林 謙，戴求仲＊，張 旭，蔣桂韜，王向榮，李 闖，黃 璇

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南長沙410128；2.湖南省畜牧獸醫(yī)研究所動物營養(yǎng)與飼養(yǎng)技術(shù)研究室，湖南長沙410131）

臨武鴨俗稱“鉤嘴鴨”，是中國八大名鴨之一，屬肉蛋兼優(yōu)型品種，亦是中國地理標志性產(chǎn)品，因其產(chǎn)蛋多、適應(yīng)性強、飼料報酬高、肉質(zhì)細嫩、皮下脂肪沉積良好、味道鮮美而深受生產(chǎn)者和消費者喜愛［1－2］。而賴氨酸作為家禽的第二限制性氨基酸，主要參與機體蛋白質(zhì)合成，同時與動物生長、發(fā)育密切相關(guān)，可見準確評估賴氨酸的需要量對家禽營養(yǎng)的研究與生產(chǎn)實踐至關(guān)重要。但是目前，還未見有關(guān)于后備期雌性臨武鴨賴氨酸需要量的研究報道。

本試驗選用12～18周齡（后備期）雌性臨武鴨為試驗動物，飼喂不同賴氨酸水平日糧，研究其對試鴨血液生化和激素指標的影響，同時從血液營養(yǎng)代謝指標和激素方面探討該階段雌性臨武鴨賴氨酸需要量的適宜水平，為臨武鴨飼養(yǎng)及營養(yǎng)標準的制訂提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與設(shè)計

選取健康、體重接近的84日齡雌性臨武鴨210羽，隨機分為5個處理（即0.55%、0.65%、0.75%、0.85%、0.95%五個賴氨酸水平處理），每個處理設(shè)6個重復(fù)，每個重復(fù)設(shè)7只鴨來進行試驗，試驗全期試鴨為84～126日齡。

1.2 試驗飼糧及營養(yǎng)水平

試驗飼糧參照NRC（1994）及本研究室對雌性臨武鴨粗蛋白質(zhì)需要量的研究結(jié)果，采用單因子試驗設(shè)計，設(shè)5 個賴氨酸水平，即0.55%（Ⅰ組）、0.65%（Ⅱ組）、0.75%（Ⅲ組）、0.85%（Ⅳ組）、0.95%（Ⅴ組）。飼糧以小麥、玉米、豆粕、次粉為主要原料配合而成，試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗鴨采用顆粒料飼喂，飼糧由湖南省畜牧獸醫(yī)研究所飼料廠生產(chǎn)。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗在湖南省畜牧獸醫(yī)研究所試驗鴨場進行，采用網(wǎng)上平養(yǎng)。試鴨自由飲水和采食，24h 光照；舍內(nèi)自然通風，保持正常溫度，相對濕度60%±5%。

1.4 測定指標與方法

1.4.1 血清生化指標 在飼養(yǎng)試驗結(jié)束時，每重復(fù)隨機選取體重相近的試驗鴨1只，空腹12h后，翼靜脈采血8mL，注入10mL 離心管傾斜放置，讓血液自然凝固。在血凝0.5h 后以3000r／min 離心15min分離血清，收集離心管上層血清分裝，于－20 ℃下保存，以測定相關(guān)生理生化指標。

表1 試驗（12～18周齡）日糧組成和營養(yǎng)水平（風干基礎(chǔ)）Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets（air－dry basis，12～18w）

血清中葡萄糖（GLU）采用葡萄糖氧化酶法測定，甘油三酯（TG）采用甘油氧化酶法測定，總膽固醇（CHO）采用膽固醇氧化酶法測定，尿酸（UA）采用酶聯(lián)比色法測定，尿素氮（BUN）采用尿素酶法測定，肌酐（Cr）采用苦味酸法測定，堿性磷酸酶（ALP）采用AMP 緩沖液法測定，谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）采用乳酸脫氫酶法測定，谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）采用蘋果酸脫氫酶法測定，總蛋白（TP）采用雙縮脲法測定、白蛋白（ALB）采用溴甲酚綠法測定，尿酸測試試劑盒由浙江東歐醫(yī)療診斷產(chǎn)品公司生產(chǎn)，其余指標都使用由桂林優(yōu)利特醫(yī)療電子有限公司產(chǎn)的相應(yīng)試劑盒測定，所有檢測均在URIT－8000全自動生化分析儀（桂林優(yōu)利特醫(yī)療電子有限公司生產(chǎn)）上進行；而球蛋白（GLO）含量通過計算獲得，即GLO含量＝TP含量－ ALB含量。

1.4.2 血清激素指標 利用步驟1.4.1獲得的血清樣本采用放射性同位素免疫法（RI?。?，使用由北京北方生物技術(shù)研究所生產(chǎn)的相應(yīng)試劑盒在GC－300型γ－放免儀（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)）上測定生長激素（GH）、胰島素（Ins）、胰高血糖素（GIU）、三碘甲腺原氨酸（T3）、甲狀腺素（T4）和皮質(zhì)醇（Cor）含量，并計算T3／T4。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)用Excel 2003軟件進行初步處理后，采用SPSS 13.0 統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析（one－way ANOVA），若組間差異顯著，則采用Duncan氏法進行多重比較，顯著水平為P＜0.05。試驗結(jié)果以“平均值±標準差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 日糧不同賴氨酸水平對12～18周齡雌性臨武鴨血液生化指標的影響

由表2可知，血清中血糖、總膽固醇、尿酸、尿素氮、肌酐和谷丙轉(zhuǎn)氨酶分別以0.85%、0.95%、0.95%、0.65%、0.55%和0.55%Lys組最高，但均無顯著差異（P＞0.05）。日糧賴氨酸水平顯著或極顯著影響試鴨血清甘油三酯（P＜0.01）、堿性磷酸酶（P＜0.01）和谷草／谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平（P＜0.05），其中，甘油三酯以0.95%Lys 組最高，為3.55 mmol／L，分別比0.55%、0.65%、0.75%和0.85%Lys組高出65.12%（P＜0.01）、65.89%（P＜0.01）、47.92%（P＜0.01）和40.87%（P＜0.01），而0.55%、0.65%、0.75%和0.85%Lys組間血清甘油三酯含量差異不顯著（P＞0.05）；堿性磷酸酶以0.75%Lys 組最高，為396.00IU／L，分別比0.55%、0.65%、0.85% 和0.95%Lys 組高出89.02%（P＜0.01）、154.66%（P＜0.01）、185.92%（P＜0.01）和410.97%（P＜0.01），另外，0.55%Lys組血清堿性磷酸酶含量顯著高于0.95%Lys組（P＜0.05），而0.55%、0.65%和0.85%Lys組間血清堿性磷酸酶含量差異不顯著（P＞0.05）；谷草／谷丙轉(zhuǎn)氨酶以0.85%Lys組最高，為1.49，比0.65%Lys組高出50.51%（P＜0.05）。谷草轉(zhuǎn)氨酶以0.95%Lys組最高，為51.75IU／L，比0.55%Lys組高出26.22%（P＜0.05）。總蛋白以0.55%Lys組最高，為60.00g／L，比0.75%Lys組高出17.65%（P＜0.05）。白蛋白以0.95%Lys組最高，為24.33 g／L，比0.75%Lys組高出23.69%（P＜0.05）。球蛋白以0.55%Lys組最高，為39.00g／L，分別比0.85%和0.95%Lys組高出30.00%（P＜0.05）和30.74%（P＜0.05）。白球比以0.95%Lys組最高，為0.87，比0.55%Lys組高出58.18%（P＜0.05）。

表2 不同賴氨酸水平對12～18周齡周齡雌性臨武鴨生長性能的影響Table 2 Effects of different Lys levels in diets on serum biochemical indices of 12～18wLinwu duck

2.2 雌性臨武鴨血液激素指標的影響

不同賴氨酸水平對12～18周齡雌性臨武鴨血清激素指標的影響見表3。由表3可知，日糧賴氨酸水平對血清生長激素、胰島素、胰高血糖素、皮質(zhì)醇、T3、T4和T3／T4影響均不顯著（P＞0.05）。其中，血清中生長激素、皮質(zhì)醇、T3、T4和T3／T4分別以0.75%、0.75%、0.75%、0.95%和0.75%Lys組最高，但均無顯著差異（P＞0.05）；胰島素以0.95%Lys組最高，為4.82μIU／mL，比0.55%Lys組高出100.83%（P＜0.05）；胰高血糖素以0.55%Lys組最高，為208.53 pg／mL，比0.65%Lys 組高出142.08%（P＜0.05）。

表3 不同賴氨酸水平對12～18周齡雌性臨武鴨血清激素指標的影響Table 3 Effect of different Lys levels diets on serum hormonal indices of 12～18wLinwu duck

3 討論

3.1 日糧賴氨酸水平對12～18周齡雌性臨武鴨血液生化指標的影響

方勇軍［3］選用3日齡櫻桃谷肉鴨108羽，分別飼喂6 組不同精氨酸水平（0.620%、0.745%、0.850%、0.995%、1.120%和1.620%）日糧，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各試驗組肉鴨血清中甘油三酯含量較之對照組均有不同程度的下降，其中日糧精氨酸水平為1.120%的試驗Ⅴ組達到顯著水平；張括等［4］對玉米－豆粕型日糧中不同色氨酸水平對后備蛋鴨營養(yǎng)代謝的影響進行研究，結(jié)果表明，適宜水平的色氨酸能顯著提高血清中的白蛋白、總蛋白和堿性磷酸酶的水平，顯著降低血清尿素氮、葡萄糖、膽固醇和和甘油三酯的水平，但對血清乳酸脫氫酶無顯著影響，并以試鴨血清營養(yǎng)代謝指標為評價標準，認為后備蛋鴨色氨酸需要量為0.256%～0.270%。不過目前對后備期蛋鴨賴氨酸需要量的研究報道十分少見，更未見有對日糧不同賴氨酸水平對后備臨武鴨血液生化指標的影響研究報道。而本研究結(jié)果顯示日糧賴氨酸水平顯著或極顯著影響試鴨血清甘油三酯、堿性磷酸酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶／谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平（P＜0.05或P＜0.01），但對血糖、總膽固醇、尿酸、尿素氮、肌酐和谷丙轉(zhuǎn)氨酶影響均不顯著（P＞0.05）。王安等［5］報道，堿性磷酸酶在動物體內(nèi)蛋白質(zhì)合成方面起到重要的作用，其與機體蛋白質(zhì)合成呈正相關(guān)。本試驗中，0.55%Lys組和0.75%Lys組血清中ALP含量最高，說明0.55%賴氨酸水平日糧即可滿足12～18周齡雌性臨武鴨生長發(fā)育需要，而日糧賴氨酸水平在0.75%時最利于12～18周齡雌性臨武鴨生長發(fā)育需要。

張婷等［6］選用1日齡金定蛋雛鴨180羽，分別飼喂5組不同賴氨酸水平（1.03%、1.10%、1.17%、1.24%和1.31%）日糧，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血清中的總蛋白、白蛋白和球蛋白含量均以Ⅲ組最高，且前二者含量顯著高于對照組。血清總蛋白及白蛋白含量可反映機體蛋白質(zhì)代謝狀況，白球比則是衡量機體免疫水平的一項指標，白球比下降說明機體特異性免疫應(yīng)答水平在提升［7］，本試驗中，血清中總蛋白和球蛋白二者與日糧賴氨酸水平呈負相關(guān)，白蛋白和白球比與日糧賴氨酸水平則呈現(xiàn)出正相關(guān)，同時宋凱等［8］研究表明，谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶在非必需氨基酸的合成和機體蛋白質(zhì)代謝過程中扮演重要角色，同時與肝臟細胞的完整性也密切相關(guān)，本試驗條件下，日糧賴氨酸水平對AST 影響趨于顯著，對AST／ALT 影響顯著，表明高賴氨酸水平日糧可造成后備期臨武鴨肝細胞受損，綜合說明日糧0.55%賴氨酸水平即可滿足12～18周齡雌性臨武鴨生長、免疫和機體發(fā)育需要。

血清甘油三酯能反映機體脂類代謝水平，其含量過高對機體健康不利［9］，本試驗中，試鴨血清中甘油三酯含量隨著日糧賴氨酸水平的增加而增加，且0.95%Lys組甘油三酯含量極顯著高于其他各組（P＜0.01），而其他各組間血清甘油三酯含量差異不顯著（P＞0.05），說明在本試驗條件下日糧0.95%賴氨酸水平不利于12～18周齡雌性臨武鴨機體健康。

3.2 日糧賴氨酸水平對12～18周齡雌性臨武鴨血液激素指標的影響

陳志敏等［10］研究表明，不同賴氨酸添加水平（0.65%、0.80%、0.95%、1.10%、1.25%和1.40%）對0～3周齡雄性肉仔雞血液中T3含量影響顯著，且二者呈正相關(guān)，而血液中T4、生長激素和胰島素含量沒發(fā)現(xiàn)在各組之間存在顯著差異。張括等［11］研究12～17周齡金定蛋鴨適宜色氨酸需要量時發(fā)現(xiàn)0.252%～0.269%的色氨酸能顯著提高試鴨血清白細胞介素（IL－2）和免疫球蛋白G 含量（P＜0.05），顯著降低血清皮質(zhì)醇（Cor）和免疫球蛋白M 的含量（P＜0.05），0.242%～0.260%的色氨酸對試鴨促卵泡激素和雌二醇分泌影響不顯著（P＞0.05），對血清中促黃體生成素和孕酮影響顯著（P＜0.05）。本試驗結(jié)果顯示，隨著日糧賴氨酸水平的增加，生長激素、T3和T4均呈先增后降趨勢，這與陳偉等［12］研究結(jié)果相似，且T3和T4間呈負相關(guān)趨勢，其原因可能是試鴨采食高賴氨酸水平日糧限制了腦垂體前葉嗜酸性細胞對激素的分泌，而生長激素又是一種由嗜酸性細胞分泌的激素，因此限制了生長激素的分泌；甲狀腺激素方面，可能是由于T3的降低，導(dǎo)致T4向T3轉(zhuǎn)化量下降，使T4的濃度增加［13］。

另有報道生長激素直接影響性腺發(fā)育，其在卵巢和子宮上有受體，可能直接或協(xié)同參與畜禽生殖機能調(diào)控［14－15］，皮質(zhì)醇參與動物機體應(yīng)激活動，能引起蛋白質(zhì)、脂肪和糖原等的分解代謝，還能引發(fā)免疫抑制［16］，本試驗中各組生長激素、皮質(zhì)醇含量無顯著差異（P＞0.05），但日糧0.75%、0.85%賴氨酸組血清GH 含量最高，日糧0.55%、0.85%賴氨酸組血清Cor含量最低，說明日糧0.55%賴氨酸水平即可滿足12～18周齡雌性臨武鴨生長發(fā)育需要，而日糧賴氨酸水平在0.75%～0.85%時對后備期臨武鴨的機體生長發(fā)育最有利。

有研究報道胰島素不僅是體內(nèi)能量代謝的重要激素，同時其可主要通過早期生長應(yīng)答蛋白－1 途徑、胞外信號調(diào)節(jié)激酶途徑和神經(jīng)肽Y 途徑三條通路對促性腺激素釋放激素的分泌與活性進行調(diào)控［17］，同時本試驗結(jié)果顯示，日糧賴氨酸水平對試鴨血清胰島素和胰高血糖素含量影響均不顯著（P＞0.05），說明對后備期雌性臨武鴨生長發(fā)育來說日糧0.55%賴氨酸水平即可滿足其需要。

4 結(jié)論

在本試驗條件下，以血液生化和激素為評價指標，12～18周齡（后備期）雌性臨武鴨賴氨酸水平為0.55%即可滿足試鴨機體生長發(fā)育需要，而日糧賴氨酸水平為0.75%～0.85%時對后備期臨武鴨的生長發(fā)育來說最適宜。

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