胡旭光 戴王強(qiáng) 南海軍 黃嗣航 王紅剛

中藥外治法實(shí)驗(yàn)研究方法探析

胡旭光 戴王強(qiáng) 南海軍 黃嗣航 王紅剛

中藥外治療法歷史悠久, 然其基礎(chǔ)研究相對(duì)滯后。目前研究多集中在中藥外治的臨床研究,但對(duì)中藥外治法的實(shí)驗(yàn)研究相對(duì)薄弱。本文圍繞中藥外治的安全性評(píng)價(jià)、療效評(píng)價(jià)和外治中藥透皮吸收等多方面作了探討, 并對(duì)其進(jìn)行評(píng)述, 為中藥外治法及外用中藥研究提供新的研究手段和方法。

中藥外治法；實(shí)驗(yàn)；方法

中醫(yī)外治法, 特別是中藥外治法具有簡(jiǎn)便、有效, 無(wú)胃腸道及肝腎損傷等毒副作用, 深受廣大患者的喜愛(ài)［1］。近年來(lái), 中藥外治法的現(xiàn)代研究主要集中在臨床應(yīng)用和療效觀察方面, 但對(duì)中藥外治法的實(shí)驗(yàn)研究相對(duì)薄弱, 特別是中藥外治的安全性評(píng)價(jià)、藥物的吸收(透皮吸收)、作用機(jī)理研究少且不夠深入, 這都影響中藥外治法的推廣及外治中藥新劑型的發(fā)展, 因此亟待加強(qiáng)中藥外治法的基礎(chǔ)研究。

現(xiàn)就中藥外治法實(shí)驗(yàn)方法, 包括中藥外治的安全性與透皮吸收, 藥效研究動(dòng)物模型、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目及藥效評(píng)價(jià)指標(biāo)等進(jìn)行概述和分析, 為闡明和發(fā)展中藥外治法提供參考。

1 中藥外治法安全性評(píng)價(jià)

根據(jù)中藥、天然藥物毒性研究的技術(shù)指導(dǎo)原則［2］, 安全性評(píng)價(jià)需進(jìn)行急性毒性、刺激性、過(guò)敏性實(shí)驗(yàn)。以下刺激性和致敏性實(shí)驗(yàn)做以介紹和評(píng)價(jià)。

1.1刺激性實(shí)驗(yàn)

1.1.1一次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn) 正常皮膚實(shí)驗(yàn)：取新西蘭大白兔, 硫化鈉脫毛。破損皮膚刺激實(shí)驗(yàn)：在用藥部位用注射針頭劃成“井”字并以滲血為度。將受試藥物直接涂于一側(cè)已去毛的皮膚上, 另一側(cè)涂賦形劑作對(duì)照。給藥時(shí)間為6 h, 給藥后用溫水清潔給藥部位。

1.1.2多次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn) 給藥方法按照一次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行, 每天在相同時(shí)間內(nèi)給藥, 連續(xù)7 d。

1.1.3觀察指標(biāo) 在自然光下觀察皮膚反應(yīng), 以紅斑、水腫的程度, 按技術(shù)指導(dǎo)原則［2］評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1.2過(guò)敏性試驗(yàn) 將豚鼠于給藥前24 h用硫化鈉脫毛, 將受試藥物涂抹于豚鼠脫毛區(qū), 6 h后去掉覆蓋物, 去掉受試藥物, 再分別于第7 d和第14 d以同樣方法各重復(fù)1次。于末次給受試物致敏后14 d, 將受試藥物涂于相對(duì)應(yīng)動(dòng)物的右側(cè)脫毛區(qū), 6 h后去掉受試物, 即刻觀察, 然后于24、48、72 h再次觀察皮膚過(guò)敏反應(yīng)情況。按照技術(shù)指導(dǎo)原則［2］中《皮膚過(guò)敏反應(yīng)程度的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)》評(píng)價(jià)。

1.3方法評(píng)述 上述方法僅通過(guò)肉眼觀察藥物的刺激性和致敏性, 以接觸部位的紅斑、水腫情況積分, 受外界因素影響較大, 如：受試動(dòng)物對(duì)藥物的敏感度；藥物本身的刺激性,特別是中藥起效和刺激性產(chǎn)生一般較緩慢, 且輕微、從而引起潛在刺激性不容易被觀察到, 易導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在較大誤差。因此, 對(duì)外用制劑的刺激性和致敏性評(píng)價(jià), 需要尋找一些更為客觀的評(píng)價(jià)指標(biāo), 如小鼠耳廓刺激性實(shí)驗(yàn), 能更準(zhǔn)確的反應(yīng)外用制劑的作用［3］。

2 中藥外治的透皮研究

目前對(duì)促滲透劑的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用研究成為研究熱點(diǎn), 包括傳統(tǒng)的化學(xué)促滲透劑如氮酮, 中藥促滲透劑主要是含有揮發(fā)性成分的芳香性藥物如薄荷、細(xì)辛 、丁香、桂枝等。因此選用合適的透皮動(dòng)物模型和檢測(cè)方法至關(guān)重要。

2.1模型動(dòng)物 一般采用兔子的皮膚, 近年來(lái)發(fā)現(xiàn)裸小鼠更適合透皮的研究。裸小鼠由于全身無(wú)毛, 其皮膚結(jié)構(gòu)功能與人皮膚很接近, 因此常被用來(lái)進(jìn)行藥物的透皮試驗(yàn)［4］。

2.2研究方法 ①采用離體兔皮或裸鼠皮膚, 在改良的Franz 擴(kuò)散池進(jìn)行, 以有效成分累積透皮百分率為測(cè)定指標(biāo),高效液相色譜法或紫外分光法測(cè)定含量, 研究中藥外用制劑透皮速度、透皮百分率及皮膚儲(chǔ)庫(kù)效應(yīng)［5-6］。②采用在體裸鼠或大鼠, 應(yīng)用經(jīng)皮微透析實(shí)驗(yàn)手段研究藥物經(jīng)皮吸收和代謝狀況。如蔡郁等［7］以經(jīng)皮微滲析技術(shù)研究芍藥苷大鼠經(jīng)皮吸收, 認(rèn)為經(jīng)皮微滲析技術(shù)是在體研究藥物經(jīng)皮滲透性的有效手段。

2.3方法評(píng)述 目前研究藥物經(jīng)皮吸收常采用離體皮膚的Franz擴(kuò)散池法, 但該法缺乏主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程, 隨著時(shí)間的延長(zhǎng),離體皮膚的活性越來(lái)越差, 與在體皮膚有很大區(qū)別, 故不能充分反映藥物在體內(nèi)的真實(shí)過(guò)程；另一方面, Franz 擴(kuò)散池法考察的是透過(guò)皮膚的藥物量, 而皮膚藥動(dòng)學(xué)考察的是保留在皮膚中的藥物濃度變化, 因此Franz 擴(kuò)散池法難以反映藥物在皮膚內(nèi)的代謝過(guò)程［8］。體內(nèi)皮膚藥物代謝實(shí)驗(yàn)有在體經(jīng)皮微透析實(shí)驗(yàn)等, 可作為藥物經(jīng)皮吸收和代謝體內(nèi)外相關(guān)性研究的一種有效工具。然而, 這些方法也存在操作復(fù)雜繁瑣、技術(shù)要求高的缺點(diǎn)［9］。

3 中藥外治的藥效研究探索

對(duì)外治中藥的藥效研究, 首先根據(jù)研究病種, 選用相應(yīng)的動(dòng)物模型, 然后采用多指標(biāo)、多實(shí)驗(yàn)儀器手段研究藥物的作用和機(jī)制。如體表穴區(qū)貼敷活血類膏劑治療關(guān)節(jié)、肌肉等疼痛的研究, 除采用常用的鎮(zhèn)痛、抗炎、抗凝血、抗血栓指標(biāo)外, 還可觀察動(dòng)物皮膚組織血管形態(tài)、血管計(jì)數(shù)和肥大細(xì)胞形態(tài)和數(shù)量的變化, 以了解該藥物對(duì)組織微循環(huán)血流的作用［10］。同時(shí)應(yīng)用激光多普勒微循環(huán)測(cè)定儀檢測(cè)技術(shù),測(cè)定皮膚血流量；用紅外成像技術(shù)及阻抗血流圖技術(shù), 觀察中藥對(duì)關(guān)節(jié)、肌肉的升溫效應(yīng)和改善局部血液循環(huán)的效應(yīng)［11］。這些都是對(duì)外治中藥藥效研究的有益探索。

4 結(jié)語(yǔ)

中藥外治法歷史悠久, 治療優(yōu)勢(shì)顯著, 對(duì)于其安全性的評(píng)價(jià)、藥效研究和透皮的研究, 對(duì)于闡明中藥外治法的優(yōu)勢(shì),為臨床用藥提供有力的指導(dǎo)和促進(jìn)新劑型的開(kāi)發(fā)以及加強(qiáng)中藥外治法基礎(chǔ)研究具有深遠(yuǎn)的意義。

［1］ 顧文, 周春祥.中醫(yī)外治法研究思路.中醫(yī)雜志, 2012, 53(19): 1642-1644.

［2］ 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物免疫毒性(過(guò)敏性、光過(guò)敏反應(yīng))研究的技術(shù)指導(dǎo)原則.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2005.

［3］ 胡旭光, 王暉, 陳麗, 等.薄荷醇的皮膚安全性評(píng)價(jià).中藥藥理與臨床, 2008,24(3):25-27.

［4］ 張瑞濤, 王暉.裸小鼠在皮膚病學(xué)和皮膚毒理學(xué)中的應(yīng)用.中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志, 2006,16(4):156-158.

［5］ 王暉, 薛漫清, 梁慶.功效函數(shù)法評(píng)價(jià)雙氯芬酸鈉的透皮吸收效果.中國(guó)藥房, 2008, 19(28):63-65.

［6］ 王暉, 郭源源, 陳墾, 等.功效函數(shù)法評(píng)價(jià)薄荷醇與月桂氮卓酮對(duì)雙氯芬酸鈉的透皮吸收.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志, 2009,29(7): 1233-1236.

［7］ 蔡郁, 劉新顏, 梁文革.以經(jīng)皮微滲析技術(shù)研究芍藥苷大鼠經(jīng)皮吸收.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2011,17(10):116-118.

［8］ Escobar-Chávez JJ, Merino-Sanjuán V, López-CervantesM, et al.The tape-stripping technique as a method for drug quantification in skin. J Pharm Pharm Sci, 2008,11(1):104.

［9］ Narkar Y.Bioequivalence for topical products-an update .Pharm Res, 2010,27(12):2590-2596.

［10］ 羅明富, 何俊娜, 郭瑩, 等.電針和懸灸對(duì)大椎穴區(qū)MCs脫顆粒不同影響的研究.針刺研究, 2007,32(5):327-329.

［11］ 張文高.中藥外治保健用品實(shí)驗(yàn)研究的思路與方法.中醫(yī)外治雜志, 2008,7(3):5-8.

510006 廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院