畢曼曼 趙學(xué)良

山東省濰坊市尖銳濕疣患兒乳頭瘤病毒檢測(cè)和型別分析

畢曼曼 趙學(xué)良

目的檢測(cè)山東省濰坊市尖銳濕疣患兒中人乳頭瘤病毒(HPV)感染情況及基因亞型。 方法采用基因擴(kuò)增技術(shù)及導(dǎo)流雜交分型技術(shù)，對(duì)24例患兒疣體的HPV進(jìn)行檢測(cè)分型。 結(jié)果 24例尖銳濕疣檢出23例HPV陽性，陽性率95.8%，20例單一型HPV感染占87.0%，混合感染型3例占13.0%；感染型別依次是 HPV6(9/23)，HPV16(6/23)，HPV11(5/23)，HPV58(3/23)，HPV18(2/23)，HPV53(1/23)。 結(jié)論 該地區(qū)尖銳濕疣患兒HPV型別以6、16、11、58、18為主，患兒感染HPV型別與生活中密切接觸者感染的型別相似。

尖銳濕疣；兒童；人乳頭狀瘤病毒

兒童尖銳濕疣對(duì)兒童的健康造成威脅。與尖銳濕疣相關(guān)的人乳頭瘤病毒(HPV)主要是低危型HPV6、HPV11型和高危型HPV16、HPV18型，為探討尖銳濕疣患兒HPV感染情況和基因亞型，我們對(duì)山東省濰坊市24例尖銳濕疣患兒皮損HPV亞型進(jìn)行了檢測(cè)。

一、對(duì)象與方法

1.對(duì)象:2010年1月至2014年3月濰坊市人民醫(yī)院和濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院門診尖銳濕疣患兒24例。所有患兒均有典型臨床表現(xiàn)，皮損外觀呈菜花狀或雞冠狀，醋酸白試驗(yàn)陽性，組織病理確診。其中男10例，年齡3～10歲，疣體分布于肛門及其周圍部位；女14例，年齡3～12歲，10例皮損分布于肛門及其周圍，4例皮損分布于大小陰唇和陰道口；1例皮損同時(shí)累及肛門和外陰。所有患兒無性侵史，其日常生活主要由父母照顧。24例患兒的雙親中有3例母親外陰有尖銳濕疣，2例母親有尋常疣。10例母親陰道分泌物查到高危HPVDNA(5例 HPV16，3例 HPV58，1 例 HPV53，1例同時(shí)感染 HPV16和 HPV6)；5例母親陰道分泌物查到低危HPVDNA(4例HPV6，1例HPV11)。其余患兒父母的患病情況不詳。

2.標(biāo)本采集:用一次性無菌采樣棉簽(由廣東凱普生物化學(xué)有限公司提供)來回擦拭疣體表面至少3次，將帶有脫落細(xì)胞的采樣棉簽放入裝有細(xì)胞保存液的取樣管中，將標(biāo)本置于-20℃冰箱保存。將采樣棉簽在取樣管中充分漂洗后取出，將洗脫液14 000 r/min離心10 min，棄上清液，待用。

3.方法:采用廣東凱普生物化學(xué)有限公司提供的HPV分型試劑盒(PCR+膜雜交法)，羅氏480ⅡPCR擴(kuò)增儀和HybriMax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀?；驹頌榛驍U(kuò)增技術(shù)及導(dǎo)流雜交原理，通過反向點(diǎn)雜交檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物與包被有特異性探針膜雜交結(jié)果，采用堿性磷酸酶系統(tǒng)性檢測(cè)，可檢測(cè)出 21 種 HPV 亞型包括 6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、44、45、51、52、53、56、58、59、66、68 和 CP8304(81)。HPV 基因亞型檢測(cè)步驟等，均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。HPVDNA最低檢出量為350拷貝/亞型(絕對(duì)數(shù))，在該最低檢出量上靈敏度符合率達(dá)到98%以上；陰性參考品符合率100%，分型正確，陽性參考品符合率100%。各型CV值不高于30%。

4.結(jié)果判定:檢驗(yàn)結(jié)果陽性點(diǎn)顯示為清晰可見的藍(lán)紫色圓點(diǎn)，根據(jù)膜條HPV分型分布圖判讀陽性點(diǎn)的HPV分型；有≥2個(gè)陽性點(diǎn)的判為多重感染。Biotin對(duì)照點(diǎn)，反映酶與顯色液反應(yīng)，在檢測(cè)中應(yīng)為陽性；IC點(diǎn)即內(nèi)對(duì)照點(diǎn)為PCR、熱變性及雜交過程質(zhì)控點(diǎn)。在檢測(cè)過程中，以上兩對(duì)照點(diǎn)陽性，若其他點(diǎn)為陰性，則判為HPV分型檢測(cè)結(jié)果陰性；若有≥1個(gè)HPV分型點(diǎn)陽性則判為該型HPV檢測(cè)陽性。

二、結(jié)果

1.24例尖銳濕疣患兒檢出23例HPV陽性，陽性率95.8%。共檢出6種HPV基因型，包括低危型HPV6、11和高危型 HPV16、18、53、58。

2.23例HPV陽性病例中，20例單一感染，其中HPV6型 7例，HPV11型 4例，HPV16型 4例，HPV-18型 2例，HPV 53型1例，HPV-58型2例，占87.0%。二重感染3例中1例6+16型，1例6+11型，1例16+58型。

3.23例HPV陽性病例中，有低危型HPV感染12例，其中6型7例，11型4例，6+11型混合1例，占52.2%；高危型HPV感染10例，其中16型4例，18型2例，58型2例，53型1例，16+58型混合1例)占43.5%；高低危型6+16型混合感染1例。

4.4例HPV16陽性患兒母親宮頸分泌物HPV16陽性；7例HPV6陽性患兒母親宮頸分泌物HPV6陽性；2例HPV58陽性患兒母親宮頸分泌物HPV58陽性；4例HPV11陽性患兒1例母親宮頸分泌物HPV11陽性；1例HPV53陽性患兒母親宮頸分泌物HPV53陽性，另1例HPV6+16型二重感染，其母親宮頸分泌物6+16型；也就是母親宮頸分泌物HPV型別與患兒的HPV型別一致。1例HPV陰性患兒母親有尋常疣。

三、討論

國(guó)內(nèi)報(bào)告引起尖銳濕疣的常見HPV型別為6、11、16、18、58，但有地區(qū)，性別和年齡差異，主要為低危HPV6、11型為主約占80%左右[1-2]。有關(guān)尖銳濕疣患兒HPV型別的報(bào)告較少，國(guó)外報(bào)告尖銳濕疣患兒HPV型別與成人不同，但結(jié)果差異很大。在加拿大一項(xiàng)研究中，35例尖銳濕疣患兒發(fā)現(xiàn)HPV主要為2、3、7、57型，而 6和11很少[3]。 Gibson檢測(cè)22例尖銳濕疣患兒HPV型別以6和11為主[4]。

本文結(jié)果顯示，24例尖銳濕疣患兒檢出23例HPV陽性，陽性率95.8%，與成人相近，單一感染比例為87.0%(20/23)，混合感染比例為13.0%(3/23)。單一感染型別按例數(shù)多少排列分別為HPV6(7/20)，HPV16(4/20)，HPV11(4/20)，HPV58(2/20)，HPV18(2/20)，HPV53(1/20)。 感染型別按例數(shù)多少排列依次是HPV6(9/23包括1例6+16混合和1例6+11混合)，HPV16(6/23包括1例6+16混合和1例16+58混合)，HPV11(5/23包括1例6+11混合)，HPV58(3/23包括1例16+58混合)，HPV18(2/23)，HPV53(1/20)。高危型HPV的感染率47.8%(11/23)較高，接近于低危型HPV的感染率56.5%(13/23，其中1例高低危型混合)。與成人尖銳濕疣以HPV6、11型為主有所不同[1-2]，也可能與病例數(shù)較少有關(guān)。但與何志秀等[5]報(bào)告的口腔尖銳濕疣患兒HPV型別以高危型16，18為主接近。分析原因可能是兒童感染HPV是通過間接途徑感染，并非性侵害。從結(jié)果看出，15例母親宮頸分泌物HPV型別與患兒HPV型別相一致，而母親感染高危型HPV比率高達(dá)66.7%(10/15)，母親作為患兒的密切接觸者最易傳染給患兒，與有關(guān)報(bào)道一致[3，6-7]。父母是兒童密切接觸者，在照顧患兒生活時(shí)應(yīng)養(yǎng)成良好的衛(wèi)生習(xí)慣，注意個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣，HPV感染者盡量避免與兒童接觸，以預(yù)防患兒HPV感染。

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2014-01-15)

(本文編輯:吳曉初)

Detection and genotyping of human papilloma virus in children with condyloma acuminatum in Weifang city，Shandong province

Bi Manman*，Zhao Xueliang.*Weifang Medical University，Weifang 261053，Shandong，China

Zhao Xueliang，Email：zhxl5801@163.com

ObjectiveTo detect human papilloma virus(HPV)and to determine its genotype in children with condyloma acuminatum(CA)in Weifang city，Shandong province.MethodsSwab specimens were collected from the surface of lesions of 24 children with CA.PCR/flow-through hybridization assay was performed to detect HPV and determine its genotypes in these specimens.ResultsAmong the 24 specimens，95.8%(23/24)were positive for HPV.Of the HPV-positive specimens，87.0%(20/23)harbored single type of HPV，and 13.0%(3/23)multiple types of HPV.The most common genotype was HPV6(9/23)，followed by HPV16(6/23)，HPV11(5/23)，HPV58(3/23)，HPV18(2/23)，and HPV53(1/23).Conclusions HPV 6，16，11，58 and 18 prevail in children patients with CA in Weifang city，Shandong province.Additionally，the HPV genotypes in children patients are similar to those in their close contacts.

Condylomata acuminata；Child；Human papillomavirus

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2014.09.015

261053山東，濰坊醫(yī)學(xué)院(畢曼曼)；濰坊市人民醫(yī)院(趙學(xué)良)

趙學(xué)良，Email:zhxl5801@163.com