欒永福孫 蓉

（1山東省中醫(yī)藥研究院，濟(jì)南，250014；2天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津，300073）

基于“溫補(bǔ)脾陽(yáng)”功效的附子“效—毒—證”關(guān)聯(lián)研究

欒永福1，2孫 蓉1

（1山東省中醫(yī)藥研究院，濟(jì)南，250014；2天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津，300073）

目的：分別研究附子水提物預(yù)防或治療給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠發(fā)揮溫補(bǔ)脾陽(yáng)功效時(shí)的藥效及其伴隨毒副作用。方法：按15%大黃粉懸液每天給藥劑量為8.9 g·kg-1·d-1，連續(xù)給藥9 d，且附加冰水游泳致力竭的方法，制備大鼠脾腎陽(yáng)虛證模型。預(yù)防實(shí)驗(yàn)組給藥與造模同時(shí)進(jìn)行，治療實(shí)驗(yàn)組造模成功后給藥，兩個(gè)實(shí)驗(yàn)藥物組均給藥9 d。實(shí)驗(yàn)期間進(jìn)行證候積分和體重稱量，并檢測(cè)血中TSH、IgG、C3等藥效指標(biāo)和LDH、CTn-I等心毒性指標(biāo)的水平。結(jié)果：附子水提物能改善脾腎陽(yáng)虛證大鼠的證候積分，增大脾體比值、腎體比值、腎上腺體比值和胸腺體比值，同時(shí)能升高血清中TSH、IgG、C3水平，且升高血LDH、CTn-I的水平，降低心體比值。結(jié)論：附子水提物對(duì)大黃致脾腎陽(yáng)虛證大鼠具有一定的預(yù)防和治療作用，同時(shí)均伴有一定的心臟毒性作用。

附子；脾腎陽(yáng)虛；功效；毒性

附子為毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaelliDebx.的子根的加工品，習(xí)稱“泥附子”[1]。其性辛、甘，大熱；有毒。歸心、腎、脾經(jīng)。具有回陽(yáng)救逆，補(bǔ)火助陽(yáng)，散寒止痛的功效。用于亡陽(yáng)虛脫，肢冷脈微，心陽(yáng)不足，胸痹心痛，虛寒吐瀉，脫腹冷痛，腎陽(yáng)虛衰，陽(yáng)痿宮冷，陰寒水腫，陽(yáng)虛外感，寒濕痹痛。附子是一味臨床常用中藥，然而其固有毒性影響了該藥的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用。其毒性物質(zhì)基礎(chǔ)主要是雙酯型二萜類生物堿，主要為烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿等烏頭屬類生物堿。

“是藥三分毒”，中藥毒性是“藥物”的一種基本屬性和客觀表現(xiàn)，中藥毒性與功效和證候密切相關(guān)，是在中醫(yī)辨證用藥和中藥發(fā)揮功效的過(guò)程中被逐漸認(rèn)知和發(fā)現(xiàn)的，因此，中藥毒性應(yīng)當(dāng)放在功效（適應(yīng)證）和中醫(yī)的“證候”中間進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)和認(rèn)知，不能孤立地就毒性論毒性。

附子作為有毒中藥在不同證候模型上體現(xiàn)的功效與毒性有一定的差異性，因此附子的功效與毒性應(yīng)當(dāng)放在證候的背景下進(jìn)行合理評(píng)價(jià)和科學(xué)認(rèn)知。只有在其主治證候的基礎(chǔ)上進(jìn)行功效與毒性研究，才符合中醫(yī)藥的研究特點(diǎn)，才能科學(xué)合理地進(jìn)行有毒中藥的毒性-功效-證候關(guān)聯(lián)性評(píng)價(jià)。脾腎陽(yáng)虛證是指脾腎陽(yáng)氣虛衰、陰寒內(nèi)生所表現(xiàn)的虛寒證候，臨床表現(xiàn)為畏寒喜溫、形寒肢冷、乏力、消瘦、便溏及腹瀉等[2]，為附子的主治證候之一。鑒于此，本實(shí)驗(yàn)制備了脾腎陽(yáng)虛證大鼠模型，并對(duì)附子水提物對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠的功效與毒性進(jìn)行了觀察和評(píng)價(jià)，將附子的功效與毒性放在證候的基礎(chǔ)上綜合評(píng)價(jià)，平衡利弊，以期為附子在臨床實(shí)踐中可以更加安全、更加合理、更具療效的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，進(jìn)而合理闡釋中醫(yī)理論中“藥以治病，因毒為能”的合理性與科學(xué)性。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物 附子（Aconitum carmichaeliDebx.），購(gòu)自北京同仁堂飲片有限責(zé)任公司，批號(hào)：201232732 -S。經(jīng)山東省中醫(yī)藥研究院林慧彬研究員鑒定為毛茛科植物烏頭的子根，按2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》（以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》）附子項(xiàng)下檢查，符合各項(xiàng)規(guī)定。取附子藥材1000 g用10倍量水浸泡，加熱回流提取2次，每次1.5 h，16層紗布過(guò)濾，取藥液濃縮至含生藥量1.2 g·mL-1，批號(hào)：20130419。實(shí)驗(yàn)前分別用蒸餾水稀釋至1.080 g·m L-1、0.540 g·m L-1、0.270 g·mL-1、0.191 g·mL-1、0.135 g·m L-1、0.096 g·mL-1、0.068 g·mL-1，備用。

附子理中丸（北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠），由附子（制）100 g、黨參200 g、白術(shù)（炒）150 g、干姜100 g、甘草100 g制成，產(chǎn)品批號(hào)：12011329。附子理中丸具有溫中健脾之功效，用于脾胃虛寒，脘腹冷痛，嘔吐泄瀉，手足不溫。故用其作為大黃所致脾腎陽(yáng)虛證的陽(yáng)性藥。實(shí)驗(yàn)前用蒸餾水制成0.243 g· mL-1水懸液，備用。

大黃（山東百味堂中藥飲片有限公司），批號(hào)：121101。經(jīng)山東省中醫(yī)藥研究院林慧彬研究員鑒定為藥用大黃Rheum officinaleBaill.的干燥根及根莖，且符合各項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)，可用于實(shí)驗(yàn)研究。實(shí)驗(yàn)前用蒸餾水制成15%大黃粉懸液，備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠，雄性，體重140～200 g，共100只，購(gòu)自山東省魯抗醫(yī)藥股份有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（魯）20130001。

1.3 儀器與試劑 YP20001電子天平（上海上天精密儀器有限公司）；AL104電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）；KDM型調(diào)溫電熱套，購(gòu)于山東鄄城華魯電熱儀器有限公司；DZKM-S-6電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）。UV-2102 PC型紫外可見(jiàn)分光光度儀（中美合資尤尼柯有限公司），常規(guī)病理檢測(cè)儀器等。

TSH（促甲狀腺素）（201307）、IgG（免疫球蛋白）（201307）、C3（C3補(bǔ)體）（201307）、LDH（乳酸脫氫酶）（20130722）、CTn-I（心肌肌鈣蛋白）（201307）試劑盒均購(gòu)自由南京建成生物工程研究所。

1.4 劑量設(shè)置依據(jù) 按照2010版《中國(guó)藥典》規(guī)定，附子人臨床日用量為3～15 g，按最大劑量換算至大鼠則為1.35 g·kg-1，所以設(shè)置相當(dāng)于人日用量的1、2、4、8倍劑量組，于1、2倍劑量之間設(shè)置1個(gè)劑量組，于1倍劑量之下設(shè)置2個(gè)劑量組。因此本實(shí)驗(yàn)設(shè)置7個(gè)劑量組：10.80、5.40、2.70、1.91、1.35、0.96、0.68 g· kg-1。

附子理中丸，人日用量3粒，每粒9 g，所以人日用量為27 g／d，換算至大鼠則為2.43 g·kg-1·d-1。因此本實(shí)驗(yàn)將其濃度配置為0.243 g·mL-1，按10 mL· kg-1灌胃給藥。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 脾腎陽(yáng)虛證大鼠模型的制備 大鼠每天上午灌胃15%大黃粉懸液，用藥量為8.9 g·kg-1·d-1，連服9 d，下午冰水游泳致力竭（力竭標(biāo)準(zhǔn)為全身下沉至沒(méi)頸，不能堅(jiān)持游泳）。有萎靡、倦臥、毛枯槁、畏寒、消瘦、四肢不收、便溏脫肛、納呆、活動(dòng)頻度下降、肛門紅腫等表現(xiàn)者為造模成功[3]。

2.2 實(shí)驗(yàn)分組與給藥

2.2.1 附子水提物預(yù)防給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠的效毒關(guān)聯(lián)評(píng)價(jià) 取大鼠100只，雌性各半，按體重分為正常對(duì)照組、脾腎陽(yáng)虛證模型組、附子水提物10.80、5.40、2.70、1.91、1.35、0.96、0.68 g·kg-1劑量組和中藥陽(yáng)性藥組。

對(duì)照組每天按10 mL·kg-1灌胃蒸餾水；模型組每天進(jìn)行造模；附子各劑量組每天造模后按10mL·kg-1分別灌胃10.80、5.40、2.70、1.91、1.35、0.96、0.68 g ·kg-1生藥量的附子水提物；中藥陽(yáng)性藥組每天造模后按10 mL·kg-1灌胃2.43 g·kg-1的附子理中丸水懸液。

2.2.2 附子水提物治療給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠的效毒關(guān)聯(lián)評(píng)價(jià) 取成模大鼠90只，雌雄各半，按體重分為脾腎陽(yáng)虛證模型組、附子水提物10.80、5.40、2.70、1.91、1.35、0.96、0.68 g·kg-1劑量組和中藥陽(yáng)性藥組，另取10只雌雄各半正常大鼠作為對(duì)照組。

對(duì)照組和模型組每天按10 m L／kg灌胃蒸餾水；附子各劑量組每天按10 mL·kg-1分別灌胃10.80、5.40、2.70、1.91、1.35、0.96、0.68 g·kg-1生藥量的附子水提物；中藥陽(yáng)性藥組每天按10 mL·kg-1灌胃2.43 g·kg-1的附子理中丸水懸液。

2.3 觀察與記錄 每天稱量體重并進(jìn)行證候積分，積分標(biāo)準(zhǔn)[4]如表1。

表1 脾腎陽(yáng)虛證大鼠證候積分表

2.4 標(biāo)本采集與檢測(cè) 末次給藥24 h后，大鼠摘眼球法取血后脫頸椎處死，取心、肝、脾、腎、腦、腎上腺、胸腺稱重，然后用將血漿進(jìn)行3500 r／min離心10 min，取上清液檢測(cè)TSH、IgG、C3、LDH、CTn-I的含量。

2.5 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)與處理 數(shù)據(jù)用（ˉx±s）表示，采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理和組間比較，P＜0.05為數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 對(duì)體重變化的影響

3.1.1 預(yù)防實(shí)驗(yàn) 附子水提物預(yù)防給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠體重的影響，詳見(jiàn)表2。

表2 附子水提物預(yù)防給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠體重的影響（±s，n＝10）

表2 附子水提物預(yù)防給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠體重的影響（±s，n＝10）

注：與模型組相比，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，***表示P＜0.001。（下同）

組附子理中丸組劑量（g·kg-1）——組別對(duì)照組模型組附子1組附子2組附子3組附子4組附子5組附子6組附子7 10.80 5.40 2.70 1.91 1.35 0.96 0.68 2.43 d0 208.0±11.8 206.3±14.4205.0±11.9 203.9±9.8 203.0±8.4 202.9±8.3 202.9±8.0 202.8±7.7 202.5±7.2 202.6±7.1 d1 213.5±17.1 209.7±14.6211.6±12.1 209.4±9.1 208.3±9.1 208.6±8.4 208.6±7.3 209.0±7.7 208.6±7.8 207.6±7.5 d2 220.7±17.0 212.7±11.3217.6±12.0 214.8±8.9 214.4±9.8 213.9±8.8 214.7±6.4 215.0±7.0 214.8±8.2 213.4±6.9 d3 227.8±16.9 218.7±10.0220.4±10.2 221.0±8.0 220.1±10.1 218.6±8.8 220.6±6.2 220.9±6.2 221.0±7.3 223.2±6.2 d4 235.3±16.3 223.7±10.0226.3±9.9 226.9±7.8 226.5±10.1 223.6±9.7 226.3±5.5 226.5±6.6 226.3±7.5 232.6±5.3*d5 243.0±17.0*228.3±9.8 232.9±9.7 233.3±8.0 232.9±10.2 229.4±10.0 231.9±5.2 232.8±6.3 232.2±7.7 239.1±4.9**d6 250.8±17.2**231.2±6.0 238.2±9.6 239.8±7.7*239.2±11.4 235.5±10.2 238.4±6.3*238.9±6.5*237.5±7.6 248.9±7.3**d7 256.7±16.8*235.8±6.2 244.6±9.6*246.2±7.7**246.2±11.4*247.4±5.8***247.9±4.2***247.4±4.4***247.0±4.9***253.9±4.5***d8 264.9±15.0***240.1±6.8 252.7±6.6***253.2±6.0***254.1±9.4**255.2±5.0***254.8±3.1***253.4±4.7***252.8±3.6***259.8±4.5***d9 271.5±15.5***244.0±7.0 255.5±8.8**256.4±8.1**258.0±8.9**258.3±6.3***257.1±4.2***257.0±3.5***256.2±5.1***268.7±10.3***

由表2可知，與正常組相比，脾腎陽(yáng)虛模型組大鼠體重增長(zhǎng)明顯緩慢；預(yù)防給藥附子水提物后，大鼠體重增長(zhǎng)加快，在一定的范圍內(nèi)隨著劑量的增大體重增長(zhǎng)幅度升高。

3.1.2 治療實(shí)驗(yàn) 附子水提物治療給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠體重的影響，詳見(jiàn)表3。由表3可知，與正常組相比，脾腎陽(yáng)虛模型組大鼠體重增長(zhǎng)明顯緩慢；治療給藥附子水提物后，大鼠體重增長(zhǎng)加快，在一定的范圍內(nèi)隨著劑量的增大體重增長(zhǎng)幅度升高。

表3 附子水提物治療給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠體重的影響（±s，n＝10）

表3 附子水提物治療給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠體重的影響（±s，n＝10）

組附子理中丸組劑量（g·kg-1）——組別對(duì)照組模型組附子1組附子2組附子3組附子4組附子5組附子6組附子7 10.80 5.40 2.70 1.91 1.35 0.96 0.68 2.43 d0 174.3±11.8 174.4±11.7174.5±11.7 174.4±11.7 174.4±11.5 174.9±11.5 175.0±11.4 174.9±11.4 174.9±11.4 174.9±11.4 d1 180.1±12.7 178.8±11.7180.3±11.8 179.5±12.2 181.0±11.5 180.6±12.2 181.0±12.4 182.2±11.6 182.1±12.0 180.9±11.8 d2 185.8±13.4 183.9±12.0185.6±12.2 184.7±12.3 186.2±11.8 184.9±11.9 185.4±12.4 185.2±12.2 187.2±12.6 185.8±11.6 d3 192.0±14.3 188.7±12.2190.7±12.1 190.4±12.1 190.5±12.4 189.8±13.3 191.3±12.3 187.2±13.4 192.1±12.6 190.8±11.8 d4 197.5±14.0 193.0±12.7193.7±12.8 192.7±12.4 193.5±13.0 193.7±13.5 194.3±12.4 191.7±12.7 194.8±12.8 193.6±12.0 d5 202.2±14.8 194.2±13.5196.7±13.1 194.8±12.1 195.5±13.1 196.8±12.7 195.1±12.9 194.3±12.2 197.8±12.8 197.6±13.0 d6 206.8±16.6 198.0±13.4199.8±12.8 197.2±12.3 198.9±12.1 199.9±13.0 197.1±12.7 197.2±11.9 199.2±13.3 199.1±13.3 d7 211.6±15.7 201.4±12.7203.4±13.3 201.7±12.8 202.2±12.8 203.6±13.1 199.6±12.7 200.7±12.3 202.0±13.5 202.8±13.9 d8 216.1±16.6 203.2±12.2205.5±14.0 204.2±13.1 204.3±13.2 205.7±12.6 201.4±12.7 204.3±12.6 205.9±13.5 204.5±13.8 d9 219.8±17.2 205.7±12.5209.2±14.4 207.6±13.6 206.2±13.1 207.5±13.0 204.5±13.1 207.7±12.7 208.8±13.8 207.5±14.1 d10 225.2±17.6*210.4±13.5210.7±14.6 210.0±13.6 209.7±13.0 211.4±14.3 207.5±12.2 210.7±13.4 212.4±14.6 214.1±14.2 d11 233.0±16.7**212.6±14.4215.8±14.9 214.4±13.8 215.6±13.1 214.8±14.4 213.0±12.2 213.0±12.5 213.4±11.0 218.9±14.8 d12 239.4±16.7**214.2±15.5222.5±15.5 220.5±13.5 220.6±13.4 220.6±14.4 220.5±9.1 219.6±14.1 219.4±11.8 222.8±15.2 d13 246.0±16.3***216.9±14.8227.4±15.8 225.7±11.8 225.4±11.2 225.4±14.9 224.8±9.7 224.7±12.7 224.3±12.9 231.5±16.4 d14 252.1±16.6***221.2±15.3234.9±16.0 233.9±9.32*233.6±10.9 234.5±10.7*231.0±8.2 230.4±12.9 230.4±13.7 239.6±16.5*d15 258.0±17.6***226.0±13.2240.1±16.3*240.3±8.0**241.0±7.8**242.0±8.5**242.1±4.8**240.9±8.0**241.0±10.0*246.6±15.4**d16 264.4±17.4***228.2±15.4245.5±18.0*245.3±10.5**246.8±8.2**252.4±7.0***250.0±3.3***248.9±5.5***248.9±7.7**251.1±14.9**d17 272.3±17.9***230.8±15.1250.9±19.0*251.1±15.5**253.4±15.1**259.1±9.0***257.0±6.4***255.2±8.5***254.8±17.3**259.2±15.7***d18 280.5±18.4***234.9±15.1258.9±14.6**261.1±12.7***264.7±11.7***267.0±8.5***267.4±14.2***267.0±15.5***267.4±17.6***271.0±12.0***

3.2 改善脾腎陽(yáng)虛證候藥效ED50值

3.2.1 預(yù)防實(shí)驗(yàn) 附子水提物對(duì)脾腎陽(yáng)虛模型大鼠的預(yù)防作用藥效ED50計(jì)算數(shù)據(jù)見(jiàn)表4（證候積分小于3為有效），附子水提物預(yù)防給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛模型大鼠證候積分的影響見(jiàn)圖1。

表4 附子水提物對(duì)脾腎陽(yáng)虛模型大鼠的預(yù)防作用藥效ED50計(jì)算數(shù)據(jù)表

由Bliss法計(jì)算得回歸方程y＝4.8830+ 4.1912Log（D），半數(shù)有效量ED50＝1.0664 g·kg-1，ED5095%的可信限為0.7740～1.3406 g·kg-1，ED5＝0.4320 g·kg-1，ED95＝2.6326 g·kg-1。

圖1 附子水提物預(yù)防給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠證候積分的影響

由圖1可知，預(yù)防給藥附子水提物后，脾腎陽(yáng)虛大鼠證候積分明顯減小，且隨著劑量的增大，效果越顯著。

3.2.2 治療實(shí)驗(yàn) 附子水提物對(duì)脾腎陽(yáng)虛模型大鼠的預(yù)防作用藥效ED50計(jì)算數(shù)據(jù)表見(jiàn)表5（證候積分小于3為有效），附子水提物對(duì)預(yù)防給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛模型大鼠證候積分的影響見(jiàn)圖2。

由Bliss法計(jì)算得回歸方程y＝4.9146+ 3.8587Log（D），半數(shù)有效量ED50＝1.0523 g·kg-1，ED5095%的可信限＝0.7306～1.3416 g·kg-1，ED5＝0.3943 g·kg-1，ED95＝2.8081 g·kg-1。

表5 附子水提物對(duì)脾腎陽(yáng)虛模型大鼠的治療作用藥效ED50計(jì)算數(shù)據(jù)表

圖2 附子水提物治療給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠證候積分的影響

由圖2可知，治療給藥附子水提物后，脾腎陽(yáng)虛證大鼠證候積分明顯降低，且隨著劑量的增大，效果更加顯著。

3.3 對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠藥效生化指標(biāo)的影響 附子水提物對(duì)預(yù)防給藥和治療給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛模型大鼠血

TSH、IgG、C3指標(biāo)的影響分別見(jiàn)表6和表7。

表6 附子水提物預(yù)防給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠血清TSH、IgG、C3的影響（±s，n＝10）

表6 附子水提物預(yù)防給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠血清TSH、IgG、C3的影響（±s，n＝10）

TSH IgG C3對(duì)照組28.2±3.5***12.5±1.3***486.5±20.8組別***模型組18.4±2.2 9.3±1.0 398.8±10.6附子10.8 g·kg-1組25.0±2.5***11.3±1.1***457.9±11.9***附子5.4 g·kg-1組24.1±2.4***11.2±0.9***449.9±9.3***附子2.7 g·kg-1組22.9±1.4***11.0±1.4**441.4±5.9***附子1.91 g·kg-1組22.4±1.0***10.9±1.6*429.3±9.9***附子1.35 g·kg-1組21.3±0.9**10.4±0.8*416.8±20.6*附子0.96 g·kg-1組20.4±0.7*10.4±0.9*412.2±15.9*附子0.68 g·kg-1組19.5±1.0 9.5±1.0 401.3±28.9附子理中丸組26.9±1.8***12.0±1.5***469.0±13.0***

表7 附子水提物治療給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠血清TSH、IgG、C3的影響（±s，n＝10）

表7 附子水提物治療給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠血清TSH、IgG、C3的影響（±s，n＝10）

TSH IgG C3對(duì)照組28.6±3.3***12.7±1.3***490.8±24.1組別***模型組18.8±2.2 9.4±1.0 403.1±9.3附子10.8 g·kg-1組25.5±2.4***11.5±1.1***462.5±12.0***附子5.4 g·kg-1組24.6±2.4***11.4±0.9***454.4±9.5***附子2.7 g·kg-1組23.3±1.2***11.2±1.4**445.7±6.0***附子1.91 g·kg-1組22.8±1.0***11.1±1.6*433.4±10.1***附子1.35 g·kg-1組21.7±0.9**10.6±0.9*420.6±21.0*附子0.96 g·kg-1組20.8±0.7***10.6±0.9*415.9±16.2*附子0.68 g·kg-1組19.9±1.0 9.7±1.0 404.8±29.4附子理中丸組27.4±1.8***12.2±1.5***473.2±14.2***

由表6可知，預(yù)防給藥附子水提物后，各組脾腎陽(yáng)虛大鼠TSH、IgG和C3水平顯著升高，且隨著劑量的增大，其效果越顯著。

由表7可知，治療給藥附子后，各組脾腎陽(yáng)虛證大鼠TSH、IgG和C3水平顯著升高，且隨著劑量的增大，其效果越顯著。

3.4 對(duì)臟體比值的影響

3.4.1 預(yù)防實(shí)驗(yàn) 附子預(yù)防給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠臟體比值的影響見(jiàn)表8、表9。

由表8可知，與模型組相比，預(yù)防給藥后，附子各劑量組均可引起脾腎陽(yáng)虛大鼠心體比值降低，但只有附子1組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；附子各劑量組均未引起脾腎陽(yáng)虛證大鼠肝體比值和腦體比值的顯著變化。

表8 附子預(yù)防給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠心、肝和腦體比值（g／100 g）的影響（±s，n＝10）

表8 附子預(yù)防給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠心、肝和腦體比值（g／100 g）的影響（±s，n＝10）

腦體比值對(duì)照組組別心體比值 肝體比值0.411±0.017 4.013±0.136 0.558±0.018模型組0.400±0.017 4.025±0.244 0.542±0.019附子10.8 g·kg-1組0.360±0.027**4.036±0.168 0.549±0.018附子5.4 g·kg-1組0.386±0.021 4.073±0.118 0.549±0.018附子2.7 g·kg-1組0.389±0.020 4.030±0.151 0.548±0.018附子1.91 g·kg-1組0.398±0.024 4.036±0.199 0.546±0.023附子1.35 g·kg-1組0.399±0.022 4.007±0.302 0.548±0.022附子0.96 g·kg-1組0.400±0.031 4.015±0.137 0.544±0.019附子0.68 g·kg-1組0.403±0.016 4.022±0.148 0.547±0.019附子理中丸組0.410±0.016 4.030±0.162 0.553±0.021

表9 附子預(yù)防給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠脾、腎、腎上腺和胸腺體比值（g／100 g）的影響（±s，n＝10）

表9 附子預(yù)防給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠脾、腎、腎上腺和胸腺體比值（g／100 g）的影響（±s，n＝10）

組別脾體比值 腎體比值 腎上腺體比值 胸腺體比值對(duì)照組0.321±0.017***0.714±0.023***0.019±0.001***0.191±0.002***模型組0.223±0.009 0.637±0.026 0.015±0.000 0.158±0.004附子10.8 g·kg-1組0.289±0.032***0.694±0.043**0.018±0.001***0.190±0.005***附子5.4 g·kg-1組0.266±0.011***0.689±0.028***0.018±0.000***0.189±0.005***附子2.7 g·kg-1組0.252±0.020***0.681±0.037**0.018±0.000***0.186±0.006***附子1.91 g·kg-1組0.243±0.010***0.672±0.035*0.018±0.000***0.187±0.005***附子1.35 g·kg-1組0.240±0.017**0.679±0.045*0.018±0.001***0.180±0.006***附子0.96 g·kg-1組0.238±0.006***0.675±0.044*0.018±0.000***0.179±0.007***附子0.68 g·kg-1組0.235±0.003***0.672±0.030*0.017±0.001***0.177±0.006***附子理中丸組0.314±0.028***0.687±0.022***0.019±0.001***0.189±0.005***

表10 附子治療給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠心、肝和腦體比值（g／100g）的影響（±s，n＝10）

表10 附子治療給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠心、肝和腦體比值（g／100g）的影響（±s，n＝10）

組別心體比值肝體比值腦體比值對(duì)照組0.426±0.013 4.038±0.235 0.531±0.014模型組0.428±0.024 4.068±0.100 0.533±0.025附子10.8 g·kg-1組0.378±0.017***4.057±0.236 0.532±0.019附子5.4 g·kg-1組0.381±0.017***4.083±0.276 0.543±0.028附子2.7 g·kg-1組0.382±0.005***4.087±0.094 0.535±0.021附子1.91 g·kg-1組0.383±0.025***4.073±0.203 0.524±0.023附子1.35 g·kg-1組0.393±0.022**4.066±0.190 0.527±0.030附子0.96 g·kg-1組0.398±0.0235*4.061±0.199 0.523±0.023附子0.68 g·kg-1組0.401±0.023*4.056±0.139 0.524±0.021附子理中丸組0.424±0.017 4.015±0.091 0.536±0.020

由表9可知，與模型組相比，預(yù)防給藥后，附子各劑量組均可引起脾腎陽(yáng)虛大鼠脾體比值顯著性升高，且隨著劑量的增大，其作用越顯著；附子各劑量組均可引起脾腎陽(yáng)虛大鼠腎體比值顯著性升高，且隨著劑量的增大，其作用越顯著；附子各劑量組均可引起脾腎陽(yáng)虛大鼠腎上腺體比值顯著性升高，且隨著劑量的增大，其作用越顯著；附子各劑量組均可引起脾腎陽(yáng)虛大鼠胸腺體比值顯著性升高，且隨著劑量的增大，其作用越顯著。

3.4.2 治療實(shí)驗(yàn) 附子治療給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠臟體比值的影響見(jiàn)表10、表11。

表11 附子治療給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠脾、腎、腎上腺和胸腺體比值（g／100g）的影響（±s，n＝10）

表11 附子治療給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠脾、腎、腎上腺和胸腺體比值（g／100g）的影響（±s，n＝10）

組別脾體比值腎體比值腎上腺體比值胸腺體比值對(duì)照組0.329±0.007***0.749±0.012***0.019±0.001***0.191±0.008***模型組0.281±0.025 0.711±0.008 0.017±0.001 0.163±0.006附子10.8 g·kg-1組0.311±0.019**0.732±0.010***0.018±0.001*0.184±0.009***附子5.4 g·kg-1組0.304±0.015*0.727±0.018*0.018±0.001*0.181±0.009***附子2.7 g·kg-1組0.300±0.005*0.724±0.014*0.018±0.001 0.180±0.008***附子1.91 g·kg-1組0.297±0.008 0.722±0.006**0.018±0.001*0.179±0.005***附子1.35 g·kg-1組0.290±0.006 0.722±0.008**0.018±0.001*0.178±0.007***附子0.96 g·kg-1組0.286±0.0034 0.716±0.011 0.018±0.000*0.177±0.004***附子0.68 g·kg-1組0.284±0.009 0.712±0.026 0.018±0.001*0.173±0.008**附子理中丸組0.323±0.009***0.743±0.012***0.018±0.001*0.188±0.009***

由表10可知，與模型組相比，治療給藥后，附子各劑量組均可引起脾腎陽(yáng)虛大鼠心體比值顯著性降低，且隨著劑量的增大，其作用越顯著；附子各劑量組均未引起脾腎陽(yáng)虛證大鼠肝體比值和腦體比值的顯著變化。

由表11可知，與模型組相比，治療給藥后，附子各劑量組均可引起脾腎陽(yáng)虛大鼠脾體比值顯著性升高，且隨著劑量的增大，其作用越顯著；附子各劑量組均可引起脾腎陽(yáng)虛大鼠腎體比值顯著性升高，且隨著劑量的增大，其作用越顯著；附子各劑量組均可引起脾腎陽(yáng)虛大鼠腎上腺體比值顯著性升高，且隨著劑量的增大，其作用越顯著；附子各劑量組均可引起脾腎陽(yáng)虛大鼠胸腺體比值顯著性升高，且隨著劑量的增大，其作用越顯著。

3.5 對(duì)藥效伴隨毒性指標(biāo)LDH、CTN-I的影響

3.5.1 預(yù)防實(shí)驗(yàn) 附子水提物預(yù)防給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛大鼠血生化指標(biāo)LDH、CTN-I的影響見(jiàn)表12。

表12 附子水提物預(yù)防脾腎陽(yáng)虛實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠LDH、CTN-I的影響（±s，n＝10）

表12 附子水提物預(yù)防脾腎陽(yáng)虛實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠LDH、CTN-I的影響（±s，n＝10）

組別LDH（U·L-1）CTN-I（pg·mL-1）對(duì)照組521.6±29.8 272.1±24.6模型組518.5±60.7 285.3±25.1附子10.8 g·kg-1組679.2±69.1***378.1±32.2***附子5.4 g·kg-1組634.1±74.6**375.0±39.7***附子2.7 g·kg-1組607.3±73.0**338.3±27.4***附子1.91 g·kg-1組589.7±73.62*333.0±31.8**附子1.35 g·kg-1組569.3±40.4*317.9±29.8*附子0.96 g·kg-1組526.0±36.9 309.4±14.8*附子0.68 g·kg-1組519.9±80.1 280.3±43.2附子理中丸組523.5±102.7 284.3±69.8

由表12可知，預(yù)防給藥后，附子各劑量組均可引起脾腎陽(yáng)虛大鼠血LDH、CTN-I顯著性升高，且隨著劑量的增大，其作用越顯著。

表13 附子水提物治療脾腎陽(yáng)虛實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠LDH、CTN-I的影響（±s，n＝10）

表13 附子水提物治療脾腎陽(yáng)虛實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠LDH、CTN-I的影響（±s，n＝10）

組別LDH（U·L-1）CTN-I（pg·m L-1）對(duì)照組526.4±30.3 276.1±24.8模型組523.9±61.5 289.4±25.3附子10.8 g·kg-1組686.0±69.8***383.0±32.5***附子5.4 g·kg-1組640.4±75.3**380.0±40.1***附子2.7 g·kg-1組613.5±73.7**342.9±27.6***附子1.91 g·kg-1組595.9±74.5*337.5±32.2**附子1.35 g·kg-1組574.9±41.0*322.3±30.2*附子0.96 g·kg-1組531.3±37.3 313.8±15.0*附子0.68 g·kg-1組525.0±80.9 284.3±43.7附子理中丸組528.5±103.6 288.2±70.4

3.5.2 治療實(shí)驗(yàn) 附子水提物治療給藥對(duì)脾腎陽(yáng)虛大鼠血生化指標(biāo)LDH、CTN-I的影響見(jiàn)表13。

由表13可知，治療給藥后，附子各劑量組均可引起脾腎陽(yáng)虛大鼠血LDH、CTN-I顯著性升高，且隨著劑量的增大，其作用越顯著。

4 結(jié)論與討論

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)預(yù)防給藥和治療給藥附子水提物后，脾腎陽(yáng)虛證大鼠的體重增長(zhǎng)狀況較模型組顯著加快，癥狀亦得到顯著改善，其脾體比值、腎體比值、腎上腺體比值和胸腺體比值均有所升高，同時(shí)血清TSH、IgG和C3的水平亦有所升高，且均呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。體重增長(zhǎng)加快說(shuō)明模型組大鼠脾臟的運(yùn)化水谷功能得到改善，IgG和C3的水平升高則從免疫力方面反映了脾陽(yáng)虛癥狀的改善，脾體比值的升高和證候積分的降低則進(jìn)一步說(shuō)明了模型大鼠的脾陽(yáng)虛證得到一定的改善；同理，模型大鼠TSH水平的升高提示其甲狀腺功能得到恢復(fù)，其腎臟和腎上腺的重量指數(shù)的升高亦說(shuō)明其性腺軸和腎上腺軸水平得到改善，證候積分的降低同樣說(shuō)明模型大鼠的腎陽(yáng)虛證得到緩解[5-7]。但是，比較預(yù)防給藥和治療給藥的藥效，二者的半數(shù)有效量相接近，但預(yù)防給藥的ED95則小于治療給藥，說(shuō)明附子水提物能對(duì)大黃致脾腎陽(yáng)虛證大鼠的預(yù)防藥效強(qiáng)于治療藥效。LDH和CTN-I是心臟受到損傷的指標(biāo)，附子水提物能顯著升高血中LDH和CTN-I的水平，并降低大鼠心體比值，且存在一定的劑量依賴性，說(shuō)明其發(fā)揮藥效的同時(shí)伴有一定的心臟毒性，這與附子的臨床不良反應(yīng)報(bào)道相符合[8-9]。綜上所述，附子水提物具有一定溫補(bǔ)脾陽(yáng)的功效，且預(yù)防給藥效果較治療給藥顯著，這可能與藥物發(fā)揮藥效時(shí)機(jī)體的狀態(tài)有一定的關(guān)系。同時(shí)附子水提物對(duì)脾腎陽(yáng)虛大鼠具有一定的心臟毒性，但預(yù)防給藥與治療給藥尚未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

附子上助心陽(yáng)、中溫脾陽(yáng)、下補(bǔ)腎陽(yáng)，為“回陽(yáng)救逆第一品藥”。由于附子具有回陽(yáng)救逆、補(bǔ)火助陽(yáng)之功，故若服用過(guò)量或陰虛陽(yáng)亢者若服用，則會(huì)造成陽(yáng)氣過(guò)盛或亡陰證。鑒于此，“辨證論治”思想顯得尤為可貴，“辯證”是為了取得更好的療效，同時(shí)也是為了避免毒副作用。“辨證論治”也是確保臨床用藥“安全有效”的基本保障，強(qiáng)調(diào)的認(rèn)識(shí)中藥時(shí)不能孤立地去研究藥物本身的毒性，而是要著眼于藥物與機(jī)體的相互關(guān)系?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》“有故無(wú)殞”思想為我們提供了相關(guān)的理論依據(jù)。

“有故無(wú)殞，亦無(wú)殞也”強(qiáng)調(diào)的即為辨證施治：“有是故用是藥”即“有是證用是藥”，實(shí)為對(duì)中藥藥性與毒性的認(rèn)識(shí)，強(qiáng)調(diào)的是中藥“毒-效-證”之間的密切關(guān)系，對(duì)臨床合理用藥具有一定的指導(dǎo)作用。“人參殺人無(wú)過(guò)，大黃救人無(wú)功”則是割裂了“毒-效-證”之間的關(guān)系，忽略辨證而孤立地評(píng)價(jià)藥物。附子在不同證候模型上體現(xiàn)的功效與毒性有一定的差異，附子毒性的研究不能離開(kāi)機(jī)體病“證”去孤立地研究藥物的毒性，而應(yīng)該充分考慮藥物和機(jī)體之間的關(guān)系，因此附子的功效與毒性應(yīng)當(dāng)以中醫(yī)理論為指導(dǎo)的前提下放在證候的背景下進(jìn)行合理評(píng)價(jià)和科學(xué)認(rèn)知，正確理解毒性、功效和證候及三者之間的關(guān)系，合理辨證用藥才能達(dá)到減毒增效的效果。

本實(shí)驗(yàn)只考察了附子水提物對(duì)脾腎陽(yáng)虛證大鼠的功效以及心臟毒性作用，其毒性作用機(jī)制、作用特點(diǎn)以及附子其他組分的相關(guān)作用則尚需進(jìn)一步研究。

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（2014-01-06收稿 責(zé)任編輯：洪志強(qiáng)）

Efficacy-Toxicity-Syndrome Relevancy of Fuzi regarding Its Effect of Warming and Tonifying Spleen Yang

Luan Yongfu1，2，Sun Rong1
（1 Shandong Research Academy of TCM，Shandong Jinan 250014，China；2 Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300073，China）

Objective：To investigate efficacy and toxicity of Fuzi water extract for control and treatment of yang deficiency of spleen and kidney in rats.Methods：Establish rat model of syndrome of yang deficiency of spleen and kidney by administering15%rhubarb powder suspension to rat for 9 days，8.9g·kg-1·d-1everyday and then making it swim in cold water until stressed out.The prevention group was establishing the syndrome model and simultaneously treated with Fuzi.The treatment group was treated after the disease model was established successfully.Treatment duration was 9 days.Syndrome scores and weight were collected，and determined content level of TSH，IgG and cardiac toxicity index C3，LDH，CTn-I.Results：Fuzi water extract could improve the rat model of yang deficiency of spleen and kidney，increase spleen weight，kidney weight，adrenal gland weight and thymus weight to body weight，increase the level of serum TSH，IgG，C3 and LDH，CTn-I，and decrease heart to body weight ratio.Conclusion：Fuzi water extract has preventing and curing effect on syndrome of yang deficiency of spleen and kidney and has certain cardiac toxicity.

Fuzi；Yang deficiency of Spleen and Kidney；Efficacy；Toxicity

R285.5

A

10.3969／j.issn.1673-7202.2014.02.008

國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃（973計(jì)劃）中醫(yī)基礎(chǔ)理論專項(xiàng)資助項(xiàng)目課題2（編號(hào)：2009CB522802）

欒永福，男，在讀碩士研究生，中藥藥理學(xué)，E-mail：luanyongfu668＠126.com

孫蓉，女，研究員，博士生導(dǎo)師。濟(jì)南市燕子山西路7號(hào)，250014，電話：（0531）82949843，E-mail：sunrong107＠163.com