■ 肖順應(yīng) 葉元土 金素雅，3 李 賓 向朝林 殷永風(fēng) 馬 紅

（1.蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，江蘇蘇州215123；2.浙江科盛飼料股份有限公司，浙江紹興312046；3.溫州市龍灣區(qū)漁業(yè)技術(shù)推廣站，浙江溫州325011）

磷是魚類最重要的營養(yǎng)素之一。本試驗設(shè)計了以酪蛋白、明膠、纖維素和豆油等為基礎(chǔ)的純化飼料，以磷酸二氫鈣為磷源，通過在純化飼料中添加不同濃度梯度的磷酸二氫鈣對草魚進行投喂，對草魚純化飼料中磷的適宜濃度添加量和磷缺乏對草魚的影響進行了研究，旨在為草魚飼料中磷水平的添加提供依據(jù)。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物及原料

草魚（Ctenopharyngodon idellus）幼魚由蘇州市相城區(qū)特種水產(chǎn)養(yǎng)殖場提供；磷酸二氫鈣由無錫華諾威動物保健品有限公司提供；酪蛋白、糊精、明膠、羧甲基纖維素鈉、微晶纖維素、無水氯化鈣購于國藥集團化學(xué)試劑有限公司；玉米淀粉購于蘇州蓮花五區(qū)農(nóng)貿(mào)市場。

1.1.2 試驗飼料

根據(jù)草魚的配合飼料營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計配方（SC/T 1024—2002），飼料配方及營養(yǎng)水平見表1。

在以酪蛋白、豆油、淀粉、糊精和纖維素為原料的純化飼料中分別添加磷酸二氫鈣0、13、29、45、61、77 g/kg，飼料原料經(jīng)粉碎過60目篩，混合均勻，用小型面條加工機加工成1.5 mm粗細(xì)的條狀料，電風(fēng)扇條件下干燥后再手工搓碎，篩選3～4 mm長的顆粒飼料置于冰箱中4℃密封保存。

1.2 試驗方法

1.2.1 飼養(yǎng)管理

試驗草魚300余尾，初始平均重量為22.29 g，為池塘養(yǎng)殖的一冬齡魚種。試驗魚經(jīng)一周暫養(yǎng)、馴化后，選擇體格健壯、規(guī)格整齊的魚種隨機分為6個組，每組設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)放魚15尾，分別投喂飼料Ⅰ～Ⅵ。正式養(yǎng)殖試驗75 d。

養(yǎng)殖設(shè)施為室內(nèi)養(yǎng)殖系統(tǒng)，單缸直徑70 cm，養(yǎng)殖容積0.23 m3，以曝氣自來水為水源，使用間歇性控電開關(guān)調(diào)節(jié)水體，每進水20 min關(guān)閉40 min，反復(fù)循環(huán)，缸的出水直接排走。定期使用水博士水質(zhì)測定盒測量水質(zhì)。養(yǎng)殖期間水質(zhì)條件為：水溫20～26℃、溶解氧6.0 mg/l以上、pH值7.0～7.4、氨氮含量0.20～0.40 mg/l、亞硝酸鹽氮0.05～0.1 mg/l。試驗飼料于每天8：00、12：00、17：30各投喂一次，投喂量為各試驗組魚體體重的2%～3%。

表1 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平

1.2.2 樣品的分析方法

用烘干失重法（GB 6435—86）測定水分；微量凱氏定氮法（GB/T 6432—94）測定粗蛋白；索氏抽提法（GB/T 6433—94）測定粗脂肪；馬弗爐灰化法測定灰分；EDTA快速滴定法測定鈣含量；釩鉬酸銨顯色法測定磷含量；血清總蛋白（TP）、血糖（GLU）、膽固醇（CHO）等血清生化指標(biāo)采用CHEMIX-800全自動生化分析儀測定；SOD、溶菌酶及肝胰臟GPT（谷丙轉(zhuǎn)氨酶）和GOT（谷草轉(zhuǎn)氨酶）采用南京建成生物工程研究所試劑盒測定。

1.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗所得數(shù)據(jù)采用EXCEL和SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行單因素統(tǒng)計分析。

2 試驗結(jié)果

2.1 對生長性能的影響（見表2）

表2 投喂不同磷含量飼料草魚的增重率、特定生長率、肥滿度和肝體指數(shù)

由表2可知，飼料中磷水平影響草魚的增重率、特定生長率、肥滿度和肝體指數(shù)。與Ⅰ組相比較，飼料中添加不同含量的磷對草魚增重率有顯著的影響（P＜0.05），Ⅲ組草魚增重率最高；對特定生長率有顯著影響（P＜0.05），Ⅲ組草魚特定生長率明顯高于其他組；對肥滿度沒有顯著性影響，但Ⅲ組肥滿度最高；對肝體指數(shù)有顯著性影響（P＜0.05），Ⅲ組肝體指數(shù)最高，且肝體指數(shù)隨著飼料中磷濃度的增加呈先升高再降低的趨勢。

2.2 對草魚體組成的影響（見表3）

表3 投喂不同磷含量飼料草魚機體組成（%）

由表3可知，飼料磷水平對草魚肝胰臟的水分、粗蛋白含量沒有顯著性影響，對粗脂肪含量有不同程度的影響，當(dāng)飼料磷水平為8.07 g/kg（試驗Ⅲ組）時，肝胰臟粗脂肪含量最低。飼料磷水平對全魚粗脂肪（Ⅲ組）含量影響不顯著，但全魚粗脂肪含量有隨著飼料磷水平的增加而減低的趨勢。飼料磷水平對草魚肌肉粗脂肪含量有不同程度的影響，高磷飼料組的草魚肌肉粗脂肪含量高于低磷飼料組。對草魚肌肉蛋白成分的影響，Ⅰ組的粗蛋白含量最高且顯著高于Ⅲ、Ⅴ和Ⅵ試驗組（P＜0.05），其余5組蛋白含量沒有顯著性差異。

2.3 對草魚鈣磷代謝的影響（見表4）

表4 草魚各組分磷含量與飼料磷的相關(guān)性

由表4可知，飼料磷水平對草魚全魚灰分和鈣含量有不同程度的影響，但是影響規(guī)律不明顯；飼料磷水平對草魚全魚磷含量，鰓蓋骨灰分和鈣含量，脊椎骨灰分、鈣、磷含量以及血清鈣、磷含量沒有顯著性影響（P＞0.05）；鰓蓋骨磷含量隨著飼料磷水平的增加而顯著降低（P＜0.05）。

由表4可知，全魚、鰓蓋骨的磷含量與飼料磷含量的相關(guān)系數(shù)分別為0.74、-0.97，其余指標(biāo)與飼料磷水平相關(guān)性不強。表明全魚磷含量和鰓蓋骨磷含量對飼料磷的添加水平變化較為敏感。

2.4 對血清生化指標(biāo)的影響（見表5）

由表5可知，飼料磷水平對草魚血清GPT、GOT轉(zhuǎn)氨酶含量有不同程度的影響，當(dāng)飼料磷水平為11.63 g/kg（Ⅳ組）時，草魚血清的GPT和GOT含量最低；飼料磷水平對草魚的肝胰臟合成儲備功能指標(biāo)總蛋白、白蛋白和球蛋白含量沒有顯著影響（P＞0.05）。磷水平對草魚血清葡萄糖含量沒有顯著影響（P＞0.05）。不同試驗組血脂四項之間沒有顯著差異（P＞0.05）。飼料磷水平對草魚血清的非特異性免疫指標(biāo)溶菌酶活力有不同程度的影響，但是各試驗組的變化規(guī)律不明顯。飼料磷水平影響草魚血清SOD活力，在飼料中磷的添加水平為8.07 g/kg（Ⅲ組）時，草魚血清SOD活力含量最高。

表5 投喂不同磷含量飼料草魚的血清生化指標(biāo)

3 討論

3.1 飼料磷含量對草魚脂肪肝的影響

脂肪肝是養(yǎng)殖魚類常見的營養(yǎng)性疾病之一。引起脂肪肝癥（Fatty Liver Syndrome）的原因很多，大量研究表明，遺傳、營養(yǎng)、環(huán)境、有毒物質(zhì)等原因均可導(dǎo)致脂肪肝癥的發(fā)生，發(fā)病機理和脂肪代謝有關(guān)，由肝細(xì)胞合成的增加和氧化減少引起的[1]。魚類脂肪肝形成主要由于集約化養(yǎng)殖，養(yǎng)殖密度加大，生產(chǎn)周期縮短；同時投喂?fàn)I養(yǎng)不平衡的人工配合飼料造成養(yǎng)殖魚類的營養(yǎng)代謝紊亂。肝臟脂肪代謝失調(diào)后，肝臟中脂肪含量升高，從而導(dǎo)致脂肪肝發(fā)生。

本研究顯示，飼料中磷的添加對試驗草魚的肥滿度沒有顯著性影響，但是投喂添加不同磷濃度飼料的試驗魚肝體指數(shù)有顯著差異（P＜0.05），在Ⅲ、Ⅳ組，肝體指數(shù)達(dá)到最高，與EI-Zibdeh[2]在大黃魚中發(fā)現(xiàn)肝體指數(shù)與飼料中磷含量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系結(jié)論不同。可見飼料磷濃度對魚體的肝胰臟有重要的影響。本研究中，草魚肝臟的粗脂肪含量隨著飼料中磷濃度的增加有降低的趨勢，在無磷組飼料中，脂肪含量最高，說明飼料磷的缺乏可能導(dǎo)致脂肪肝的發(fā)生。與胡王龍[3]在黑鯛、Sakamoto等[4]在鯉魚上的研究結(jié)果一致。在本試驗中，血清中的甘油三酯和膽固醇的含量都是Ⅳ含量最高，兩者都有隨著磷含量的增加而先增大再減小的趨勢，在Ⅳ組達(dá)到最高然后隨著磷含量的增加而降低，這與胡王龍[3]在黑鯛的研究中得出的隨著飼料磷的增加，血漿甘油三酯和總膽固醇含量有下降趨勢的結(jié)果相反，也與EI-Zibdeh[2]在大黃魚的研究發(fā)現(xiàn)，血清中甘油三酯和總膽固醇含量隨飼料中磷水平的升高而降低，具有明顯的線性關(guān)系的研究結(jié)果具有一定的差異?？赡苁怯捎隰~種的差異、養(yǎng)殖環(huán)境以及取樣的差異造成的。幾方面的結(jié)論說明在草魚飼料中磷缺乏是會導(dǎo)致魚體肝胰臟脂肪肝的發(fā)生。Takeuchi等[5]在鯉魚飼料磷和脂肪關(guān)系的研究以及Sakamoto[6]在真鯛中的研究認(rèn)為，飼料中磷含量的增加可降低魚體水分和脂肪的含量，同時增加蛋白的含量。這些研究者認(rèn)為，抑制脂肪酸的β-氧化可能導(dǎo)致魚體內(nèi)脂肪的大量積累，線粒體外游離脂肪酸和線粒體外輔酶在三磷酸腺苷酶催化作用下進行催化反應(yīng)生成?；o酶A進入線粒體，而這一過程中每激活一分子脂肪酸需要消耗兩個ATP，磷酸鹽缺乏可能會抑制這一過程，導(dǎo)致機體利用脂肪供能的能力降低，從而導(dǎo)致過多的脂肪在體內(nèi)累積。

3.2 對生長的影響和磷缺乏的標(biāo)志

本試驗的研究結(jié)果顯示，飼料中適量無機磷的添加對草魚的生長有明顯的促進作用，當(dāng)飼料總磷含量為8.07 g/kg（Ⅲ組）時，草魚的增重率和特定生長率明顯升高，進一步增加磷的含量，則生長有下降的趨勢。Roy等[7]研究發(fā)現(xiàn)，飼料磷水平對黑線鰭魚的生長有顯著的影響，隨著飼料磷水平的增加其增重率也增加，但當(dāng)飼料磷水平達(dá)到1.02%時，其增重率隨著飼料中磷含量水平的增加而呈降低趨勢。胡王龍[3]對黑鯛幼魚的研究、EI-Zibdeh[2]對大黃魚的研究、Rodehutscord等[8]對虹鱒和Jokinen等[9]對歐洲白鱘的研究中也有類似的結(jié)論。由此可以推論，飼料中磷的含量對魚體的正常生長具有重要的作用，在適量的添加范圍內(nèi)能有效地促進魚體的生長，如果磷不足或者磷過量都會對魚體的生長造成阻礙作用。阻礙生長的原因可能是由于大部分磷被分配用于維持其它生理代謝過程，而用于生長的磷不足，因此阻礙魚體的生長發(fā)育，導(dǎo)致低磷飼料組增重降低[10]。

在魚類營養(yǎng)研究中，關(guān)于磷缺乏的標(biāo)志，國內(nèi)外在不同的魚類上已經(jīng)有了眾多的研究，魚體灰分和磷含量常被作為魚體磷狀況的評價指標(biāo)[11-12]，脊椎骨中磷含量更是由于磷在骨骼中的重要作用而成為反映魚體磷營養(yǎng)狀態(tài)更為靈敏的指標(biāo)[13-17]。

其它的磷缺乏的標(biāo)志還包括生長緩慢[18]、攝食率低[16]、骨骼礦化低[19]、鰓蓋和鱗片磷含量低[20]、骨骼軟化和骨骼畸形[16]等。在本試驗研究中，各組分磷指標(biāo)與飼料磷水平相關(guān)系數(shù)最高的為草魚全魚磷含量，而鰓蓋骨磷含量與飼料磷水平有較高的負(fù)相關(guān)關(guān)系，因此認(rèn)為草魚全魚磷含量和鰓蓋骨磷含量可以作為飼料磷水平判定的靈敏指標(biāo)。關(guān)于飼料磷水平相對應(yīng)的磷水平判定指標(biāo)的范圍值尚待進一步的研究。

4 結(jié)論

①在本試驗條件下，草魚對純化飼料中的磷需求量濃度為8.07 g/kg，過高或過低都不利于草魚的生長。

②鰓蓋骨磷含量和全魚磷含量可作為草魚磷缺乏的一個判斷標(biāo)志。