譚俞佳 綜述，江青山 審校(南華大學附屬第一醫(yī)院耳鼻喉科，湖南 衡陽 421001)

鼻咽癌(carcinoma of nasopharynx,NPC)是國內(nèi)高發(fā)腫瘤之一，從流行病學調(diào)查資料顯示，廣東、廣西、湖南、福建、江西為世界鼻咽癌高發(fā)區(qū)；男性發(fā)病率約為女性的2～3倍，40～50歲是高發(fā)年齡組。鼻咽癌98%屬低分化鱗狀細胞癌，首選放射治療，放療5年生存率為50%左右[1]，局部復發(fā)與遠處轉(zhuǎn)移是主要死亡原因[2]，約60%的患者在確診鼻咽癌時已發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，導致治療的失敗。腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移是連續(xù)而又復雜的過程，隨著人類基因組計劃的完成，吸引了眾多的研究者從基因組學和蛋白質(zhì)組學方面突破對鼻咽癌的傳統(tǒng)認識，探索鼻咽癌轉(zhuǎn)移的相關分子及其機制，從而改變治療方式。

1 鼻咽癌轉(zhuǎn)移相關基因

1.1 CD44基因與鼻咽癌

CD44基因位于人類11號染色體短臂(11p13)，其編碼產(chǎn)生的單鏈糖蛋白是一種重要的細胞粘附分子，在多種生理及病理進程中均發(fā)揮作用。免疫學研究發(fā)現(xiàn)，CD44信號通路的激活會使細胞的形態(tài)發(fā)生變化，如出現(xiàn)偽足、使細胞運動能力增強等。近年來研究發(fā)現(xiàn)其與惡性腫瘤細胞的浸潤與轉(zhuǎn)移關系密切[3]。CD44在鼻咽癌組織中表達已得到證實。

王爽等[4]發(fā)現(xiàn)高轉(zhuǎn)移特性的鼻咽癌細胞中CD44的表達明顯高于低轉(zhuǎn)移特性的鼻咽癌細胞；利用帶有CD44基因的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染低轉(zhuǎn)移特性的鼻咽癌細胞，發(fā)現(xiàn)其轉(zhuǎn)移能力明顯增強，進一步發(fā)現(xiàn)其間質(zhì)標志物基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)的表達明顯增高，表明CD44與鼻咽癌轉(zhuǎn)移關系密切，且通過調(diào)控上皮細胞間質(zhì)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)進程影響鼻咽癌細胞的轉(zhuǎn)移能力。因此，臨床上檢測CD44的表達，可以預測鼻咽癌細胞轉(zhuǎn)移能力，從而預測患者的預后情況；通過靶向抑制CD44，可以抑制EMT的進程，從而降低鼻咽癌的轉(zhuǎn)移率，提高5年生存率。

1.2 EZH2與鼻咽癌

EZH2位于人染色體7q35，與胚胎發(fā)育、細胞分化、腫瘤干細胞的自我更新及多種惡性腫瘤的發(fā)病密切相關。其編碼的蛋白可通過催化DNA甲基化來阻止轉(zhuǎn)錄子與啟動子區(qū)結(jié)合，導致基因的沉默。多項研究表明其高表達可以促進癌細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。比較基因雜交技術(comparative genomic hybridization，CGH)證實此染色體區(qū)帶可能存在與鼻咽癌轉(zhuǎn)移相關的基因。

梁碧君等[5]收集臨床標本發(fā)現(xiàn)鼻咽癌組織中EZH2表達明顯高于炎性組織；在細胞實驗中發(fā)現(xiàn)具有高轉(zhuǎn)移特性的鼻咽癌細胞中EZH2表達明顯高于低轉(zhuǎn)移特性的鼻咽癌細胞；臨床隨訪資料分析發(fā)現(xiàn)高表達EZH2蛋白的鼻咽癌患者5年生存率明顯低于低表達者。進一步實驗證實EZH2的沉默使鼻咽癌細胞轉(zhuǎn)移能力減弱，且上皮標志物的表達增高、間質(zhì)標志物表達降低；而高表達則明顯促進鼻咽癌細胞的轉(zhuǎn)移，且上皮間質(zhì)標志物的表達呈現(xiàn)相反的結(jié)果，表明EZH2可通過調(diào)控EMT來影響鼻咽癌的轉(zhuǎn)移。因此，臨床上也可將EZH2作為預測鼻咽癌患者預后情況的指標。且抑制EZH2可降低鼻咽癌的轉(zhuǎn)移率。

1.3 THY1與鼻咽癌

THY1基因也稱白細胞分化抗原CD90，位于人染色體11q22～23區(qū)域，該區(qū)域與鼻咽癌密切相關。THY1編碼的蛋白質(zhì)屬于免疫球蛋白超家族中的一員，是一種高度糖基化的細胞表面糖蛋白。THY1與機體免疫反應、細胞增殖、分化、細胞因子釋放、血管生成及凋亡等細胞功能有重要關聯(lián)。

Lung等[6]發(fā)現(xiàn)在鼻咽癌組織及細胞中THY1的表達明顯低于正常組織與細胞，且THY1表達的缺失可能與其啟動子高度甲基化有關。具有高轉(zhuǎn)移特性的鼻咽癌細胞在轉(zhuǎn)染THY1基因后，呈現(xiàn)出生長速度減慢及轉(zhuǎn)移率降低的特點，表明THY1基因能夠抑制鼻咽癌細胞的生長及轉(zhuǎn)移，可作為鼻咽癌的一個候選抑癌基因。

1.4 NGX6與鼻咽癌

鼻咽癌相關基因6(nasopharyngeal carcinoma associated gene 6,NGX6)是新的轉(zhuǎn)移相關抑癌基因，可抑制腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力[7]。目前研究已證實NGX6基因的表達可抑制鼻咽癌的增殖，侵襲和轉(zhuǎn)移能力，其機制可能是通過調(diào)節(jié)多種腫瘤相關基因的表達，引起信號轉(zhuǎn)導通路分子改變，在調(diào)控腫瘤細胞周期，腫瘤細胞粘附遷移及腫瘤血管生成等環(huán)節(jié)發(fā)揮重要作用。

吳靜嫻等[8]發(fā)現(xiàn)在非轉(zhuǎn)移鼻咽癌組織中NGX6表達高于轉(zhuǎn)移鼻咽癌組織，其蛋白陽性表達率隨T分期、N分期的增高呈下降趨勢；NGX6蛋白的表達與鼻咽癌組織微淋巴管密度呈負相關性，由此推測NGX6抑制鼻咽癌組織淋巴管的生成而抑制其侵襲轉(zhuǎn)移。隨著抑癌基因NGX6在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展，侵襲及轉(zhuǎn)移中作用機制的逐步明確，NGX6蛋白的檢測可能在輔助鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風險預測和預后判斷方面發(fā)揮作用，并可能成為鼻咽癌基因治療中新的重要靶點。

2 鼻咽癌轉(zhuǎn)移相關分子

2.1 LMP1與鼻咽癌

潛伏性膜蛋白1(latent membrane protein 1，LMP1)是EB病毒基因組中發(fā)現(xiàn)的第一個能改變細胞形態(tài)的癌基因，與鼻咽癌的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關。LMP1的基因位于EB病毒基因組U5-TR區(qū)的BNLF-1基因，由386個氨基酸殘基組成的跨膜蛋白[9]。

LMP1是EB病毒編碼的主要致瘤蛋白，其陽性表達是誘導鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移的重要因素。李剛等[10]發(fā)現(xiàn)抑制LMP1的表達，則鼻咽癌細胞的增殖、轉(zhuǎn)移能力減弱。Wang等[11]發(fā)現(xiàn)LMP1可通過激活MEK/ERK1/2和JAK3信號傳導通路，活化STAT3結(jié)合位點，上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子的表達和分泌，為瘤細胞轉(zhuǎn)移提供血管基礎。還可通過激活JAK/STAT、AP-1、NF-κB、PI-PLC-PKC等多條細胞內(nèi)信號傳導通路，促進鼻咽癌細胞的EMT進程，賦予鼻咽癌細胞高侵襲高轉(zhuǎn)移能力；Liu等[12]則發(fā)現(xiàn)LMP1可上調(diào)鼻咽癌細胞MMP9的活性，促進EMT進程；阻斷轉(zhuǎn)錄因子e-Jun和Ets1的表達，LMP1對MMP9活性的誘導降低，表明了e-Jun和Ets1調(diào)控鼻咽癌MMP9的表達。申志華等[13]研究認為EBV-LMP1可通過上調(diào)Ezrin的表達來介導對鼻咽癌轉(zhuǎn)移能力的影響，Ezrin蛋白可通過與CD44分子、E-鈣粘素、整合素等細胞表面分子形成復合體，調(diào)節(jié)細胞粘附，參與腫瘤細胞信號轉(zhuǎn)導。

2.2 VEGF與鼻咽癌

血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是血管內(nèi)皮細胞特異性肝素結(jié)合生長因子，是目前已知的作用最強、特異性最高的促血管生成因子。腫瘤轉(zhuǎn)移與其誘導血管增生的能力關系密。腫瘤血管增生一方面促進了腫瘤組織生長，另一方面為腫瘤細胞轉(zhuǎn)移提供了重要通路。已有研究顯示VEGF與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、治療及預后關系密切。

姜武忠等[14]發(fā)現(xiàn)VEGF在鼻咽癌組織中的表達率高于炎性及正常鼻咽上皮組織；頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鼻咽癌組織中表達高于未轉(zhuǎn)移組織；晚期鼻咽癌組織中表達顯著高于早期鼻咽癌組織，表明VEGF的高表達與鼻咽癌的浸潤發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關。孫軍[15]比較鼻咽癌放療患者血清中VEGF發(fā)現(xiàn)，放療前VEGF量高于正常人，放療后VEGF減少，復發(fā)患者VEGF量較未復發(fā)者量多。它顯示檢測VEGF對預測鼻咽癌預后有一定的價值，可作為預后不良的指標之一。

2.3 PFK1與鼻咽癌

6-磷酸果糖激酶-1(6-phosphofructo-1-kinase,PFK1)是糖酵解途徑中的第二個限速酶，是糖酵解途徑三個限速酶中最重要的一個。近年來研究發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤細胞中普遍存在糖酵解途徑的增強，而PFK1與惡性腫瘤關系密切,在很多腫瘤組織中，PFK1表達明顯增強，在腫瘤細胞的糖酵解和細胞增殖中起重要作用。

李爍等[16]發(fā)現(xiàn)PFK1在鼻咽癌組織中表達高于鼻咽部炎性組織；鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中表達高于未轉(zhuǎn)移組織，說明PFK1與鼻咽癌轉(zhuǎn)移關系密切。PFK1表達的增高促進了腫瘤組織中糖酵解比例的增高，能夠為腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移提供能量支持，而糖酵解產(chǎn)生的酸性代謝產(chǎn)物可以破壞正常的細胞基質(zhì)，為侵襲和轉(zhuǎn)移提供有利的環(huán)境。因此，PFK1可能是鼻咽癌轉(zhuǎn)移的分子標志之一。

3 微小RNA與鼻咽癌

微小RNA(microRNA，miRNA)是一類編碼長度為17～25個核苷酸組成的非編碼單鏈RNA分子，參與基因表達調(diào)控，尤其在轉(zhuǎn)錄后調(diào)控中發(fā)揮重要作用。miRNA能與下游靶基因mRNA的3’UTR堿基配對，引導沉默復合物抑制mRNA的翻譯或降解mRNA，這種特性使其參與生物合成和腫瘤的發(fā)展過程。在已注解的miRNA分子中，有超過50%的miRNA定位于腫瘤相關基因位點，說明miRNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著至關重要的作用。很多研究表明，miRNA在鼻咽癌組織和細胞中表達高于正常鼻咽上皮組織，扮演了抑癌基因或原癌基因的角色，并通過多種分子機制參與調(diào)控鼻咽癌的浸潤與轉(zhuǎn)移。它們極其可能成為未來鼻咽癌的生物標志物和治療靶點。

Luo等[17]發(fā)現(xiàn)miR-149在鼻咽癌細胞中的表達明顯高于正常鼻咽上皮細胞。miR-149過表達能增強鼻咽癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力；反之，抑制miR-149的表達則出現(xiàn)相反的結(jié)果。進一步實驗研究發(fā)現(xiàn)。miR-149能降低E-鈣粘蛋白的表達，說明其可通過調(diào)節(jié)EMT在鼻咽癌的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。

Li等[18]利用miRNA芯片篩選發(fā)現(xiàn)miR-18a在鼻咽癌組織中表達上調(diào)。Luo等[19]研究發(fā)現(xiàn)高表達miR-18a能促進鼻咽癌細胞的增殖、遷移和侵襲，反之則降低。進一步研究發(fā)現(xiàn)miR-18a通過Dicer1促進鼻咽癌的發(fā)展。Dicer1是miRNA合成酶的關鍵分子，在miRNA合成過程中，Dicer1控制成熟的miRNA合成。miR-18a下調(diào)Dicer1的合成，從而下調(diào)miR-200家族的表達，而miR-200家族能調(diào)節(jié)EMT標志分子物的改變，說明miR-18a的調(diào)控網(wǎng)絡中包括促進EMT進程，從而促進鼻咽癌的轉(zhuǎn)移。

Zhang等[20]發(fā)現(xiàn)miR-144在鼻咽癌組織中表達上調(diào)，實驗發(fā)現(xiàn)沉默miR-144可以減少鼻咽癌細胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。進一步研究其作用機制發(fā)現(xiàn)，它主要通過抑制磷酸酶及張力蛋白同源性基因(phosphatase and tensin homolog,PTEN)這一抑癌基因來增加磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(pAKT)和周期素D1向G1期轉(zhuǎn)化，并且通過降低E-鈣粘素促進EMT進程。

綜上所述，多種鼻咽癌轉(zhuǎn)移相關分子參與了調(diào)控EMT進程，且調(diào)控機制多樣，各種相關分子相互協(xié)同或制約，構(gòu)成錯綜復雜的調(diào)控網(wǎng)絡。鼻咽癌的侵襲轉(zhuǎn)移是一個復雜的過程，對其相關分子的不斷了解，為腫瘤標記物的篩選及藥物治療靶點的選擇成為可能；也為治療后轉(zhuǎn)移風險的預測提供了更多的科學依據(jù)。但目前研究發(fā)現(xiàn)的鼻咽癌轉(zhuǎn)移相關分子缺乏特異性，難以應用于臨床實踐。因此，進一步尋找特異性鼻咽癌轉(zhuǎn)移相關分子標志物，并深入探討其作用機制仍是未來鼻咽癌防治研究的重點。

[1]Fang FM,Chien CY,Tsai WL,et al.Quality of life and survival outcome for patients with nasopharyngeal carcinoma receiving three-dimensional conformal radiotherapy vs.Intensity-modulated radiotherapy-a longitudinal study[J].Int J Radiat Oncol Biol Phys,2008,72(2):356-364.

[2]趙水喜,王迎選,崔書祥,等.442例鼻咽癌放射治療療效觀察[J].中國腫瘤臨床,2004,31(10):595-596.

[3]Naor D,Nedvetzki S,Golan I,et al.CD44 in cancer [J].Crit Rev Clin Lab Sci,2002,39(6):527-579.

[4]王爽,李仕晟,謝鼎華,等.CD44調(diào)控鼻咽癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)移的實驗研究[J].臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2013,(5):250-254.

[5]梁碧君.EZH2在鼻咽癌中的表達及其促進侵襲轉(zhuǎn)移的實驗研究[D].廣州:南方醫(yī)科大學，2012：45-50.

[6]Lung HL,Cheung AK,Cheng Y,et al.Functional characterization of THY1as a tumor suppressor gene with antiinvasive activity in nasopharyngeal carcinoma[J].Int J Cancer,2010,127(2):304-312.

[7]Wang L,Xiang B,Yi M,et al.Identification of a new seven-span transmembrane protein:NGX6a is downregulated in nasopharyngeal carcinoma and is associated with tumor metastasis[J].J Histochem Cytochem,2010,58(1):41-51.

[8]吳靜嫻.NGX6蛋白在鼻咽癌中的表達及其與VEGF表達和LMVD的相關性研究[D].上海：第二軍醫(yī)大學，2009.

[9]Repic AM,Shi M,Scott RS,et al.Augmented latent membrane protein 1 expression from Epstein-Barr virus episomes with minimal terminal repeats[J].J Virol,2010,84(5):2236-2244.

[10]李剛,李湘平,劉雄,等.DNA載體介導RNA干擾抑制LMP-1基因?qū)Ρ茄拾┘毎D(zhuǎn)移能力的影響[J].中華腫瘤雜志,2006,28(10):724-727.

[11]Wang Z,Luo F,Li L,et al.STAT3 activation induced by Epstein-Barr virus latent membrane protein1 causes vascular endothelial growth factor expression and cellular invasiveness via JAK3 And ERK signaling[J].Eur Cancer,2010,46(16):2996-3006.

[12]Liu WB.Latest advances in the study on the involvement Epstein - Barr virus encoded latent membrane protein 1 in nasopharyngeal carcinoma invasion and metastasis[J].Int J Pathol Clin Med,2010,30(6):484-488.

[13]Shen ZH,Chen XY,Chen J.Impact of up- regulating Ezrin expression by Epstein - Barr virus latent membrane protein 1 on metastasis ability of nasopharyngeal carcinoma cells[J].Chinese Cancer,2008,27(2):165-169.

[14]姜武忠,趙素萍,廖遇平,等.鼻咽癌組織中LMP1和VEGF蛋白表達及其臨床意義[J].中國耳鼻咽喉顱底外科雜志,2007,13(3):173-177.

[15]孫軍.鼻咽癌患者放療前后血清IGF-Ⅱ、CEA和VEGF檢測的臨床意義[J].放射免疫學雜志,2012,25(5):505-506.

[16]李爍,杜政德,高進良,等.鼻咽癌組織中6-磷酸果糖激酶-1基因的表達及臨床意義[J].臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2014(06):393-395.

[17]Luo ZH,Zhang LY,Li Z,et al.MiR149 promotes epithelial-mesenchymal transition and invasion in nasopharyngeal carcinoma cells[J].Journal of central south university of technology,2011,36(07):604-609.

[18]Li T,Chen JX,Fu XP,et al.microRNA expression profiling of nasopharyngeal carcinoma[J].Oncol Rep,2011,25(5):1353-1363.

[19]Luo Z,Dai YZ,hang L，et al.miR-18a promotes malignant progression by impairing microRNA biogenesis in nasopharyngeal carcinoma[J].Carcinogenesis,2013,34(2):415-425.

[20]Zhang LY,Ho-Fun Lee V,Wong AM,et al.MicroRNA-144 promotes cell proliferation，migration and invasion in nasopharyngeal carcinoma through repression of PTEN[J].Carcinogenesis,2013,34(2):454-463.