孔祥密，王培卿，康文藝

河南大學中藥研究所，開封 475004

決明子為豆科草本植物決明(Cassia obtusifolia L.)或小決明(Cassia tora L.)的干燥成熟種子。其味甘、苦、咸，性微寒，歸肝、腎、大腸經(jīng)，具有清肝明目、潤腸通便的功效［1］。在中國傳統(tǒng)醫(yī)學上用于保護肝臟［2］，此外還用于治療目赤腫痛、羞明淚多、頭痛頭暈、大便秘結(jié)?，F(xiàn)代藥理學研究證明，決明子具有降血壓、降血脂、抗氧化、抗菌等活性［3］，是一種被廣泛應用的藥用同源的植物?；瘜W研究表明，萘并吡喃酮類和蒽醌類化學物質(zhì)是決明子的主要藥效成分［4］。至今研究顯示決明子提取物可以抑制活性氧自由基活性，消除羥自由基，在細胞和細胞膜中與脂類結(jié)合而有效抑制脂質(zhì)的氧化過程［5］。鄭榮波，黃曉丹等［6］研究了決明子提取物對鏈脲佐菌素誘發(fā)糖尿病小鼠晶狀體氧化應激狀態(tài)的影響，發(fā)現(xiàn)決明子提取物可以通過清除自由基和抑制脂質(zhì)過氧化過程改善STZ 誘導糖尿病小鼠晶狀體內(nèi)的過氧化狀態(tài)，說明決明子具有一定的抗氧化能力。本課題組采用DPPH、ABTS 和FRAP 三種方法對決明子及其炮制品的抗氧化活性進行了綜合考察，以評價不同炮制方法對決明子抗氧化作用的影響。

1 儀器、材料與試劑

1.1 主要儀器

UV-2000 型紫外可見分光光度計(上海尤尼可儀器有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本東京理化公司);電子天平(美國Mettler-Toledo 儀器有限公司);Multiskan MK3 酶標儀(美國Thermo Electron 公司)。

1.2 材料

決明子購于開封樂仁堂總店，經(jīng)河南大學中藥研究所李昌勤副教授鑒定為豆科草本植物決明(Cassia obtusifolia L.)或小決明(Cassia tora L.)的干燥成熟種子，標本存于河南大學中藥研究所。

1.3 試劑

DPPH(日本東京化成工業(yè)株式會社);［2，2'-連氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨鹽］(ABTS，美國Fluka 公司);Fe3+-三吡啶三啞嗪(tripyridyl-triazine，TPTZ;比利時Acrosorganics 公司);6-羥基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-2-羧酸(Trolox，美國Aldrich 公司);二丁基羥基甲苯(BHT，比利時Acros organics 公司);其他試劑均為分析純。

2 實驗方法

2.1 決明子炮制及浸膏提取

決明子生品:決明子原藥材除去雜質(zhì)，洗凈后干燥;炒決明子:取凈決明子500 g，置于鍋內(nèi)用中火，炒至顏色加深，斷面淺黃色，爆鳴聲減弱并有香氣溢出是，取出放涼;鹽決明子:取凈決明子500 g，加鹽水(2 kg/100 kg)，拌勻悶透，置于鍋內(nèi)用文火加熱，炒至表面棕褐色，微鼓起，有香氣溢出，取出放涼;酒炙決明子:取凈決明子500 g，加入適量黃酒浸泡過夜，置于鍋內(nèi)用文火炒干，取出放涼;醋炙決明子:取凈決明子500 g，加入適量米醋浸泡過夜，置于鍋內(nèi)用文火炒干，取出放涼;酒蒸決明子:取凈決明子500 g，加入適量黃酒浸泡過夜，恒溫55 ℃蒸2 h，取出放涼。

各取決明子生品、炒決明子、鹽決明子、酒炙決明子、醋炙決明子和酒蒸決明子200 g，用甲醇冷浸提取三次，回收溶劑，得甲醇總浸膏。甲醇總浸膏用10%甲醇水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到?jīng)Q明子生品及5 種炮制品各石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。

2.2 抗氧化活性篩選

2.2.1 DPPH 法

按照文獻［7］的方法，在515 nm 波長處測定樣品及對照品BHT 對DPPH 自由基的清除能力。計算清除率及半數(shù)抑制率IC50值。

2.2.2 ABTS 法

按照文獻［8］的方法，在734 nm 波長處測定樣品及陽性對照BHT 對ABTS 自由基的清除能力。計算清除率及半數(shù)抑制率IC50值。

2.2.3 FRAP 法

按照文獻［9］的方法，在593 nm 波長處測定樣品及陽性對照BHT 還原Fe3+的能力，結(jié)果以Trolox 當量表示。當C(Trolox)=25～400 mol/L 時，有良好的線性關(guān)系(r=0.9996)。

3 結(jié)果與分析

3.1 對DPPH 自由基的清除能力

表1 顯示，除酒炙、酒蒸和鹽蒸決明子EA 部位外其他決明子生品及其炮制品提取物均無清除DPPH 自由基的作用，酒炙、酒蒸和鹽蒸決明子EA 部位清除DPPH 自由基的能力(IC50分別為94.4、93.8 和104.6 μg/mL)遠弱于陽性對照BHT(IC50為23 μg/mL)。

注:BHT 為陽性對照品。Note:BHT was used as positive control.

圖1 炒決明子(A)、醋炙決明子(B)、酒蒸決明子(C)、酒炙決明子(D)、決明子生品(E)及鹽蒸決明子(F)各部位對ABTS自由基的影響Fig.1 Scavenging activities of different concentrations of fried(A)，vinegar fried(B)，wine steamed(C)，wine fired(D)，raw(E)and salt steamed(F)C.obtusifolia on ABTS free radical

3.2 對ABTS 自由基的清除作用

決明子及其炮制品提取部位的質(zhì)量濃度對ABTS 自由基的清除率的影響見圖1(A)～(F)。結(jié)果顯示，決明子生品及其炮制品各提取部位對ABTS自由基的清除率隨著質(zhì)量濃度的增加而增大。除炒決明子ME 總浸膏、醋炙決明子各提取部位、酒蒸決明子PE 部位、酒炙決明子PE 及ME 部位、決明子生品BU 及PE 部位和鹽蒸決明子ME 總浸膏外，其他部位當達到一定濃度后，再繼續(xù)增加濃度，抑制率變化不大，即抗氧化活性接近飽和。

由表1 可以看出，決明子及其炮制品清除ABTS自由基的能力都弱于陽性對照BHT(IC50為2.3 μg/mL)。炒決明子、醋炙決明子和酒炙決明子PE 部位清除ABTS 自由基的能力(IC50分別為11.1、43.1 和47.1 μg/mL)強于決明子生品PE 部位(IC50為60.7 μg/mL);酒炙決明子和鹽蒸決明子EA 部位清除ABTS 自由基能力(IC50分別為8.1 和9.7 μg/mL)均強于決明子生品EA 部位(IC50為10.5 μg/mL);炒決明子、酒炙決明子、酒蒸決明子和鹽蒸決明子清除ABTS 的能力(IC50分別為11.7、13.7、15.3 和9.7 μg/mL)均強于決明子生品BU 部位(IC50為29.9 μg/mL)。

3.3 對Fe3+的還原能力

表1 顯示，決明子生品及炮制品各提取部位還原Fe3+的能力均弱于陽性對照BHT，炮制后的決明子ME 部位還原Fe3+的能力均降低;炒決明子、醋炙決明子和酒炙決明子PE 部位Fe3+的還原能力(TEAC 分別為208.85、50.3 和69.47 μmol/g)強于決明子生品PE 部位(TEAC=28.88 μmol/g);酒炙、酒蒸和鹽蒸決明子EA 部位Fe3+的還原能力(TEAC 分別為319.22、298.49 和290.92 μmol/g)強于決明子生品EA 部位(TEAC=195.59 μmol/g);炒炙、醋炙、酒炙、酒蒸及鹽蒸決明子BU 部位Fe3+的還原能力(TEAC 分別為120.96、47.87、152.88、175.23 和217.56 μmol/g)強于決明子生品BU 部位(TEAC=44.89 μmol/g)。

4 結(jié)論

本文首次采用DPPH、ABTS 和FRAP 3 種抗氧化方法，對決明子及其5 種炮制品不同提取部位進行研究，結(jié)果表明，決明子及其炮制品的抗氧化活性較弱，均低于陽性對照BHT。與生品相比，經(jīng)炮制后的決明子的抗氧化能力均發(fā)生了變化，此外，各部位的活性均與濃度呈正相關(guān)性，具有一定的濃度依賴性。

1 China Pharmacopoeia Committee(國家藥典委員會).Pharmacopoeia of People's Republic of China(中華人民共和國藥典).Beijing:Chemical Industry Press，2005.98.

2 Kang WY，Yu HL，Wang JX.α-Glucosidase inhibitory compounds from seeds of Cassia obtusifolia.Chem Nat Comp，2012，48:465-466.

3 Mei QX(梅全喜).Modern Pharmacology and Clinical Application Manual(現(xiàn)代中藥藥理與臨床應用手冊)，Beijing:China Press of Traditional Chinese Medicine，2008.232-233.

4 Zhang QW(張啟偉)，Yin J(陰健)，Zhang J(張俊).Comparison of contents of some active components between crude and processed seeds of Cassia tora and their decoctions by HPLC.Chin Tradit Herb Drugs(中草藥)，1996，27(2):79-81.

5 Ju MS，Kim HG，Choi JG，et al.Cassiae semen，a seed of Cassia obtusifolia，has neuroprotective effects in Parkinson's disease models.Food Chem Toxicol，2010，48:2037-2044.

6 Zheng RB(鄭榮波)，Huang XD(黃曉丹)，He RR(何榮榮)，et al.Effects of Cassia obtusifolia extract on oxidative stress status in STZ-induced diabetic mice.Chin J Exp Tradit Med Form(中國實驗方劑學雜志)，2012，18:233-237.

7 Kang WY，Li CF，Liu YX.Antioxidant phenolic compounds and flavonoids of Mitragyna rotundifolia(Roxb.)Kuntze in vitro.Med Chem Res，2010，19:1222-1232.

8 Kang WY，Wang JM.In vitro antioxidant properties and in vivo lowering blood lipid of Forsythia suspense leaves.Med Chem Res，2010，19:617-628.

9 Zhao WE(趙文恩)，Li QQ(李茜倩).Determination of total antioxidant capacity of red pigments from Chinese iujube peel by the ferric reducing/antioxidant power assay.J Zhengzhou Univ，Eng Sci(鄭州大學學報，工學版)，2011，32(3):28-30，35.