/李金海（四川農業(yè)大學動物醫(yī)學院豬病研究中心，四川雅安 625014），李興玉，曹三杰…//中國人獸共患病學報.-2013，29（4）.-380～384，407

目的建立一種能快速、高效、敏感、特異地檢測口蹄疫病毒（FMDV）的一步法熒光定量RT-PCR檢測方法。方法根據(jù)FMDV聚合酶3D基因序列比對結果，設計特異性引物和MGB探針；通過優(yōu)化，得到最佳反應體系和反應條件；分別以質粒和病毒RNA為模板，構建標準曲線；并進行特異性、敏感性、重復性試驗。結果該方法能特異性檢測A型、O型、Asia 1型FMDV，而對豬瘟、豬藍耳病、豬圓環(huán)病毒、豬細小病毒、豬狂犬病毒、豬乙型腦炎等病原檢測結果均為陰性；構建的熒光定量標準曲線Ct值與模板濃度呈良好的線性關系，檢測質粒的敏感性可達83.4copies/μL，檢測病毒RNA的敏感性可達7.1fg/μL，比多重RT-PCR敏感性高10倍；對4份樣品進行5次批內和批間重復檢測，檢測結果變異系數(shù)均小于2%。結論建立的口蹄疫病毒一步法TaqMan-MGB熒光定量RT-PCR檢測方法特異性強、敏感性高、重復性好，可用于口蹄疫臨床樣品診斷、流行病學調查和畜產品安全監(jiān)測。