對APP/PS1轉基因小鼠學習記憶障礙的改善作用及其調(diào)節(jié)NGF-TrkA/p75NTR平衡的神經(jīng)保護機制。方法將20只APP/PS1轉基因小鼠隨機分為2組，每組10只，分為模型組(APP/PS1組)和實驗組(EGCG組)。以2 mg·kg－1EGCG灌胃給予APP/PS1鼠4周(EGCG組)，以等劑量雙蒸水灌胃給予 C57 BL/6J鼠(Wild Type組，WT組)和APP/PS1鼠(APP/PS1組)，連續(xù)4周；以Morris水迷宮及被動避暗實驗觀察其行為學變化，免疫組化法檢測腦內(nèi)Aβ1－40及胱天蛋白酶3的表達水平，fluoro-Jade B法檢測神經(jīng)細胞凋亡狀況，并以Western blot法檢測小鼠海馬NGFTrkA/p75NTR相關蛋白及凋亡相關蛋白胱天蛋白酶3的表達水平。結果EGCG可明顯改善APP/PS1轉基因小鼠的學習記憶障礙及；EGCG可顯著抑制其腦內(nèi)Aβ1－40的過度沉積，抑制神經(jīng)細胞凋亡；EGCG可顯著上調(diào)APP/PS1轉基因小鼠海馬內(nèi)NGF及其前體蛋白proNGF的表達水平，增加NGF/proNGF的比例，使NGF相對表達水平顯著上調(diào)；EGCG可通過顯著激活TrkA，同時抑制p75NTR，從而抑制神經(jīng)細胞凋亡和改善學習記憶障礙，發(fā)揮神經(jīng)保護作用。結論EGCG通過調(diào)節(jié)APP/PS1轉基因小鼠海馬NGF-TrkA/p75NTR平衡，抑制神經(jīng)細胞凋亡，改善學習記憶障礙。

關鍵詞:EGCG；NGF；細胞凋亡；學習記憶

基金項目:國家科技部“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項子課題(2013ZX09103001-003)；遼寧省科學技術計劃項目(2011415052,2013225079)；遼寧省教育廳科學研究一般項目(L2012279)

通訊作者:魏敏杰,E-mail:minjie＿wei＠163.com

T3－26

MEOX2基因在AD模型小鼠中的作用

曠 喜，何 倩，龍方懿，桑 納，曾 怡，毛曉娜，杜俊蓉

(四川大學華西藥學院藥理學系，四川成都 610041)

摘要:目的研究MEOX2基因在AD轉基因模型小鼠中的作用。方法選用1，6和12月齡的APP/PS1雄性小鼠及其相應年齡段的C57對照小鼠作為AD疾病發(fā)展三個階段(幼年、青年及老年)的模型動物，分為六組，每組14只。采用水迷宮方法檢測動物學習記憶能力的變化情況，多普勒血流儀檢測動物腦皮層血流的變化。實驗結束后處死動物，免疫組化染色觀察小鼠大腦皮層及海馬區(qū)域淀粉樣蛋白前體物質(zhì) APP、淀粉樣蛋白Aβ沉積、膠質(zhì)細胞 Iba-1、GFAP活化、腦組織損傷指標NSE、神經(jīng)突觸素抗體SYN的表達情況；分別采用比色法或ELISA檢測腦組織NO與內(nèi)皮素ET含量、免疫雜交法分析腦組織MEOX2蛋白水平、定量PCR方法檢測MEOX2核酸水平。結果APP/PS1轉基因小鼠學習記憶能力隨著年齡的增加出現(xiàn)明顯的功能障礙，12月齡模型組與C57對照組水迷宮結果具有統(tǒng)計學差異(P＜0.01)，其短時程、長時程有效象限率分別降低45.5%、53.7%；多普勒血流儀檢測結果顯示6月齡和12月齡動物APP/PS1組腦血流量明顯低于C57對照組(P＜0.01)，三個年齡段的APP/PS1模型組比對應的C57對照組分別降低3.74%，17.1%與37.5%；免疫組化結果顯示，隨著年齡的增加，腦組織神經(jīng)炎癥反應指標Iba-1和GFAP明顯活化；腦組織損傷指標NSE明顯增加，淀粉肽前體蛋白APP及淀粉樣蛋白Aβ表達增加。神經(jīng)突觸素抗體SYN表達降低，且6月齡和12月齡APP/PS1組動物的病理學變化與相應年齡段C57組動物比較有明顯區(qū)別(P＜0.01)；血管內(nèi)皮功能性指標血管內(nèi)皮素ET水平隨動物月齡的增加而增加，NO水平逐漸降低，顯示6和12月齡APP/PS1組動物與C57對照組動物比較，ET和 NO具有統(tǒng)計學差異(P＜0.01)，MEOX2基因核酸和蛋白水平隨著AD動物年齡的增加逐漸降低，6月齡和12月齡APP/PS1組動物與C57組動物比較有顯著性差異(P＜0.01)。結論MEOX2基因在AD疾病發(fā)病過程中具有重要意義，AD特征性病理變化與MEOX2表達水平呈負性相關，其分子機制可能與AD疾病發(fā)展過程中MEOX2調(diào)控的血管內(nèi)皮功能障礙有關。

關鍵詞:MEOX2基因；阿爾茲海默病；腦血流量；一氧化氮；內(nèi)皮素

基金項目:國家自然科學基金資助項目(81202540)

通訊作者:曠 喜,E-mail:kuangxi56＠163.com；杜俊蓉,E-mail:dujr＿1＠163.com

T3－27

C反應蛋白誘導SH-SY5Y細胞Tau蛋白的過度磷酸化

郭海彪，程玉芳，王燦茂，李亦文，徐江平

(南方醫(yī)科大學藥學院神經(jīng)藥理學科，廣東廣州 510515)

摘要:目的利用SH-SY5Y細胞，探討C反應蛋白(CRP)對tau蛋白的磷酸化的影響，進一步研究CRP介導tau蛋白的磷酸化可能機制。方法MTT法篩選出CRP對SH-SY5Y細胞毒性范圍；運用Western blotting技術檢測CRP不同時間點處理細胞、不同濃度CRP處理細胞后，p-Akt(ser473)，p-GSK3β(ser9)，p-Tau(ser202)的蛋白表達變化；非特異性GSK3β抑制劑LiCl預處理后加入CRP，檢測p-GSK3β(ser9)，p-Tau(ser202)的蛋白表達變化。結果MTT結果顯示，CRP(5，10，20 μmol·L－1)處理SHSY5Y細胞后，細胞存活率出現(xiàn)顯著性下降；CRP (10 μmol·L－1)不同時間點處理細胞后，p-Akt(ser473)，p-GSK3β(ser9)的表達呈時間依賴性地下降，p-Tau (ser202)的表達則依賴性增加，在20，40，80 min均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。不同濃度CRP(5，10，20 μmol·L－1)處理細胞20 min后，p-Akt(ser473)，p-GSK3β(ser9)明顯下調(diào)(P＜0.05)，而p-tau(ser202)顯著性增加(P＜0.05)；此外，LiCl明顯抑制GSK3β(ser9)的下調(diào)，進一步抑制p-Tau (ser202)的表達。結論C反應蛋白在AD發(fā)病中的重要致病因子之一，其機制可能與Akt/GSK3β通路介導的tau磷酸化有關。

關鍵詞:C反應蛋白；Tau蛋白；磷酸化；阿爾茨海默病

基金項目:國家自然科學基金-廣東省聯(lián)合基金重點項目(U1032006/L02)；國家自然科學基金(81373384；81301099)

T3－28

氯比普蘭改善學習記憶作用及其機制

吳金剛，程玉芳，汪海濤，王燦茂，郭海彪，甘丹娜，徐江平

(南方醫(yī)科大學藥學院神經(jīng)精神藥理學課題組，廣東 廣州510515)

摘要:目的在Aβ25－35海馬注射建立的癡呆大鼠模型中考察氯比普蘭對學習記憶的改善作用及其作用的分子機制。方法60只成年雄性Sprague-Dawley大鼠隨機分成6組:假手術組、模型組、氯比普蘭低劑量組(0.05 mg·kg－1)、氯比普蘭高劑量組(0.15 mg·kg－1)、陽性藥咯利普蘭組(0.5 mg·kg－1)、陽性藥多奈哌齊組(1 mg·kg－1)。使用雙側海馬CA1區(qū)立體定位注射經(jīng)老化處理(37℃，4 d)的Aβ25－35(10 μg/側)造成癡呆模型，假手術組給于等體積的空白溶劑。造模24 h后，各組大鼠連續(xù)灌胃給藥23 d，每天1次。手術后第14天進行曠場實驗測試大鼠自發(fā)活動能力；第20天采用Morris水迷宮進行定向航行實驗及空間探索實驗檢測大鼠學習記憶能力；行為學測試結束后大鼠斷頭取海馬組織，Western blotting檢測PKA及CREB磷酸化水平(pPKA/ pCREB)的變化，RT-PCR及Western blot分別檢測海馬組織中BDNF的mRNA及蛋白水平。結果曠場實驗表明氯比普蘭不影響大鼠自發(fā)活動；水迷宮實驗結果顯示，Aβ25－35模型組大鼠的定位航行潛伏期明顯長于假手術組，而氯比普蘭高劑量組、多奈哌齊組及咯利普蘭組大鼠的潛伏期明顯短于模型組(P＜0.01)；空間探索實驗顯示模型組大鼠在目標象限(第Ⅱ象限)中游泳時間及游泳距離百分比百分比明顯低于假手術組，而多奈哌齊組、咯利普蘭組、氯比普蘭低劑量和高劑量組均能顯著提高大鼠在目標象限游泳的時間及游泳的距離(P＜0.05)。Western blotting結果顯示，Aβ25－35顯著降低大鼠海馬組織中pPKA和pCREB(Ser133)水平；與模型組相比，氯比普蘭低劑量和高劑量組、多奈哌齊組、咯利普蘭組其pPKA和pCREB(ser133)水平顯著增高。PCR與Western blotting結果顯示，與模型組比較，各組海馬內(nèi)BDNF mRNA水平均增高。結論表明氯比普蘭具有顯著改善癡呆大鼠學習記憶障礙的作用，其作用機制可能與激活cAMP/PKA/pCREB信號通路，促進BDNF的表達有關。

關鍵詞:氯比普蘭；學習；記憶

基金項目:國家自然科學基金-廣東省聯(lián)合基金重點項目(U1032006/L02)；國家自然科學基金(81373384)

T3－29

水楊酸甲酯糖苷抗炎改善APP/PS1轉基因老年癡呆小鼠學習記憶

張?zhí)焯瑒?睿，馬曉瑋，李金澤，杜冠華

(中國醫(yī)學科學院藥物研究所國家藥物篩選中心，北京100050)

摘要:目的觀察水楊酸甲酯糖苷在APP/PS1轉基因老年癡呆小鼠模型的作用及可能的作用機制。方法APP/ PS1轉基因老年癡呆小鼠6月齡后給予水楊酸甲酯糖苷(150和300 mg·kg－1·d－1)，檢測學習記憶能力、大腦皮質(zhì)神經(jīng)元超微結構退行性變化和小膠質(zhì)細胞活化。進而，在BV-2細胞觀察水楊酸甲酯糖苷對炎性因子的表達、NF-κB信號通路活化的影響，探討其可能的作用機制。結果水楊酸甲酯糖苷能夠顯著提高小鼠學習記憶能力，減緩神經(jīng)退行性病變，保護皮質(zhì)神經(jīng)元超微結構。分子機制方面，水楊酸甲酯糖苷抑制可顯著抑制炎癥因子TNF-α和IL-6的基因表達和分泌，可減少細胞上清液中NO的生成，可抑制iNOS蛋白和基因的表達，可顯著抑制COX-1和COX-2蛋白和基因的表達，并減少PGE2的基因表達和分泌。提示 MSL對活化BV-2具有顯著的抗炎作用。同時，水楊酸甲酯糖苷通過抑制IKK激酶磷酸化、IκBα蛋白泛素化降解、以及p65蛋白核轉位而抑制NF-κB信號通路的活化，發(fā)揮抗炎作用。結論水楊酸甲酯糖苷在APP/PS1轉基因老年癡呆小鼠模型中，通過抑制炎性因子的表達和抑制NF-κB信號通路的活化發(fā)揮抗炎作用，從而提高認知能力，保護神經(jīng)細胞，對延緩AD病理損傷和改善學習記憶能力發(fā)揮了潛在作用。

關鍵詞:水楊酸甲酯糖苷；抗炎；學習；記憶

基金項目:北京市科技計劃專項(Z13110200270000)；十一五“重大新藥創(chuàng)制”(2009ZX09102-034)

通訊作者:杜冠華,E-mail:dugh＠imm.ac.cn

T3－30

富含脯氨酸的酪氨酸激酶2參與離子霉素誘導的神經(jīng)遞質(zhì)釋放

張 釗，楚世峰，陳乃宏

(中國醫(yī)學科學院藥物研究所，北京 100050)

摘要:目的研究富含脯氨酸的酪氨酸蛋白激酶2 (Pyk2)在 Ca2＋載體―離子霉素(Ionomycine)作用下對PC12細胞中神經(jīng)遞質(zhì)的釋放的影響。方法通過RNA干擾實驗對PC12細胞中Pyk2表達進行抑制，結合神經(jīng)遞質(zhì)釋放實驗、免疫共沉淀、免疫印跡和細胞免疫熒光等方法明確Pyk2磷酸化與神經(jīng)遞質(zhì)釋放的相關性及其機制。結果PC12細胞在離子霉素的作用下，多巴胺(DA)及谷氨酸(Glu)釋放明顯增多，在2 min達峰值(DA:占總含量的2.67%±0.412%；Glu:占總含量的7.12%±1.28%，之后迅速下降，6 min以后已接近基線水平(DA:占總含量的0.313%±0.0527%；Glu:占總含量的2.42%±0.458%。而PC12細胞中通過RNA干擾技術預先干擾Pyk2的表達，可明顯抑制DA的釋放 (2 min時占總含量的 0.541%± 0.1247%)。Western和共聚焦結果均顯示離子霉素可引起Pyk2的磷酸化，其402位酪氨酸磷酸化在90 s熒光值最高，之后逐漸下降。而Pyk2其他三個酪氨酸磷酸化位點(579，580，881)未見明顯變化。通過構建Pyk2不同酪氨酸磷酸化位點的突變體 Pyk2-Y402F，Pyk2-Y579F，Pyk2-Y580F，Pyk2-Y881F檢測各位點在離子霉素引起的遞質(zhì)釋放中的作用，同樣驗證了Y402位的關鍵性。結論酪氨酸激酶Pyk2的402位酪氨酸殘基磷酸化在離子霉素誘導的神經(jīng)遞質(zhì)釋放過程中具有重要作用，對其進一步的研究可能為PD等神經(jīng)遞質(zhì)紊亂所致的神經(jīng)退行性疾病提供新的治療策略。

關鍵詞:Pyk2；神經(jīng)遞質(zhì)釋放；Y402；RNA干擾

基金項目:國家自然科學基金資助項目(81274122, 81073078,81001487,81373510,81373998；重點項目90713045)；國家科技重大專項(2012ZX09301002-004, 2012ZX09103101-006)；國家863項目(2012AA020303)；長江學者和創(chuàng)新團隊發(fā)展計劃(IRT1007)；北京自然科學基金(7131013)；教育部博士點基金(20121106130001)

通訊作者:陳乃宏,E-mail:chennh＠imm.ac.cn

T3－31

人參皂苷聯(lián)合左旋多巴防治帕金森病實驗研究

張宇奮1?，凌 鵬1?，連曉媛2

(1.安徽中醫(yī)藥大學藥學院，安徽合肥 230038；2.浙江大學藥學院，浙江杭州 310011)

摘要:目的探討人參皂苷(Rb)與l-DOPA合用能否在控制帕金森病癥狀的同時具有神經(jīng)保護作用。方法用魚藤酮誘導大鼠帕金森模型，每天早晚各注射一次，直到出現(xiàn)PD癥狀為止；藥物處理組包括Rb組(40 mg·kg－1·d－1)，l-DOPA組(46 mg·kg－1·d－1)和Rb＋l-DOPA組，在每次給魚藤酮前1 h灌胃給藥，模型組給予等量的生理鹽水。同時設正常對照組。從造模開始的整個實驗過程中，觀測各組動物一般活動能力和肢體運動及平衡協(xié)調(diào)能力。于最后一次行為實驗結束后，用多聚甲醛心臟灌注固定腦組織。用免疫組織化學的方法檢測TH陽性染色以測定黑質(zhì)致密部多巴胺胞體和紋狀體多巴胺神經(jīng)纖維末端的損傷情況，并統(tǒng)計各組大鼠損傷發(fā)生率及損傷體積(mm3)。結果與正常組比較，魚藤酮模型組體重逐漸降低并至顯著水平(P＜0.01)，Rb或l-DOPA單獨給藥對魚藤酮誘導的體重降低無影響，而Rb＋l-DOPA可顯著對抗體重降低。與正常組比較，模型組的抓力和平衡協(xié)調(diào)能力顯著降低(P＜0.01)，與模型組比較，Rb＋l-DOPA組可顯著對抗抓力與平衡協(xié)調(diào)能力的降低(P＜0.01，P＜0.05)，而Rb或l-DOPA單獨給藥僅有部分改善作用。腦組織免疫組化分析結果與運動行為結果高度一致。60%的模型組動物紋狀體出現(xiàn)顯著的TH丟失，指示多巴胺神經(jīng)纖維末端的損傷，損傷體積為1.63±0.47(n＝10)；Rb組和l-DOPA組分別為12.5%(損傷體積為0.27±0.17，n＝10)和30%(損傷體積為1.04±0.53，n＝10)；而Rb＋l-DOPA組無任何動物出現(xiàn)損傷情況。結論Rb對魚藤酮誘導的大鼠帕金森病有一定的行為改善和神經(jīng)保護作用，與l-DOPA合用時效果更為顯著特別是可有效保護多巴胺能神經(jīng)，顯示了Rb尤其是與l-DOPA合用在治療帕金森病的應用前景。

關鍵詞:帕金森病；人參皂苷；左旋多巴；神經(jīng)保護

基金項目:國家重點基礎研究發(fā)展計劃(973計劃)資助項目(2011CB504400)

通訊作者:連曉媛,E-mail:xylian＠zju.edu

?共同第一作者.

T3－32

2-(α-羥基戊基)苯甲酸鉀鹽抗阿爾茨海默病的作用機制

彭 英，胡艷麗，榮先芳，徐少鋒，李 江，馮 楠，王 玲，王曉良

(中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院藥物研究所，北京100050)

摘要:目的采用APP/PS1-阿爾茨海默病(AD)轉基因小鼠模型，觀察了2-(α-羥基戊基)苯甲酸鉀鹽(dl-PHPB)抗AD的藥理作用并對相關機制進行探討。方法12月齡的APP/PS1轉基因小鼠灌胃給予dl-PHPB 30 mg·kg－1，3個月后動物進行行為學實驗，然后取材進行生化及病理檢測。結果結果顯示，dl-PHPB明顯改善APP/PS1小鼠的學習記憶缺失。dl-PHPB能減少Thio-S陽性的Aβ沉積和APP的磷酸化，PKC信號通路可能參與dl-PHPB調(diào)節(jié)APP加工過程朝非淀粉樣肽生成方向發(fā)展，從而減少Aβ的生成。dl-PHPB 30 mg·kg－1處理后可顯著降低轉基因小鼠皮層和海馬中Tau蛋白在Ser199，Thr205 and Ser396位點的過度磷酸化。另外dl-PHPB能顯著減低調(diào)節(jié)Tau蛋白磷酸化的主要激酶CDK-5和GSK-3β的表達。PI3K/Akt信號通路能夠調(diào)節(jié)GSK-3β激酶的活性，進而影響Tau蛋白磷酸化。dl-PHPB長期給藥可明顯逆轉PI3K/Akt表達的減少，抑制Tau蛋白磷酸化。結論dl-PHPB可能通過多靶點發(fā)揮抗AD的作用。

關鍵詞:2-(α-羥基戊基)苯甲酸鉀鹽；阿爾茨海默病

T3－33

神經(jīng)退行性疾病生物標志物與藥物作用機制的轉化醫(yī)學研究

王曉良，魯雯雯，朱 蕾，孫英妮，榮先芳

(中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院藥物研究所，北京100050)

摘要:應用AD和PD轉基因動物組織及患者血清進行了生物標志物的轉化醫(yī)學研究，并進一步探討了AD和PD的發(fā)病機制和藥物的治療作用。應用2DE蛋白組學技術，在APP/PS1轉基因動物大腦皮質(zhì)和海馬中共發(fā)現(xiàn)23個差異蛋白，經(jīng)文獻比較發(fā)現(xiàn)13個蛋白曾被報導存在于轉基因動物和AD病人中，5個蛋白僅在動物而未在病人中發(fā)現(xiàn)過，而4個蛋白從未在AD被報道過。用Western blot方法在20個AD病人血清中驗證，發(fā)現(xiàn)6個蛋白與AD轉基因動物中的改變一致，且與正常人有顯著差別。在另一實驗中，我們對20個PD病人及等量正常人血清進行了對比研究，發(fā)現(xiàn)FGG，IT1-H4和Apo A-N蛋白表達及亞基構成上發(fā)生了變化，為PD研究提供了新的思路，更大規(guī)模的臨床病人血清驗證正在進行中。神經(jīng)退行性疾病生物標志物的轉化醫(yī)學研究為疾病機制和藥物作用評價提供了重要手段，如我們在前期工作的基礎上研究了NDRG2和Coffillin等在AD發(fā)生中的作用，以及AD治療藥物對生物標志物的逆轉作用。

關鍵詞:神經(jīng)退行性病變；生物標志物；轉化醫(yī)學

T3－34Bay 60-7550對Aβ淀粉蛋白誘導的認知功能障礙的改善作用

許笑笑，吳飛燕，嚴奇植，吳 凡，費 寧，連樂競，潘建春

(溫州醫(yī)科大學藥學院腦科學研究所，浙江溫州 325035)

摘要:目的探討PDE2抑制劑Bay 60-7550的抗癡呆，提高學習認知的功能及其可能的機制。方法32只ICR小鼠隨機分為假手術組、模型組和兩個劑量處理組，海馬CA1區(qū)微量注射Aβ制作阿爾茲海默病模型，恢復7 d后，腦微量注射分別給予模型組生理鹽水，兩個劑量組給予Bay 60-7550 5 μg/側，10 μg/側，連續(xù)給藥14 d。從第15天起，給予藥物處理24 h后，檢測行為學指標。采用跳臺實驗，morris水迷宮實驗檢測各組小鼠認知行為學改變，測試結束后處死小鼠取組織，采用Western蛋白質(zhì)印記法測定海馬和前額葉內(nèi)細胞凋亡相關蛋白Bcl，Bax，轉錄因子NF-κB，炎癥因子IL-17，IL-22的表達。結果跳臺實驗，Morris水迷宮實驗，模型組與假手術組相比，學習和記憶潛伏期顯著增加；兩個劑量組與模型組比較，學習和記憶潛伏期顯著減少，而海馬和前額葉內(nèi)Bax/Bcl下降，NF-κB轉錄因子，炎癥因子IL-17，IL-22表達均顯著下降。結論PDE2抑制劑Bay 60-7550具有抗癡呆，提高學習認知的功能，其機制可能涉及腦內(nèi)細胞凋亡因子及炎癥因子的表達。

關鍵詞:PDE2抑制劑；阿爾茲海默病；癡呆；認知行為；細胞凋亡因子；炎癥因子

T3－35

白藜蘆醇對Aβ1－42所致的小鼠學習記憶功能損傷的改善作用及機制

吳 凡，嚴奇植，吳飛燕，許笑笑，潘建春

(溫州醫(yī)科大學藥學院腦科學研究所，浙江溫州 325035)

摘要:目的研究白藜蘆醇(RES)對Aβ1－42所致小鼠學習記憶功能損傷模型的改善作用及其可能機制。方法

實驗分為對照組，模型組，不同劑量的藥物組，采用腦內(nèi)注射Aβ1－42的方法建立學習記憶功能障礙的小鼠模型，術后連續(xù)14 d給予不同劑量的RES治療，之后開始行為學測試，通過跳臺試驗和水迷宮實驗觀測小鼠的學習記憶功能的變化，行為學結束后殺鼠取腦組織進行Western blot檢測，檢測海馬及前額葉中環(huán)腺甘酸(cAMP)，cAMP反應元件結合蛋白(p-CREB)以及腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)的蛋白表達。結果模型組小鼠表現(xiàn)出明顯的學習記憶能力損傷癥狀，跳臺實驗中潛伏期較對照組明顯減少，水迷宮測試中潛伏期較對照組明顯增加，而RES能夠顯著逆轉這種現(xiàn)象。Western blot檢測發(fā)現(xiàn)模型組海馬及額葉中cAMP，p-CREB以及BDNF蛋白表達均較對照組顯著降低，而藥物組的cAMP，p-CREB以及BDNF蛋白表達較模型組有顯著升高。結論RES可以改善由Aβ1－42所致的小鼠學習記憶功能損傷，其機制可能涉及到對cAMP-p-CREB-BDNF通路的調(diào)控。

關鍵詞:白藜蘆醇；Aβ1－42；學習記憶；環(huán)腺甘酸

T3－36腦內(nèi)給予Aβ1－42后不同時間點小鼠記憶行為的變化情況

吳飛燕，許笑笑，吳 凡，嚴奇植，連樂競，費 寧，潘建春

(溫州醫(yī)科大學藥學院腦科學研究所，浙江溫州 325035)

摘要:目的探索腦內(nèi)微注射Aβ1－42，在不同時間點對小鼠記憶行為的影響及可能涉及的通路。方法將小鼠分成10組，分別為1個月對照組，1個月手術組；2個月對照組，2個月手術組；3個月對照組，3個月手術組；4個月對照組，4個月手術組；5個月對照組，5個月手術組。同時腦內(nèi)給予Aβ1－42，術后1個月，以跳臺，水迷宮測1個月小鼠行為學，采用免疫組織化學染色法檢測β淀粉樣蛋白，Western蛋白印跡法檢測海馬和前額葉內(nèi)腦源性神經(jīng)生長因子(BDNF)、磷酸化cAMP反應元件結合蛋白(p-CREB)的表達及tau蛋白和PDE2水平的變化。術后2個月，以相同的行為學測試，相同的方法檢測生物指標，術后3、4、5個月小鼠同上。結果4個月手術組小鼠與4個月對照組相比，在跳臺測試中，潛伏期明顯增加，具有顯著性差異(P＜0.01)，在水迷宮測試中，游泳速度無統(tǒng)計學差異，逃逸潛伏期、探索距離及探索時間，皆具有顯著性差異(P＜0.01)。4個月手術組小鼠海馬神經(jīng)元Aβ1－42及其相關蛋白表達水平明顯增加，海馬和前額葉內(nèi)BDNF含量、p-CREB的表達均有顯著性增加，tau蛋白含量及PDE2水平顯著上升(P＜0.05)。結論小鼠腦內(nèi)給予Aβ1－42，在術后4個月時，對小鼠記憶行為的影響相對較明顯，其機制可能涉及cAMP/CREB這條信號通路。

關鍵詞:Aβ1－42；記憶行為；時間點；腦源性神經(jīng)生長因子；cAMP反應元件結合蛋白；tau蛋白；PDE2

T3－37

山茱萸環(huán)烯醚萜苷拮抗tau蛋白異常過度磷酸化的研究

張 蘭，楊翠翠，鄶學先，張 麗，李雅莉，李 林

(首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院藥物研究室，北京市老年病醫(yī)療研究中心，神經(jīng)變性病教育部重點實驗室，北京 100053)

摘要:本研究的目的是從糖原合成酶激酶-3β通路和蛋白磷酸酯酶2A通路兩方面，研究山茱萸環(huán)烯醚萜苷(CIG)抑制tau蛋白過度磷酸化的作用機制，為研發(fā)治療AD的創(chuàng)新藥物提供實驗依據(jù)。研究發(fā)現(xiàn)，在tau蛋白過度磷酸化的4個細胞模型和1個動物模型上，CIG能夠降低tau蛋白在多個位點的過度磷酸化，其作用機制包括:CIG可直接降低蛋白磷酸酯酶2A催化亞基C的去甲基化及磷酸化以提高蛋白磷酸酯酶2A活性，從而促進tau蛋白的去磷酸化；也可通過減少糖原合成酶激酶-3β抑制糖原合成酶激酶-3β活性，從而減低tau蛋白的磷酸化。CIG能夠抑制神經(jīng)細胞和動物腦內(nèi)tau蛋白過度磷酸化，具有治療AD的應用前景。

關鍵詞:山茱萸環(huán)烯醚萜苷；tau蛋白；磷酸化

T3－38

CB2受體激動劑對AD小鼠學習記憶和小膠質(zhì)細胞激活表型的影響

王立寬1，2，劉 越1，3，王 勃1，孫德佳1，4，賈慧群2，李 錦1(1.軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，北京 100850；2.河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院麻醉科，河北石家莊 050017；3.蘇州大學藥學院，江蘇蘇州 215123；4.解放軍71669部隊768醫(yī)院藥械科，河南南陽 473000)

摘要:目的觀察大麻素Ⅱ型(CB2)受體激動劑JWH-015對阿爾茨海默病(AD)模型小鼠學習記憶能力的改善作用，探索其對腦內(nèi)小膠質(zhì)細胞激活表型的影響。方法通過腦室注射Aβ1－42建立AD小鼠模型；通過Morris水迷宮，新物體識別實驗觀察小鼠空間和非空間學習記憶能力；采用實時定量PCR技術觀察海馬、紋狀體、前額葉腦區(qū)CB2受體，M1型小膠質(zhì)細胞表面標記物腫瘤壞死因子α(TNF-α)、誘導型一氧化氮合成酶(iNOS)、白介素6(IL-6)，M2型小膠質(zhì)細胞表面標記物幾丁質(zhì)酶3樣蛋白(Ym1/2)mRNA表達情況。結果AD模型小鼠與對照組相比，空間和非空間學習記憶能力顯著降低；JWH-015連續(xù)三周給藥可顯著改善AD模型小鼠學習記憶能力。此外，AD模型組小鼠海馬、紋狀體及前額葉腦區(qū)CB2受體mRNA表達較對照組相比均顯著上調(diào)，小膠質(zhì)細胞M1型表面標記物表達顯著升高或呈升高趨勢，M2型表面標記物表達顯著降低；與模型組相比，JWH-015干預組小鼠海馬、紋狀體及前額葉腦區(qū)小膠質(zhì)細胞M1型表面標記物表達顯著降低或呈降低趨勢，而海馬和前額葉腦區(qū)M2型表面標記物表達顯著升高。結論大麻素Ⅱ型受體激動劑JWH-015對Aβ誘導的AD模型小鼠學習記憶能力具有改善作用，其機制可能與抑制激活小膠質(zhì)細胞向促炎表型演化，促進激活小膠質(zhì)細胞向抑炎表型演化有關。

關鍵詞:大麻素Ⅱ型受體；阿爾茨海默??；學習記憶；小膠質(zhì)細胞表型

基金項目:北京市科委科技新星資助項目(Z121102002512046)

通訊作者:李 錦,E-mail:jinli9802＠163.com；王 勃, E-mail:wbcmx＠sina.com

T3－39

抑制Aβ1－42聚集的化合物篩選和評價

黃 晏，李 鑫，周文霞，張永祥

(軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，北京 100850)

摘要:目的篩選和評價具有抗淀粉樣蛋白(Aβ)聚集作用的化合物。方法采用硫磺素T(Th-T)結合實驗對聚集態(tài)Aβ進行定量分析；采用CCK-8法檢測化合物對Aβ所致的SH-SY5Y細胞損傷的影響；采用采用APP/PS1轉基因小鼠評價活性化合物對學習記憶及小鼠在體海馬長時程增強的影響。結果本研究共篩選18個化合物，其中有3個化合物能明顯降低Th-T結合試驗的熒光強度。通過對篩選出的3個化合物進行吸收光譜掃描(300～600 nm)和競爭結合實驗表明，化合物C1900在405 nm和480 nm均無特異吸收峰且與Th-T無競爭結合關系。所以，C1900具有抗Aβ聚集的作用。分子水平的評價表明，C1900具有抑制Aβ聚集(IC50＝14.8 μmol·L－1)和解聚聚集態(tài)Aβ(IC50＝8.7 μmol·L－1)的作用。細胞水平的結果表明，C1900可明顯對抗Aβ所致的SH-SY5Y細胞損傷。最后，選用了APP/PS1轉基因小鼠評價了C1900對學習記憶行為和神經(jīng)突觸可塑性的影響。結果表明，連續(xù)灌胃給予C1900(100 mg·kg－1·d－1) 15 d，可明顯改善APP/PS1小鼠的筑巢能力；Morris水迷宮實驗表明，C1900可明顯縮短模型動物在定向航行期尋找站臺的潛伏期(P＜0.05)，且對空間探索期的穿環(huán)次數(shù)及目標象限停留時間均有所改善；在體海馬LTP實驗表明，C1900可明顯提高模型動物的 PS增幅顯(P＜0.01)。結論C1900在分子水平具有抗Aβ聚集的作用，并在細胞水平和動物水平表現(xiàn)出良好的抗阿爾茲海默病作用。

關鍵詞:阿爾茲海默??；淀粉樣蛋白；硫磺素T

基金項目:國家自然科學基金資助項目(81202505, 81302759)；國家科技支撐計劃資助項目(2012BAI29B07)

通訊作者:周文霞,E-mail:zhouwx＠bmi.ac.cn

T3－40

阿爾茨海默病患者血清差異microRNA的篩選及其做為潛在診斷標志物的研究

周文霞1，蔣 寧1，阮燦軍1，程肖蕊1，張永祥1，譚繼平2，王魯寧2

(1.軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，北京 100850；2.解放軍總醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，北京 100853)

摘要:目的研究認知正常人(NDC)、輕度認知障礙病人(MCI)與阿爾茨海默病(AD)患者血清microRNA表達的差異，尋找和發(fā)現(xiàn)與AD相關的microRNA，為研究microRNA在AD發(fā)病機制中的作用及其做為診斷標志物奠定基礎。方法嚴格按照國際標準收集臨床病例60例，包括認知正常人、輕度認知障礙病人和阿爾茨海默病病人各20例，采集血清樣本。采用Agilent人microRNA寡核苷酸基因芯片，對NDC，MCI和AD患者血清中microRNA的表達進行檢測，并采用real time-PCR技術驗證芯片結果，進而采用生物信息學方法預測microRNA的靶基因及其參與的生物學通路。結果從microRNA寡核苷酸基因芯片的877個microRNA中，篩選出83個差異表達的microRNA。進而，應用real time-PCR技術，對差異表達倍數(shù)大于2.6倍，P＜0.037的14個microRNA進行驗證，獲得5個符合質(zhì)控標準的差異microRNA，即Hsa-let-7g，Hsa-miR-126，Hsa-miR-197，Hsa-miR-29a和Hsa-miR-451。進而，對5個microRNA在30個樣本中的表達進行受試者工作特征曲線(ROC)分析，結果表明，其中4個 microRNA(let-7g，miR-197，miR-126和miR-29a)建立MCI和AD診斷模型具有較高的靈敏度和特異性。最后，采用生物信息學方法預測了上述建模所用microRNA的靶基因及其參與的生物學通路，發(fā)現(xiàn)其靶基因參與多條通路，且與AD進程相關，即隨病程不同，microRNA參與調(diào)控的信號通路也發(fā)生改變。結論認知正常人(NDC)、輕度認知障礙病人(MCI)與AD患者血清microRNA表達存在顯著差異，其中4個microRNA可作為建立MCI、AD診斷模型的候選microRNA，有望成為AD的診斷生物標志物，值得深入研究。

關鍵詞:阿爾茲海默病；血清microRNA；診斷模型；生物標志物

基金項目:國家高技術研究發(fā)展計劃(863)項目(2008AA02Z423)；國 家 科 技 支 撐 計 劃 課 題(2012BAI29B07)；國家"重大新藥創(chuàng)制"科技重大專項(2012ZX09301003-002-001)

通訊作者:周文霞，E-mail:zhouwx＠bmi.ac.cn

專題4:腦損傷與認知

T4－01

Metformin promotes functional recovery following experimental stroke via inducing alternative polarization of microglia/macrophages

NI Jing-shu，JIN Qin，JIA jia，ZHEN Xue-chu

(Department of Pharmacology，College of Pharmaceutical Sciences，Soochow University，Suzhou215123，China)

Abstract:OBJECTlVEAcute AMPK activation exacerbates ischemic brain damage experimentally.Paradoxically，the clinical use of an AMPK activator metformin reduces the incidence of stroke.We investigated whether post-stroke chronic metformin treatment promotes functional recovery and tissue repair via an M2-polarization mechanism following experimental stroke.METHODSMice were randomly divided to receive metformin or vehicle daily beginning at 24 h after middle cerebral artery occlusion(MCAO).Neurological deficits were monitored for 30 d following MCAO.To characterize the polarization of the microglia and infiltrating macrophages，the expression of the M1 and M2 signature genes was analyzed with qPCR，ELISA and immunohistochemistry.Post-MCAO angiogenesis and neurogenesis were examined immunohistochemically.An in vitro angiogenesis model was employed to examine whether metformin promoted angiogenesis in a M2 polarization-dependent manner.RESULTSPoststroke chronic metformin treatment had no impact on acute infarction but enhanced cerebral AMPK activation，promoted functional recovery and skewed the microglia/macrophages toward an M2 phenotype following MCAO.Metformin also significantly increased angiogenesis and neurogenesis in the ischemic brain.Consistently，metformin-induced M2 polarization of BV2 microglial cells depended on AMPK activation in vitro.Furthermore，treatment of brain endothelial cells with conditioned media collected from metformin-polarized BV2 cells promoted angiogenesis in vitro.CONCLUSlONPost-stroke chronic metformin treatment improved functional recovery following MCAO via AMPK-dependent M2 polarization.Modulation of microglia/macrophage polarization represents a novel therapeutic strategy for stroke.

Key words:metformin；stoke

T4－02

PDE5 inhibitors－a potential effective therapeutic agent in treating ischemic disorders

YANG Jing-yu1，CHEN Xue-mei1，LIU Ying-lu1，ZHANG Tian-yu1，ZHU Lei1，WANG Yong-feng2，WU Chun-fu1

(1.Department of Pharmacology，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China；2.Zhuhai Oxforston PharmTech Co.Ltd， Tangjiawan， Zhuhai 519085，China)

Abstract:Here we evaluated the effect of yonkenafil，a novel phosphodiesterase type 5(PDE5)inhibitor，on ischemic injury and its possible mechanism of action.Male Sprague-Dawley rats were exposed to transient middle cerebral artery occlusion and treated with yonkenafil by intravenous or intraperitoneal injection 2 h later.Behavioral tests were carried out on day 1 or day 7 after reperfusion，while cerebral infarction，edema，Nissl staining，F(xiàn)luoro-Jade B staining and electron microscopy assays were carried out 24 h post-stroke.Regulation of classical apoptosis factors such as hsp70，apaf-1，caspase-9 and caspase-3 were detected by immunoblotting.Levels ofcGMP-dependent Nogo-66 receptor(Nogo-R)pathway components，brain-derived neurotrophic factor(BDNF)/tropomyosin-related kinase B(TrkB)and nerve growth factor (NGF)/tropomyosin-related kinase A(TrkA)were also measured.Significant reductions of cerebral infarction and edema were observed when yonkenafil was administered within 4 h after ischemia onset.Meanwhile，this protection was associated with an ameliorative neurological function and was sustained for at least 7 d.Additionally，the range of penumbra was enlarged by yonkenafil，and the ischemic cell apoptosis and the loss of neurons were reduced，besides the contribution to modulating the expression of proteins in the Nogo-R pathway.Moreover，yonkenafil protected the structure of synapses and mediated the expression of synaptophysin and neurotrophic factors.In conclusion，these findings demonstrated that yonkenafil exerts neuro-protective effects in transient focal ischemia，which may involve an integrated process of neuronal networks.

Key words:stroke；Nogo-R pathway；neuroprotection

Foundation item:The project supported by the National Natural Science Foundation of China(81102455)；National Key Scientific Project for New Drug Discovery and Development，China(2010ZX09401)

Corresponding author:WU Chun-fu，E-mail:wucf＠syphu.edu.cn；chunfuw＠gmail.com

T4－03

Exogenousbasicfibroblastgrowthfactorinhibits endoplasmic reticulum stress induced apoptosis and improves recovery of spinal cord injury

WANG Zhou-guang，ZHANG Xie，LI Rui，ZHANG Chao，ZHANG Hong-yu

(School of Pharmacy，Key Laboratory of Biotechnology and Pharmaceutical Engineering，Wenzhou Medical University，Wenzhou 325035，China)Abstract:OBJECTlVETo investigate the mechanism of endoplasmic reticulum stress(ERS)-induced apoptosis as well as the protective action of basic fibroblast growth factor(bFGF)both in vivo and in vitro.RESULTSERS induced apoptosis was involved in the injuries of spinal cord injury(SCI)model rat.bFGF administration improved the recovery and increased the survival of neurons in spinal cord lesions in model rat.The protective effect of bFGF is related to the inhibition of CHOP，GRP78 and caspase-12，which are ER stress-induced apoptosis response proteins.bFGF administration also increased the survival of neurons and the expression of growth-associated protein 43(GAP43)，which is related to neural regeneration.The protective effect of bFGF is related to the activation of downstream signals，PI3K/Akt/GSK-3b and ERK1/2，especially in the ER stress cell model.CONCLUSlONThis is the first study to illustrate that the role of bFGF in SCI recovery is related to the inhibition of ER stress-induced cell death via the activation of downstream signals.Our work also suggested a new trend for bFGF drug development in central neural system injuries，which are involved in chronic ER stress-induced apoptosis.

Key words:apoptosis；basic fibroblast growth factor；endoplasmic reticulum stress；ERK1/2；PI3K/Akt；spinal cord injury

Foundation item:The project supported by National Natural Science Foundation of China(81200958)；Zhejiang Province Key Creative Team(2010R50042)

T4－04

莫諾苷對局灶性腦缺血再灌注大鼠海馬周期蛋白D1及Cdk6的影響

劉婷婷，孫芳玲，艾厚喜，張 麗，王 文

(首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院藥物研究室，教育部神經(jīng)變性病學重點實驗室，北京市老年病醫(yī)療研究中心，北京 100053)

摘要:目的觀察莫諾苷對局灶性腦缺血再灌注大鼠細胞周期蛋白的影響。方法用線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注模型。將30只Sprague-Dawley大鼠隨機分為假手術組，模型組，莫諾苷30，90和270 mg·kg－1。利用免疫組化方法檢測大鼠患側海馬CA1區(qū)周期蛋白D1、Cdk6表達。結果與假手術組相比，模型組周期蛋白D1及Cdk6表達顯著增加；但給予莫諾苷治療后，與模型組相比，莫諾苷中、高劑量能顯著降低大鼠同期蛋白D1及Cdk6的表達。結論莫諾苷能通過降低腦缺血再灌注后周期蛋白D1及Cdk6的表達而發(fā)揮神經(jīng)保護作用。

關鍵詞:莫諾苷；腦缺血再灌注；周期蛋白D1；海馬

T4－05

莫諾苷對局灶性腦缺血再灌注大鼠皮質(zhì)Wnt7a和APC表達的影響

薛金龍1，2，石淑先1，孫芳玲2，艾厚喜2，王 文2

(1.北京化工大學材料科學與工程學院，北京 100029；2.首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院藥理研究室，北京 100053)

摘要:目的觀察莫諾苷對局灶性腦缺血再灌注大鼠皮質(zhì)Wnt7a和結腸腺瘤性息肉病基因(APC)表達的影響。方法用線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注模型。將50只Sprague-Dawley大鼠隨機分為假手術組，模型組，莫諾苷30，90和270 mg·kg－1。造模后7 d新鮮取材，利用蛋白免疫印跡法檢測皮層中Wnt7a和APC含量表達變化。結果

模型組大鼠皮層Wnt7a的表達量比假手術組顯著升高，APC表達量顯著下降；與模型組相比，莫諾苷大劑量組Wnt7a表達明顯升高；莫諾苷小、中、大劑量組APC的表達顯著降低。結論莫諾苷可以促進缺血性腦損傷后大鼠皮質(zhì)Wnt7a表達，抑制APC表達，可能因此激活Wnt信號通路。

關鍵詞:莫諾苷；腦缺血再灌注；Wnt7a

T4－06

歐前胡素對大鼠腦缺血再灌注損傷后炎癥反應的影響

何 蔚，周鈺梅，陳偉偉，廖 芳

(贛南醫(yī)學院藥理學教研室，江西省腦血管藥理重點實驗室，江西贛州 341000)

摘要:目的研究歐前胡素對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后炎癥反應的影響。方法采用線栓法短暫阻塞大鼠大腦中動脈建立局灶性腦缺血(2 h)再灌注(24 h)損傷模型，缺血后1，5和9 h腹腔注射給予歐前胡素1.25和2.5 mg·kg－1，再灌注24 h，檢測大鼠神經(jīng)功能缺損評分、腦水腫和腦梗死范圍，ELISA測定缺血區(qū)腦組織中腫瘤壞死因子α (TNF-α)和白介素1β(IL-1β)的含量，Western blot檢測缺血區(qū)腦組織中核因子κB p65(NF-κB p65)、誘導型一氧化氮合酶(iNOS)和環(huán)氧化酶2(COX-2)的蛋白表達。結果歐前胡素能改善大鼠腦缺血再灌注后神經(jīng)功能評分，減輕腦水腫和縮小腦梗死范圍，降低缺血區(qū)腦組織中TNF-α和IL-1β的含量，抑制NF-κB p65，iNOS和COX-2的蛋白表達。結論歐前胡素可抑制腦缺血再灌注損傷后炎癥反應，這可能是其發(fā)揮腦保護作用的機制。

關鍵詞:歐前胡素；腦缺血再灌注；NF-κB p65；一氧化氮合酶；環(huán)氧化酶2

基金項目:國家自然科學基金資助項目(81360492)；江西省自然科學基金資助項目(20122BAB205036)

T4－07

EPH/ephrin信號通路在血管新生方面的研究進展

向本旭，孫芳玲，艾厚喜，張 麗，王 文

(首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院藥物研究室，教育部神經(jīng)變性病學重點實驗室，北京市老年病醫(yī)療研究中心，北京 100053)

摘要:EPH受體是人體內(nèi)最大的受體家族，受體酪氨酸家族的一員，與其配體ephrin特異性結合，對血管生成、組織邊界形成、細胞遷移以及軸突導向等產(chǎn)生重要影響。缺血性腦卒中發(fā)生后，基于神經(jīng)干細胞遷移而產(chǎn)生的神經(jīng)發(fā)生和血管新生對于卒中的恢復是有意義的。而在缺血性腦卒中發(fā)生后，EPH/ephrin及其下游Grb4，Pak-1，Cap和Abi-1等蛋白的表達會有不同程度的變化，同時伴有缺血灶血管新生。因此，EPH/ephrin信號通路可作為研究腦卒中后血管新生的研究目標。

關鍵詞:信號通路；血管新生

T4－08

腦缺血生物標記物的研究進展

薛金龍1，2，石淑先1，孫芳玲2，艾厚喜2，王 文2

(1.北京化工大學材料科學與工程學院，北京 100029；2.首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院藥理研究室，北京 100053)

摘要:缺血性腦卒中發(fā)病率逐年增高，病死率、致殘率居高不下，且除溶栓外尚無有效的治療方法，嚴重影響人類的健康。尋找缺血性腦卒中生物標志物，用于及時診斷缺血性腦卒中，并評估預后程度，具有十分重要的臨床價值。生物標志物相比于儀器檢測具有費用低廉，方便快捷，特異靈敏等優(yōu)點。目前國際上普遍發(fā)現(xiàn)的具有成為缺血性腦卒中標志物潛在可能性的多為炎癥因子和C-反應蛋白等。但是這些蛋白的變化大多在缺血后3或6 h內(nèi)差異明顯，實際病人發(fā)病到醫(yī)院就醫(yī)檢查，時間大多要超過這個時間。并且大腦其他疾病(如癲癇)也會影響炎癥因子的含量升高，這就會影響標志物的特異性。如果能夠?qū)ふ业娇煽康难荷飿酥疚?，對于腦卒中的臨床診斷和治療有重大意義。

關鍵詞:腦缺血；生物標記物

T4－09

淫羊藿苷對H2O2誘導的PC12細胞氧化損傷的保護作用及機制

高健美

(遵義醫(yī)學院藥學院，貴州遵義 563000)

摘要:目的探討淫羊藿苷對H2O2誘導的PC12細胞氧化損傷的保護作用。方法以H2O2損傷PC12建立氧化損傷模型，以不同濃度淫羊藿苷進行干預。采用MTT法檢測細胞活力，光學顯微鏡觀察細胞形態(tài)，活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)試劑盒檢測ROS，SOD和MDA含量，羅丹明123(Rh123)染色法檢測細胞線粒體膜電位改變。結果與對照組相比，模型組細胞氧化應激作用明顯增強，而淫羊藿苷顯著降低ROS和MDA含量，升高SOD活力，提供細胞抗氧化能力；改善TBHP誘導的線粒體膜電位降低。結論淫羊藿苷能夠抑制H2O2誘導的PC12細胞的氧化損傷，其保護作用可能與抑制氧化應激引起線粒體功能損傷有關。

關鍵詞:淫羊藿苷；PC12細胞；氧化應激；線粒體

通訊作者:高健美,E-mail:422245948＠qq.com

T4－10

慢性腦低灌注大鼠海馬CA1區(qū)HCN2通道蛋白的表達

譚佳鴻，盧 云， 李昌俊，周 梅，李 彩， 徐旭林，呂 青，郭蓮軍

(華中科技大學同濟醫(yī)學院基礎醫(yī)學院藥理學系，湖北武漢430030)

摘要:目的探討HCN2在慢性腦缺血情況下，海馬CA1區(qū)HCN2蛋白表達的變化。方法將大鼠隨機分為假手術組，雙側頸總動脈永久性結扎(2VO)組。大鼠水合氯醛(350 mg·kg－1，ip)麻醉，切開頸部皮膚約1.5 cm，鈍性分離皮下組織，暴露雙側頸總動脈，用4-0手術縫線結扎雙側頸總動脈的近心端和遠心端后，剪斷，制備永久性慢性腦低灌性腦缺血模型，假手術組僅暴露雙側頸總動脈，不結扎血管。在整個手術期間，大鼠體溫保持在(37.5±0.5)℃，待大鼠清醒后，單籠飼養(yǎng)。2VO 5周后，各組大鼠在麻醉后迅速斷頭，在冰凍腦脊液內(nèi)取腦，腦切片機將其切至400 μm厚腦片，在體視顯微鏡下，分離CA1區(qū)組織，用膜蛋白試劑盒提取膜蛋白，經(jīng)BCA試劑盒測定蛋白濃度后，用Western blot檢測膜與胞漿內(nèi)HCN2蛋白表達，用NIH Image J統(tǒng)計檢測蛋白條帶的灰度值，以評價蛋白表達量的變化。結果2VO 5周后海馬CA1區(qū)HCN2膜蛋白表達顯著增加，與假手術組相比，增加了40%(n＝5，P＜0.01)，胞內(nèi)HCN2蛋白表達與假手術組大鼠比較，無明顯的變化。結論在慢性腦缺血時海馬CA1區(qū)HCN2膜蛋白表達上調(diào)，可能參與海馬突觸可塑性的病理調(diào)節(jié)。

關鍵詞:大鼠；慢性腦低灌注；海馬CA1區(qū)；HCN2通道蛋白

基金項目:國家自然科學基金資助(81173038)

T4－11

慢性腦低灌注大鼠海馬CA1區(qū)HCN通道調(diào)節(jié)蛋白的表達

盧 云，李昌俊，羅 攀，徐旭林，呂 青，郭蓮軍

(華中科技大學同濟醫(yī)學院基礎醫(yī)學院藥理學系，湖北武漢430030)

摘要:目的觀察在慢性腦低灌注損傷時，超極化激活環(huán)核苷酸門控非選擇陽離子通道(HCN)調(diào)節(jié)蛋白的表達，以進一步闡明HCN通道在腦缺血時膜表達的調(diào)節(jié)機制。方法采用永久性結扎大鼠雙側頸總動脈(2VO)，制作慢性腦低灌注損傷模型，大鼠2VO 5周后，斷頭取腦，取海馬CA1區(qū)組織，用Western blot方法，檢測HCN調(diào)節(jié)蛋白TRIP8b (tetratricopeptide repeat-containing ab8b-interacting protein)2種亞型TRIP8b(1b-2)，TRIP8b(1a-4)，AP2(錨定蛋白家族的一員)，是一種重要的TRIP8b相互作用蛋白；AAK1(絲氨酸/蘇氨酸激酶Prk/Ark家族的成員之一)，可與AP2結合，使AP2 μ2發(fā)生磷酸化，進而抑制AP2介導的受體的內(nèi)化。結果大鼠2VO 5周后，海馬CA1區(qū)TRIP8b (1a-4)和TRIP8b(1b-2)的表達顯著減少(n＝5，與假手術組相比，P＜0.05)。p-AP2 μ2的表達減少(n＝6，與假手術組相比，P＜0.05)，AAK1的表達水平顯著減少(n＝5，與假手術相比，P＜0.01)。結論在慢性腦低灌注損傷時，HCN調(diào)節(jié)蛋白的 TRIP8b(1a-4)，TRIP8b(1b-2)，AAK1和p-AP2 μ2的表達均發(fā)生明顯下調(diào)，其變化可能參與HCN通道蛋白膜表達的調(diào)控。

關鍵詞:慢性腦低灌注損傷；海馬CA1區(qū)；HCN通道調(diào)節(jié)蛋白

基金項目:國家自然科學基金(81173038)

T4－12

牛磺酸對喹啉酸致人神經(jīng)母細胞瘤細胞損傷的保護作用

石艷茜，鞠傳霞，王 蕾，蘇全中，葛瑞芬，鄭 娜，張芳芳，孫 睿

(青島大學醫(yī)學院，山東青島 266021)

摘要:目的研究?；撬?Tau)對喹啉酸(QA)致人神經(jīng)母細胞瘤(SH-SY5Y)細胞損傷的保護作用。方法實驗分為對照組、QA模型組、Tau低、中、高濃度組，Tau組分別用Tau 5，10和20 mmol·L－1預處理24 h，除對照組外，其余各組均加入終濃度為1 mmol·L－1的QA繼續(xù)培養(yǎng)24 h。采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)檢測細胞活力；Hochest33258染色觀察細胞凋亡；流式細胞術(FCM)檢測細胞內(nèi)游離鈣離子濃度([Ca2＋]i)和線粒體膜電位的變化(△Ψm)；比色法檢測超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性及丙二醛(MDA)含量。結果Tau 10和20 mmol·L－1可升高細胞存活率；抑制QA引起的細胞凋亡；降低[Ca2＋]i濃度；抑制線粒體膜電位下降；升高QA損傷細胞內(nèi)SOD和GSH-PX活性；降低QA損傷細胞內(nèi)MDA含量。結論Tau對QA所致的SH-SY5Y細胞損傷具有明顯的保護作用，其機制可能與抗氧化，降低細胞內(nèi)[Ca2＋]i濃度進而穩(wěn)定△ψm有關。

關鍵詞:?；撬?；神經(jīng)母細胞瘤細胞；細胞損傷；抗氧化

通訊作者:王 蕾,E-mail:qdwanglei67＠126.com

T4－13

永久性結扎大鼠雙側頸總動脈5周后海馬CA1區(qū)神經(jīng)元數(shù)量及樹突棘密度的改變

李昌俊，盧 云，羅 攀，陳 誠，周 梅，黃鵬程，郭蓮軍

(華中科技大學同濟醫(yī)學院基礎醫(yī)學院藥理學系，湖北武漢430030)

摘要:目的觀察慢性腦低灌注大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元數(shù)量及樹突棘的密度，以進一步明確缺血性腦損傷導致神經(jīng)退行性變的最主要的標志神經(jīng)元的丟失及突觸連接的改變。方法采用永久性結扎大鼠雙側頸總動脈，制作慢性腦低灌注損傷模型，2VO 5周后大鼠用烏拉坦(1.5 g·kg－1，ip)深度麻醉，一部分大鼠用免疫組化染色技術標記NeuN來評估海馬CA1神經(jīng)元數(shù)量的變化；同時用Western blot檢測NeuN蛋白表達水平；另一部分大鼠按高爾基法進行染色，切片厚度為50 μm。海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元一級樹突棘密度計算原則:選取單個連續(xù)樹突長度≥10 μm；在1000倍油鏡下精確測定樹突的長度和此段樹突上的樹突棘的數(shù)量，樹突棘密度用“樹突棘數(shù)/10 μm”來表示。結果免疫組化顯示，海馬CA1區(qū)的錐體神經(jīng)元NeuN陽性細胞數(shù)量顯著減少，與假手術組比較，減少了40%(P＜0.01)；NeuN蛋白在海馬CA1區(qū)表達顯著降低(與假手術組相比，P＜0.01)；而CA3和DG區(qū)的神經(jīng)元的數(shù)量和NeuN蛋白表達無顯著變化。Golgi-Cox染色結果顯示，2VO引起的海馬CA1區(qū)樹突棘密度降低65%(n＝4)，與假手術相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。結論慢性低灌注缺血，可導致海馬CA1區(qū)神經(jīng)元數(shù)量和NeuN蛋白表達顯著減少和樹突棘密度降低等病理性改變。

關鍵詞:慢性腦低灌注損傷；海馬CA1區(qū)；神經(jīng)元數(shù)量；樹突棘的密度

基金項目:國家自然科學基金(81173038)

T4－14

氯比普蘭對皮質(zhì)酮介導的神經(jīng)毒性的保護作用及其作用的信號通路

汪海濤，劉騰飛，徐江平

(南方醫(yī)科大學藥學院神經(jīng)精神藥理學科，廣東 廣州510515)

摘要:目的通過皮質(zhì)酮造成PC12細胞損傷，考察新型磷酸二酯酶4抑制劑氯比普蘭對PC12細胞的保護作用及其作用的信號通路。方法采用不同濃度皮質(zhì)酮處理PC12細胞，通過噻唑藍(MTT)實驗確定皮質(zhì)酮的神經(jīng)毒性劑量，在此基礎上考察氯比普蘭對PC12細胞的保護作用，并利用Hoechst染色考察皮質(zhì)酮及氯比普蘭對細胞形態(tài)的影響；通過Western blot實驗考察氯比普蘭在基礎條件及皮質(zhì)酮處理條件下對cAMP反應元件結合蛋白(CREB)、蛋白激酶A(PKA)、糖原合成激酶3β(GSK-3β)以及細胞外信號調(diào)控激酶(ERK1/2)磷酸化/活性的影響；通過免疫細胞化學(ICC)實驗確定在給予皮質(zhì)酮處理下及氯比普蘭與皮質(zhì)酮共處理下，p-CREB在細胞內(nèi)的定位，通過給予PKA抑制劑H-89及轉染CREB特異性siRNA考察阻斷PKA及敲低CREB后，氯比普蘭是否能發(fā)揮其神經(jīng)保護作用，以探討其作用的信號通路。結果皮質(zhì)酮在50～800 μmol·L－1可以濃度依賴性地減少細胞活力，在400 μmol·L－1時損傷具有顯著統(tǒng)計學差異，而通過給予氯比普蘭0.3125～5 μmol·L－1，則可以顯著對抗皮質(zhì)酮所導致的細胞活力的下降，逆轉細胞核形態(tài)學變化；Western blot實驗發(fā)現(xiàn)，在基礎條件下下，氯比普蘭可以促進PKA，GSK-3β以及CREB的磷酸化，并呈時間及劑量依賴性，而ERk1/2則未見有明顯變化；氯比普蘭亦可逆轉皮質(zhì)酮對PKA，GSK-3β以及CREB磷酸化的降低作用；進一步的ICC結果顯示，皮質(zhì)酮處理PC12時，胞核內(nèi)pCREB水平較低，而給予氯比普蘭則可以顯著增加胞核內(nèi)pCREB的水平；H-89阻斷PKA活性及siRNA敲低CREB的表達后，可一定程度阻斷氯比普蘭的神經(jīng)保護作用。結論氯比普蘭可以對抗皮質(zhì)酮所致的PC12損傷，其機制可能是與激活 PKA蛋白磷酸化繼而引起CREB (Ser133)及GSK-3β(Ser9)的磷酸化并增加胞核內(nèi)pCREB (Ser133)的含量，促進細胞存活有關。

關鍵詞:氯比普蘭；神經(jīng)毒性；信號通路

基金項目:國家自然科學基金(81373384；81301099)；廣東省自然科學基金(S2013040014202)；中國博士后科學基金(2013M542192)

T4－15

扇貝糖胺聚糖抑制六羥基多巴胺誘導SH-SY5Y細胞凋亡作用及機制

鞠傳霞，王 蕾，侯 琳，劉 賽，王大超，趙小丹

(青島大學醫(yī)學院，山東青島 266021)

摘要:目的研究扇貝糖胺聚糖(SS-GAG)對六羥基多巴胺(6-OHDA)誘導SH-SY5Y細胞凋亡的保護作用及機制。方法實驗分為對照組、模型組(6-OHDA 50 μmol·L－1處理24 h)、給藥組(SS-GAG 200，400和800 mg·L－1預處理24 h，后用6-OHDA 50 μmol·L－1處理24 h)。Hochest 33258熒光染色觀察細胞核形態(tài)學變化，AnnexinⅤ-FITC/ PI雙染法檢測細胞凋亡率，Real-time PCR和Western blot方法分別檢測Bcl-2、Bax mRNA和蛋白表達，流式細胞術檢測線粒體膜電位改變和胞內(nèi)鈣離子水平，Western blot方法檢測胞漿和線粒體內(nèi)細胞色素c水平，流式細胞術檢測胱天蛋白酶3和胱天蛋白酶9蛋白活化情況。結果SS-GAG 400和800 mg·L－1能抑制6-OHDA引起的細胞凋亡形態(tài)學改變，降低細胞凋亡率，升高Bcl-2/Bax比值，降低胞內(nèi)鈣離子水平，抑制線粒體膜電位下降，抑制線粒體內(nèi)細胞色素c的釋放，抑制胱天蛋白酶3和胱天蛋白酶9蛋白活化。結論

SS-GAG可通過維持線粒體功能，抑制6-OHDA誘導的SH-SY5Y細胞凋亡。

關鍵詞:扇貝糖胺聚糖；細胞凋亡；胱天蛋白酶

通訊作者:侯 琳,E-mail:qingyi001＠126.com

T4－16

堿性成纖維細胞生長因子對脊髓損傷后血-脊屏障的修復機制

葉麗冰，虞希充，譚曉華，張 超，肖 健

(溫州醫(yī)科大學藥學院，溫州浙江 325035)

摘要:目的探討脊髓損傷(SCI)后成纖維細胞生長因子(bFGF)對血-脊屏障(BSCB)的通透性的影響及其作用機制。方法采用紐約大學專利進口打擊器構建SCI模型，通過尾靜脈注射依文思藍和FITC-dextran觀察 SCI模型BSCB的通透性情況。同時通過蛋白印跡、免疫熒光方法檢測緊密連接蛋白、黏附蛋白和小窩蛋白(caveolin-1)的表達。在體外模型中，通過內(nèi)皮細胞和星形膠質(zhì)細胞共培養(yǎng)建立體外BSCB模型，通過糖氧剝奪破壞屏障的完整性。采用檢測FITC-dextran滲透率評價模型的構建，并用相應的抑制劑和siRNA闡明bFGF是否通過PI3K-Akt-caveolin-1信號通路來影響緊密連接蛋白和粘附蛋白的表達。結果SCI后，BSCB破壞，bFGF能夠減少依文思藍和 FITC的擴散。Western blot結果和免疫熒光結果都表明bFGF上調(diào)緊密連接蛋白的表達。同時，bFGF能夠調(diào)節(jié)SCI后caveolin-1的表達。在體外模型中，OGD后，F(xiàn)ITC滲透增加，緊密連接蛋白和caveolin-1表達降低，而bFGF能夠顯著減少FITC的滲透量，同時上調(diào)緊密連接蛋白和黏附蛋白的表達。此外，當給予Cav-1 si-RNA后，bFGF無法發(fā)揮作用。結論bFGF能夠通過 PI3K-Akt-caveolin-1信號通路，促進SCI后BSCB的恢復。

關鍵詞:堿性成纖維細胞生長因子；血-脊屏障；緊密連接蛋白；黏附蛋白；小窩蛋白1

基金項目:國家自然科學基金資助(81371351, 81200958)；浙江省蛋白藥物科技創(chuàng)新團隊(2010R50042)

T4－17

脂質(zhì)納米粒對小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的毒性作用及藥物調(diào)控

孫盟盟1，2，謝陽陽1，2，蔣 權1，王成坤1，韓 峰1

(1.浙江大學藥學院藥理毒理與生化藥學研究所，浙江 杭州 310058；2.浙江工業(yè)大學藥學院，浙江杭州 310014)

摘要:目的探討脂質(zhì)納米粒對小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的毒性以及鈣調(diào)蛋白拮抗劑DY9836的保護作用。方法小鼠隨機分為對照組、模型組和給藥組，模型組和給藥組小鼠先尾靜脈注射脂質(zhì)納米粒，然后分別每天給予同等劑量的生理鹽水和DY9836灌胃，對照組則直接給予同等劑量生理鹽水，一個月后進行水迷宮行為學實驗。利用Western blot和免疫組化檢測相關蛋白的表達變化。結果水迷宮實驗顯示訓練后的對照組小鼠到達平臺的時間較短，而模型組相比訓練前未見明顯變化，給藥后有較明顯改善；最后一天模型組小鼠幾乎沒有穿過平臺，而對照組和給藥組穿過平臺的時間和次數(shù)有顯著的增加。Western blot結果顯示模型組PCaMKⅡ，P-PKC和P-PKA的表達顯著降低，給予DY9836后可以上調(diào)。通過免疫組化結果可見模型組中膠質(zhì)細胞激活，給予DY9836后在一定程度上逆轉。結論脂質(zhì)納米粒對小鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)有毒性作用，導致小鼠認知功能障礙，而DY9836具有一定程度的神經(jīng)保護作用。

關鍵詞:脂質(zhì)納米粒；DY9836；中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性

通訊作者:韓 峰,E-mail:changhuahan＠zju.edu.cn

T4－18

DY-98及多聚唾液酸改善小鼠雙側頸總動脈狹窄引起的空間記憶損害作用

王 銳1，2，曹晶晶1，湯佳佳1，Qaisar1，孫盟盟3，雷 雨1，陸楠楠1，王欣晨1，王成坤1，譚 超1，韓 峰1

(1.浙江大學藥學院藥理毒理與生化藥學研究所，浙江 杭州 310058；2.寧夏醫(yī)科大學藥理學系，寧夏 銀川750004；3.浙江工業(yè)大學藥學院，浙江杭州 310014)

摘要:目的觀察化合物DY-98及多聚唾液酸(PSA)對血管性認知功能障礙(VCI)的改善作用，并探討VCI可能的病理生理機制及前二者的作用機制。方法成年C57BL/ 6J小鼠制作雙側頸總動脈狹窄(BCAS)模型，隨機分為模型對照、DY-98 1和0.5 mg·kg－1組、PSA 7 mg·kg－1組及PSA 7 mg·kg－1＋DY-98 0.5 mg·kg－1組，同齡小鼠為正常對照。術后5 d開始給藥，DY-98 1和0.5 mg·kg－1組po給藥，PSA 7 mg·kg－1組及PSA 7 mg·kg－1＋DY-98 0.5 mg·kg－1組，ip給藥，每日1次，連續(xù)30 d。給藥結束后以Morris水迷宮實驗觀察小鼠空間記憶改變。結果與正常對照組比較，模型組小鼠在水迷宮實驗的空間探索實驗和工作記憶實驗中，潛伏期均延長(P＜0.05，P＜0.01)。與模型組比較，在空間探索實驗中，DY-98 1 mg·kg－1組小鼠的潛伏期由模型組的(49.7±9.7)s縮短至(27.2±3.4)s(P＜0.05)；在工作記憶試驗中，DY-98 1和0.5 mg·kg－1組、PSA 7 mg·kg－1組及PSA 7 mg·kg－1＋DY-98 0.5 mg·kg－1組小鼠的潛伏期由模型組的(45.4±2.9)s縮短至27.6±2.0，36.6±2.6，32.3±2.4和(29.8±2.7)s(P＜0.05，P＜0.01)。結論DY-98及PSA可增強小鼠雙側頸總動脈狹窄術后空間學習記憶的作用。

關鍵詞:DY-98多聚唾液酸；雙側頸總動脈狹窄；血管性認知功能障礙

通訊作者:韓 峰，E-mail:changhuahan＠zju.edu.cn

T4－19

硝化應激介導E6AP/Peroxiredoxin1關聯(lián)信號失衡參與血管內(nèi)皮細胞缺血損傷機制

邵玲小，陶蓉蓉，廖美華，黃繼云，韓 峰

(浙江大學藥學院藥理毒理與生化藥學研究所，浙江 杭州310058)

摘要:目的探討腦缺血病理過程中硝化應激介導過氧化物酶Peroxiredoxin1(Prx1)抗氧化失衡參與腦血管內(nèi)皮細胞損傷內(nèi)在關聯(lián)機制。方法采用糖氧剝奪(OGD)和ONOO－供體(SIN-1)處理，構建血管內(nèi)皮細胞硝基應激損傷模型；整體動物實驗采用大腦中動脈閉塞模型(MCAO)。免疫印跡法考察血管內(nèi)皮細胞硝化應激損傷引起相關蛋白水平變化；免疫熒光法考察相關蛋白的分布及相互關聯(lián)性；免疫共沉淀法考察硝化應激介導Prx1泛素化修飾降解；構建E6AP活性突變質(zhì)粒及Prx1過表達質(zhì)粒，考察Prx1平衡體系對腦血管內(nèi)皮細胞的保護作用。結果硝化應激介導血管內(nèi)皮細胞過氧化物酶Prx1表達快速上升，增強血管內(nèi)皮細胞抗氧化防御體系功能，與細胞免疫熒光結果一致。隨著硝化應激不斷加劇，Prx1后期反而呈下降的趨勢。與此同時，硝化應激后期血管內(nèi)皮細胞Prx1在大分子量處呈現(xiàn)明顯的聚集堆積現(xiàn)象并呈現(xiàn)ONOO－濃度依賴性。結合免疫共沉淀結果發(fā)現(xiàn)硝化應激損傷過程中Prx1發(fā)生泛素化修飾及降解。這與E3泛素連接酶E6AP被過度激活密切相關。E6AP活性位點突變可有效抑制Prx1泛素化修飾，過表達Prx1逆轉血管內(nèi)皮細胞缺血損傷。結合小鼠MCAO模型發(fā)現(xiàn)腦血管內(nèi)皮Prx1過表達或E6AP突變可有效保護血腦屏障完整性、抑制神經(jīng)元缺血損傷，改善腦缺血損傷引起的神經(jīng)功能障礙。結論腦缺血損傷病理過程中，硝化應激活化E3泛素連接酶E6AP，使得過氧化物酶Prx1發(fā)生泛素化修飾，從而導致Prx1關聯(lián)抗氧化系統(tǒng)失衡，加重了腦血管缺血損傷病理進程。

關鍵詞:硝化應激；腦缺血；血管內(nèi)皮細胞；泛素化；Peroxiredoxin1；E6AP

基金項目:國家自然科學基金 (1120108023, 91232705)；浙江省“錢江人才計劃”(2012R10036)

通訊作者:韓 峰,E-mail:changhuahan＠zju.edu.cn

T4－20

腦血管內(nèi)皮源性信號分子參與腦卒中病理過程的分子機制

韓 峰

(浙江大學藥學院藥理毒理所，浙江杭州 310058)

摘要:腦卒中作為我國致死率第一的重大疾病，其藥物靶點發(fā)現(xiàn)及創(chuàng)新藥物研發(fā)備受關注。國際腦卒中研究領域?qū)＜乙苍谏羁袒仡櫯c反省近幾十年來的“功”與“過”，卒中關聯(lián)信號分子網(wǎng)絡還在不斷豐富，變得越來越復雜，但確切的新藥靶點及能顯著解決臨床問題的藥物仍是一藥難求。在眾多腦血管病危險因素作用下，在神經(jīng)元丟失的終點分子事件發(fā)生之前，腦微血管損傷是否是值得關注的早期環(huán)節(jié)，因為它是感知和調(diào)控腦血流“生命線”的直接參與者。我們近年來結合基礎和臨床的科研資料，著眼于探索何種早期分子參與介導腦血管內(nèi)皮細胞損傷?這些分子機制是平行發(fā)生還是呈級聯(lián)因果關系?在損傷微環(huán)境條件下腦血管內(nèi)皮細胞與其他血腦屏障組分如何相互“對話”協(xié)調(diào)啟動快速反應來保護脆弱的神經(jīng)元?其中是否存在潛在的腦血管保護藥物治療靶點?通過蛋白組學研究方法我們期望逐漸了解腦微血管在缺血損傷條件下的蛋白質(zhì)變化的“清單”，從而認識腦血管疾病病理過程的細胞信號轉導“圖譜”和內(nèi)在規(guī)律。體內(nèi)外腦缺血病理模型結合藥理學調(diào)控深入研究氧化/還原微環(huán)境穩(wěn)態(tài)失衡、泛素-蛋白酶體系統(tǒng)異常激活、細胞漿核轉位及蛋白質(zhì)翻譯后修飾改變等各細胞信號傳導模塊之間如何通過關鍵節(jié)點蛋白進行“對話”。值得關注的是，腦血管內(nèi)皮細胞處于應激狀態(tài)時保護性應答元件與硝化應激損傷元件之間的博弈最終可能決定神經(jīng)血管單元損傷結局，此間的關鍵信號分子可能是潛在的腦卒中治療藥物靶點。

關鍵詞:腦卒中；信號轉導；腦血管內(nèi)皮細胞

T4－21

Atg5基因缺失加重脂質(zhì)納米粒引起的基于自噬-溶酶體通路失衡的腦內(nèi)神經(jīng)毒性

陸楠楠1，高銀萍1，田 允1，廖美華1，黃繼云1，盧應梅2，韓 峰1

(1.浙江大學藥學院藥理毒理與生化藥學研究所，浙江 杭州 310058；2.浙江大學城市學院，浙江杭州 310015)

摘要:目的探討Atg5在脂質(zhì)納米粒引發(fā)自噬-溶酶體失衡、導致神經(jīng)毒性中所發(fā)揮的作用。方法WT(Wide Type)小鼠分別尾靜脈注射生理鹽水和脂質(zhì)納米粒，還應用了Atg 5部分敲除(Atg5＋/－)小鼠尾靜脈注射納米粒；采用透射電鏡技術觀察脂質(zhì)納米粒注射7 d后小鼠腦皮層細胞和腦內(nèi)納米粒形態(tài)變化，采用Western-blot免疫印跡法檢測相關蛋白的表達水平。結果透射電鏡觀察到脂質(zhì)納米粒在小鼠腦內(nèi)聚集，并觀察到有包裹線粒體的自噬小體，表明脂質(zhì)納米?？烧T導小鼠腦內(nèi)發(fā)生自噬現(xiàn)象。Western-blot檢測自噬相關蛋白Atg5，P62，LC3和溶酶體水解酶cathepsin B，發(fā)現(xiàn)注射納米粒后在腦內(nèi)的表達均有升高。此外，Atg5＋/－鼠注射納米粒后，cathepsin B的表達升高更為明顯，表明抑制自噬后，脂質(zhì)納米粒引起腦內(nèi)溶酶體功能的過度激活，脂質(zhì)納米粒引起腦內(nèi)自噬-溶酶體信號的失衡依賴于Atg5基因的表達。進一步考察血腦屏障緊密連接蛋白claudin 5和炎癥相關指標胱天蛋白酶1發(fā)現(xiàn)，注射納米粒后，相比WT小鼠，這些蛋白在Atg5＋/－鼠中上調(diào)水平均更加明顯。由此可見自噬-溶酶體穩(wěn)態(tài)失衡導致納米材料的腦內(nèi)毒性增加。結論脂質(zhì)納米粒靜脈注射后在腦內(nèi)誘導自噬病理生理現(xiàn)象發(fā)生，而Atg5部分敲除介導自噬-溶酶體穩(wěn)態(tài)失衡，進一步加劇了腦部炎癥及血腦屏障損傷等神經(jīng)毒性。

關鍵詞:脂質(zhì)納米粒；自噬-溶酶體；神經(jīng)毒性

通訊作者:韓 峰,E-mail:changhuahan＠zju.edu.cn

T4－22

Poly l C對氧糖剝奪/復灌誘導的大鼠星形膠質(zhì)細胞增殖的影響

李 洋，趙 丹，郭蓮軍，呂 青

(華中科技大學同濟醫(yī)學院基礎醫(yī)學院藥理系，湖北 武漢430030)

摘要:目的探討Poly I C對氧糖剝奪/復灌誘導的大鼠星形膠質(zhì)細胞增殖的抑制作用。方法將離體培養(yǎng)純化后的21 d的大鼠星形膠質(zhì)細胞分為對照組、模型組、Poly I C，1和10 mg·L－1組)。采用MTT和EDU方法檢測細胞增殖情況。結果MTT結果顯示，與對照組相對比，模型組星形膠質(zhì)細胞細胞活力顯著增加(對照組100%±22.8%，模型組122%±23.9%，P＜0.01)，與模型組相對比，Poly I C不同劑量處理組細胞活力顯著下降(模型組 100%±19.6% 1 mg·L－1組，81%±12.0%，P＜0.01，10 mg·L－1組72%± 12.3%，P＜0.01)。EDU結果顯示，與模型組相比，Poly I C不同劑量處理組細胞增殖數(shù)量顯著下降(1 mg·L－1組61%±15.7%，P＜0.05，10 mg·L－1組27%±12.5%，P＜0.01)。結論Poly I C可顯著抑制氧糖剝奪/復灌誘導的大鼠星形膠質(zhì)細胞增殖，其具體作用機制有待進一步研究。

關鍵詞:氧糖剝奪/復灌；星形膠質(zhì)細胞

T4－23

寶藿苷Ⅰ對腦缺血再灌注損傷大鼠模型的保護作用

鄧媛媛，熊德慶，龔其海

(遵義醫(yī)學院基礎藥理省部共建教育部重點實驗室，貴州遵義 563000)

摘要:目的觀察寶藿苷Ⅰ(BHGⅠ)對大鼠急性缺血性腦卒中模型的保護作用，并探索其可能的作用機制。方法雄性SD大鼠39只隨機分為4組，分別為假手術組9只，模型組、BHGⅠ組各10只。分組后預防性給藥3 d，BHGI組每次分別灌胃BHGⅠ10和30 mg·kg－1，假手術組和模型組灌胃等體積雙蒸水，每日兩次。3 d后采用右側大腦中動脈阻塞(MCAO)法建立大鼠急性缺血性腦卒中模型，2 h后拔線造成缺血再灌注損傷。假手術組同法操作，但不插MCAO栓線以作對照。造模后24 h按Bederson法對大鼠進行神經(jīng)功能評分。評分結束后處死大鼠、取材，TTC染色法觀察大鼠腦梗死體積的變化，Western blot檢測大鼠腦組織缺血周邊區(qū)中的炎癥因子IL-1β、TGFβ1及IκB-α及p-NF-κB-p65的蛋白水平。結果模型組大鼠神經(jīng)功能評分1.89± 0.33，受試藥BHGⅠ10和30 mg·kg－1明顯降低MCAO大鼠的神經(jīng)功能評分(P＜0.05)；模型組大鼠腦梗死體積為18.2%±0.05%(P＜0.01)，BHGⅠ組腦梗死體積較模型組明顯降低(P＜0.05)；與假手術組相比，模型組IL-1β、TGFβ1及p-NF-κB-p65的蛋白表達量明顯增加，IκB-α的蛋白表達水平顯著下降，而BHGⅠ劑量依賴性地阻遏MCAO誘導的IL-1β、TGFβ1等炎癥因子的過度表達和p-NF-κB-p65蛋白表達的升高和IκB-α水平下降。結論BHGI對大鼠急性缺血性腦卒中有明顯的保護作用。其機制與抑制IκB/NF-κB通路的激活，從而抑制IL-1β、TGFβ1等炎癥因子的過度表達有關。

關鍵詞:寶藿苷Ⅰ；腦缺血；再灌注

基金項目:教育部創(chuàng)新團隊(IRT1197)；教育部新世紀優(yōu)秀人才支持計劃(NCET-11-0927)

T4－24

flupirtine對慢性束縛性應激小鼠學習記憶能力的影響

黃鵬程，李 彩，呂 青，郭蓮軍，徐旭林

(華中科技大學同濟醫(yī)學院基礎醫(yī)學院藥理學系，湖北武漢430030)

摘要:目的研究Kv7/M通道開放劑flupirtine對慢性束縛性應激小鼠學習記憶的保護作用及其機制。方法雄性昆明種小鼠隨機分:溶劑對照組(10%DMSO)，正常給藥組(flupirtine 10和 25 mg·kg－1)，模型溶劑組(10% DMSO)，模型給藥組(flupirtine 10和25 mg·kg－1)。小鼠每天束縛6 h(10:00－16:00)，連續(xù)束縛21 d，第22天開始進行連續(xù)4 d的水迷宮訓練，第5天進行檢測，水迷宮檢測結束后分離小鼠海馬進行Western blot分析。結果① 水迷宮檢測結果顯示:與正常組小鼠相比，模型組小鼠第2、3和4天潛伏期明顯延長(P＜0.05)，在目標象限的時間明顯縮短(P＜0.01)；flupirtine(25 mg·kg－1)給藥組小鼠第3天和第4天潛伏期與模型組小鼠比明顯縮短(P＜0.05)，并且flupirtine(10和25 mg·kg－1)給藥組小鼠在目標象限的時間與模型組小鼠比明顯延長(P＜0.01)。②Western蛋白檢測結果顯示:慢性束縛性應激小鼠海馬p-ser473-Akt和p-Ser9-GSK3β表達水平明顯降低(P＜0.01)，flupirtine(25 mg· kg－1)能抑制慢性束縛應激所致的p-ser473-Akt和p-Ser9-GSK3β水平的降低(P＜0.05)。③慢性束縛應激小鼠與對照組小鼠相比，海馬組織中的Bax蛋白表達上調(diào)(P＜0.05)，flupirtine(25 mg·kg－1)能逆轉慢性束縛應激所致Bax的上調(diào)(P＜0.01)，但是Bcl-2蛋白表達沒有明顯變化。結論氟吡啶可改善慢性束縛性應激小鼠的學習記憶損傷，此改善作用可能與調(diào)控AKT/GSK-3β信號通路有關。

關鍵詞:慢性束縛性應激；學習與記憶；flupirtine；海馬；AKT/GSK-3β

基金項目:國家自然基金課題(81173038,81001425, 81001432)

通訊作者:徐旭林,E-mail:xulinxu＠hust.edu.cn

T4－25

孕期炎癥刺激對子代大鼠認知能力的影響

郝麗云，周見至，李曉輝

(重慶第三軍醫(yī)大學藥物研究所，重慶 630000)

摘要:目的從孕期炎癥刺激后子代認知障礙入手，研究其發(fā)病新機制。方法隨機分為4組:對照組、LPS組、LPS＋PDTC組及PDTC組；SD孕鼠在孕第8、10、12天給予LPS 0.79 mg·kg－1ip；子鼠出生后監(jiān)測子鼠通過斜面轉身、斷崖回避、前肢懸掛、平面翻正、空中翻正、聽覺驚愕、視覺定向等實驗檢測子鼠早期神經(jīng)反射發(fā)育的情況；通過Morris水迷宮定位航行實驗、平臺探索實驗、可視平臺實驗及穿梭箱實驗檢測子鼠早期認知能力的改變；免疫熒光雙標觀察星形膠質(zhì)細胞NF-κB與GFAP的共表達。結果孕期腹腔注射LPS后孕鼠生育仔鼠的數(shù)量、胎鼠體重及胎鼠21 d存活率在各組之間均沒有明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。張耳、左右睜眼、感覺反射、運動反射、協(xié)調(diào)性的發(fā)育均無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。Morris水迷宮實驗表明LPS組逃避潛伏期延長，較對照組有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)；LPS組子鼠在穿梭箱試驗中主動逃避反應的習得率較其余各組有所降低且被動反應的電擊時間延長，與對照組子鼠相比有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。LPS組子鼠海馬CA1區(qū)的某些部位星形膠質(zhì)細胞密集，胞體清晰，突起變長、變粗，染色深，GFAP熒光IOD值較與對照組顯著增高(P＜0.01)。結論孕期炎癥刺激后子代大鼠的認知能力隨著年齡的增長而顯著降低，同時用NF-κB抑制劑可有效的抑制子代神經(jīng)結構的損傷，改善認知功能。

關鍵詞:孕期炎癥刺激；認知

T4－26

大鼠慢性低灌注腦缺血海馬亞區(qū)NeuN的表達變化

羅 攀，李昌俊，盧 云，周 梅，陳 誠，郭蓮軍

(華中科技大學同濟醫(yī)學院藥理學系，湖北武漢 430030)

摘要:目的通過觀察慢性低灌注腦缺血大鼠在不同時間點，不同海馬亞區(qū)成熟神經(jīng)元標記物NeuN的表達變化，為臨床上對腦卒中患者的干預治療等提供實驗依據(jù)。方法實驗采用大鼠雙側頸總動脈結扎(2VO)建立慢性腦低灌注缺血模型，按要求分為:假手術4周組，假手術8周組，假手術12周組，缺血4周組，缺血8周組，缺血12周組；免疫印跡Western blot檢測缺血后4周，8周，12周3個時間點海馬CA1區(qū)，CA3區(qū)以及DG區(qū)NeuN的表達變化。結果假手術4周，8周，12周大鼠NeuN的表達在海馬3個亞區(qū)都無顯著性差異，提示在實驗過程中正常假手術大鼠相關腦區(qū)NeuN的表達不隨年齡的增大而發(fā)生改變。但與假手術相比，缺血4周組NeuN在CA1的表達顯著降低(P＜0.05)，說明慢性腦低灌注對海馬CA1區(qū)神經(jīng)元造成了損傷；驚奇的是:本實驗的結果還發(fā)現(xiàn)在缺血8周和12周時，這種永久不可逆性腦缺血造成的CA1區(qū)神經(jīng)元的損傷卻得到了逆轉，其與假手術相比，NeuN的表達量并未出現(xiàn)顯著下降，這可能與大鼠自身的恢復能力有一定聯(lián)系。而在CA3區(qū)和DG區(qū)，本研究中并未觀察到缺血后NeuN的表達發(fā)生變化，提示CA3區(qū)與DG區(qū)可能對腦缺血損傷并不敏感。結論慢性低灌注腦缺血對大鼠海馬神經(jīng)元的損傷具有時間依賴性，隨著缺血時間的延長，大鼠通過自身的恢復能力能逆轉這種神經(jīng)損傷。

關鍵詞:腦缺血；海馬；NeuN

T4－27

外源性表皮生長因子通過Pl3K-Akt-Rac-1信號調(diào)節(jié)血-脊髓完整性的作用機制

周玉龍1，鄭彬彬1，朱思品1，葉麗冰2，張宏宇2，徐華梓1(1.溫州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院脊柱外科，溫州 浙江325035；2.溫州醫(yī)科大學藥學院，溫州浙江 325035)

摘要:目的脊髓損傷(SCI)后血-脊髓屏障(BSCB)的破壞是繼發(fā)性脊髓損傷致死的重要原因，有效修復BSCB是治療脊髓損傷的主要手段。故探討表皮生長因子(EGF)對脊髓損傷(SCI)后血-脊髓屏障(BSCB)的修復作用及其作用機制。方法采用NYU打擊器構建SCI模型，通過尾靜脈注射EGF，利用伊文思藍和FITC-dextran觀察BSCB的通透性變化情況。同時通過蛋白印跡方法檢測緊密連接蛋白、黏附蛋白、Rac1、RhoA的表達，免疫熒光檢測緊密連接蛋白、黏附蛋白表達。在體外模型中，通過微血管內(nèi)皮細胞和星形膠質(zhì)細胞共培養(yǎng)建立BSCB模型，并用相應的抑制劑和siRNA闡明EGF是否通過PI3K-Akt-Rac1信號通路來影響緊密連接蛋白和粘附蛋白的表達。結果在1，3和7 d SCI模型中，EGF能明顯減少伊文思藍和FITC的擴散；蛋白印跡結果和免疫熒光結果都表明EGF上調(diào)緊密連接蛋白、黏附蛋白的表達；同時，EGF能夠調(diào)節(jié)SCI后Rac-1和RhoA的表達。在體外BSCB模型中，EGF能夠顯著減少FITC的滲透量，同時上調(diào)緊密連接蛋白、黏附蛋白和Rac-1的表達。而給予Rac-1 si-RNA后，EGF不能上調(diào)緊密連接蛋白、黏附蛋白和Rac-1的表達。結論在體內(nèi)和體外水平上闡明EGF通過PI3K-Akt-Rac-1信號通路促進BSCB修復，為SCI的治療提供新的思路。

關鍵詞:表皮生長因子；脊髓損傷；血-脊髓屏障；微血管內(nèi)皮細胞；緊密連接蛋白

基金項目:浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生平臺計劃重點項目(2014ZDA017)；浙江省自然科學基金項目(LY14H1700)

T4－28

堿性成纖維生長因子對創(chuàng)傷性腦損傷后血腦屏障的修復作用及其機制

程 藝，葉麗冰，蔡平討，張 超，張宏宇

(溫州醫(yī)科大學藥學院，浙江溫州 325000)

摘要:目的探討堿性成纖維生長因子(bFGF)與創(chuàng)傷性腦損傷后血腦屏障的修復作用及其機制的關系。方法體內(nèi)實驗，建立 C57BL/6N小鼠液壓沖擊創(chuàng)傷性腦創(chuàng)傷(TBI)模型，在TBI模型中引起血腦屏障(BBB)的破壞，進而破壞了細胞間緊密連接和黏附連接。體外實驗，通過人腦微血管內(nèi)皮細胞(HBMEC)建立糖氧剝奪模型。實驗采用Evans Blue和FITC-dextran檢測血腦屏障通透性的改變，并用PI3K/Akt的抑制劑LY294002和Rac1 siRNA闡明bFGF是否通過 PI3K-Akt-Rac1信號通路影響緊密連接(TJ)和黏附連接(AJ)相關蛋白，從而促進BBB的修復。運用免疫熒光組織化學的方法及Western blot技術檢測緊密連接蛋白(密封蛋白5、閉合蛋白和ZO-1)、黏附蛋白(p120-鏈蛋白和β-鏈蛋白)、p-Akt，GTP-Rac1和GTP-RhoA的表達。結果TBI大鼠模型中腦室內(nèi)注射 bFGF可以減少Evans Blue和FITC－dextran在腦室內(nèi)的擴散，且bFGF可以減少在TBI和缺糖缺氧條件下細胞對親水性大分子的通透性，并上調(diào)ZO-1、閉合蛋白、密封蛋白5、p120-鏈蛋白和β-鏈蛋白等蛋白，抑制劑LY294002和Rac1 siRNA抑制這些蛋白的表達。而且證明bFGF能夠激活PI3K-Akt-Rac1信號通路從而抑制了RhoA的活性，恢復BBB的完整性。結論bFGF有利于創(chuàng)傷性腦損傷后血腦屏障的修復作用，改善細胞間緊密連接蛋白和黏附蛋白的表達。其主要是通過激活PI3K-Akt-Rac1信號通路從而抑制了RhoA的活性，進而發(fā)揮促進BBB修復的作用。

關鍵詞:創(chuàng)傷性腦損傷；堿性成纖維生長因子；血腦屏障；緊密連接蛋白；人腦微血管內(nèi)皮細胞

基金項目:國家自然科學基金(81200958)；浙江省蛋白藥物科技創(chuàng)新團隊(2010R50042)

T4－29

Role of norepinephrine and hippocampal AMPA receptor in age-related deficit of emotional memory

ZHOU Jun，LUO Yi，WANG Fang，CHEN Jian-Guo

(Department of Pharmacology，Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030，China)

Abstract:OBJECTlVEAge-related emotional memory deficit is an important complication with cognition decline in Alzheimer′s disease and aged individuals.However，little is known about the underlying mechanism.METHODSBy using electrophysiological recording，western blotting and behavior experiment，we examined the role of norepinephrine(NE)and its reuptake inhibitor desipramine in the regulation of rat hippocampal long-term potentiation(LTP)，surface expression of AMPA receptor(AMPAR)，and associative fear memory in contextual fear conditioning.RESULTSWe found there was a defective regulation of NE content and AMPAR trafficking during fear conditioning in aged rats，which were accompanied by impaired emotional memory and LTP，when compared with adult rats.Furthermore，we also found that exogenously upregulating NE level ameliorated the impairment of LTP and emotional memory via enhancing AMPAR trafficking in aged rats.Conversely，the downregulation of NE function impaired hippocampal LTP in adult rats.Finally，acute treatment with NE or desipramine rescued the impaired emotional memory in aged rats.CONCLUSlONThese findings imply a pivotal role for NE in synaptic plasticity and associative fear memory in aging，and suggest that desipramine may be a potential candidate for the therapy of age-related emotional memory deficit.

Key words:aging；emotional memory；norepinephrine；AMPAR；LTP；desipramine

Foundation item:The project supported by the 973 Program of China(2013CB531303)

Corresponding author:CHEN Jian-guo，E-mail: chenj＠m(xù)ails.tjmu.edu.cn

T4－30

莫諾苷通過ephrin B2促進缺血性腦損傷大鼠血管新生的作用機制

孫芳玲，郭心磊，艾厚喜，張 麗，王 文

(首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院藥物研究室，教育部神經(jīng)變性病學重點實驗室，北京市老年病醫(yī)療研究中心，北京 100053)

摘要:血管新生是指從已有的血管形上芽生和生成新生血管，從而擴大和重塑現(xiàn)有的血管網(wǎng)的過程，這在發(fā)育和各種病理過程中具有重要作用。缺血性腦損傷后，在梗死灶周圍的腦組織有被稱為的半暗帶的區(qū)域 。半暗帶區(qū)雖然部分功能受損，但仍為可逆性修復的腦組織。該區(qū)域血管的新生增強，可以加快損傷的修復，血管神經(jīng)穩(wěn)態(tài)的重構，以及功能的恢復。Eph受體酪氨酸激酶及其配體ephrin是一種重要的信號通路，在生理或疾病狀態(tài)下具有廣泛的作用。研究證明ephrin B2在血管內(nèi)皮細胞內(nèi)表達，并且在血管的發(fā)育和血管的新生中具有重要作用。ephrin B2與Eph受體結合激活下游通路。ephrin B2反向信號通過 Abl、STAT3、FAK等通路調(diào)節(jié)內(nèi)皮增殖、分化和遷移等。敲除ephrin B2基因會造成血管畸形導致胎兒死亡。截斷其細胞內(nèi)部分或阻斷ephrin B2反向信號會產(chǎn)生類似的效果。說明ephrin B2的反向信號對于血管新生的過程極其重要。莫諾苷是一種山茱萸環(huán)烯醚帖苷類化合物，具有廣泛的生物學活性，能夠抗炎、抗腫瘤等。莫諾苷能夠促進大鼠缺血性腦損傷后損傷區(qū)域的血管新生及血管網(wǎng)重塑，研究莫諾苷通過ephrin B2的促血管作用機制，可以幫助我們找到新的促進缺血性腦損傷后恢復的靶位點。

T4－31

缺血性腦損傷后神經(jīng)血管穩(wěn)態(tài)重構作用與機制

王 文，艾厚喜，孫芳玲，張 麗

(首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院藥物研究室，教育部神經(jīng)變性病學重點實驗室，北京市老年病醫(yī)療研究中心，北京 100053)

摘要:腦血管病是常見三大疾病之一，缺血性腦損傷是主要誘發(fā)因素，它能引起復雜的病理變化，誘發(fā)腦卒中、血管性癡呆、癲癇等疾病。缺血性腦損傷能夠誘發(fā)短暫而微弱的干細胞突發(fā)性增殖，這種增殖很難達到神經(jīng)再生育修復作用。胚胎發(fā)育及干細胞研究表明，在干細胞轉化過程中有許多信號通路參與這個復雜過程的調(diào)控，我們初步實驗表明，腦缺血可以短暫激活Wnt信號通路；莫諾苷可以促進局灶性腦缺血大鼠SVZ區(qū)神經(jīng)干細胞增殖和分化成熟，上調(diào)促神經(jīng)發(fā)生調(diào)節(jié)因子，并持續(xù)激活Wnt信號通路及促進神經(jīng)功能的恢復和減小梗死體積，并推測其促進神經(jīng)發(fā)生的機制可能與Wnt信號通路的激活有關。

基金項目:2個科技部重大專項和4個國家自然基金

T4－32

AQP4對突觸可塑性和學習記憶的影響

張潔婷，金 悠，王 芳，陳建國

(華中科技大學同濟醫(yī)學院基礎醫(yī)學院藥理學系，湖北武漢430030)

摘要:目的研究水通道蛋白4(AQP4)敲除小鼠觀察AQP4對海馬和杏仁核突觸傳遞長時程增強(LTP)和長時程抑制(LTD)及學習記憶的影響。方法條件性恐懼記憶和新事物認知實驗觀察小鼠的記憶行為；腦片膜片鉗和場電位技術記錄NMDA受體介導的電流及LTP和LTD；Western blotting實驗研究突觸可塑性相關蛋白的表達水平。結果敲除AQP4損傷杏仁核腦區(qū)LTP及學習記憶，該作用與AQP4敲除下調(diào)谷氨酸轉運體(GLT-1)表達，選擇性增加NMDA受體介導的興奮性突觸后電流(EPSC)有關。頭孢曲松通過上調(diào)GLT-1表達，可拮抗AQP4敲除所致LTP和恐懼記憶損傷。另外，我們發(fā)現(xiàn)AQP4敲除可易化海馬區(qū)NMDA受體依賴的LTD，對mGluR受體依賴的LTD無影響。AQP4敲除通過增加突觸外NR2B-NMDA受體活性，促進小鼠恐懼記憶消散，損傷小鼠新事物認知能力。結論AQP4通過調(diào)節(jié)GLT-1表達和突觸外NR2B-NMDA受體活性，在杏仁核和海馬腦區(qū)突觸可塑性及學習記憶中扮演重要角色。

關鍵詞:AQP4；LTP；LTD；記憶；海馬；杏仁核

基金項目:國家“973計劃”(2013CB531300)

通訊作者:陳建國,E-mail:chenj＠m(xù)ails.tjmu.edu.cn

T4－33

AMPA受體膜穩(wěn)定性調(diào)控可卡因和情感記憶相關的行為及突觸可塑性

陸海峰，周 俊，羅 翊，吳鵬飛，陳建國，王 芳

(華中科技大學同濟醫(yī)學院基礎醫(yī)學院藥理學系，湖北武漢430030)

摘要:目的研究可卡因戒斷和恐懼記憶中AMPA受體膜表達的變化及其對突觸可塑性和行為學的影響。方法條件性恐懼記憶和自發(fā)活動觀察大鼠行為；場電位技術記錄LTD；Western blotting實驗研究相關蛋白的表達水平。結果

可卡因戒斷增加伏隔核區(qū)NSF-GluR2間作用與其引起的行為敏化有關。干擾NSF-GluR2相互作用通過減少GluR2膜表達，增加可卡因引起的行為敏化，相反，阻斷含GluR2亞基AMPA受體下膜減輕行為敏化行為。給予SNAP通過促進GluR2膜表達亦可減輕可卡因所致行為敏化。另外，我們發(fā)現(xiàn)給予去甲腎上腺素通過增加GluR1磷酸化和上膜，損傷杏仁核LTD。腹腔注射普萘洛爾杏仁核腦區(qū)過表達GluR1的C末端均可抑制GluR1膜表達，逆轉LTD損傷，減輕恐懼記憶的保留。結論增加AMPA受體的膜穩(wěn)定性可減輕可卡因戒斷行為和創(chuàng)傷后應激。

關鍵詞:AMPA受體；可卡因；恐懼記憶；突觸可塑性

基金項目:國家“973計劃”(2013CB531300)

通訊作者:王 芳,E-mail:wangfangtj0322＠163.com

T4－34

烷基硫醇類化合物調(diào)控海馬腦區(qū)AMPA受體膜轉運及機制

韓 俊，吳鵬飛，胡壯麗，王 芳，陳建國

(華中科技大學同濟醫(yī)學院基礎醫(yī)學院藥理學系，湖北武漢430030)

摘要:目的研究硫醇類化合物對大鼠海馬腦區(qū)AMPA受體的作用及其機制。方法Western blotting，腦片膜片鉗，BS3交聯(lián)檢測膜蛋白，棕櫚?；瘷z測，化學合成。結果Western blotting檢測發(fā)現(xiàn)，硫醇類化合物 DTT(50～100 μmol·L－1)和β-ME(100～200 μmol·L－1)處理海馬腦片0.5 h不引起AMPA受體GluR1和GluR2亞基表達的增加。BS3交聯(lián)法檢測膜蛋白發(fā)現(xiàn)，DTT和β-ME等顯著增加海馬腦區(qū)AMPA受體的膜轉運。腦片膜片鉗技術發(fā)現(xiàn)，DTT和β-ME等顯著增加海馬腦區(qū)AMPA受體介導的谷氨酸電流。棕櫚?；瘷z測實驗表明，DTT和β-ME減少GluR1亞基的棕櫚?；剑崾玖虼碱惢衔镌黾覩luR1亞基膜轉運的效應和其去棕櫚?；^程密切相關。進一步發(fā)現(xiàn)，雜環(huán)類的硫醇化合物青霉胺、甲硫咪唑等不能增加海馬腦區(qū)GluR1亞基的膜轉運，提示硫醇類化合物的去棕櫚?；哂薪Y構特異性。進一步合成他克林烷基硫醇衍生物，發(fā)現(xiàn)他克林(200 μmol·L－1)不能增加AMPA受體GluR1亞基的膜轉運，但其烷基硫醇衍生物ST10(200 μmol·L－1)顯著增加AMPA受體GluR1亞基的膜轉運。結論烷基硫醇類化合物促進AMPA受體膜轉運的藥理學效應，其機制和其介導的去棕櫚?；嘘P。

關鍵詞:硫醇類化合物；AMPA受體；棕櫚?；?/p>

基金項目:國家“973計劃”(2013CB531300)

通訊作者:陳建國,E-mail:chenj＠m(xù)ails.tjmu.edu.cn

T4－35

蛋氨酸亞砜還原酶A負性調(diào)控小膠質(zhì)細胞介導的炎癥反應及機制

吳鵬飛，范 華，張 玲，胡壯麗，王 芳，陳建國

(華中科技大學同濟醫(yī)學院基礎醫(yī)學院藥理學系，湖北武漢430030)

摘要:目的研究蛋氨酸亞砜還原酶A(MsrA)在小膠質(zhì)細胞中的作用及其機制。方法PCR，Western blotting，免疫熒光，ELISA，生化檢測，基因工程，電子自旋共振譜技術。結果PCR，Western blotting和免疫熒光技術發(fā)現(xiàn)，MsrA mRNA和蛋白質(zhì)均存在于原代培養(yǎng)的小膠質(zhì)細胞中。脂多糖誘導小膠質(zhì)細胞激活后MsrA表達顯著升高。MsrA siRNA使脂多糖刺激激活的小膠質(zhì)細胞數(shù)目和產(chǎn)生的炎癥因子含量均顯著增加，提示MsrA可能是小膠質(zhì)細胞炎性激活中重要的負向調(diào)控因子。通過基因工程技術制備的透膜性融合蛋白Tat-rMsrA處理小膠質(zhì)細胞，顯著下調(diào)脂多糖刺激激活的膠質(zhì)細胞數(shù)目和產(chǎn)生的炎癥因子含量，其機制可能和Tat-rMsrA顯著減少脂多糖刺激引起的MAPK信號通路激活和NF-κB轉錄因子的入核有關。補充Tat-rMsrA能顯著下調(diào)脂多糖引起的小膠質(zhì)細胞活性氧水平的升高。電子自旋共振譜技術證實，這種效應主要來源于MsrA催化了蛋氨酸和活性氧的反應。結論MsrA在小膠質(zhì)細胞的炎性激活中扮演著重要的負向調(diào)控因子作用，其機制和MsrA催化蛋氨酸對活性氧的清除、減少活性氧引發(fā)的MAPK信號通路激活和NF-κB轉錄因子的入核有關。

關鍵詞:MsrA；小膠質(zhì)細胞；脂多糖；炎癥

基金項目:國家“973計劃”(2013CB531300)

通訊作者:陳建國,E-mail:chenj＠m(xù)ails.tjmu.edu.cn

專題5:成癮醫(yī)學

T5－01Significant association of rs17189632 in the glutamate receptor subunit gene(GRlN3A)with heroin dependence

XIE Xiao-hu1，2，LIU Hui-fen1，2，ZHOU Wen-hua1，2

(1.Lab of Behavioral Neuroscience，School of Medicine，Ningbo University，Ningbo 315010，China；2.Ningbo Addiction Researcher and TreatmentCenter， Ningbo 315010，China)

Abstract:OBJECTlVEThe N-methyl-D-aspartate receptor is consisting of three subfamilies(NR1，NR2A，2B，2C，2Dand NR3A，3B).The ability of NR3A to modulate the NMDAR function makes it an attractive candidate gene of heroin addiction.The purpose of this study is to explore the association between two single nucleotide polymorphisms(SNPs)(rs3739722，rs17189632)in the glutamate receptor subunit gene(GRIN3A)and heroin addiction.METHODSThegenotypesofthetwoSNPs (rs3739722，rs17189632)in 332 heroin dependent patients and 200 normal control subjects in the male Han Chinese population were detected by TaqMan SNP genotyping method， and the association between heroin dependence and the two SNPs was analyzed.RESULTSThe distributions of genotype and allele at rs3739722 were not significantly different between in the cases and in the control group(P＞0.05).The frequencies of genotype and allele at rs17189632 were significantly different between the cases and the controls(χ2＝7.237，P＝0.0268；χ2＝4.278，P＝0.0386).In addition，the A allele frequency of rs17189632 was significantly lower in cases compared with the control group(OR＝0.752，95%CI 0.574－0.986，P＝0.0386).And the frequency of AA genotype of rs17189632 was significantly lower in cases compared with the control group(OR＝0.457，95%CI 0.255－0.818，P＝0.0073).CONCLUSlONOur study indicates that the rs17189632 of the glutamate receptor subunit gene(GRIN3A)play a major role in heroin dependence.

Key words:heroin；glutamate receptor；genotype

Foundation item:The project supported by the National Key Technology R＆D Program in the 12th Five Year Plan of China(2012BAI01B07)；Natinoal Natural Science Foundation of China(81071077，U1132602)；and by Science and Technology Innovative Research Team of Ningbo (2009B21002)

T5－02

Role of deep brain stimulation of medial prefrontal cortex on heroin seeking behavior in rats

CHEN Jun-feng，ZHU Hua-qiang，SUN An-na，LAI Miaojun，CHEN Wei-sheng，ZHANG Fu-qiang，ZHOU Wenhua，LIU Hui-fen

(Lab of Behavioral Neuroscience，Ningbo Addiction Research and Treatment Center，School of Medicine，Ningbo University，Ningbo 315010，China)

Abstract:OBJECTlVETo investigate the role and possible mechanisms of deep brain stimulation(DBS) treatment for the two sub-regions(dorsal and ventral)of medial prefrontal cortex(mPFC)in the extinction and reinstatement of heroin seeking behavior.METHODSThe rats were implanted with electrodes in the dmPFC，vmPFC and trained to self－administer heroin(0.05 mg/kg/infusion)under a FR1 schedule in daily 4 h sessions.Then，extinction session(2 h)were conducted for 10 d，DBS (130 Hz or 10 Hz，0.1 ms，0.2 mA)were conducted 1 h before each extinction session.Cue-induced heroin seeking reinstatement test was conducted 24 h after the last extinction training.RESULTSIn the DBS treatment with dmPFC，two-factor repeated ANOVA revealed that the HDBS group had significantly lower active pokes in cue-induced reinstatement of heroin seeking compared with those of sham stimulation group，while there was no difference in active pokes between sham stimulation and L-DBS group in cue-induced reinstatement of heroin seeking. There was also no difference in active nose-pokes between stimulated and sham control groups during the extinction sessions.In the DBS treatment with vmPFC，two-factor repeated ANONA found the number of active pokes in HDBS group were significantly higher than the sham control group in cue-induced reinstatement of heroin seeking or during day 4－7 extinction sessions.But low-frequency DBS in vmPFC had no effect on both extinction and cue-induced heroin-seeking.We also explored the effects of long-term high frequency stimulation of dmPFC on p-CREB，p-AKT and p-ERK expression in the NAc core and NAc shell. Western blot and immunohistochemical analysis showed that the level of p-CREB in the NAc core significantly increased in the rats treated with H－DBS compared with the sham control.In contrast，the level of p-ERK and p-AKt in the NAc core significantly decreased in the rats treated with H-DBS compared with the sham control.However，both p-CREB and p-ERK in the NAc shell did not change significantly，but could significantly down-regulate the p-AKt expression.We conclude that the high frequency stimulation of dmPFC can inhibit the reinstatement of heroin-seeking induced by conditioned cues，and its regulation of phosphorylated CREB，phosphorylated ERK and phosphorylated AKt expression in NAc core may contribute to the behavioral inhibition in cue-induced reinstatement.High fre-quency stimulation of the vmPFC can impair the extinction of heroin seeking and facilitate the reinstatement of heroinseeking induced by conditioned cues；Low frequency stimulation of either dmPFC or vmPFC have no influence on heroin seeking behavior during extinction and cue-induced reinstatement.CONCLUSlONThe present studies demonstrated that chronic DBS treatment with mPFC may represent a useful treatment method for heroin addiction.

Key words:deep brain stimulation；heroin；drug seeking；dmPFC；vmPFC；p-CREB；p-ERK；p-AK

Foundation item:The projecct supported by the National Key Technology R＆D Program in the 12th Five Year Plan of China(2012BAI01B07)；National Natural Science Foundation of China(81071077，U1132602)；and Science and Technology Innovative Research Team of Ningbo (2009B21002)

T5－03

Memantine attenuates reinstatement of heroin seeking induced by heroin or cues in an animal model of relapse

LAI Miao-jun，LIU Hui-fen，ZHENG Fu-qiang，ZHOU Wen-hua

(Lab of Behavioral Neuroscience，Ningbo Addiction Research and Treatment Center，School of Medicine，Ningbo University，Ningbo 315010，China)

Abstract:OBJECTlVETo study the effects of acute treatment with memantine on the heroin seeking behavior.MEHTODSRats were self-administered heroin under a fixed ratio 1(FR1)schedule for 14 d and then extinguished for 10 d.A progressive schedule(PR3-4)was used to evaluate the relative motivational value of heroin reinforcement.After training，the conditioned cue or heroin priming(250 μg·kg－1)was introduced for the reinstatement of heroin-seeking behavior.The effects of memantine at doses 1－15 mg·kg－1pretreatment on behaviors were examined under these schedules.RESULTSMemantine at these doses produced a upward shift in the dose-response curve for heroin self-administration，but failed to inhibition the break point(reward value)under the PR3－4schedule.In addition，memantine at doses 5－15 mg·kg－1inhibited the reinstatement of heroin seeking induced by heroin priming in a dose-dependent manner，while at dose of 15 mg·kg－1inhibited the reinstatement of conditioned cue－induced heroin seeking.Memantine at these doses failed to alter locomotion activity.CONCLUSlONThese data demonstrate that acute treatment with memantine inhibites the reinstatement of heroin seeking induced by heroin priming or conditioned cues and memantine may be an adunctive therapy for the treatment of heroin addiction.

Key words:NMDA receptor；heroin；relapse；addiction

Foundation item:The project supported by the National Key Technology R＆D Program in the 12th Five Year Plan of China(2012BAI01B07)；Natinoal Natural Science Foundation of China(81071077，U1132602)；and Science and Technology Innovative Research Team of Ningbo (2009B21002)

Corresponding author:ZHOU Wen-hua，E-mail: whzhou＠vip.163.com

T5－04

Reward-induced memory relieves anxiety-related behavior through strengthening synaptic efficacy and protein kinase C in dentate gyrus

LEI Zhuo-fan1，2，LIU Bei1，2，WANG Jin-hui1，2

(1.State Key Laboratory，Institute of Biophysics，Chinese Academy of Sciences，Beijing 100101，China；2.University of Chinese Academy of Sciences，Beijing 100049，China)

Abstract:OBJECTlVEThe reagents to enhance serotonergic and GABAergic synaptic function are used to treat anxiety.Their effectiveness delay and side-effect make psychological therapies to be paid attention，in which anxiety status appears to be relieved by reward memory. Cellular and molecular mechanisms underlying such psychological therapies remain elusive.The elucidation to these issues will shed light onto finding new therapeutic approach for anxiety.METHODSANDRESULTSFood reward at the open-arm end of the elevated plusmaze was applied to train the mice for them to form working memory and challenge open arm.Glutamatergic synapses in the hippocampal dentate gyrus were analyzed by using electrophysiology and cellular imaging.The mice with reward training increase their entrances and staying in the reward open-arm versus in a neutral open-arm and two closed-arms.After the level of mouse anxiety-related behavior is reduced by this reward memory，long-term synaptic potentiation in vivo and dendritic spines in the granule cells become upregulated.This upregulated synaptic plasticity is accompanied by the expression of more protein kinase C in the dendritic spines.Protein kinase C inhibitor，chelerythrine，reduces the formation of working memory，the relief of anxiety-related behavior and the upregulation of glutamate synapses.CONCLUSlONReward-induced memory relieves the mouse anxiety-related behaviors via strengthening synaptic efficacy and protein kinase C expression in the hippocampus.

Key words:anxiety；protein kinase C；hippocampus T5－05

Parenting styles associate drug craving and psychological symptoms in subjects with methamphetamine use disorder

SHEN Wen-wen1，LI Long-hui1，LIU Yu1，ZHAO Jinshao2，YAO Yong-qing2，ZHOU Wen-hua1

(1.Ningbo Addiction Research and Treatment Center，School of Medicine，Ningbo University，Ningbo 315010，China；2.Administration Bureau of Addiction Detoxification，Ningbo 315010，China)

Abstract:OBJECTlVETo investigated the influence of parenting styles on drug use behaviors as well as psychiatric symptoms in subjects with methamphetamine use disorder(MUD).METHODSThe investigation recruited 288 male patients with MUD who were under compulsorydetoxification in Zhejiang Province.Questionnaires included the drug use histories，the symptoms check list(SCL-90)，the Pittsburgh Sleep Quality Index(PSQI)，the Egna Minnen av B?traffande Uppfostran-My memories of upbringing (EMBU)and the brief report of maltreatment experiences in childhood.The norm data of EMBU were from 390 high school and college students investigated in 1993.Significant correlation were determined by spearman correlation analysis.Coefficients no less than 0.3，and P＜0.001 were termed as strongly significant，and correlations with P＜0. 05 were termed as moderately significant.RESULTSPositive reports on childhood maltreatment experiences were rare.However，subjects with MUD had more rejecting，callous，and less emotionally warm parents compared to the controls.The rearing styles were not related to the severity of drug use behaviors，including daily dosage，and the frequency of drug use.But parents emotional warmth have moderately negative relations with the methamphetamine craving(Father，c＝－0.206，P＜0.01；mother c＝－0.274，P＜0.001)，while the punishment from mother have a positive relations with it(c＝0.231，P＜0.01). These relations were significant after control for drug use histories(daily dose，duration of methamphetamine use，weekly frequency of use，and frequency of binge use). Parental rejection was the main factors that related with psychological symptoms and sleep qualities.And the relationships were significant after control for drug use histories.After control for the craving，the relation of somatization and father rejection turn non-significant，but all the other correlations stood still.CONCLUSlONParenting styles have profound psychological impacts in patients with SUD.Inappropriate ways of rearing were closely related with the craving for methamphetamine and various psychological symptoms.Family treatment should become an important component in the comprehensive treatments of substance use disorders.And educations of parent-child relationship should be a crucial measure to prevent psychological and behavioral disorders in adult life.

Key words:methamphetamine；parents；genetics，behavioral

T5－06

lnhibition of phosphodiesterase10A attenuates mMorphine-induced conditioned place preference

MU Ying，REN Zhao-xiang，JIA Jia，GAO Bo，ZHENG Long-tai，WANG Guang-hui，Eitan FRIEDMAN，ZHEN Xue-chu

(Department of Pharmacology，College of Pharmaceutical Sciences，Soochow University，Suzhou215123，China)

Abstract:OBJECTlVE AND METHODSTo investigate the potential role of PDE10A in the reinforcement of morphine，we observed the effect of MP-10，a selective inhibitor of PDE10A，on the acquisition，expression，and extinction of morphine-induced conditioned place preference (CPP).RESULTSThe results show that 2.5 mg·kg－1MP-10，administered subcutaneously，significantly inhibited the acquisition of morphine-induced CPP.Same dose of inhibitor，administered alone，did not result in the acquisition of CPP.Moreover，MP-10 did not alter the expression of morphine-induced CPP，but did accelerate the extinction of morphine-induced CPP.Additionally，we detected a decreased expression of phosphorylated cAMP response element binding protein(pCREB)in dorsomedial striatum，shell of NAc，and anterior cingulated cortex (ACC)，and decreased expression of ΔFosB in shell of NAc and ACC in response to chronic MP-10(2.5 mg·kg－1sc)treatment.CONCLUSlONThese results imply that inhibition of PDE10A may have therapeutic potential in the treatment of opioid addiction.

Key words:phosphodiesterase；opoioid addition；MP-10

T5－07The novel roles of uridine in morphine-induced hyperactivity by decreasing striatal dopamine release

LIU Ping，YU Li-sha，WANG Xiao-min，WANG Fang，YANG Jing-yu

(Department of Pharmacology of Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang110016，China)

Abstract:Uridine interacted with the dopaminergic system and regulated dopamine-related behaviors in role of potentialendogenous neuromodulatorofthe GABAAreceptor.The present study investigated the effects of uridine on morphine-induced hyperactivity and on modulating dopaminergic neurotransmission in mice，which may help to understand how uridine acts as modulators of the GABAAreceptor.The results showed that uridine(30 or 100 mg·kg－1)significantly attenuated the hyperactivity induced by acute morphine treatment in mice.Morever uridine could increase the extracellular levels of GABA in the brain.In addition，the GABAAreceptor antagonist，significantly attenuated the effect of uridine on morphineinduced hyperactivity.In vivo microdialysis demonstrated that uridine reversed morphine-induced dopamine release in the dorsal striatum of morphine-treatment mice.In conclusion，these data suggested that the therapeutic effect of uridine on morphine-induced hyperactivity may be mediated in part by interfering with the dopaminergic system possibly via agonistic effects at GABAAreceptors.

Key words:hyperactivity；uridine；morphine；GABAAreceptors

Foundation item:The project supported by National Natural Science Foundation of China(81373383)

Correspondingauthor:YANG Jing-yu， E-mail: yangjingyu2006＠gmail.com

T5－08

Aquaporin-4 deficiency attenuates opioid self-administration in mice

SONG Rui，LYU Yang，PANG Chong，ZHAO Tai-yun，WU Ning，LI Jin

(Institute of Pharmacology and Toxicology，Academy of Military Medical Sciences，Beijing 100850，China)

Abstract:OBJECTlVETo investigates whetherAQP4 affects opioid psychological addiction and reveal the mechanisms underlying the role of AQP4 in opioid addiction.METHODS① In the heroin self－administration experiment，we compared the AQP4 knockout mice with the wild type mice.The process is that train mice to learn heroin self-administration(0.05 mg/kg/infusion)under a fixedratio 1(FR1)reinforcement schedule.And then，switch the heroin doses with 0.00625，0.0125，0.025，0.05，or 0. 1 mg/kg/infusion in a randomized counterbalanced assignment design.At last，all mice underwent extinction and reinstatement test.②In oral sucrose self-administration，the procedures were similar to heroin self-administration，5% sucrose solution was used for the mice.③ In locomotor activity test，mice were placed in the chamber for 0.5 h of habituation，and then given saline or morphine(5，10，or 20 mg·kg－1sc).RESULTSWe found that AQP4 deletion had no effect sucrose-taking and sucrose-seeking，but significantly attenuated heroin-taking and heroin-seeking behaviors in heroin self-administration.Besides these，AQP4 deletion had no effect basal level of locomotion，but decreases locomotor-stimulating response to morphine at dose of 10 mg·kg.CONCLUSlONOur present findings demonstrate that AQP4 deletion produces attenuated heroin-taking and heroin seeking behaviors.

Key words:aquaporin 4；reward；opioid addiction

Foundation item:The project supported by National Natural Science Foundation of China(81102425)；Key project of Natural Science Foundation of Beijing (7131010)；Beijing Nova Program(xx2014A014)；and Project ofNationalScience and Technology Support Program in China(2012BAI01B07)

Corresponding author:LI Jin，E-mail:jinli9802＠163.com

T5－09

ABlN-1 regulates opioid dependence through interaction with the μ-opioid receptor

JIANG Jie-bing?，ZHOU Pei-lan?，LI Yu-lei，LIU Meng，WANG Xiao，YAN Hui，SU Rui-bin，GONG Ze-hui

(Department of Pharmacology，Institute of Pharmacology and Toxicology，Academy of Military Medical Sciences，Beijing 100850，China)

Abstract:OBJECTlVETo identify and characterize novel intracellular signal molecules which specially mediated the phosphorylationand desensitization ofMOR.METHODSUsing a bacterial two-hybrid screen，we observed that the carboxyl tail of the rat MOR associates with A20-binding inhibitor of nuclear factor(NF)-κB(ABIN-1).RESULTSThis interaction was confirmed by direct protein-protein binding and the coimmunoprecipitation of MOR and ABIN-1 proteins from cell lysates.Saturation binding studies showed that ABIN-1 had no effect on MOR binding. However，D-ala2，N-Me-Phe4-Gly-ol5enkephalin(DAMGO)-induced MOR internalization，phosphorylation，and ubiquitination were decreased in Chinese hamster ovary cells that coexpressed MOR and ABIN-1.The interaction of ABIN-1 and MOR also inhibited the activation of G-protein and the suppression of forskolin-stimulated adenylyl cyclase induced by DAMGO.Furthermore，morphine-induced dependence was almost abolished by the coexpression of ABIN-1，based on observed calcium levels.Additionally，the protein and mRNA levels of ABIN-1 were increased in chronic morphine-treated rat brain and primary neurons of the rat brain prefrontal cortex.CONCLUSlONThese data suggest that ABIN-1 is a negative regulator of MOR activation，phosphorylation，desensitization，and opioid dependence.

Key words:ABIN-1；dependence；opioids；μ-opioid receptor

Foundation item:The project supported by a grant from the Natural Science Foundation of China Grants (30901799)；the Natural Science Foundation of Beijing Grants(7092078)

Corresponding author:SU Rui-bin，E-mail:ruibinsu＠126.com

?Co-first author.

T5－10

β連環(huán)素及wnt5a在甲基苯丙胺自身給藥中的表達變化

鄭文慧，黃坤玉，黎興興，呂秀依，孫 艷，劉 昱

(寧波大學醫(yī)學院，浙江寧波 315000)

摘要:目的初步探討β連環(huán)素，wnt1在甲基苯丙胺自身給藥后蛋白表達量的變化，從而根據(jù)其變化選擇相應的特異性拮抗劑或者激動劑以期達到對甲基苯丙胺成癮的抑制作用。方法采用大鼠靜脈自身給藥進靜脈插管手術的方法來構造大鼠自身給藥的模型，再取腦通過免疫印記的方法來檢測大鼠腦區(qū)蛋白表達量的變化。結果與假手術組相比，甲基苯丙胺給藥組的β連環(huán)素的表達量在前額皮層，伏隔閡，尾殼核，腹側被蓋區(qū)以及海馬區(qū)均有不同程度的增高；wnt1只在腹側被蓋區(qū)中的表達量有所升高，而在其他各腦區(qū)中的表達量并無差異。結論甲基苯丙胺自身給藥會引起wnt信號通路的關鍵蛋白β連環(huán)素表達量的變化，而僅僅影響wnt1在腹側被蓋區(qū)的表達。

關鍵詞:甲基苯丙胺；信號通路；β連環(huán)素

T5－11

青春期環(huán)境對成年期大鼠空間記憶能力及甲基苯丙胺自身給藥的影響

黎興興，呂秀依，孫 艷，劉 昱

(寧波大學醫(yī)學院，浙江寧波 315000)

摘要:目的探討青春期環(huán)境干預對成年期甲基苯丙胺依賴易感性和強迫覓藥行為的影響。方法取剛斷奶的SD大鼠，放入不同的環(huán)境(豐富和匱乏)中飼養(yǎng)，取部分大鼠進行不同的藥物干預，藥物干預結束，進行水迷宮測試、甲基苯丙胺的自身給藥實驗，整個自身給藥實驗包括獲得、維持、戒斷、消退和復吸幾個階段。結果早期環(huán)境干預對成年期大鼠有重要的影響，豐富環(huán)境組飼養(yǎng)的大鼠對新事物的探索欲低于匱乏環(huán)境中的大鼠，而其空間記憶水平高于匱乏環(huán)境中飼養(yǎng)的大鼠。匱乏組中加利培酮提高了由匱乏環(huán)境飼養(yǎng)造成的空間記憶下降，但其作用不隨青春期干預時間點的不同而改變；豐富組MK-801破壞了豐富環(huán)境飼養(yǎng)對實驗大鼠的空間記憶的保護作用，但是這種損害性只有在青春期早期(PND 41 d藥物干預)引入時才有明顯表現(xiàn)。結論青春期不同時期開始對認知功能干預，對大鼠空間記憶、自身給藥行為有影響。不同的藥物干預在青春期不同階段對大鼠空間記憶、自身給藥行為也有影響。而這種差異性主要是由藥物干預的時間點不同造成的。認知功能增強劑可以逆轉匱乏環(huán)境對大鼠空間記憶、給藥動機、重建率的影響；認知功能損害劑破壞了豐富環(huán)境對大鼠空間記憶、給藥動機的保護作用，并且越早進行青春期認知功能藥物干預，這種影響越明顯。

關鍵詞:空間記憶；甲基苯丙胺；環(huán)境因素；青春期

T5－12

慢性嗎啡暴露大鼠海馬DG區(qū)HCN1表達變化

周 梅，王點石，劉海洋，張宏偉，溫 清，郭蓮軍

(華中科技大學同濟醫(yī)學院藥理學系，湖北武漢 430030)

摘要:目的研究慢性嗎啡暴露大鼠海馬DG區(qū)HCN1表達變化。方法雄性SD大鼠隨機分為正常對照組、慢性嗎啡暴露組(n＝4)。慢性嗎啡暴露組大鼠皮下注射嗎啡5 mg·kg－1，連續(xù)7 d，正常對照組大鼠皮下注射等體積生理鹽水。第7天給予嗎啡2 h后斷頭取腦，置于冰冷人工腦脊液中制備400 μm冠狀切片，分離海馬DG腦區(qū)。腦組織提取膜蛋白和漿蛋白后，經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳，觀察慢性嗎啡暴露大鼠海馬DG區(qū)超極化激活環(huán)核苷酸門控非選擇性陽離子通道1(HCN 1)亞型表達變化。結果與正常對照組相比，慢性嗎啡暴露組大鼠海馬DG區(qū)HCN1膜表達明顯降低，為(72.8±7.1)%，差異有顯著性意義(P＜0.05)，而胞漿內(nèi)HCN1蛋白水平表達有一定程度增加。同時，與正常對照組相比，慢性嗎啡暴露組大鼠海馬DG區(qū)HCN1總蛋白無明顯變化。結論慢性嗎啡暴露大鼠海馬DG區(qū)HCN1膜表達發(fā)生紊亂，提示HCN1膜表達異?？赡軈⑴c了藥物成癮的海馬病理性突觸可塑性的調(diào)節(jié)。

關鍵詞:慢性嗎啡暴露；齒狀回；HCN通道

基金項目:華中科技大學優(yōu)秀博士創(chuàng)新課題及八年制本科生創(chuàng)新課題資助

T5－13

NMDA受體對嗎啡成癮戒斷后厭惡性情緒記憶的影響及其可能機制

王 芳，王 歡，范書園，高成雙，崔云燕，楊靜玉，吳春福

(沈陽藥科大學生命科學與生物制藥學院藥理系，遼寧沈陽110016)

摘要:目的研究NMDA受體對嗎啡成癮戒斷后厭惡性情緒記憶的影響及可能機制。方法采用腹腔注射遞增劑量嗎啡，納洛酮戒斷建立小鼠條件性位置厭惡(CPA)模型。然后腹腔注射離子型谷氨酸受體NMDA受體拮抗劑MK-801，觀察其對CPA模型不同階段厭惡性情緒記憶的影響。采用Western blot方法測定島葉皮層內(nèi)NR2B，CaMKⅡ-α，CREB，p-CREB，c-Fos以及△FosB蛋白表達?？疾霱K-801對嗎啡成癮戒斷后厭惡性情緒記憶影響的可能機制。結果NMDA受體拮抗劑MK-801對CPA的獲得和表達具有顯著地抑制作用，但對CPA的維持幾乎沒有影響。MK-801對CPA的再學習能力沒有影響。CPA表達階段島葉皮層內(nèi)NR2B，CaMKⅡ-α，p-CREB以及△FosB的蛋白表達顯著升高，MK-801能明顯抑制島葉皮層內(nèi)NR2B，CaMKⅡ-α，p-CREB以及△FosB的蛋白表達。結論谷氨酸NMDA受體參與了嗎啡成癮戒斷后厭惡情緒記憶的獲得和表達，但MK-801對厭惡情緒記憶獲得的抑制并不能影響線索相關的新的厭惡性情緒記憶的建立。島葉皮層內(nèi)NR2B/CaMKⅡ-α/p-CREB/△FosB信號通路參與了CPA厭惡情緒記憶的表達。

關鍵詞:受體，NMDA；嗎啡；成癮

基金項目:遼寧省教育廳杰出青年學者成長計劃(LJQ2012089)；2012年度國家級大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目(201210163022)

T5－14

甲基苯丙胺神經(jīng)興奮性作用新機制

張樹卓?，楊路加?，孫 燕，趙 哲，劉曉燕，魏曉莉，鄭建全

(軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，北京 100850)

摘要:目的探討超極化激活、環(huán)核苷酸門控性離子通道(HCN)與甲基苯丙胺興奮性作用之間的關系。方法采用大鼠海馬腦片和全細胞記錄技術，觀察甲基苯丙胺對神經(jīng)元動作電位發(fā)放和HCN通道的作用。在甲基苯丙胺急性給藥模型上，觀察了甲基苯丙胺對HCN通道表達的影響，以及HCN通道拮抗劑ZD7288對模型動物刻板行為的影響。結果甲基苯丙胺可以增大海馬神經(jīng)元HCN通道電流，并使神經(jīng)元的動作電位發(fā)放頻率明顯增加。HCN通道拮抗劑ZD7288可以逆轉甲基苯丙胺增大HCN通道電流和神經(jīng)元動作電位發(fā)放頻率的興奮性作用。在大鼠腹腔注射甲基苯丙胺急性和亞急性動物模型上，發(fā)現(xiàn)大鼠海馬、前額葉皮質(zhì)、伏隔核、紋狀體等腦區(qū)神經(jīng)元上HCN1通道的表達明顯上調(diào)。側腦室注射ZD7288后，注射甲基苯丙胺的模型動物所表現(xiàn)出的搖頭、轉圈、后退等刻板行為得到明顯改善。結論在甲基苯丙胺引起的中樞興奮性效應中，HCN通道發(fā)揮了重要作用，并與甲基苯丙胺導致的動物刻板行為相關。

關鍵詞:HCN通道；甲基苯丙胺

基金項目:國家自然科學基金青年項目(81100995)；“十二五”國家科技支撐計劃資助項目(2012BAI01B07)；國家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(2012ZX09301003-001)

通訊作者:鄭建全,E-mail:jqzheng2012＠163.com

?共同第一作者.

T5－15

Ⅰ型咪唑啉受體基因敲除動物的建立及對阿片功能調(diào)節(jié)作用

趙太云，張 嶺，王 勃，陳 瑛，姜 蕾，侯 寧，滕 燕，程 萱，吳 寧，蘇瑞斌，楊 曉，李 錦

(軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，北京 100850)

摘要:目的Ⅰ型咪唑啉受體(I1R)是上世紀80年代中期發(fā)現(xiàn)的一個新型受體，具有參與中樞血壓調(diào)節(jié)、激素分泌等功能。本課題組前期研究表明，激活I1R也具有抑制阿片成癮的作用。但由于缺乏作用I1R的特異性配體、沒有合適的細胞模型及模式動物，尚無法對I1R的功能進行精確研究。因此，本文擬建立I1R條件性基因敲除小鼠，并進行表型分析及I1R對阿片功能調(diào)節(jié)作用的研究。方法采用Cre-LoxP系統(tǒng)建立I1R條件性基因敲除小鼠；采用Morris水迷宮、前脈沖抑制、熱板等模型進行神經(jīng)系統(tǒng)相關表型及對阿片功能影響的研究。結果錨定IRAS基因(I1R，Nischarin)的第4外顯子構建了插入LoxP序列的打靶載體，通過電轉小鼠ES細胞、囊胚注射、移植等操作獲得了可條件性剔除I1R基因的打靶小鼠(IRASfloxed/floxed)。將打靶小鼠與EⅡ-Cre小鼠交配得到目的鼠，經(jīng)PCR、RT-PCR、Western blot等方法鑒定得到I1R基因敲除小鼠(IRAS－/－)。表性分析顯示，I1R基因敲除后不影響動物的生殖能力、體溫、自發(fā)活動、神經(jīng)運動功能(抓力、轉棒實驗)、學習記憶(Morris水迷宮實驗)、感覺門控功能(前脈沖抑制實驗)；但是與野生型小鼠相比，IRAS－/－小鼠發(fā)育遲緩、基礎痛域降低，且美沙酮鎮(zhèn)痛作用降低、而促進鎮(zhèn)痛耐受和軀體依賴的形成。結論本文在國際上首次構建了I1R基因敲除小鼠，為精細研究I1R的功能提供了動物模型。利用此模式動物研究揭示I1R參與了生長發(fā)育、痛覺感受、阿片類物質(zhì)鎮(zhèn)痛、耐受、依賴等生物學過程。

關鍵詞:I1咪唑啉受體；條件性基因敲除；表型分析；阿片鎮(zhèn)痛、耐受、依賴

基金項目:國家自然科學基金課題(81102426、30930040)；國家科技支撐計劃課題(2012BAI01B07)

通訊作者:李 錦,E-mail:jinli9802＠163.com

T5－16

甲基苯丙胺對記憶重現(xiàn)能力的影響

陳 圓，董華進，宮澤輝，蘇瑞斌，顏玲娣

(軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，北京 100850)

摘要:目的探討急/慢性給予甲基苯丙胺(MA)對短期/長期記憶重現(xiàn)能力的影響。方法小鼠在Y迷宮中從非安全區(qū)一次性跑到安全區(qū)判為正確，連續(xù)10次電擊中有9次正確為學會標準。以連續(xù)30次電擊可達學會標準為準準入條件，將合格動物隨機分為對照組和藥物組。每天20:00給藥，急性給藥實驗藥物組腹腔注射 MA 1.0，10.0和20.0 mg·kg－1，對照組給予等體積生理鹽水，單次注射；慢性給藥實驗藥物組腹腔注射MA 1.0，5.0和15.0 mg·kg－1，對照組給予等體積生理鹽水，連續(xù)20 d。于末次給藥后的第1，5和10天8:00，通過Y迷宮檢測記憶重現(xiàn)能力，以固定電擊次數(shù)的錯誤率為評價指標。結果急性給予MA的小鼠，與生理鹽水組比較，給藥后第1天，Y迷宮錯誤率無顯著性差異；第5天，1.0 mg·kg－1組和10.0 mg·kg－1組錯誤率顯著增加(P＜0.05)；第10天，20.0 mg·kg－1組錯誤率顯著增加(P＜0.05)。慢性給予MA的小鼠，與生理鹽水組比較，給藥后第1天，Y迷宮錯誤率無顯著性差異；第5、10天，15.0 mg·kg－1組錯誤率顯著增加(P＜0.01)。此外，藥物組動物在行為學實驗程中的一般狀態(tài)，運動速度與里程數(shù)與生理鹽水組無顯著性差異。結論急性/慢性給予MA對短期記憶重現(xiàn)能力無明顯影響，但導致長期記憶重現(xiàn)能力下降。

關鍵詞:甲基苯丙胺；記憶重現(xiàn)能力

基金項目:國家自然科學基金資助項目(81273494, 81200850)

T5－17

Ⅰ型大麻受體真核表達體系構建及其在HEK293細胞中的表達

龍 明1，賴國旗2，封玉玲1，苗加偉1，嚴 磊2，李 晶1(重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W校，重慶萬州 404120；重慶醫(yī)科大學，重慶渝中 400016)

摘要:目的構建人Ⅰ型大麻受體(CB1)基因GV230真核表達質(zhì)粒，并檢測hCB1基因在HEK293細胞中的表達。方法利用人腦皮質(zhì)細胞的總RNA為模板，RT-PCR獲得cDNA，通過酶切、連接及測序鑒定正確后，再將目的片段插入真核表達載體GV230，構建重組表達質(zhì)粒GV230-hCB1，陽性克隆用脂質(zhì)體瞬時轉染HEK293細胞。激光共聚焦掃描顯微鏡(CLSM)和蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測hCB1基因表達產(chǎn)物在細胞的表達情況。結果擴增出hCB1基因片段，通過酶切及測序鑒定證明成功構建了重組表達質(zhì)粒，熒光顯微鏡觀察和Western blot檢測到目的蛋白在轉染細胞中的表達，激光共聚焦顯微鏡觀察到CB1受體在胞膜分布和表達。結論成功構建GV230-hCB1質(zhì)粒，該質(zhì)粒在HEK293細胞中能表達CB1蛋白，此為進一步研究hCB1生物學功能奠定了實驗基礎。

關鍵詞:Ⅰ型大麻受體；基因克??；真核表達

基金項目:重慶市科委前沿與基礎研究一般項目(cstc2014jcyjA1215)；重慶市高校骨干教師資助計劃；重慶市教委自然科學基金項目(KJ111802)；重慶市衛(wèi)生局醫(yī)學科研項目(2012-1-096)；重慶市高等教育教學改革研究重點項目(132128；133309)；重慶萬州區(qū)科技計劃項目(201203055)

通訊作者:李 晶,E-mail:mybestdorthy＠hotmail.com

T5－18

甲基苯丙胺誘發(fā)行為敏化過程中大鼠前額葉皮質(zhì)組蛋白乙酰化修飾及基因轉錄的變化

李 輝，李 斐，吳 寧，蘇瑞斌，李 錦

(軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，北京 100850)

摘要:目的研究甲基苯丙胺誘發(fā)行為敏化大鼠前額葉皮質(zhì)(PFC)基因組組蛋白乙?；揎棥⒒虮磉_的變化，以及組蛋白乙酰化修飾調(diào)控酶的動態(tài)變化，以加深對藥物成癮的表觀遺傳學調(diào)控機制的理解。方法采用mRNA表達譜芯片和組蛋白修飾譜芯片研究mRNA差異表達及組蛋白修飾的改變，采用RT-qPCR和CHIP-qPCR進行驗證，采用RT-qPCR、酶活性分析等方法檢測組蛋白乙?；揎椪{(diào)控酶的變化。結果mRNA表達譜芯片篩選顯示，在甲基苯丙胺處理各階段大鼠PFC共505個基因出現(xiàn)mRNA差異表達；基因功能主要定位于金屬離子結合相關分子、調(diào)節(jié)轉錄分子、染色質(zhì)重塑與DNA結合相關分子、細胞表面受體信號轉導分子、質(zhì)膜相關分子、參與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育分子、細胞凋亡相關分子和癌癥相關分子等七類。組蛋白修飾譜芯片篩選顯示主要變化位點為組蛋白乙酰化，2491個基因啟動子位點H3乙酰化改變，5551個基因啟動子位點H4乙酰化改變；而H3甲基化修飾幾乎不改變，表明在甲基苯丙胺誘發(fā)的行為敏化模型中，主要是組蛋白乙?；瘏⑴c轉錄調(diào)控。mRNA表達芯片中mRNA表達增加基因明顯多于減少基因，而組蛋白修飾譜中H3和H4乙?；揎棾潭纫苍诮o與甲基苯丙胺后顯著增加，提示組蛋白乙?；揎椀脑黾咏閷Щ蜣D錄的活化。經(jīng)驗證，在甲基苯丙胺誘發(fā)行為敏化各階段(單次給藥、形成期、戒斷期、激發(fā)期)，Anp32a和Pou3f2組蛋白修飾與mRNA表達變化較一致，提示這兩個分子的轉錄主要受組蛋白乙?；{(diào)控。另外，PFC的組蛋白乙?；揎椪{(diào)控酶也在行為敏化各階段呈現(xiàn)復雜的動態(tài)變化，組蛋白去乙?；窰DAC1、2(屬于Ⅰ型HDAC)的mRNA含量主要在甲基苯丙胺急性給藥以及形成期慢性給藥后下降，HDAC4、5(屬于Ⅱ型HDAC)則主要是在戒斷(轉化期)和激發(fā)后下降，而HDAC活性的變化是長期給藥后降低，戒斷和激發(fā)后顯著增加；CBP(一種組蛋白乙酰轉移酶)在激發(fā)后mRNA表達量下降。結論在甲基苯丙胺誘發(fā)的行為敏化模型中，大鼠PFC的基因組整體組蛋白乙?；皆黾硬⒔閷掠位虻拈_放表達；而在轉錄上游，甲基苯丙胺通過調(diào)控CBP和HDAC的mRNA表達和活性而動態(tài)調(diào)控組蛋白乙?；?，這些結果提示PFC的組蛋白乙?；揎椏赡茉诩谆奖烦砂a中發(fā)揮重要作用。

關鍵詞:甲基苯丙胺；行為敏化；組蛋白乙?；揎棧唤M蛋白乙酰轉移酶

基金項目:國家科技支撐計劃課題(2012BAI01B07)

通訊作者:李 錦,E-mail:jinli9802＠163.com；蘇瑞斌,E-mail:ruibinsu＠126.com

專題6:睡眠、癲癇與其他神經(jīng)精神疾病

T6－01

State-of-art sleep bioassay systems，from basic research to drug discovery

QU Wei-min

(Department of Pharmacology，Shanghai Medical College of Fudan University，Shanghai200032，China)

Abstract:OBJECTlVEBenzodiazepines and nonbenzodiazepines are often used to treatinsomnia in humans.It is well known that these drugs have many untoward reactions，such as drug dependence，tolerance，rebound insomnia，amnesia and muscle relaxation.Therefore，we need sleep promoting substances that induce physiological sleep withoutsignificantadverse effects. However，lack of animal model limits the development of novel drugs for treating sleep disorders.METHODSWe used sleep bioassay system for rodents and developed insomnia animal models mimicking the pathophysiological characteristics of human insomnia.By combining state-ofart sleep bioassay systems with following technologies，electrophysiology，neurochemistry，molecular biology，immunohistochemistry approaches， and gene knockout mice，we determined the effects of some compounds from natural plants on sleep-wake profiles.RESULTSWe developed insomnia animal models，including psychological and physical stress，dysfunction of neuronal networks of wake-and sleep-promoting neurons，failure in homeostatic regulation of sleep， disruption of the circadian rhythms，first night effect，etc.Furthermore，we found that honokiol，magnolol，crocin，safranal and paeoniflorin promoted physiological sleep judged by EEG power density.CONCLUSlONThese compounds from natural plants promoted physiological sleep，suggesting that they may be suitable for the treatment of insomnia.

Key words:Sleep；Insomnia；Models；Rats；Mice

Foundation item:The project supported by the National Basic Research Program of China(2011CB711000)；and the National Natural Science Foundation of China(31171010，31121061，and 31271164)

Corresponding author:QU Wei-min，E-mail:quweimin＠fudan.edu.cn

T6－02

鉤吻素子對C57BL/6小鼠類風濕關節(jié)炎的治療作用

楊 漸，廖婉婷，曾玉蘭，俞昌喜

(福建醫(yī)科大學藥學院藥理學系，福建福州 350004)

摘要:目的觀察鉤吻素子對Ⅱ型膠原誘導的類風濕關節(jié)炎(CIA)小鼠的治療作用及其與小鼠脾臟CD4＋CD25＋Foxp3＋調(diào)節(jié)性T細胞(Treg細胞)數(shù)量及血清轉化生長因子β(TGF-β)水平的關系。方法雞Ⅱ型膠原和等量完全弗氏佐劑充分乳化后，第1天與第21天分別皮內(nèi)注射于C57BL/ 6小鼠尾根部建立CIA小鼠模型。篩選造模成功的小鼠隨機分為模型組、甲氨蝶呤組和鉤吻素子高、中、低劑量處理組，未免疫小鼠設為對照組；從第23天起，灌胃給予鉤吻素子鉤吻素子0.4，2和10 mg·kg－1，每天1次，連續(xù)10 d。觀察小鼠后足熱縮足反射潛伏期、后足厚度、關節(jié)炎指數(shù)等指標的變化，最后一次灌胃給藥3 h后處死小鼠，采集血清，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測抗CⅡ抗體IgG1以及TGF-β水平；摘取小鼠脾，流式細胞術檢測小鼠脾中CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg細胞所占CD4＋T細胞的百分率；取各組小鼠后足踝關節(jié)，行HE染色觀察。結果與對照組小鼠相比，CIA模型組小鼠出現(xiàn)顯著的關節(jié)腫脹和熱痛敏，關節(jié)炎指數(shù)顯著升高，HE染色顯示后足踝關節(jié)有明顯炎癥細胞浸潤，關節(jié)結構破壞與血管翳形成，血清抗CⅡ抗體IgG1水平顯著升高；鉤吻素子能夠劑量依賴性緩解模型小鼠熱痛敏，減弱關節(jié)腫脹，降低關節(jié)炎指數(shù)，下調(diào)其血清抗CⅡ抗體IgG1的水平，改善模型鼠足踝關節(jié)炎癥細胞浸潤及血管翳的形成，提示鉤吻素子對CIA小鼠具有顯著的治療作用。流式細胞術檢測結果顯示，CIA模型組小鼠脾 CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg/ CD4＋T細胞比值顯著低于對照組，鉤吻素子高劑量組小鼠脾CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg/CD4＋T細胞比值則顯著高于模型組；ELISA檢測結果顯示，與對照組相比，模型組小鼠血清中TGF-β的含量顯著降低，鉤吻素子對之有拮抗趨勢但無顯著意義。結論鉤吻素子對類風濕關節(jié)炎可能具有顯著的治療作用，該作用可能與其上調(diào)脾Treg細胞數(shù)量有關。

關鍵詞:鉤吻素子；類風濕關節(jié)炎；CD4＋CD25＋調(diào)節(jié)性T細胞；轉化生長因子β；C57BL/6小鼠

基金項目:福建省自然科學基金(2012J01367)

通訊作者:俞昌喜,E-mail:changxiyu＠m(xù)ail.fjmu.edu.cn

通訊作者:田俊生,E-mail:jstian＠sxu.edu.cn；秦雪梅, E-mail:qinxm＠sxu.edu.cn

T6－05

T6－03

莫諾苷對血小板聚集鈣離子的影響

艾厚喜，孫芳玲，張 麗，王 文

(首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院藥物研究室，教育部神經(jīng)變性病學重點實驗室，北京市老年病醫(yī)療研究中心，北京 100053)

摘要:目的研究莫諾苷對二磷酸腺苷(ADP)誘導兔血小板聚集后Ca2＋濃度的影響。方法利用Fura-2/AM熒光法，通過記錄5 min之內(nèi)Fura-2在激發(fā)波長340和380 nm處的熒光強度比值檢測不同條件下ADP誘導血小板聚集后Ca2＋的變化。結果與空白對照組相比，莫諾苷能顯著抑制由ADP誘導兔血小板聚集后Ca2＋的升高(P＜0.01)。結論莫諾可能通過降低Ca2＋的上升達到抗ADP誘導的兔血小板的聚集，從而改善體外血液流變學。

關鍵詞:莫諾苷；血小板聚集；鈣離子

T6－04

補中益氣湯干預脾虛證模型大鼠脾1H-NMR代謝組學機制

陳 磊1，2，向 歡3，邢 婕1，田俊生1，秦雪梅1

(山西大學 1.中醫(yī)藥現(xiàn)代研究中心，2.化學化工學院，3.體育學院，山西太原 030006)

摘要:目的應用核磁共振(1H NMR)代謝組學技術結合多元統(tǒng)計分析方法研究脾虛證模型大鼠脾中內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的變化規(guī)律，探討補中益氣湯治療脾虛證的作用機制。方法40只SD大鼠隨機分為空白組、模型組、補中益氣湯高劑量組(生藥量20 g·kg－1)、補中益氣湯中劑量組(生藥量 10 g·kg－1)、補中益氣湯低劑量組(生藥量5 g·kg－1)。除空白組外，均采用大黃灌胃、負荷游泳及隔日禁食的綜合法造模，大黃給藥劑量梯度增加，禁食時間為24 h，游泳負重為體質(zhì)量的5%。復制脾虛證模型14 d后繼續(xù)造模的同時除空白組和模型組ig等量生理鹽水外，其余各組ig相應劑量的補中益氣湯水溶液，每天1次，持續(xù)7 d。觀察補中益氣湯對大鼠體質(zhì)量以及行為活動的影響。實驗結束后收集大鼠脾臟樣本，應用1H-NMR技術結合多元統(tǒng)計分析方法分析大鼠脾臟內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的變化規(guī)律，尋找潛在的生物標志物。結果補中益氣湯能明顯改善脾虛證模型大鼠的體質(zhì)量和行為活動(P＜0.05，P＜0.01)。PLS-DA結果顯示模型組中有5個內(nèi)源性代謝物具有顯著性差異(P＜0.05)，其中乳酸、?；撬帷⒋吸S嘌呤含量升高，而谷氨酸、鯊肌醇含量下降(P＜0.05，P＜0.01)。補中益氣湯干預后能明顯回調(diào)這5個標志物，使之趨向正常。結論本研究依據(jù)中醫(yī)病因發(fā)病理論，對補中益氣湯干預后的脾樣品進行1H-NMR代謝組學研究，為脾虛證的發(fā)病機制及補中益氣湯治療脾虛證的作用機制研究提供科學的實驗依據(jù)。

關鍵詞:補中益氣湯；脾虛證；代謝組學

基金項目:國家自然科學基金項目(81102833, 81173366,31070295)

代謝組學研究葡萄籽提取物對人體尿液中代謝產(chǎn)物的影響

田俊生1，向 歡2，彭國茳1，吳麗君2，秦雪梅1

(山西大學1.中醫(yī)藥現(xiàn)代研究中心，2.體育學院，山西太原030006)

摘要:目的采用1H-NMR代謝組學技術研究口服葡萄籽提取物(GSE)后人體尿液中內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的變化規(guī)律，為探討葡萄籽原花青素干預對人體代謝產(chǎn)物的影響機制的研究提供科學依據(jù)。方法選擇16名健康男生隨機平均分成2組，即試食組(A)和對照組(B)。試食組每人每天口服GSE軟膠囊2粒，連續(xù)14 d，對照組連續(xù)服用安慰劑14 d。分別收集試食組及對照組服藥前(0 d)和服藥后(14 d)的晨尿，運用核磁共振(1H-NMR)代謝組學技術分析尿液中內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的變化及其規(guī)律。結果通過尿液核磁典型圖譜中指認出24個代謝物，主要包括氨基酸、有機酸等。PLS-DA結果顯示，與對照組相比，服藥14 d后，試食組人體尿液中乳酸水平下降，肌酐水平上升，且具有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)。結論GSE對人體尿液中內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的調(diào)節(jié)作用顯著，涉及能量代謝、脂質(zhì)代謝以及氨基酸代謝等，是一種很好的運動營養(yǎng)補充劑。

關鍵詞:代謝組學；葡萄籽提取物；尿液；核磁共振；代謝產(chǎn)物

基金項目:國家自然科學基金項目(81102833)；山西省基礎研究項目(2012021031-2)

通訊作者:秦雪梅,E-mail:qinxm＠sxu.edu.cn

T6－06

龍膽苦苷抗炎癥作用和機制研究進展

魏仁平，孫芳玲，艾厚喜，張 麗，王 文

(首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院藥物研究室，教育部神經(jīng)變性病學重點實驗室，北京市老年病醫(yī)療研究中心，北京 100053)

摘要:龍膽苦苷是龍膽科龍膽屬植物龍膽的有效成分之一，屬于裂環(huán)環(huán)烯醚萜類，主要從龍膽和秦艽中提取。其中，秦艽為龍膽科龍膽屬植物，據(jù)《本草正義》記載秦艽是“風家潤藥”，具有“祛風除濕、活血舒筋”的藥理作用，常配伍治療關節(jié)疼痛。龍膽苦苷是秦艽提取物中的主要成分，有研究證實其具有一定的抗炎作用。在近年的醋酸扭體法和熱板法實驗中發(fā)現(xiàn)了龍膽苦苷的新的適應癥-關節(jié)炎，對急、慢性炎癥反應均有一定的抑制作用。其藥理機制可能涉及對多種炎癥介質(zhì)的抑制。有研究發(fā)現(xiàn)，在CFA大鼠佐劑模型中，給予龍膽苦苷治療的大鼠血清中的白介素1(IL-1)和腫瘤壞死因子(TNF-α)含量要比模型動物血清中的含量要低，表明龍膽苦苷的免疫調(diào)節(jié)作用是通過調(diào)控TNF-α和IL-1炎癥介質(zhì)來實現(xiàn)的。本課題組前期研究也表明其能抑制MPP＋誘導人神經(jīng)母細胞瘤細胞IκBα降解，抑制NF-κB炎癥信號通路的激活，降低通路相關產(chǎn)物TNF-α和IL-1β的表達水平，提示龍膽苦苷可以神經(jīng)炎癥為靶點，對PD的預防和治療可能具有一定的潛在價值。

關鍵詞:龍膽苦苷；抗炎癥

T6－07

水平臺法制備睡眠剝奪模型的影響因素考察及刺五加總苷的改善作用

郭冷秋1，王 琦2，梁 睿1，劉竟天1

(1.蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術學院藥學院，江蘇蘇州 215009；2.黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院，黑龍江哈爾濱 150040)

摘要:目的尋找有效對抗睡眠剝奪的藥物。方法本研究首先對改良多平臺水環(huán)境法制備快動眼睡眠剝奪模型的影響因素進行分析:雄性 Wistar大鼠，選取體質(zhì)量(190±30)g，(250±30)g和(310±30)g與睡眠剝奪時間(1，3和5 d)為影響因素，利用正交實驗設計，在睡眠剝奪結束后的12 h內(nèi)進行皮層腦電的描記與分析，闡明實驗動物的體質(zhì)量與睡眠剝奪時間對睡眠剝奪模型制備效果的影響。在確定睡眠剝奪模型最佳制備方法的基礎上，觀察刺五加總苷對睡眠剝奪大鼠恢復期睡眠狀態(tài)的影響。結果體質(zhì)量為(190±30)g，(250±30)g和(310±30)g的大鼠睡眠剝奪3或5 d后，恢復期的睡眠總時間(TST)、非快動眼睡眠(NREMS)和快動眼睡眠(REMS)與睡眠剝奪前相比均具有明顯增加，差異具有顯著性(P＜0.01)；由正交實驗結果分析表明:體質(zhì)量這一因素中，(250±30)g為優(yōu)水平；睡眠剝奪時間這一因素中，睡眠剝奪3 d為優(yōu)水平。與空白對照組相比，刺五加總苷按5.6 g·kg－1劑量連續(xù)灌胃給藥7 d后對睡眠剝奪大鼠恢復期睡眠TST，REM和NREM均有明顯縮短作用，差異具有顯著性(P＜0.01)。結論實驗動物的體質(zhì)量與睡眠剝奪時間對水平臺法大鼠睡眠剝奪模型的制備有顯著的影響:以雄性Wistar大鼠在體質(zhì)量(250±30)g、連續(xù)睡眠剝奪3 d的條件下復制的模型較為理想。刺五加總苷對睡眠剝奪后恢復期延長的TST，NREMS和REMS均具有顯著的改善作用。

關鍵詞:睡眠剝奪；模型；刺五加總苷；快動眼睡眠

T6－08

基于海馬神經(jīng)元CaMKⅡ相關信號紊亂的自閉癥發(fā)病機制

吳 剛1，田 允1，盧應梅2，韓 峰1

(浙江大學1.藥學院藥理毒理與生化藥學研究所，浙江杭州 310058；2.城市學院，浙江杭州 310015)

摘要:目的利用BTBR T＋tf/J自閉癥模型，以突觸蛋白鈣離子/調(diào)素依賴性蛋白激酶(CaMKⅡ)相關信號為切入點研究其相關發(fā)病機制。方法利用曠場實驗、社會交往實驗、高架十字迷宮、震驚/前脈沖抑制實驗等考察BTBR T＋tf/J自閉癥模型小鼠行為學改變；利用Western blotting考察海馬神經(jīng)元CaMKⅡ/Synapsin/GluR1相關信號通路的蛋白表達變化。結果行為學顯示，BTBR T＋tf/J小鼠在曠場中央?yún)^(qū)時間減少，在高架十字迷宮開放臂中滯留時間百分比降低，提示該模型動物畏懼開闊、未知，探索性差，趨避性嚴重；在社會交往實驗中，BTBR T＋tf/J小鼠社交時間明顯縮短，對新伙伴的興趣和探索性明顯降低，提示該模型動物對新事物的學習和接受能力下降；在震驚/前脈沖抑制實驗中PPI減小，驚反射幅度降低，說明該動物反射調(diào)節(jié)和感覺運動門控異常，具有嚴重認知障礙。Western blotting結果顯示，BTBR T＋tf/J自閉癥模型海馬神經(jīng)元中CaMKⅡ/ Synapsin/GluR1相關通路蛋白在總蛋白含量不變的情況下，Phospho-CaMKⅡ(Thr286)，Phospho-SynapsinⅠ(Ser603)， Phospho-GluR1(Ser831)，Phospho-NR1 (Ser896)表達均有明顯降低。結論海馬CaMKⅡ相關信號紊亂與自閉癥病理改變密切相關，關聯(lián)深入研究將為預防和治療自閉癥的新靶點發(fā)現(xiàn)和新藥研發(fā)提供實驗依據(jù)。

關鍵詞:自閉；海馬；BTBR；CaMKⅡ；Synapsin；GluR1

通訊作者:韓 峰,E-mail:changhuahan＠zju.edu.cn

T6－09

AMPA受體調(diào)節(jié)劑LCX001對抗阿片類藥物致呼吸抑制的藥效學研究

高 翔，雍 政，宮澤輝，蘇瑞斌

(軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，北京 100850)

摘要:目的評價AMPA受體調(diào)節(jié)劑LCX001對阿片類藥物致呼吸抑制的對抗作用。方法觀察LCX001對阿片類藥物030418(本所合成)與嗎啡致小鼠急性死亡的對抗效果；利用清醒無創(chuàng)大鼠肺功能描記儀測定 LCX001對030418致呼吸抑制大鼠肺功能參數(shù)的影響；檢測LCX001對030418及Carfentanil致呼吸抑制大鼠動脈血氣參數(shù)的影響。結果LCX001能使030418致小鼠死亡的LD50由6.77 mg·kg－1提高至 17.08 mg·kg－1，嗎啡致小鼠死亡的LD50由309.12 mg·kg－1提高至415.20 mg·kg－1。肺功能參數(shù)測定顯示，與基礎值水平相對比，030418所致呼吸頻率為36.1%，通氣量為56.6%，呼吸氣道阻力為689.8%，LCX001治療后呼吸頻率恢復至72.9%，通氣量為100.4%，呼吸氣道阻力為 227.3%。血氣檢測結果顯示，正常大鼠基礎值95 mmHg，給予 030418后，pO2迅速下降至37 mmHg，LCX001治療后恢復至74 mmHg；給予Carfentanil后，pO2迅速下降至約35 mmHg；LCX001治療后恢復至67 mmHg。結論LCX001能夠顯著對抗阿片類藥物引起的呼吸抑制致死，且成劑量依賴關系；提高呼吸抑制后的呼吸頻率與通氣量水平，同時緩解氣道阻力，改善有效呼吸抑制；LCX001能夠顯著對抗阿片類藥物引起pO2降低。LCX001有望成為一類全新全新靶點的抗阿片類致呼吸抑制藥物。

關鍵詞:AMPA受體調(diào)節(jié)劑；阿片類藥物；呼吸抑制

專題7:神經(jīng)生長因子

T7－01

神經(jīng)生長因子基礎與臨床應用研究進展

徐江平，汪海濤，程玉芳

(南方醫(yī)科大學藥學院神經(jīng)精神藥理學科，廣東 廣州510515)

摘要:神經(jīng)生長因子(NGF)是于1953年由Rita Levi-Montalcini發(fā)現(xiàn)并且鑒定出來的首個神經(jīng)營養(yǎng)因子，也是目前研究最為透徹，由神經(jīng)元、神經(jīng)支配的靶組織或膠質(zhì)細胞產(chǎn)生的能促進中樞和外周神經(jīng)分化、生長和存活的活性蛋白質(zhì)，它們在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和正常生理功能維持中起著重要作用。NGF及其受體主要分布于神經(jīng)系統(tǒng)，也廣泛分布在如上皮、間葉及淋巴造血組織等非神經(jīng)組織。NGF受體包括:①酪氨酸激酶受體TrkA:成熟NGF的高親和力受體，通過PI3K-Akt，Ras-MAPK和(PLC-γ1)等途徑，促進神經(jīng)存活和軸突生長、減少受損神經(jīng)元細胞死亡。② 腫瘤壞死因子受體p75:成熟NGF的低親和力受體，通過與TrkA受體的共表達來激活神經(jīng)酰胺、NF-κB，促進神經(jīng)存活和軸突生長，亦可通過JNK通路促進細胞凋亡。NGF的生理功能為:①在神經(jīng)系統(tǒng)，NGF能在運動、交感、感覺性軸突中逆行運輸，從而發(fā)揮其對運動、交感、感覺神經(jīng)元的促神經(jīng)突起生長和神經(jīng)營養(yǎng)作用。②在非神經(jīng)系統(tǒng)，NGF主要表現(xiàn)在影響免疫細胞的活性，進而調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能，促進炎性反應趨化作用；促進新血管形成；促進皮膚和肺的成纖維細胞的修復等方面。動物藥代動力學研究顯示，小鼠靜脈注射NGF，分布相半衰期為0.13 h，消除相半衰期為3.68 h。小鼠肌內(nèi)注射NGF消除相半衰期分別為4.5 h。肌內(nèi)注射NGF生物利用度約為52.7%。NGF肌內(nèi)注射后，在腎、胃、腸中性濃度最高，心、肝、肺、肌肉、脾次之，腦和脊髓最少。小鼠肌內(nèi)注射NGF以尿排泄為主，48 h經(jīng)尿排出量占給藥量65.5%，前10 h排出34%，前24 h排出59%。48 h經(jīng)糞排出7.9%，48 h經(jīng)糞尿排出73.4%，注射部位殘留15.2%。美國基因泰克(Genentech)公司開展的Ⅰ期臨床試驗顯示，NGF劑量大于0.1 μg·kg－1時出現(xiàn)輕到中度肌肉痛(主要是背部肌肉痛)及注射部位疼痛，女性更敏感；NGF制成滴眼劑局部應用時，74例健康受試者中，循環(huán)血液內(nèi)NGF的值與對照組沒有差異；隨機、雙盲、對照的Ⅱ期臨床試驗顯示hNGF顯著改善HIV感染相關的周圍神經(jīng)病理性疼痛及糖尿病相關的周圍神經(jīng)病變，最常見的不良反應為注射部位疼痛及肌肉痛，注射部位疼痛可持續(xù)到給藥后10～20 d；多中心、隨機、雙盲、對照的Ⅲ期臨床試驗顯示NGF不能顯著改善糖尿病相關的周圍神經(jīng)病變，根據(jù)艾伯特愛因斯坦醫(yī)學院Apfel博士(Ⅲ期臨床試驗學術主持)分析，原因可能在于:①對照組選擇失誤；②對于有效性來說，Ⅲ期臨床試驗劑量過低；③治療組患者人群選擇；④Ⅲ期試驗中使用的新重組神經(jīng)生長因子與Ⅱ期試驗中醋酸和氯化鈉的濃度不同，制劑的濃度也略有改變，試驗用制劑不穩(wěn)定。通過重新設計臨床試驗，即:選擇合適對照組；提高NGF劑量；選擇合適治療組患者人群；獲得穩(wěn)定的制劑處方。通過以上改進，預期能夠得到滿意的治療效果。目前獲批上市的NGF的適應癥為:用于促進神經(jīng)損傷恢復，用于治療視神經(jīng)損傷(蘇肽生、麗康樂)；通過促進神經(jīng)損傷恢復，用于治療正己烷中毒性周圍神經(jīng)病(恩經(jīng)復、金路捷)。預期NGF在眼科疾病(急性和遷延性視神經(jīng)、視神經(jīng)萎縮、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、手術或變性損傷、青光眼、角膜潰瘍等)、神經(jīng)外科(顱腦損傷、脊髓損傷；脊髓移植)、神經(jīng)內(nèi)科(急性腦血管性中樞神經(jīng)損傷、腦萎縮、帕金森病、癡呆、重癥肌無力、多發(fā)性硬化、亨廷頓舞蹈癥等疾病)、骨科(四肢神經(jīng)損傷、坐骨神經(jīng)損傷、神經(jīng)斷裂及退行性病變)、兒科(新生兒缺血缺氧性腦病、小兒腦癱、腦炎后遺癥)等方面有廣泛的應用。

關鍵詞:神經(jīng)生長因子；受體；臨床治療

T7－02

鼠神經(jīng)生長因子對糖尿病大鼠皮膚損傷的促愈合作用

程玉芳，汪海濤，袁 欣，甘丹娜，徐江平

(南方醫(yī)科大學藥學院神經(jīng)精神藥理學科，廣東 廣州510515)

摘要:目的探討鼠神經(jīng)生長因子(mNGF)是否具有促進糖尿病皮膚損傷愈合的作用。方法采用腹腔注射鏈脲佐菌素的方法建立糖尿病(I型)大鼠模型，分別用皮膚切割性創(chuàng)傷(清潔創(chuàng)面)和燙傷(有腐爛組織創(chuàng)面)兩種方法造成皮膚損傷。肌內(nèi)注射給予mNGF治療，于創(chuàng)面形成當日開始治療，每天1次，連續(xù)21 d。陽性對照藥為重組人酸性成纖維細胞生長因子，給藥方法與周期同mNGF。比較創(chuàng)傷面積的愈合情況、速度和皮膚病理學(成纖維細胞、毛細血管的增生等)的變化。結果mNGF對糖尿病大鼠皮膚切割性損傷的治療效果:由于傷口本身的愈合速度較快，治療組與糖尿病模型組在治療后同時間點比較，創(chuàng)面面積僅在治療后3～10 d其絕對值略有降低，但無統(tǒng)計學顯著意義。傷口形成21 d以后，治療組與模型組的傷口愈合率均在80%以上(陽性對照組達90.1%)。皮膚病理學表明mNGF促進創(chuàng)面纖維細胞和毛細血管的形成仍有較明顯的效應。經(jīng)21 d治療后，與治療前比較，皮膚燙傷大鼠模型對照組傷口面積縮小61%。由于皮膚燙傷模型對照組創(chuàng)面愈合速度較慢，則治療組大鼠皮膚愈合速度明顯高于模型對照組。從治療第7天開始，治療組大鼠創(chuàng)面較模型對照組明顯縮小，隨著治療時間的延長，差別也越明顯，且在mNGF低、中、高三個劑量組之間存在明顯的量效關系，說明mNGF肌內(nèi)注射對糖尿病大鼠皮膚燙傷有顯著地促愈合作用。將皮膚組織切片并經(jīng)HE染色后進行病理分析，采用半定量化評分對成纖維細胞、纖維細胞、膠原纖維和毛細血管的增生情況進行評價，mNGF均有明顯地促進受損皮膚纖維細胞和毛細血管的增生作用。結論mNGF對糖尿病的皮膚損傷有促修復作用，可促進創(chuàng)面愈合，縮短愈合周期，有利于皮膚成纖維細胞和毛細血管的增生。

關鍵詞:鼠神經(jīng)生長因子；糖尿?。黄つw損傷

T7－03

神經(jīng)生長因子抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激促進大鼠脊髓損傷功能恢復的機制

鄔芬贊1，程 藝2，葉麗冰2，張宏宇2，魏曉捷1

(1.溫州醫(yī)科大學附屬慈溪人民醫(yī)院，浙江慈溪 315300；2.溫州醫(yī)科大學藥學院，浙江溫州 325035)

摘要:目的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激介導的細胞凋亡在各種疾病中起著非常重要的作用，其中包括脊髓損傷(SCI)。研究表明神經(jīng)生長因子(NGF)具有神經(jīng)保護作用，可以促進脊髓損傷恢復，但是其具體機制尚不明確。方法手術暴露成年雌性SD大鼠脊柱，用血管夾夾閉大鼠T9段制作輕度挫傷模型。0.9%生理鹽水稀釋神經(jīng)生長因子原液，并尾靜脈注射20 μg·kg－1·d－1給藥，直到1，3，7和14 d處死。采用BBB評分、斜扳試驗、腳步印跡等行為學檢測方法分析脊髓損傷大鼠后肢運動功能變化。此外，應用Western blot檢測體內(nèi)外內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關蛋白CHOP、GRP78及胱天蛋白酶12的表達水平。體內(nèi)用TUNEL凋亡試劑盒檢測細胞凋亡率，體外水平采用流式細胞儀檢測細胞凋亡水平，同時用相關抑制劑分析下游信號通路Akt/GSK-3β和ERK1/2的變化。結果實驗結果顯示大鼠脊髓損傷后有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激介導的細胞凋亡的發(fā)生，神經(jīng)生長因子給藥可以促進大鼠運動功能的恢復，增加脊髓損傷區(qū)域神經(jīng)元細胞的存活。用TUNEL檢測顯示，神經(jīng)生長因子抑制神經(jīng)元細胞的凋亡及胱天蛋白酶3凋亡因子的表達，抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激介導的凋亡反應蛋白CHOP、GRP78及胱天蛋白酶12的表達，同時神經(jīng)生長因子增加生長相關蛋白GAP43的表達。體外檢測發(fā)現(xiàn)，給予NGF后下游信號通路Akt/GSK-3β和ERK1/2被激活。結論大鼠脊髓損傷后，神經(jīng)生長因子的神經(jīng)保護作用與激活下游信號通路，抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激介導的細胞凋亡有關，從而為神經(jīng)生長因子通過調(diào)節(jié)慢性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激，治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)性疾病藥物開發(fā)提供依據(jù)。

關鍵詞:神經(jīng)生長因子；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激；脊髓損傷；細胞凋亡；Akt/GSK-3β；ERK1/2

基金項目:浙江省自然科學基金項目(LY14H090013)；國家自然科學基金項目(81200958)

T7－04

表皮生長因子抑制Gsk3β的活性促進血脊髓屏障恢復的機制

周玉龍1，鄭彬彬1，朱思品1，肖 健2，徐華梓1

(1.溫州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院脊柱外科，溫州 浙江325035；2.溫州醫(yī)科大學藥學院，溫州浙江 325035)

摘要:目的探討大鼠脊髓損傷表皮生長因子(EGF)在時通過抑制Gsk3β的活性減少血脊髓屏障的滲透性發(fā)揮神經(jīng)保護性作用。方法采用NYU脊髓打擊器構建SCI模型，選用200～250 g SD大鼠在T9的水平用200 kdy的力進行打擊，實驗分為空白對照組，脊髓損傷組，EGF給藥組，LY294002抑制劑組。1 d后尾靜脈注射Evans藍檢測各組BSCB的通透性，蛋白印跡和免疫熒光檢測各組緊密連接蛋白和p-Gsk3β的表達情況。仿造脊髓損傷缺血缺氧的特點，對人源型腦微血管內(nèi)皮細胞進行糖氧剝奪構建體外模型，并用Gsk3β抑制劑和 siRNA驗證 EGF是通過 PI3K-Akt-Gsk3β信號通路來影響B(tài)SCB的滲透性和緊密連接蛋白的表達。結果EGF在脊髓損傷1 d后能減少EB的滲透率，上調(diào)緊密連接蛋白的表達，這一現(xiàn)象被 Gsk3β激活劑LY294002所抑制，同時在體外模型中EGF也能夠促進內(nèi)皮細胞間緊密連接蛋白的表達減少內(nèi)皮細胞間的滲透率。結論脊髓損傷時EGF通過抑制Gsk3β的活性，促進緊密連接蛋白的表達，減少血脊髓屏障的通透性，促進脊髓損傷的恢復。

關鍵詞:堿性成纖維細胞生長因子；血脊屏障；緊密連接蛋白；黏附蛋白；Gsk3β

基金項目:浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生平臺計劃重點項目(2014ZDA017)；浙江省自然科學基金項目(LY14H1700)

T7－05

堿性成纖維細胞生長因子對MCAO后血腦屏障損傷的修復作用及其機制

夏清海，楊 穎，葉晶晶，朱晶晶，張 超，肖 健

(溫州醫(yī)科大學藥學院，浙江溫州 325035)

摘要:目的探討堿性成纖維細胞生長因子對中動脈閉塞模型(MCAO)后血腦屏障損傷的修復作用及其可能機制。方法建立大鼠大腦MCAO，缺血后立即腹腔注射重組bFGF蛋白，麻醉清醒24h后神經(jīng)學功能評分、TTC染色觀察梗死面積、伊文思藍法觀察BBB通透情況。造模24 h后，運用Western blot實驗技術檢測大鼠大腦皮質(zhì)和海馬中ZO-1、閉合蛋白、密封蛋白 5、β-鏈蛋白、P120-鏈蛋白和p-FGFR等蛋白的表達變化。運用免疫熒光組織化學的方法觀察在MCAO模型中bFGF給藥后ZO-1、閉合蛋白和密封蛋白5的表達變化。結果bFGF對MCAO后大鼠神經(jīng)學功能損傷有修復作用，TTC染色及伊文思藍染色顯示bFGF能減少MCAO后大鼠大腦的缺血性損傷。免疫熒光結果顯示，bFGF能提高MCAO模型中ZO-1、閉合蛋白和密封蛋白5的表達。Western blot結果顯示bFGF能抑制MCAO模型中大鼠大腦皮質(zhì)和海馬中ZO-1、閉合蛋白、密封蛋白5、β-鏈蛋白和P120-鏈蛋白表達量的減少。結論bFGF可能通過增加血腦屏障中黏附分子的表達，來修復中動脈閉塞造成的血腦屏障的破壞，發(fā)揮神經(jīng)保護的作用。

關鍵詞:堿性成纖維細胞生長因子；血腦屏障；黏附因子；閉合蛋白；密封蛋白

基金項目:國家自然科學基金(81200958)；浙江省蛋白藥物科技創(chuàng)新團隊(2010R50042)

Persistent nociception induces anxiety and depression-like behaviors in rats:role of the HCN channel

YANG Lu-jia，ZHANG Shu-zhuo，SUN Yan，LIU Xiao-yan，LI Jin，ZHENG Jian-quan

(Institute of Pharmacology and Toxicology，Academy of Military Medical Sciences，Beijing 100850，China)

OBJECTlVETo explore the relationship between hyperpolarization-activated cyclic nucleotidegated channels(HCN)and the comorbid neuropathic pain and mental disorder.METHODSRat spared nerve injury (SNI)model was setup and ZD7288，an antagonist of HCN channel，was administrated by intracerebroventricular injection.The touch threshold and paw withdrawallatency of SNI rats were measured.The open field，elevated plus maze and forced swimming test were performed.The expression level of HCN channel was tested.RESULTSAfter SNI surgery，the pain threshold and paw withdrawal latency decreased.The expression level of HCN was increased in hippocampus and thalamus.ZD7288 (5 μg·kg－1)could increase the touch threshold significantly and partial ameliorate anxiety as well as depression like behavior.CONCLUSlONZD7288 plays an analgesic effect and ameliorate anxiety as well as depression like behaviors in SNI rats by blocking HCN channels.HCN channel is possibly involve in the comorbid neuropathic pain and mental disorder.

neuropathic pain； HCN channel；ZD7288；anxiety；depression

HUANG Zhi-li， E-mail: huangzl＠fudan.edu.cn

福建省自然科學基金(81273493)

俞昌喜,E-mail:changxiyu＠m(xù)ail.fjmu.edu.cn