向世瓊，鄔應(yīng)龍*

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，四川 雅安 625014）

RS4型抗性淀粉對齊口裂腹魚生長、脂肪代謝及相關(guān)基因表達(dá)的影響

向世瓊，鄔應(yīng)龍*

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，四川 雅安 625014）

目的：研究RS4型抗性淀粉對齊口裂腹魚生長性能、脂肪代謝以及相關(guān)基 因表達(dá)量的影響。方法：將體質(zhì)量75 g左右的齊口裂腹魚隨機(jī)分為RS4型抗性淀粉添加量為0%（對照組）、3. 5%、7%、14%、28% 5組。飼喂60 d，測定生長性能指標(biāo)、血脂水平，并采用實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)檢測各組肌肉及肝臟中過氧化物酶增殖體激活受體α（peroxisome proliferators activated receptor s-alpha，PPARα）、脂肪酸結(jié)合蛋白（fatty acid-binding prot ein，F(xiàn)ABP）mRNA表達(dá)水平。結(jié)果：添加RS4型抗性淀粉劑量為7%和14%時與對照組相比能顯著增加齊口裂腹魚的體質(zhì)量、攝食率、特定生長率（P＜0.05），添加劑量為28%時能夠顯著增加攝食率，但是對體質(zhì)量和特定生長率沒有顯著的影響。添加劑量 到達(dá)14%及以上時與對照組相比能夠顯著降低血脂水平及肌肉中心型脂肪酸結(jié)合蛋白（heart-fatty acid-binding protein，H-FABP mRNA）表達(dá)水平，且H-FABP與肌內(nèi)脂肪呈正相關(guān)性。添加劑量達(dá)7%及以上時能夠顯著升高肌肉和肝臟中PPARα mRNA表達(dá)水平，降低肝臟中FABP mRNA表達(dá)水平。結(jié)論：適當(dāng)?shù)奶砑覴S4型抗性淀粉能夠促進(jìn)齊口裂腹魚的生長、并且調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的表達(dá)，降低了腸系脂肪及肌內(nèi)脂肪沉積。

抗性淀粉；齊口裂腹魚；實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；過氧化物酶增殖體激活受體α；脂肪酸結(jié)合蛋白

齊口裂腹魚（Schizothorax prenanti Tchang）是我國川西北高原特有冷水性魚類，屬鯉形目， 鯉科，裂腹魚亞科，裂腹魚屬。其肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美，賴氨酸含量極為豐富，可作為賴氨酸的天然強(qiáng)化食品，在我國西部及東北地區(qū)的冷水養(yǎng)殖中具有很大的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的市場養(yǎng)殖前景[1]。

歐洲抗性淀粉研究協(xié)會1993年將抗性淀粉定義為：不被健康人體小腸所吸收的淀粉及其降解產(chǎn)物的總稱。根據(jù)抗性淀粉產(chǎn)生抗性的原理不同一般將其分為4種，RS4型為其中一種，即通過物理或化學(xué)變性后，淀粉分子結(jié)構(gòu)的改變及化學(xué)官能團(tuán)的引入而產(chǎn)生的抗酶解淀粉，如檸檬酸淀粉酯。研究表明，RS4型抗性淀粉作為一種新型的可溶性膳食纖維，能夠調(diào)節(jié)血糖和脂質(zhì)代謝[2-3]。譚青松[4]研究表明在魚餌料添加適量的纖維素能夠刺激腸道的運動，改善腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。Shimotoyodome等[5]研究表明RS4型抗性淀粉能夠增加肝臟脂肪酸氧化能力及相關(guān)基因的表達(dá)。它還能增加腸道短鏈脂肪酸的含量，預(yù)防結(jié)腸癌等腸道疾病的發(fā)生[6-8]。RS4型抗性淀粉對于哺乳動物的調(diào)節(jié)血糖和脂質(zhì)代謝的功能在國內(nèi)外都研究的比較深入，但是其對魚類的生長、脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)作用的研究甚少。本實驗主要研究不同劑量RS4型抗性淀粉對齊口裂腹魚的生長性能的影響，并通過實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測齊口裂腹魚脂質(zhì)代謝相關(guān)基因氧化物酶體增殖物激活受體（peroxisome proliferators activated receptors-alpha，PPARα）、脂肪酸結(jié)合蛋白（fatty acid-binding protein，F(xiàn)ABP）mRNA表達(dá)水平，探討RS4型抗性淀粉對齊口裂腹魚脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)機(jī)制，以拓寬抗性淀粉應(yīng)用范圍。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

RS4型抗性淀粉實驗室自制[9]。

總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）試劑盒 南京建成生物工程研究所；TRNzol 天根生化科技公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR?Premix Ex TaqTM日本TaKaRa公司；瓊脂糖 西班牙 Spain公司；熒光定量八連板 寶生物工程（大連）有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

PTC-150普通PCR儀、ABI7500實時熒光定量PCR儀、HM-I型水平電泳槽、LG9905-060電泳儀 美國Bio-Rad公司；UVP White/Ultraviolet凝膠成像系統(tǒng) 美國UVP公司；微量移液器、Centrifuge 5810R高速低溫離心機(jī) 德國Eppendorf公司。

1.3 實驗動物及管理

1.3.1 實驗用魚

齊口裂腹魚（Schizothorax prenanti Tchang）為雅安天全縣雅魚場2012年孵化的同一批魚種。體質(zhì)量（75.47±5.12）g/尾，體長（16.09±0.73）cm。選擇體質(zhì)健壯的魚種240尾，用20 mg/L的KMnO4消毒15 min。

1.3.2 飼料及分組

飼料配方參照NRC[10]魚類營養(yǎng)需要和段彪等[11]的齊口裂腹魚飼料配方設(shè)計基礎(chǔ)飼料配方，見表1。

表1 實驗飼料的干基組成及營養(yǎng)水平Table 1 Composition and nutrient levels of the experimental diets (on dry basis)

在基礎(chǔ)飼料中分別添加0%（對照組）、3.5%、7%、14%、28% RS4型抗性淀粉（等量減少小麥淀粉用量），共5個劑量組，每個劑量組4個重復(fù)，每個重復(fù)12尾魚。各種飼料原料均過40目篩，充分混合后加工成1 mm的硬顆粒飼料，烘干并保存于冰箱中，破碎后投喂。

1.3.3 飼養(yǎng)管理

實驗魚飼養(yǎng)于20個玻璃缸中（2.0 m×1.5 m× 1.2 m），水深0.6 m。用基礎(chǔ)飼料馴化14 d，待魚攝食正常后開始實驗，日投喂3次，投餌率為體質(zhì)量2%～2.5%，并根據(jù)水溫、攝食情況進(jìn)行調(diào)整，各組保持一致的投飼量。養(yǎng)殖實驗期間水溫16～20℃，溶解氧＞5.0 mg/L、NH3-N含量＜0.3 mg/L，晝夜充氣。

1.4 方法

1.4.1 樣品采集

實驗結(jié)束時，對實驗魚饑餓24 h，尾靜脈采血，每尾魚的血樣分別放置在4 ℃靜置12 h后，4 ℃、3 000 r/min離心15 min，取其上清液（即血清），－80 ℃保存?zhèn)溆?。解剖后迅速取出肝臟及肌肉，放入液氮中，－80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 指標(biāo)計算

式中：mo為實驗開始時魚體質(zhì)量/g；mt為實驗結(jié)束時魚體質(zhì)量/g；mh為實驗結(jié)束時魚肝臟質(zhì)量/g；mm為實驗結(jié)束時魚腸系膜脂肪質(zhì)量/g；no為實驗開始時魚的尾數(shù)；nt為實驗結(jié) 束時魚的尾數(shù)；mF為飼料攝入質(zhì)量/g；t為養(yǎng)殖實驗時間/d；Lt為實驗結(jié)束時魚的體長/cm。

1.4.3 肌內(nèi)脂肪含量（intramuscular fat，IMF）測定

取齊口裂腹魚肌肉組織（n=12），參照GB/T 5009.6—2003《食品中脂肪的測定》采用索氏化學(xué)抽提法測定肌肉脂肪含量。

1.4.4 血清脂質(zhì)含量的測定

按照說明書的方法測定血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C含量。極低密度脂蛋白膽固醇（very low density lipoprotein cholesterol，VLDL-C）含量按公式（9）計算。

VLDL-C含量=TC含量－HDL-C含量－LDL-C含量 （9）

1.4.5 引物設(shè)計與合成

用Primer Premier 5.0軟件根據(jù)GenBank中齊口裂腹魚β-actin基因序列（JQ013000）、PPARα基因序列（KF316324）、FABP基因序列（GU205786）設(shè)計特異性引物，引物序列見表2。

表2 引物序列及退火溫度Table 2 Primer sequences and anneal temperatures

1.4.6 總RNA提取和cDNA制備

參照TRNzol總RNA提取試劑盒（TIANGEN）說明書方法提取RNA，用10g/L的瓊脂糖凝膠電泳鑒定提取RNA的完整性，通過OD260nm/OD280nm檢測樣本純度。

cDNA由逆轉(zhuǎn)錄試劑盒法制備，放置于－20 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.4.7 RT-PCR基因檢測

采用SYBRGreen I 熒光染料法，10 μL反應(yīng)體系，含5 μL SYBR?Premix Ex TaqTM（2×）、上下游引物各0.25 μL、1 μL cDNA、3.5 μL 焦碳酸二乙酯（diethyl pyrocarbonate，DEPC）水。RT-PCR步驟：95 ℃、3 min；95 ℃、10 s，各基因相應(yīng)退火溫度條件下退火30 s、39個循環(huán)；95 ℃、10 s；擴(kuò)增完畢后，迅速降溫到65 ℃進(jìn)行溶解曲線分析，然后以0.5 ℃/s的速率從65 ℃遞增到95 ℃，連續(xù)測定樣品熒光強(qiáng)度以獲取溶解曲線。

1.4.8 相對表達(dá)量的分析

以β-actin基因作為內(nèi)參基因，選擇一校準(zhǔn)樣本，比較待測樣本相對校準(zhǔn)樣本的表達(dá)差異，利用2－ΔΔCt法進(jìn)行相對定量分析[12]。

結(jié)果是通過參照基因表達(dá)水平校正的待測樣本中的目標(biāo)基因相對于校準(zhǔn)樣本的相對表達(dá)量，用參照基因校準(zhǔn)目標(biāo)基因表達(dá)來彌補(bǔ)樣本組織量的差異。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 RS4型抗性淀粉對齊口裂腹魚生長及飼料利用率的影響

表3 不同水平的RS4型抗性淀粉對齊口裂腹魚生長及飼料利用率的影響）Table 3 Effect of RS4 starch at various levels on growth and feed utilization rate of Schizothorax prenanti Tcha

表3 不同水平的RS4型抗性淀粉對齊口裂腹魚生長及飼料利用率的影響）Table 3 Effect of RS4 starch at various levels on growth and feed utilization rate of Schizothorax prenanti Tcha

注：同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著（P＜0.05）。下同。

項目對照組3.5%RS4劑量組7%RS4劑量組14%RS4劑量組 28%RS4劑量組初體質(zhì)量/g 75.67±5.2375.25±4.4575.74±5.6876.14±3.6576.52±4.63相對增重率/% 0.27±0.01b0.21±0.02b0.31±0.01a0.31±0.01a0.25±0.02b餌料系數(shù)3.51±0.05b3.52±0.02b2.99±0.11c3.10±0.04c3.66±0.05a攝食率/（%/d）1.05±0.08b1.13±0.06b1.47±0.04a1.48±0.03a1.45±0.03a特定生長率/（%/d）0.30±0.02b0.32±0.03b0.46±0.03a0.44±0.04a0.34±0.02b成活率/%100100100100100

由表3可見，RS4型抗性淀粉添加量為7%和14%與其他組相比能顯著增加齊口裂腹魚的體質(zhì)量（P＜0.05），添加量為3.5%和28%對魚的體質(zhì)量沒有顯著的影響；7%RS4劑量組、14%RS4劑量組與對照組相比能顯著降低餌料系數(shù)（P＜0.05），3.5%RS4劑量組與對照組相比無顯著的影響，但是28%RS4劑量組與對照組相比顯著的增加了餌料系數(shù)（P＜0.05）；當(dāng)抗性淀粉添加量達(dá)到7%及以上時，能顯著的增加齊口裂腹魚的攝食率（P＜0.05）；7%RS4劑量、14%RS4劑量組與其他組相比能顯著提高魚的特定生長率（P＜0.05），3.5%RS4劑量組、28%RS4劑量組與對照組相比對魚的特定生長率無顯著影響。

2.2 RS4型抗性淀粉對齊口裂腹魚形體指標(biāo)和內(nèi)臟指數(shù)的影響由表4可知，RS4型抗性淀粉添加量為14%時能夠顯著降低齊口裂腹魚的肥滿度（P＜0.05），其他組對肥滿度沒有顯著影響；添加3.5%的抗性淀粉對齊口裂腹魚的腸脂比沒有顯著影響，但隨著添加劑量的增加，抗性淀粉組的腸脂比顯著降低；添加抗性淀粉對齊口裂腹魚的肝體比沒有顯著影響。

表4 不同水平的RS4型抗性淀粉對齊口裂腹魚形體指標(biāo)和內(nèi)臟指數(shù)的影響（）Table 4 Effect of RS4 starch at various different levels on body parameters and visceral indices of Schizothorax prenanti Tcha

表4 不同水平的RS4型抗性淀粉對齊口裂腹魚形體指標(biāo)和內(nèi)臟指數(shù)的影響（）Table 4 Effect of RS4 starch at various different levels on body parameters and visceral indices of Schizothorax prenanti Tcha

項目對照組3.5%RS4劑量組7%RS4劑量組14%RS4劑量組 28%RS4劑量組肥滿度/（g/cm3）1.61±0.17a1.48±0.09ab1.49±0.17ab1.46±0.06b1.51±0.14ab腸脂比/%1.23±0.31a0.82±0.29ab0.74±0.32b0.71±0.08b0.74±0.15b肝體比/%1.46±0.311.45±0.6131.46±0.251.47±0.461.46±0.05

2.3 RS4型抗性淀粉對齊口裂腹魚血脂水平的影響

表5 不同水平的RS4型抗性淀粉對齊口裂腹魚血脂水平的影響Table 5 Effect of RS4 starch at various levels on serum lipid levels of Schizothorax prenanti Tchan

表5 不同水平的RS4型抗性淀粉對齊口裂腹魚血脂水平的影響Table 5 Effect of RS4 starch at various levels on serum lipid levels of Schizothorax prenanti Tchan

VLDL-C含量/（mmol/L）對照組7.77±0.54a3.39±0.99a3.05±0.28b1.53±0.25a2.96±0.04a3.5%RS4劑量組6.85±0.24ab2.62±0.45ab3.64±0.19ab0.80±0.1b2.13±0.28ab7%RS4劑量組7.10±1.71ab2.68±0.53ab3.56±0.34ab1.23±0.39a2.56±0.11a14%RS4劑量組5.93±0.32b1.90±0.20b3.95±0.67a0.53±0.06b1.46±0.35b28%RS4劑量組5.35±1.01b2.11±0.08b2.93±0.20b0.57±0.16b1.34±0.07b組別TC含量/（mmol/L）TG含量/（mmol/L）HDL-C含量/（mmol/L）LDL-C含量/（mmol/L）

由表5可見，當(dāng)RS4型抗性淀粉添加量低于7%時對TC、TG、VLDL-C含量無顯著影響，但當(dāng)劑量達(dá)到14%及以上時，能夠顯著降低血清TC、TG、VLDL-C含量（P＜0.05）；14%RS4劑量組與對照組相比能顯著增加HDL-C含量（P＜0.05），其他組與對照組相比無顯著差異；3.5%RS4、14%RS4、28%RS4劑量組與對照組相比能夠顯著降低LDL-C含量（P＜0.05），7%RS4劑量組與對照組相比無顯著影響。

2.4 RS4型抗性淀粉對齊口裂腹魚IMF的影響

圖1 RS4型淀粉對齊口裂腹魚IMF含量的影響Fig.1 Effect of RS4 starch at various levels on intramuscular fat content

由圖1可見，RS4型抗性淀粉添加量小于7%時對齊口裂腹魚IMF含量沒有顯著影響，但當(dāng)劑量達(dá)到14%時能夠顯著降低IMF含量（P＜0.05），隨著劑量的增高影響越顯著。

2.5 RS4型抗性淀粉對齊口裂腹魚肌肉和肝臟中PPARα及FABP mRNA表達(dá)水平的影響

2.5.1 肌肉中PPARα m RNA的表達(dá)

圖2 肌肉中PARα mRNA表達(dá)水平比較Fig.2 PPARα gene expression level in muscle

由圖2可見，RS4型抗性淀粉組肌肉中PPARα mRNA表達(dá)水平均顯著高于對照組（P＜0.05），其中RS4組顯著高于其他組（P＜0.05）。

圖3 肝臟中PPARα mRNA表達(dá)水平比較Fig.3 PPARα gene expression level in liver

2.5.2 肝臟中PPARα mRNA的表達(dá)由圖3可見，齊口裂腹魚肝臟中PPARα mRNA表達(dá)水平趨勢與肌肉中相似，RS4型抗性淀粉組肝臟中PPARα mRNA表達(dá)水平均顯著高于對照組（P ＜0.05），與肌肉不同的是14%RS4組與其他抗性淀粉劑量組之間沒有顯著性差異（P＞0.05）。

2.5.3 肌肉中H-FABP mRNA的表達(dá)

圖4 肌肉中H-FABP mRNA 表達(dá)水平比較Fig.4 H-FABP gene expression level in muscle

由圖4可知，當(dāng)RS4型抗性淀粉添加劑量達(dá)到14%及以上時能夠顯著降低心型脂肪酸結(jié)合蛋白（heart fatty acid-binding protein，H-FABP）mRNA表達(dá)水平（P＜0.05），添加劑量為3.5%、7%對H-FABP mRNA表達(dá)水平?jīng)]有顯著影響（P＞0.05）。

2.5.4 肝臟中FABP mRNA的表達(dá)

圖5 肝臟中FABP mRNA表達(dá)水平比較Fig.5 FABP gene expression level in liver

由圖5可知，抗性淀粉的劑量為3.5%時對肝臟FABP mRNA表達(dá)量與對照組相比無顯著影響（P＞0.05）；當(dāng)劑量達(dá)到7%時能夠顯著降低肝臟中FABP mRNA表達(dá)量（P＜0.05），并且隨著劑量的增高，影響越顯著，降低的趨勢與肌肉中的結(jié)果一樣。

3 討 論

本實驗結(jié)果表明，RS4型抗性淀粉能夠促進(jìn)齊口裂腹魚的體質(zhì)量增加，并且能夠顯著提高魚的攝食率和特定生長率，這可能是由于飼料中含有適量的纖維素刺激腸道的運動加劇，提高了齊口裂腹魚的攝食并改善了腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，這與譚青松[4]的研究結(jié)果一致，齊口裂腹魚屬于雜食性魚類，對碳水化合物的利用高于肉食性魚類。但是當(dāng)劑量達(dá)到28%時餌料系數(shù)顯著增加，特定生長率與對照組相比卻沒有影響，表明飼料中過高的抗性淀粉影響了齊口裂腹魚對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，也就降低飼料的利用率。

本實驗中，抗性淀粉添加劑量7%以上能夠顯著的升高肌肉和肝臟中PPARα mRNA表達(dá)水平，與王欣[13]的研究結(jié)果一致，PPARα是調(diào)節(jié)脂肪酸氧化分解代謝的最重要的一種核轉(zhuǎn)錄因子，可以調(diào)節(jié)若干線粒體脂肪酸催化酶的表達(dá)，通過誘導(dǎo)肌肉和肝臟特異性的肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)運酶表達(dá)而調(diào)控脂肪酸向線粒體的轉(zhuǎn)運[14-15]，促進(jìn)TG的循環(huán)，維持體內(nèi)脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)從而降低了血清中TC、TG的含量，同時本實驗齊口裂腹魚的腸系膜脂肪沉積減少， IMF含量也降低。PPARα?xí)璧KApoE基因的表達(dá)，使脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase，LPL）的活性增強(qiáng)，促進(jìn)LPL基因表達(dá)，導(dǎo)致血中富含TG的脂蛋白，如乳糜微粒和VLDL-C分解代謝加劇，血中TG水平降低，進(jìn)而引起富含TG的LDL-C水平降低。肝臟中FABP可以調(diào)節(jié)膽固醇的吸收和代謝，且能影響膜雙分子層中膽固醇的移動。新近研究證實L-FABP主要由PPARα來調(diào)控。PPARα與L-FABP基因啟動子區(qū)的過氧化物酶體增殖物反應(yīng)元件結(jié)合，調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)錄[16]。在脂肪代謝中，L-FABP增高，使TC、TG積聚，導(dǎo)致脂質(zhì)代謝紊亂。本實驗結(jié)果中，RS添加劑量7%及以上時肝臟中FABP mRNA表達(dá)水平下降，在FABP與PPARα的共同調(diào)控作用下血清中TC、TG、LDL-C含量也隨之下降，與Liu等[17]報道結(jié)果一致。但Enes[18]的研究結(jié)果瓜兒膠（與RS4一樣是屬于可溶性非淀粉多糖）不影響白海鯛的血清膽固醇和甘油三酯水平。Kim等[19]也報道了小鼠攝食高RS水平的玉米淀粉，可以降低其肝臟中總脂和膽固醇水平，表明RS的降血脂作用可能是通過干擾腸道膽固醇和膽汁酸的吸收而對其造成影響。本實驗研究結(jié)果表明當(dāng)RS劑量達(dá)到7%以上時能夠降低齊口裂腹魚血清中TC、TG、LDL-C、VLDL-C水平，并且從基因表達(dá)水平上初步解釋了可能原因是上調(diào)了PPARα mRNA的表達(dá)、同時肝臟FABP mRNA表達(dá)水平下降，促進(jìn)了脂肪酸的氧化分解代謝。

H-FABP的mRNA水平與影響肉質(zhì)性狀的肌內(nèi)脂肪IMF含量有關(guān)，可作為 肉質(zhì)的候選基因[20-22]。本實驗結(jié)果顯示，當(dāng)RS4型抗性淀粉劑量達(dá)到14%及以上時能夠顯著降低齊口裂腹魚肌肉中H-FABP mRNA表達(dá)水平，與IMF含量變化趨勢一致，本研究結(jié)果與報道的肌肉中IMF含量與H-FABP呈顯著正相關(guān)的結(jié)果一致[23]。結(jié)果表明，添加適當(dāng)劑量的RS4型抗性淀粉不僅能夠調(diào)節(jié)哺乳動物的脂質(zhì)代謝，同樣能夠調(diào)節(jié)齊口裂腹魚的脂質(zhì)代謝，魚的特定生長率及攝食率顯著提高，腸系膜脂肪和肌內(nèi)脂肪卻減少，表明更多的脂肪不是用于儲存而是用作能量消耗，使一部分本應(yīng)供能的蛋白質(zhì)用于生長，從而提高了齊口裂腹魚的生長性能，降低了魚體脂肪沉積。

[1] 李瑞文, 林亞秋, 鄭玉才, 等. 齊口裂腹魚PGC-1α基因編碼區(qū)的克隆及其在肌肉組織中的表達(dá)[J]. 生物技術(shù)通訊, 2013, 24(1): 72-75.

[2] SAJILATA M G, SINGHAL R S, KULKARNI P R. Resistant starch: a review[J]. Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety, 2006, 5: 1-17.

[3] LEE K Y, YOO S H, LEE H G. The effect of chemically-modified resistant starch, RS type-4, on body weight and blood lipid profiles of high fat diet-induced obese mice[J]. Starch- St?rke, 2012, 64(1): 78-85.

[4] 譚青松. 飼料中不同來源淀粉對異育銀鯽和長吻鮠生長和代謝的影響[D]. 武漢: 中國科學(xué)院研究生院, 2005.

[5] SHIMOTOYODOME A, SUZUKI J, FUKUOKA D, et al. RS4-type resistant starch prevents high-fat diet-induced obesity via increased hepatic fatty acid oxidation and decreased postprandial GIP in C57BL/6J mice[J]. American Journal of Physiology, 2010, 298: 652-662.

[6] SUZUKI T, YOSHIDA S, HARA H. Physiological concentrations of short-chain fatty acids immediately suppress colonic epithelial permeability[J]. British Journal of Nutrition, 2008, 100(2): 297-305.

[7] RICHARD K L, HU Ying. Effects of resistant starch on genotoxininduced apoptosis, colonic epithelium, and luminal contents in rats [J]. Carcinogenesis, 2003, 24(8): 1347-1352.

[8] RICHARD K L, HU Ying. A synbiotic combination of resistant starch and Bifidobacterium lactis facilitates apoptotic deletion of carcinogendamaged cells in rat colon[J].The Journal of Nutrition, 2005, 135(5): 996-1001.

[9] 王步樞, 鄔應(yīng)龍. 檸檬酸甘薯淀粉酯制備工藝優(yōu)化及性質(zhì)研究[J].食品科學(xué), 2012, 33(24): 86-91.

[10] NRC (National Research Council). Nutrient requirement of fish[M]. Washington, DC: National Academy Press, 1993.

[11] 段彪, 向梟, 周興華, 等. 齊口裂腹魚飼料中適宜脂肪需要量的研究[J].動物營養(yǎng)學(xué)報, 2007(3): 232-236.

[12] PFAFFL M W. A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR[J]. Nucleic Acids Research, 2001, 29(9): 41-45.

[13] 王欣. RS4型甘薯抗性淀粉對高脂飲食小鼠炎癥因子及PPARα mRNA表達(dá)的影響[D]. 雅安: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué), 2013: 21-32.

[14] MICHUNG Y. PPARα in obesity: sex difference and estrogen involvement[J]. PPAR Research, 2010, 10: 1155-1171.

[15] MANDARD S, MüLLAR M, KERSTEN S. Peroxisome proliferatoractivated receptors-alpha target genes[J]. Cellular and Molecular Life Sciences, 2004, 61: 393-416.

[16] ATSHAVES B P, MARTIN G G, HOSTETLER H A, et al. Liver fatty acid-binding protein and obesity[J]. The Journal of Nutritional Biochemistry, 2010, 21(11): 1015-1032.

[17] LIU X, OGAWA H, KISHIDA T, et al. Hypolipidaemic effect of maize starch with different amylose content in ovariectomized rats depends on intake amount of resistant starch[J]. British Journal of Nutrition, 2009, 101(3): 328-339.

[18] ENES P, POUSAO-FERREIRA C, SALMERON, et al. Effect of guar gum on glucose and lipid metabolism in white sea bream Diplodus sargus[J]. Fish Physiology and Biochemistr y, 2013, 39(2): 159-169.

[19] KIM W K, CHUNG M K, KANG N E, et al. Effect of resistant starch from corn or rice on glucose control, colonic events, and blood lipid concentrations in streptozotocin-induced diabetic rats[J]. The Journal of Nutritional Biochemistry, 2003, 14(3): 166-172.

[20] MICHAL J J, ZHANG Z W, GASKINS C T, et al. The bovine fatty acid binding protein 4 gene is significantly associated with marbing and subcutaneous fat depth in Wayu×Limousin F2 crosser[J]. Animal Genetics, 2006, 37(4): 400-402.

[21] YE M H,CHEN J L, ZHAO G P, et al. Associations of A-FABP and H-FABP markers with the content of intramuscular fat in Beijing-you chicken[J]. Animal Biotechnology, 2010, 21(1): 14-24.

[22] LEE S H, CHOI Y M, CHOE J H, et al. Association between polymorphisms o f the heart fatty acid binding protein gene and intemuscular fat content, fatty acid composition, and meat quality in Berkshire breed[J]. Meat Science, 2010, 86(3): 794-800.

[23] 林亞秋, 李瑞文, 鄭玉才, 等. 齊口裂腹魚和鯉魚H-FABP基因的克隆及其表達(dá)譜[J]. 中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報, 2012, 27(6): 554-560.

Effect of RS4-Type Resistant Starch on Growth Performance, Lipid Metabolism and Related Gene Expression in Schizothorax prenanti Tchang

XIANG Shi-qiong, WU Ying-long*
(College of Food Science, Sichuan Agricultural University, Ya’an 625014, China)

Obje ctive: To explore the effect of RS4-type resistant starch on growth performance, lipid metabolism and related gene expression in Schizothorax prenanti Tchang. Methods: Schizothorax prenanti Tchang weighed about 75 g were randomly div ided into five groups which were fed RS 4-type resistant starch at doses of 0 (control), 3.5%, 7%, 14% an d 28%, respectively. After 60 days of administration, the growth performance and serum lipid levels were measured; meanwhile, peroxisome proliferators activated receptors-alpha (PPARα) and fatty acid-binding protein (FABP mRNA) expression levels in muscle and liver were determined by RT-PCR. Results: The body weight, feed intake and specific growth ratio of Schizothorax prenanti Tchang were significantly higher in the 7% and the 14% resistant starch groups than in the control group (P ＜ 0.05). Feed intake was significantly increased at the dose of 28%, but neither body weight nor specific growth ratio was significantly affected. The 14% resistant starch group showed significant reduced levels of blood lipids and heartfatty acid-binding protein (H-FABP) mRNA expression when compared to the control group, and a positive correlation existed between H-FABP mRNA expression and intramuscular fat (IMF) content. When the dose was as high as 7% or above, we observed a signifi cant increase in PPARα mRNA expression levels in muscle and liver but a significant decrease in FABP mRNA expression level in liver. Conclusion: Dietary supplementation with the appropriate amount of RS4-type resistant starch can promote the growth of Schizothorax prenanti Tchang, regulate lipid metabolism-related genes, and reduce the accumulation of mesenteric fat and intramuscular fat.

RS4-type resistant starch; Schizothorax prenanti Tchang; real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR); peroxisome proliferators activated receptors-alpha (PPARα); fatty acid-binding protein (FABP)

TS254.1

A

1002-6630（2014）07-0223-06

10.7506/spkx1002-6630-201407044

2013-07-18

四川省科技支撐計劃項目（2009NZ0077-007）；四川農(nóng)業(yè)大學(xué)“211”工程雙支計劃項目（2010）

向世瓊（1989—），女，碩士研究生，研究方向為功能性食品。E-mail：xiangshiqiong@163.com

*通信作者：鄔應(yīng)龍（1963—），男，教授，博士，研究方向為功能性食品。E-mail：wuyinglong99@163.com