崔 玲，劉 云，金立鋼，柏曉松

(上海市楊浦區(qū)市東醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海200438)

細(xì)菌感染是引起白細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞增多最常見(jiàn)的原因，及時(shí)準(zhǔn)確的診斷對(duì)臨床治療和疾病預(yù)后具有重要意義。血培養(yǎng)是細(xì)菌感染的金標(biāo)準(zhǔn)，但其陽(yáng)性率低、易受污染、且報(bào)告周期長(zhǎng)[1-2]。其他指標(biāo)如降鈣素原、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、C反應(yīng)蛋白(CRP)等也是細(xì)菌感染診斷重要的輔助指標(biāo)，但需要額外化驗(yàn)檢查。因此，找到一種快速方便的診斷指標(biāo)十分必要。

機(jī)體發(fā)生感染時(shí)，病原微生物及相關(guān)炎癥因子活化中性粒細(xì)胞，引起中性粒細(xì)胞胞漿內(nèi)中毒性顆粒和細(xì)胞核核酸含量的增加，以合成抗菌活性成分抵抗微生物的侵襲。中性粒細(xì)胞中毒性顆粒是重度感染的重要指標(biāo)，但其操作方法繁瑣，半定量且具有一定的主觀性。Sysmex XT-2000i全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)中性粒細(xì)胞時(shí)通過(guò)側(cè)向散射光(SSC，以 NEUT-X表示)反映細(xì)胞的內(nèi)容物(核、顆粒)，側(cè)向熒光(SFL，以 NEUT-Y表示)反映細(xì)胞的DNA和RNA含量，上述2個(gè)指標(biāo)與中性粒細(xì)胞的活化密切相關(guān)，已得到相關(guān)研究的驗(yàn)證[3]。我們對(duì)中性粒細(xì)胞參數(shù)NEUT-X和NEUTY的變化規(guī)律進(jìn)行觀察分析，以探討其在感染性疾病診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值。

材料和方法

一、對(duì)象

1.感染組 收集2013年3月至5月上海市市東醫(yī)院收治的發(fā)熱病例，經(jīng)血、痰或其他體液細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性，確診為細(xì)菌感染的患者114例，其中男61例，女53例，年齡18～90歲。

2.細(xì)菌培養(yǎng)陰性組 收集2013年3月至5月收治的發(fā)熱、經(jīng)標(biāo)本細(xì)菌培養(yǎng)陰性的患者96例，其中男57例，女49例，年齡16～79歲。

3.正常對(duì)照組 選擇上海市市東醫(yī)院健康體檢者142名，其中男68名，女74名，年齡20～75歲。

二、儀器與試劑

SYSMEX XT-2000i全自動(dòng)血液分析儀及配套試劑、質(zhì)控品、校正品由日本Sysmex公司提供。該血液分析儀每半年進(jìn)行性能評(píng)價(jià)和正確性驗(yàn)證，配套室內(nèi)質(zhì)控中反映激光穩(wěn)定性的參數(shù)是DIFF-X和DIFF-Y。這2個(gè)參數(shù)在實(shí)驗(yàn)期間的室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果見(jiàn)圖1。乙二胺四乙酸二鉀(EDTAK2)真空抗凝管;瑞吉復(fù)合染液及pH值6.4～6.8磷酸鹽緩沖液;Quikread蛋白免疫分析儀及配套試劑。

圖1 DIFF-X、DIFF-Y室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果圖

三、方法

嚴(yán)格按照臨檢操作規(guī)程[4]采集患者靜脈血2 mL，于EDTA-K2抗凝管輕搖混勻備用，樣本分析在2 h內(nèi)完成。血涂片經(jīng)瑞吉染色后，人工顯微鏡下觀察中毒顆粒占中性粒細(xì)胞(100個(gè)或200個(gè))的百分率，計(jì)算中性粒細(xì)胞的毒性指數(shù)(TI)。使用QuikRead蛋白免疫分析儀測(cè)定血CRP水平，按儀器操作手冊(cè)進(jìn)行操作。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，服從正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以±s表示。2組間均數(shù)用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析，多組間均數(shù)比較用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、各組中性粒細(xì)胞NEUT-X、NEUT-Y參數(shù)結(jié)果

感染組NEUT-X、NEUT-Y和NEUT-Z參數(shù)與細(xì)菌培養(yǎng)陰性組、正常對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)，見(jiàn)表1。

二、NEUT-X、NEUT-Y與CRP的相關(guān)性

NEUT-X、NEUT-Y與CRP的相關(guān)系數(shù)(r)分別為 0.518、0.491，均具有較好的相關(guān)性，見(jiàn)圖 2。

表1 各組中性粒細(xì)胞NEUT-X、NEUT-Y、NEUT-Z參數(shù)的比較

圖2 NEUT-X、NEUT-Y與CRP相關(guān)性分析

三、NEUT-X、NEUT-Y和CRP參數(shù)在細(xì)菌感染診斷中的應(yīng)用

運(yùn)用受試者工作特征(ROC)曲線分析NEUT-X、NEUT-Y和CRP參數(shù)的敏感性和特異性，其曲線下面積分別為 0.789、0.725、0.862，見(jiàn)圖3。當(dāng)NEUT-X、NEUT-Y和 CRP臨界值(Cutoff值)取1 370.5、408.5、20.5 mg/L 時(shí)，敏感性分別為 71.1%、86.0%、94.7%，特異性分別為75.6%、50.0%、71.4%，見(jiàn)表 2。

四、NEUT-X在TI判斷中的作用

TI常用于提示感染的嚴(yán)重程度，表示中毒顆粒占中性粒細(xì)胞的百分率。1為極重，0.75為重度，0.5為中度，＜0.25為輕度。圖4顯示NEUTX、NEUT-Y、CRP與TI均具有較好的相關(guān)性，r值分別為 0.764、0.593、0.716，P 均 ＜0.01。

圖3 NEUT-X、NEUT-Y和CRP診斷細(xì)菌感染ROC曲線分析

表2 NEXT-X、NEUT-Y及CRP診斷細(xì)菌感染ROC曲線分析

圖4 NEUT-X、NEUT-Y、CRP與TI的相關(guān)性分析

討 論

SYSMEX XT-2000i全自動(dòng)血液分析儀白細(xì)胞分類采用半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)合核酸熒光染色技術(shù)對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。加入特殊的白細(xì)胞分類溶血?jiǎng)┖途鄞渭谆鶡晒馊旧?，獲得白細(xì)胞分類散點(diǎn)圖，側(cè)向熒光反映每個(gè)細(xì)胞核酸含量，側(cè)向散射光反映每個(gè)細(xì)胞內(nèi)容物復(fù)雜程度，平均每個(gè)細(xì)胞的上述2項(xiàng)數(shù)值，由此得到中性粒細(xì)胞參數(shù)NEUT-X、NEUT-Y和淋巴細(xì)胞參數(shù)LYMPH-X、LYMPH-Y。

細(xì)菌感染時(shí)，機(jī)體進(jìn)行應(yīng)激反應(yīng)，從骨髓中動(dòng)員釋放大量中性粒細(xì)胞，對(duì)病原微生物進(jìn)行吞噬和殺滅，中性粒細(xì)胞數(shù)量增多、比例升高，出現(xiàn)中毒顆粒、空泡樣變化、核左移、桿狀核增多、Dole樣小體等現(xiàn)象。中性粒細(xì)胞被激活后，細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)細(xì)胞器增大變粗現(xiàn)象，引起側(cè)向散射光增強(qiáng)而使NEUT-X參數(shù)增高;同樣由于中性粒細(xì)胞被激活，細(xì)胞合成蛋白和核酸明顯增加，聚次甲基熒光染色液對(duì)核酸進(jìn)行染色引起側(cè)向熒光增強(qiáng)，從而引起 NEUT-Y參數(shù)增高。因此 NEUT-X、NEUT-Y參數(shù)能很好地反映細(xì)菌感染時(shí)中性粒細(xì)胞在形態(tài)和生理上的變化[6]。

本研究結(jié)果顯示感染組NEUT-X、NEUT-Y分別為1 391.4 ±42.3、450.9 ±40.9，明顯高于細(xì)菌培養(yǎng)陰性組(1 344.5 ±37.0、422.7 ±45.9)和正常對(duì)照組(1 351.7 ± 33.7、415.8 ± 32.2)(P ＜0.01)。診斷細(xì)菌感染時(shí)NEUT-X和NEUT-Y的ROC曲線下面積分別為0.789和0.725。以上結(jié)果表明NEUT-X和NEUT-Y用于指示細(xì)菌感染具有很高的臨床應(yīng)用價(jià)值。另外，NEUT-X、NEUT-Y與CRP和TI的相關(guān)性均較高。

眾所周知，白細(xì)胞計(jì)數(shù)和中性粒細(xì)胞百分率(NE%)異常升高是細(xì)菌感染的重要參考指標(biāo)。但人體血液中正常狀態(tài)下白細(xì)胞的基礎(chǔ)值個(gè)體差異較大，參考區(qū)間較寬，又易受運(yùn)動(dòng)、精神等多種因素影響。當(dāng)機(jī)體發(fā)生局限性輕度感染以及患者對(duì)外界感染因素反應(yīng)性較差如老年人、惡病質(zhì)及嚴(yán)重感染時(shí)，或某些藥物、放療或免疫功能不全等原因，可致使白細(xì)胞計(jì)數(shù)不升高甚至降低，此時(shí)再利用這2個(gè)指標(biāo)來(lái)輔助診斷細(xì)菌感染就不是很準(zhǔn)確[6-7]。實(shí)際上這時(shí)候中性粒細(xì)胞雖然在數(shù)量和比例上沒(méi)有明顯變化，但形態(tài)上已經(jīng)發(fā)生了變化，若血涂片染色后人工顯微鏡下觀察，可發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞的中毒顆粒并計(jì)算出TI。但該方法操作繁瑣，半定量且具有一定的主觀性。NEUT-X數(shù)值的大小可反映中性粒細(xì)胞的內(nèi)容物(核、顆粒)的復(fù)雜程度。本研究顯示NEUT-X、NEUT-Y和TI均具有較高的相關(guān)性，其中NEUT-X的相關(guān)性更高。CRP是細(xì)菌感染另一個(gè)重要的參考指標(biāo)。本研究中CRP診斷細(xì)菌感染ROC曲線下面積為0.862，高于 NEUT-X 和 NEUT-Y，但其與 TI的 r值＜NEUT-X。另外，在診治過(guò)程中，CRP結(jié)果的獲取需要額外的檢查和費(fèi)用，一定程度上可能會(huì)增加患者的負(fù)擔(dān)。

總體來(lái)說(shuō)，SYSMEX XT-2000i全自動(dòng)血液分析儀的NEUT-X、NEUT-Y參數(shù)能實(shí)際反映細(xì)菌感染時(shí)激活的中性粒細(xì)胞內(nèi)在結(jié)構(gòu)或生物物理病理性質(zhì)的變化，而且操作簡(jiǎn)單快捷，不需額外處理和費(fèi)用，因此可以作為一種新的輔助診斷細(xì)菌感染的實(shí)用指標(biāo)。

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