徐 靜，李 磊，張 麗，袁碧波，張仁亞，楊林青

(1天津醫(yī)科大學(xué)研究生院，天津300070;2濟寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院;3天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院)

近年來宮頸癌發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢，發(fā)病年齡趨于年輕化。研究證實，宮頸癌的發(fā)生與HPV感染密切相關(guān)。正常宮頸經(jīng)過宮頸上皮內(nèi)瘤變發(fā)展成宮頸癌是個漸進(jìn)過程，如何在這個漸進(jìn)過程中進(jìn)行及時有效防控，目前是研究的熱點［1］。國外研究表明hTERC基因在宮頸癌前病變及宮頸鱗癌患者宮頸組織中有不同程度陽性表達(dá)，有助于宮頸病變的早期診斷和篩查［2，3］，國內(nèi)相關(guān)研究較少。2013年8月～12月，我們采用熒光原位雜交(fFISH)技術(shù)檢測不同CIN分級及宮頸癌患者宮頸病變組織及正常宮頸組織中 hTERC基因表達(dá)情況，分析hTERC基因表達(dá)對宮頸病變及宮頸癌早期診斷的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2007年1月～2009年1月就診于濟寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，病理檢查診斷為宮頸CIN及宮頸癌的150患者例，年齡23～66歲，平均45.8歲。入選標(biāo)準(zhǔn):①能夠配合隨訪調(diào)查;②術(shù)前無放化療史;③除外其他性傳播疾病、免疫系統(tǒng)疾病及傳染性疾病、全身其他部位有惡性腫瘤者;④非孕婦女;⑤宮頸鱗狀上皮病變者。其中CIN I級30例、CINⅡ級30例、CINⅢ級30例、宮頸鱗癌60例。宮頸癌中高分化39例，中分化15例，低分化6例;FIGO分期Ⅰ期37例，Ⅱa期23例;有淋巴轉(zhuǎn)移22例，無轉(zhuǎn)移38例。選擇30例因良性病變切除子宮的患者作為對照。

1.2 hTERC基因表達(dá)情況檢測 收集病理科儲存的上述患者及對照者宮頸活檢或手術(shù)切除的宮頸組織蠟塊標(biāo)本，用fFISH技術(shù)檢測hTERC基因表達(dá)。按照fFISH檢測試劑盒說明書操作。單個間期細(xì)胞核中紅色及綠色信號各2個為正常細(xì)胞。單個間期細(xì)胞核中綠色信號不少于2個、紅色信號多于2個為hTERC基因陽性表達(dá)細(xì)胞。每個樣本觀察100個細(xì)胞，計數(shù)其中hTERC基因陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)目，并計算hTERC基因陽性表達(dá)細(xì)胞百分率。采用FISH法檢測正常宮頸組織中hTERC基因陽性表達(dá)情況的方法計算宮頸組織中hTERC基因陽性表達(dá)細(xì)胞百分率的閾值(6%)，超過此閾值為標(biāo)本hTERC基因表達(dá)陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件。不同宮頸病變組織中hTERC基因陽性表達(dá)情況比較采用χ2檢驗或用 Fisher確切概率法，生存率分析用Kaplan-Meier生存曲線法。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

正常對照者宮頸組織，CINⅠ級、CINⅡ級、CINⅢ級及宮頸癌組織中hTERC基因陽性表達(dá)0例(0)、3 例(10%)、19 例(63.3%)、25 例(83.3%)、55例(91.7%)。hTERC基因陽性表達(dá)率宮頸癌CINⅢ級＞CINⅡ級＞CINⅠ級，P均＜0.05。宮頸癌組織中hTERC基因陽性表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1。由表1可見，宮頸癌組織中hTERC基因陽性表達(dá)情況與分化程度、FIGO臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P均＞0.05)。宮頸癌患者中hTERC基因陰性、陽性表達(dá)者5年累積生存率分別為79.2%、75.3%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 宮頸癌組織中hTERC基因陽性表達(dá)情況與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

高危型HPV感染是宮頸癌的主要致病因素，但最終只有極少數(shù)發(fā)展成宮頸癌。大量研究證實，癌基因激活、抑癌基因失活、端粒酶活性激活以及各種細(xì)胞因子的共同參與，最終導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生［1］。人類端粒酶由端粒酶mRNA(hTERC)、端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)及端粒酶結(jié)合蛋白(hTP1)組成。其中 hTERC基因由 Feng等［3］1995年首次發(fā)現(xiàn)，hTERC基因的主要作用是阻止細(xì)胞凋亡因而導(dǎo)致腫瘤產(chǎn)生。Hopman等［4］研究發(fā)現(xiàn) 80%的 HPV DNA整合CIN病變中可見hTERC基因表達(dá)陽性，且hTERC基因拷貝數(shù)隨CIN病變的嚴(yán)重程度而增加，hTERC基因陽性表達(dá)率可作為宮頸病變的獨立預(yù)測指標(biāo)。Sokolova等［5］研究認(rèn)為宮頸癌發(fā)生的早期，HPV病毒的整合導(dǎo)致或伴隨染色體不穩(wěn)定發(fā)生，致癌基因 E6/E7編碼的原癌蛋白表達(dá)，引起hTERC基因異常擴增，阻止細(xì)胞調(diào)亡，使細(xì)胞異常分化，導(dǎo)致細(xì)胞癌變發(fā)生。袁艷龍等［6］研究發(fā)現(xiàn)在組織切片上應(yīng)用FISH技術(shù)檢測hTERC基因，在鑒別CINⅠ與CINⅡ/Ⅲ病變時有較高的敏感性、準(zhǔn)確率及陽性預(yù)測值。Umayahara等［7］研究發(fā)現(xiàn)端粒酶活性改變是很多腫瘤發(fā)展的必由之路。宮頸癌的基因擴增區(qū)域中心為染色體3q26.2，而此區(qū)域包含了hTERC基因。因此hTERC基因很可能是與宮頸癌密切相關(guān)的靶基因。李靜然等［8］研究表明，隨宮頸病變程度增加，hTERC基因表達(dá)率逐漸增加，隨組織學(xué)病變程度加重，基因拷貝數(shù)明顯增加，可作為癌前病變進(jìn)展的生物遺傳學(xué)檢測指標(biāo)。hTERC基因與宮頸癌的關(guān)系已成為研究熱點［9～14］。

本研究結(jié)果顯示，隨宮頸病變級別增高，hTERC基因陽性表達(dá)率明顯上升，hTERC基因陽性表達(dá)率宮頸癌組織＞CINⅢ級宮頸病變組織＞CINⅡ級宮頸病變組織＞CINⅠ級宮頸病變組織。與上述文獻(xiàn)相符。hTERC基因與宮頸癌FIGO臨床分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌患者中hTERC基因陽性表達(dá)者的5年累積生存率和hTERC基因陰性者相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。考慮其原因可能是:①腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后是多基因、多步驟、多因素共同作用的結(jié)果，而非某個基因和蛋白的單獨作用，hTERC基因表達(dá)對宮頸癌預(yù)后的影響可能只是其中一部分。②本研究入組病例較少。

綜上所述，hTERC基因在各級CIN和宮須癌組織中均有陽性表達(dá)，其陽性表達(dá)率隨著宮頸病變程度增加而增加。采用FISH方法檢測宮頸組織hTERC基因陽性表達(dá)率有助于宮頸病變篩查。

［1］崔英，胥愛輝，蔡永娥，等.人乳頭瘤病毒(HPV)至宮頸癌的分子機制研究［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2008，16(1):143-145.

［2］Cohen SB，Graham ME，Lovrecz GO，et al.Protein composition of catalytically active human telomerase from immortal cells［J］.Science，2007，315(5820):1850-1853.

［3］Feng J，F(xiàn)unk WD，Wang SS，et al.The RNA Component of human telomerase.［J］.Science，1995，269(5228):1236-1241.

［4］Hopman AH，Theelen W，Hommelberg PP，et al.Genomic integration of oncogenic HPV and gain of the human telomerase gene TERC at 3q26 are strongly associated events in the progression of uterine cervical dysplasia to invasive cancer［J］.J Pathol，2006，210(4):412-419.

［5］Sokolova I，Algeciras－ Schimnich A，Song M，et al.Chromosomal biomarkers for detection of human papillomavirus associated genomic instability in epithelial cells of cervical cytology specimens［J］.J Mol Diagn，2007，9(5):604-611.

［6］袁艷龍，何春年，徐明堂，等.應(yīng)用熒光原位雜交技術(shù)在組織標(biāo)本中檢測宮頸上皮病變的端粒酶RNA基因擴增［J］.中華病理學(xué)雜志，2011，40(3):182-186.

［7］Umayahara K，Hirai Y，Sugiyama Y，et al.Genetic alterations during the progression of early cervical neoplasm［J］.Proc Amer Assoc Cancer Res，2005，46(8):132-136.

［8］李靜然，魏麗惠，劉寧，等.FISH檢測宮頸脫落細(xì)胞hTERC基因的表達(dá)及其臨床意義［J］.現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2008，17(10):725-729.

［9］Kirwan M，Beswick R，Vulliamy T，et al.Exogenous TERC alone can enhance proliferative potential，telomerase activity and telomere length in lymphocytes from dyskeratosis congenita patients［J］.Br J Haematol，2009，144(5):771-781.

［10］Bin H，Ruifang W，Ruizhen L，et al.Detention of HPV L1 capsid protein and hTERC gene in screening of cervical cancer［J］.Iran J Basic Med Sci，2013，16(6):797-802.

［11］Zheng X，Liang P，Zheng Y，et al.Clinical significance of hTERC gene detection in exfoliated cervical epithelial cells forcervical lesions［J］.Int J Gynecol Cancer，2013，23(5):785-790.

［12］Obermann EC，Savic-Prince S，Barascud A，et al.Prediction of outcome in patients with low-grade squamous intraepithelial lesions by fluorescence in situ hybridization analysis of human papillomavirus，TERC，and MYC［J］.Cancer Cytopathol，2013，121(8):423-431.

［13］Yin G，Li J，Zhu T，et al.The detection of hTERC amplification using fluorescence in situ hybridization in the diagnosis and prognosis of cervical intraepithelial neoplasia:a case control study［J］.World J Surg Oncol，2012，21(10):168.

［14］Chen SM，Lin W，Liu X，et al.Significance of human telomerase RNA gene amplification detection for cervical cancerscreening［J］.Asian Pac J Cancer Prev，2012，13(5):2063-2068.