呂 祥馮彥軍夏 英劉 靜侯風(fēng)剛李 雁任建琳陳偉杰

（1上海市中醫(yī)醫(yī)院腫瘤科，上海，200071；2蘇州市第五人民醫(yī)院腫瘤科，蘇州，215007；3上海市中醫(yī)醫(yī)院藥物臨床試驗機(jī)構(gòu)辦公室，上海，200071；4上海市中醫(yī)醫(yī)院泌尿外科，上海，200071）

實驗研究

淫羊藿素抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞血管生成及其機(jī)制

呂 祥1，3馮彥軍2夏 英3劉 靜1侯風(fēng)剛1李 雁1任建琳1陳偉杰4

（1上海市中醫(yī)醫(yī)院腫瘤科，上海，200071；2蘇州市第五人民醫(yī)院腫瘤科，蘇州，215007；3上海市中醫(yī)醫(yī)院藥物臨床試驗機(jī)構(gòu)辦公室，上海，200071；4上海市中醫(yī)醫(yī)院泌尿外科，上海，200071）

目的：探討淫羊藿素對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）血管生成的抑制作用及其機(jī)制。方法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，分別觀察淫羊藿素對其增殖、遷移及其小管形成的影響。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）和色素上皮衍生因子（PEDF）的含量。結(jié)果：經(jīng)淫羊藿素作用48 h后，未見對內(nèi)皮細(xì)胞增殖有影響。淫羊藿素高濃度組（ICT1 10-6mol/L）、中濃度組（ICT2 10-7mol/L）、低濃度組（ICT3 10-8mol/L）和沙利度胺（TLD）組HUVEC細(xì)胞遷移數(shù)目（4.67±1.26）、（10.48±3.15）、（21.06±6.83）和（19.15±6.03）個，明顯低于空白對照（Control）組（41.38±7.78）個（P＜0.01）。ICT1、ICT2、ICT3及TLD組小管形成的面積分別為（5 867.45±925.36）、（1 627.33±288.56）、（735.73±325.65）和（2 933.24±741.43）μm2/視野，均低于Control組（7 883.69±1 034.85）μm2/視野（P＜0.01）。經(jīng)淫羊藿素處理后，HUVEC細(xì)胞分泌VEGF功能明顯下降，而分泌PEDF功能明顯升高。結(jié)論：體外實驗結(jié)果表明淫羊藿素具有抑制HUVEC細(xì)胞血管生成的作用，這種效應(yīng)與血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF的活性降低及其合成受到抑制，同時對PEDF活性升高及其合成受到促進(jìn)作用有關(guān)。

淫羊藿素；人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞；血管新生；血管生成抑制劑

血管新生在人體正常發(fā)育以及許多疾病的發(fā)生與發(fā)展中起著重要作用，尤其與腫瘤的形成及轉(zhuǎn)移關(guān)系密切[1]，新生血管保證了腫瘤持續(xù)生長所需要營養(yǎng)物質(zhì)的有效供給，抑制腫瘤的血管新生，切斷腫瘤生長和轉(zhuǎn)移所依賴的命脈已經(jīng)成為當(dāng)前治療腫瘤的重要策略之一[2]。現(xiàn)代藥理研究表明，淫羊藿及其有效成分具有多種藥理作用，以往研究發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷可以誘導(dǎo)體外腫瘤細(xì)胞凋亡等作用[3-10]。淫羊藿素是淫羊藿活性成分之一，是淫羊藿苷在體內(nèi)的一種代謝產(chǎn)物，在一定的濃度范圍內(nèi)具有雌激素樣作用[11-12]。前期在雞胚尿囊膜體內(nèi)實驗（Chick Chorioallantoic Membrane，CAM）研究中發(fā)現(xiàn)淫羊藿素對新生毛細(xì)血管生成具有明顯抑制作用[13]。淫羊藿素是一種十分具有應(yīng)用前景的抗腫瘤天然藥物，但其作用機(jī)制尚不明確。本研究通過體外模擬血管生成，觀察淫羊藿素對內(nèi)皮細(xì)胞血管生成的抑制作用，并探討其作用機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 材料 淫羊藿素（上海融禾醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號：100109）和MMT（美國Sigma公司）；沙利度胺（常州制藥廠有限公司，批號：國藥準(zhǔn)字H32026130）；二甲基亞砜（DMSO）（北京亞太精細(xì)化工公司產(chǎn)品）；Transwell小室（美國Corning公司）；基質(zhì)膠（美國Becton-Dickinson公司）；人內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）和色素上皮衍生因子（PEDF）定量ELISA試劑盒（美國R＆D systems公司）；DMEM培養(yǎng)液（美國Gibco公司）；XDS-1B型倒置相差顯微鏡（日本Olympus公司）；Modle 500型酶聯(lián)免疫檢測儀（美國Bio-Rad公司）；人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）（中國科學(xué)院上海細(xì)胞研究所）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 用含有10%熱滅活小牛血清的DMEM培養(yǎng)基在37℃，體積分?jǐn)?shù)為5%CO2飽和濕度條件下常規(guī)培養(yǎng)，2～3 d傳代1次，實驗用對數(shù)生長期細(xì)胞。

1.2.2 細(xì)胞增殖實驗 取對數(shù)生長期的人臍靜脈內(nèi)皮HUVEC細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為5× 104/m L，以每孔100μL接種于96孔培養(yǎng)板。細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)24 h后完全貼壁，分別設(shè)立空白對照組、實驗組、溶劑對照組和陽性對照組，每組設(shè)立6個復(fù)孔。分別加入0、2×10-5、2×10-6、2×10-7、2×10-8mol/L的ICT，0.02%DMSO及100μg/m L的TLD。24 h、48 h后，每孔加入5 mg/m L的MTT溶液，孵育4 h，翻板，每孔加入100μL DMSO。微型混合器上震蕩2 min，10 min后于酶標(biāo)儀檢測OD值，波長選擇490 nm。按下列公式計算不同濃度淫羊藿素對HUVEC細(xì)胞的增殖抑制率：抑制率（%）＝[（空白對照組OD值─實驗組OD值）/空白對照組OD值]×100%。

1.2.3 內(nèi)皮細(xì)胞遷移實驗 取對數(shù)生長期HUVEC細(xì)胞，用消化液消化后，加入無血清培養(yǎng)基，吹打制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度為9×104個/mL。在24個上室中加入細(xì)胞懸液90μl，分為六組，每組4個復(fù)孔，每組依次加入藥物為0、10-5、10-6、10-7mol/L ICT，0.1%DMSO及500μg/m L的TLD各10μL。在小室下室中各加入含1%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基600 μL。于37℃、5%CO2、飽和濕度培養(yǎng)箱中孵育12 h。取出小室，吸棄上下小室的培養(yǎng)基，用棉簽擦去膜內(nèi)表面細(xì)胞，然后用PBS液洗2遍。常溫下用95%乙醇固定30 min，取出小室風(fēng)干，用結(jié)晶紫染色液染色10 min，最后再用PBS液洗兩遍。在100倍光鏡下，觀察微孔濾膜外表面的細(xì)胞，在400倍鏡下隨機(jī)選擇5個視野拍照，計得每個視野的細(xì)胞數(shù)目，取平均值。細(xì)胞數(shù)目的多少反映內(nèi)皮細(xì)胞的遷移能力，并按下列公式計算遷移抑制率。遷移抑制率＝[1-（實驗組細(xì)胞的遷移數(shù)/空白對照組細(xì)胞的遷移數(shù)）]×100%。

1.2.4 小管形成實驗 用Matrigel膠以每孔120μL包被24孔培養(yǎng)板，鋪平后置于37℃培養(yǎng)箱中聚合4 h。取對數(shù)生長期HUVEC細(xì)胞消化后，將不同濃度ICT、空白對照及TLD與含5%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，以及HUVEC細(xì)胞（5×104/孔，每孔體積為1 m L）混勻后加入24孔培養(yǎng)板。每組4個復(fù)孔。于37℃、5%CO2、飽和濕度培養(yǎng)箱中孵育24 h。在倒置顯微鏡下于100倍鏡頭觀察小管形成情況，每孔隨即取5個視野拍照，用圖像分析軟件處理后，以形成的管狀結(jié)構(gòu)面積表示ICT的作用強(qiáng)弱。

1.2.5 ELISA檢測細(xì)胞上清液中VEGF及PEDF的濃度 采用雙抗體夾心ABC-ELISA方法，檢測人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC分泌VEGF及PEDF的水平。取對數(shù)生長期HUVEC細(xì)胞，常規(guī)胰酶及EDTA消化，細(xì)胞計數(shù)后調(diào)整細(xì)胞濃度1×105/mL，取100μL接種于96孔培養(yǎng)板，待細(xì)胞完全貼壁后，棄原培養(yǎng)基，加入分別含有終濃度為10-6，10-7，10-8mol/L淫羊藿素及50 μg/mL沙利度胺的DMEM培養(yǎng)基250μL，同時設(shè)立空白對照組，作用24 h后收集各孔上清液，在4℃條件下，1 000 r/min離心5 min，吸取上清作為待測樣品。測定時取200μL上清液，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒操作說明進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 淫羊藿素對HUVEC細(xì)胞增殖的影響 淫羊藿素對HUVEC的增殖無明顯抑制作用，與藥物濃度無依賴關(guān)系。沙利度胺對HUVEC的增殖存在抑制作用（見表1，圖1）。

2.2 淫羊藿素對血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移的影響

2.2.1 劃痕閉合實驗 結(jié)果顯示，在空白對照組劃痕處發(fā)生遷移的細(xì)胞數(shù)目明顯多于淫羊藿素各組及沙利度胺組，劃痕損傷區(qū)重新被內(nèi)皮細(xì)胞覆蓋。在淫羊藿素各組中，隨著藥物濃度的增大，遷移細(xì)胞數(shù)目逐漸減少，劃痕區(qū)被細(xì)胞重新覆蓋的面積也不斷縮小。沙利度胺組亦有部分細(xì)胞發(fā)生遷移，但與空白對照組比較，遷移細(xì)胞數(shù)目明顯減少（見圖2）。

表1 ICT對HUVEC細(xì)胞株增殖的影響及其抑制率

圖1 ICT對HUVEC細(xì)胞株增殖的抑制率

圖2 淫羊藿素對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移的影響（×400倍）

2.2.2 Transwell小室趨化實驗 結(jié)果顯示，濃度為10-6～10-8mol/L的淫羊藿素對HUVEC細(xì)胞的遷移有明顯的抑制作用，并呈濃度依賴關(guān)系。與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。濃度為50 μg/mL的沙利度胺也可抑制內(nèi)皮細(xì)胞遷移，遷移抑制率達(dá)53.72%，與淫羊藿素中高濃度組比較，組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），但與淫羊藿素低濃度組比較，兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（見表2，圖3）。

表2 淫羊藿素對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移的影響（±s，n＝6）

表2 淫羊藿素對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移的影響（±s，n＝6）

注：**P＜0.01與空白組比較，△△P＜0.01與沙利度胺組比較。

分組濃度遷移細(xì)胞數(shù) 遷移抑制率（%）0 41.38±7.78 0沙利度胺組50μg/m L 19.15±6.03**53.72淫羊藿素高濃度組10-6mol/L 4.67±1.26**△△88.71淫羊藿素中濃度組10-7mol/L 10.48±3.15**△△74.67淫羊藿素低濃度組10-8mol/L 21.06±6.83**空白組49.11

圖3 淫羊藿素對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移的影響（×100倍）

表3 淫羊藿素對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC小管形成的影響（±s，n＝6）

表3 淫羊藿素對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC小管形成的影響（±s，n＝6）

與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與沙利度胺組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

分組濃度小管面積（um2/field）小管周長（um/field）0 7 883.69±1 034.85 886.61±168.73沙利度胺組50μg/mL 2 933.24±741.43**462.75±161.58**淫羊藿素高濃度組10-6mol/l 5 867.45±925.36**△△734.51±71.57*△△淫羊藿素中濃度組10-7mol/l 1 627.33±288.56**△△249.58±68.25**△淫羊藿素低濃度組10-8mol/l 735.73±325.65**△△132.31±52.73空白組**△△

圖4 淫羊藿素對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC小管形成的影響（×100倍）

2.3 淫羊藿素對血管內(nèi)皮細(xì)胞小管形成的影響 光鏡下觀察結(jié)果顯示，與空白對照組比較，淫羊藿素各組形成管狀結(jié)構(gòu)的數(shù)目明顯減少，小管間距離增大，管狀結(jié)構(gòu)不完整。圖像經(jīng)量化分析后發(fā)現(xiàn)，淫羊藿素各組及沙利度胺組管狀結(jié)構(gòu)面積和周長明顯小于空白對照組（P＜0.01）。沙利度胺組管狀面積及周長小于淫羊藿素高濃度組（P＜0.01），但高于淫羊藿素中低濃度組（P＜0.05或P＜0.01）（見表3，圖4）。

2.3 淫羊藿素對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 HUVEC分泌VEGF及PEDF的影響ICT和TLD作用于HUVEC 24 h后，ICT和TLD的抑制作用與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。中高濃度淫羊藿素的抑制作用明顯強(qiáng)于沙利度胺（P＜0.05或P＜0.01），而低濃度淫羊藿素與沙利度胺比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（見表4）。

表4 淫羊藿素對HUVEC細(xì)胞分泌VEGF及PEDF的影響（±s，n＝6）

表4 淫羊藿素對HUVEC細(xì)胞分泌VEGF及PEDF的影響（±s，n＝6）

注：*P＜0.05與空白組比較，**P＜0.01 與空白組比較；△P＜0.05與沙利度胺組比較，△△P＜0.01與沙利度胺組比較。

分組濃度VEGF表達(dá)量（pg/mL）PEDF表達(dá)量（pg/mL）0 1 082.53±18.91 19.31±2.51沙利度胺組50μg/mL 963.77±24.58**23.69±3.18*淫羊藿素高濃度組10-6mol/L 938.43±42.23**25.97±3.65*淫羊藿素中濃度組10-7mol/L 890.45±6.86**△△27.77±3.64*淫羊藿素低濃度組10-8mol/L 861.72±21.34**△△28.28±4.75空白組**△

3 討論

血管生成是一個由一系列細(xì)胞因子介導(dǎo)的級鏈反應(yīng)過程，其中血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移和分化是血管生成過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[14]。本研究分別觀察了ICT對血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和小管形成的直接效應(yīng)。我們發(fā)現(xiàn)，ICT在10-6～10-8mol/L時對HUVEC細(xì)胞的增殖沒有抑制作用，表明ICT無細(xì)胞毒性作用。研究發(fā)現(xiàn)，在濃度10-6～10-8mol/L時，ICT對纖維粘連蛋白誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移具有抑制作用。在相同濃度下，ICT可降低血管內(nèi)皮細(xì)胞在體外分化成管狀結(jié)構(gòu)的能力，這表明血管內(nèi)皮細(xì)胞在形成血管的幾個關(guān)鍵環(huán)節(jié)均不同程度受到ICT的抑制，提示ICT可能通過抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和分化而發(fā)揮其抗血管生成作用。

在血管生成過程中，VEGF是內(nèi)皮細(xì)胞中一種選擇性、特異性有絲分裂原，它能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，提高內(nèi)皮細(xì)胞的生存能力，還能夠增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞的趨化性和血管壁的通透性。其不僅能夠在體內(nèi)誘發(fā)新血管發(fā)生，而且在體外還能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，是迄今為止已知的最強(qiáng)的血管生成促進(jìn)因子之一。PEDF屬于絲氨酸蛋白酶超家族，具有高度保守的序列以及獨特的分子結(jié)構(gòu)，近年來因研究發(fā)現(xiàn)其具有營養(yǎng)神經(jīng)，抑制新生血管，抗腫瘤等多種功能而成為研究的熱點，其中抗新生血管的功能尤為重要[15]。為了探討淫羊藿素對血管內(nèi)皮細(xì)胞合成和分泌VEGF和PEDF是否有影響，我們檢測了血管內(nèi)皮細(xì)胞上清夜中VEGF和PEDF的含量。結(jié)果表明，淫羊藿素具有抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌VEGF的作用，同時具有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌PEDF的作用，而且其作用存在濃度依賴關(guān)系。本研究結(jié)果說明，淫羊藿素對HUVEC細(xì)胞體外構(gòu)建新生血管具有明顯的抑制作用，但它在體內(nèi)是否也具有抗血管生成效應(yīng)需要進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)。

[1]趙國旗，許奕，王薔.鼻咽癌放射治療前測定血管內(nèi)皮生長因子的意義[J].中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報，2005，3（4）：274-277.

[2]Blagosk lonny MV.Antiangiogenic therapy and tumor progression[J]. Cancer Cell，2004，5（1）：13-17.

[3]葉麗卡，陳濟(jì)民.淫羊藿的藥理研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志，2006，25（6）：293-295.

[4]李貴新，張玲.淫羊藿甙誘導(dǎo)白細(xì)胞細(xì)胞凋亡及其對癌基因表達(dá)的影響[J].中華血液學(xué)雜志，2002，2（4）：352-353.

[5]李貴新，張玲.淫羊藿苷誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的研究[J].中國腫瘤生物治療雜志，1999，4（3）：235-236.

[6]毛海婷，張玲.淫羊藿甙對高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞惡性表型的逆轉(zhuǎn)作用及其調(diào)控機(jī)制研究[J].中國腫瘤生物治療雜志，1999，6（1）：7-8.

[7]趙勇，張玲.淫羊藿甙的體外免疫調(diào)節(jié)作用研究[J].中草藥，1996，27（11）：669-672.

[8]陳逸青，劉從云，孫靜，等.淫羊藿總黃酮對絲裂霉素致小鼠骨髓細(xì)胞突變的保護(hù)作用[J].毒理學(xué)雜志，2008，22（5）：368-370.

[9]趙連梅，紀(jì)昕，潘曉明，等.淫羊藿苷（ICA）對化療后免疫抑制小鼠的免疫促進(jìn)作用[J].中國免疫學(xué)雜志，2009，25（12）：1092-1099.

[10]王洪武，賈亮亮，徐媛青，等.淫羊藿總黃酮對環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用[J].天津醫(yī)藥，2010，38（12）：1068-1071.

[11]王大偉，鄧秀蘭，牛建超，等.淫羊藿素和脫水淫羊藿素對人類乳腺癌細(xì)胞T47D增殖和細(xì)胞周期的影響[J].北京中醫(yī)藥，2009，28（8）：637-640.

[12]葉海勇，劉健，樓宜嘉.淫羊藿苷衍生物的制備及其雌激素樣作用研究[J].浙江大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2005，34（2）：131-136.

[13]呂祥，吳金峰，易婷嬌，等.淫羊藿素抑制雞胚絨毛尿囊膜血管生成的實驗研究[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報，2010，16（6）：96-97.

[14]Soff GA.Angiostatin and angiostatin-related proteins[J].Cangcer Metast Rev，2000，19（1-2）：97-107.

[15]Tom bran T ink J，Johnson LV.Neuronaldifferentiation of retinoblastoma cells induced bymedium conditioned by human RPE cells[J].Exp Eye Res，1989，48（4）：549-559.

（2013-11-21收稿 責(zé)任編輯：王明）

The Suppressive E ffect of Icaritin on Angiogenesis of Endothelial Cells in Human Um bilical Vein and Its Associated Mechanisms

Lv Xiang1，F(xiàn)eng Yanjun2，Xia Ying1，Liu Jing1，Hou Fenggang1，Li Yan1，Ren Jianlin1，Chen Weijie3
（1 ShanghaiMunicipal Hospital of Traditional Chinese Medicine，Shanghai200071，China；2 The fifth People's Hospital of Suzhou，Suzhou 215007，China；3 Department of Urology，Shanghai Municipal Hospital of Traditional Chinese Medicine，Shanghai200071，China）

Objective：To investigate the suppressive effect of Icaritin on angiogenesis of human umbilical vein endothelial cells（HUVEC）and its associated mechanisms.Methods：HUVEC cellswere cultured in vitro，and we observed the effects of Icaritin on its proliferation，migration and tube formation.The content of vascular endothelial growth factor（VEGF）and pigment epithelium-derived factor（PEDF）was detected by ELISA.Results：Icaritin had no significant effect on the proliferation of HUVEC cells after48h treatment.The number ofmigrated cells in Icaritin high concentration group（ICT1 10-6mol/l），middle concentration group（ICT2 10-7mol/l），low concentration group（ICT3 10-8mol/l）and Thalidom ide（TLD）group were 4.67±1.26，10.48±3.15，21.06±6.83，19.15±6.03 respectively，and all ofwhich were lower compared with the control group（41.38±7.78）（P＜0.01）.The area of tube formation in ICT1、ICT2、ICT3 and TLD were separately 5 867.45±925.36，1 627.33±288.56，735.73±325.65，2 933.24±741.43μm2per vision，all of which were lower than the control group（7 883.69±1 034.85μm2per vision）（P＜0.01）.A fter Icaritin treatment，HUVEC cells had a significant lower ability to secret VEGF，but asfor PEDF，itwas on the opposite situation.Conclusion：Icaritin can inhibit the angiogenesis of HUVEC cells in vitro.Such effectmay be related to the decreased activity and synthesis of VEGF in vascular endothelial cells，and also associated with the increased activity and synthesis of PEDF.

Icaritin，Human umbilical vein endothelial cell；Angiogenesis；Angiogenesis inhibitor

R285.5

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.01.026

國家自然科學(xué)基金項目（編號：81173221）；國家中醫(yī)藥重點?？平ㄔO(shè)項目（編號：ZJ0901ZL020）；上海市中醫(yī)腫瘤特色?？平ㄔO(shè)（編號：2008YSZK008）；上海市衛(wèi)生局科研項目（編號：20124Y018）；上海市教委創(chuàng)新項目（編號：12YZ057）上海中醫(yī)藥大學(xué)校級項目（編號：2009050）

呂祥（1979—），男，碩士研究生，住院醫(yī)師，中西醫(yī)結(jié)合防治腫瘤基礎(chǔ)及臨床工作，E-mail：xiangzi790812＠126.com