解金輝，種靖慧，黃 嫻，王 維，董 崢，李立新，李彤彤，李 力，閆莉娜

（天津市血液中心，天津300110）

新生兒溶血?。╤emolytic disease of the newborn，HDN）是一種由于母嬰血型不合所引起的新生兒同種免疫性溶血疾病，常見于ABO血型系統(tǒng)，即母親血型為O型，嬰兒血型為A或者B型。該病僅發(fā)生于胎兒與早期新生兒，是新生兒早期黃疸的重要原因。本文將送檢至本實(shí)驗(yàn)室的1939例懷疑因母嬰ABO血型不合引起的新生兒標(biāo)本進(jìn)行檢測，并對檢測結(jié)果進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源

2012年8月至2013年8月間因臨床表現(xiàn)懷疑患有HDN的新生兒血樣送至本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行HDN檢測。新生兒血樣均為EDTA抗凝保存。

1.2 試劑

抗A、抗B血清及反定型細(xì)胞Ac、Bc、Oc由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供；微柱凝膠檢測卡由達(dá)亞美（Diamed）公司提供；抗體篩選細(xì)胞由sanquin公司提供，IgM抗D血清由長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供。

1.3 試驗(yàn)方法

試管法檢測新生兒及母體ABO及RhD血型。

新生兒紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(yàn)，紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)，游離抗體試驗(yàn)及母體不規(guī)則抗體篩選試驗(yàn)均由微柱凝膠法檢測，試驗(yàn)操作遵守達(dá)亞美凝膠卡使用說明。其中新生兒細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)采用56℃水浴熱放散。

新生兒溶血的診斷標(biāo)準(zhǔn)：（1）母嬰血型不合；（2）早期出現(xiàn)高膽紅素血癥（病理性黃疸）和／或貧血；（3）作改良直接抗人球蛋白試驗(yàn)，抗體釋放試驗(yàn)及游離試驗(yàn)，其中，改良直接抗人球蛋白試驗(yàn)及／或抗體釋放試驗(yàn)陽性可確診［1］。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 21軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

在1939份標(biāo)本中，母親血型均為O型RhD陽性，并且抗體篩選試驗(yàn)均為陰性。A型血嬰兒818例，其中直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性141例，紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)陽性730例。B型血嬰兒1121例，其中直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性121例，紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)陽性881例。A型血與B型血嬰兒的直接抗人球蛋白試驗(yàn)和釋放試驗(yàn)陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，表 1）。

Tab.1 Positive rate contrast between blood type A and B

在1939份標(biāo)本中，出生5 d內(nèi)的嬰兒有1779人，日齡大于5 d的嬰兒160人，兩組嬰兒HDN陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，表 2）。

Tab.2HDN positive rate in different age group

3 討論

ABO血型不合是引起新生兒溶血病常見的原因之一，主要為O型血的母親引起A型血或B型血的嬰兒患病，在本文的統(tǒng)計(jì)中，A型血的嬰兒庫姆試驗(yàn)陽性率和釋放試驗(yàn)陽性率都較B型血的嬰兒高，而且這種差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由于A型血嬰兒紅細(xì)胞表面的A抗原多于B型血嬰兒紅細(xì)胞表面的B抗原，所以當(dāng)母體中的IgG抗A或者抗B進(jìn)入胎兒體內(nèi)后，A型紅細(xì)胞表面吸附的抗體就會(huì)多于B型紅細(xì)胞，所以A型血的嬰兒直接抗人球蛋白試驗(yàn)和釋放試驗(yàn)陽性率都會(huì)高于B型血的嬰兒。本試驗(yàn)結(jié)果與其他文獻(xiàn)報(bào)道是相同的［2］。

在檢測嬰兒血型時(shí)，只需正定型檢測即可，如果正定型凝集強(qiáng)度弱，表示紅細(xì)胞表面抗原數(shù)量少，可能是抗原仍未發(fā)育完全，也可能因?yàn)檠蜑閬喰?，在血清學(xué)試驗(yàn)不能確定血型時(shí)，我們可以通過高分辨的基因分型方法準(zhǔn)確定型［3］，因?yàn)榭乖瓟?shù)量較少，母體中的IgG抗A或者抗B對其紅細(xì)胞破壞也比較小，所以不會(huì)引起嚴(yán)重的HDN。

送檢HDN的患兒血樣采集時(shí)間與HDN檢出率呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，越早送檢，HDN檢出率就越高［4］，所以如果嬰兒臨床表現(xiàn)懷疑HDN時(shí)，應(yīng)當(dāng)盡快送檢，及時(shí)對癥治療。在本文釋放試驗(yàn)陽性中，最大嬰兒日齡為20 d，提示我們?nèi)绻e(cuò)過最佳檢測時(shí)間，仍然應(yīng)該盡快送檢。

在HDN檢測中，只有抗人球蛋白試驗(yàn)陽性和釋放試驗(yàn)陽性是診斷標(biāo)準(zhǔn)，如果這兩項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果陰性，而游離抗體試驗(yàn)陽性是不能確診的，因?yàn)榧词够純貉褐泻锌贵w，但是其紅細(xì)胞表面沒有該抗體對應(yīng)的抗原，即紅細(xì)胞不能被致敏，也就不會(huì)導(dǎo)致溶血。

HDN傳統(tǒng)的檢測方法是試管法，該方法操作繁雜，靈敏度低，結(jié)果不易判斷，漏檢率高。而微柱凝膠檢測卡操作簡單，重復(fù)性好，在新生兒溶血病檢測試驗(yàn)中，也比試管法有明顯高的靈敏度［5］。在本文中采用的方法微微柱凝膠法，使得有臨床表現(xiàn)的患兒HDN檢出率達(dá)到了83.1%（1611／1939）。此外，還要注意酶化細(xì)胞制備過程，避免酶化細(xì)胞發(fā)生溶血，影響最終檢測結(jié)果。正確的檢測結(jié)果能夠指導(dǎo)臨床及時(shí)對患兒進(jìn)行有針對性的治療，減少該病對嬰兒造成的影響。

［1］ 金漢珍，黃德珉，官希吉，等.實(shí)用新生兒學(xué)［M］.第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：531-550.

［2］ 薛向陽，金春子，呂勝利.105例母嬰ABO血型不合的新生兒中溶血病的實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果分析［J］.中國優(yōu)生與遺傳雜志，2006，14（8）：64-67.

［3］ 張純武，王本泉，劉 彪，等.基因分型方法在疑難血型鑒定中的應(yīng)用［J］.中國應(yīng)用生理學(xué)雜志，2013，29（5）：461-464.

［4］ Whyte J，Graham H.Prediction of the severity of ABO haemolytic disease of the newborn by cord blood tests［J］.Acta Paediatr Scand，1981，70（2）：217-222.

［5］ 陳 華，伍 燕，王嬌華.微柱凝膠技術(shù)在新生兒溶血病抗體檢測中的應(yīng)用研究［J］.中國全科醫(yī)學(xué)，2012，15（26）：3079-3080.