黨民團(tuán)，張雪妮

(渭南師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，陜西渭南714099)

藥物中的殘留溶劑是指在原料藥或者輔料的生產(chǎn)中、或在制劑制備過(guò)程中使用或者產(chǎn)生的，但在工藝過(guò)程中未能完全去除的有機(jī)溶劑.大多有機(jī)溶劑對(duì)人體健康有一定危害，因此，為保障用藥安全，藥劑生產(chǎn)中需要對(duì)藥物中的有機(jī)溶劑殘留量嚴(yán)加控制.

琥珀酸美托洛爾(metroprolol succinate，MPS)是一種選擇性β1受體阻滯劑，目前國(guó)內(nèi)廣泛用于對(duì)高血壓、冠心病、心律失常等癥的治療，近年來(lái)亦有將其用于慢性心力衰竭治療的研究報(bào)道.［1-2］MPS生產(chǎn)過(guò)程中需要用丙酮和異丙醇，據(jù)USP相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求［3］，丙酮、異丙醇的殘留量必須小于5 000 ppm(即≦0.5%).近年來(lái)，有關(guān)食品藥品中殘留溶劑的測(cè)定方法報(bào)道很多，參考有關(guān)文獻(xiàn)［4-10］，本文采用頂空-氣相色譜法［11-12］對(duì)MPS中殘留溶劑丙酮和異丙醇的檢測(cè)方法進(jìn)行了探究和優(yōu)化，使得進(jìn)樣室在較低溫度下操作，可避免組分分解;頂空進(jìn)樣也可大大減少溶解樣品的溶劑和樣品本身對(duì)色譜系統(tǒng)帶來(lái)的干擾和污染;縮短分析時(shí)間;延長(zhǎng)分離柱壽命且提高了樣品檢測(cè)的重現(xiàn)性.

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 主要儀器與試劑

島津2010plus氣相色譜儀(帶分流進(jìn)樣口，F(xiàn)ID檢測(cè)器);島津Labsolution和AOC5000自動(dòng)頂空進(jìn)樣器(配2.5 mL頂空氣體進(jìn)樣針);美國(guó)Agilent公司DB-624彈性石英毛細(xì)管柱(30 m×0.53 mm×3.0 μm);Mettler-TOLEDO AL-104型電子天平(梅特勒-托利多公司);MPS試樣(由杭州杰恒化工有限公司提供).丙酮、異丙醇、MPS(標(biāo)樣)均為色譜純，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司.

1.2 標(biāo)準(zhǔn)液配制

MPS在水中易溶［13］，其最大溶解濃度為40 mg/mL，標(biāo)準(zhǔn)要求殘留溶劑限度為0.5%，則其飽和溶液濃度中殘留溶劑限值不大于0.2 mg/mL.以水作溶劑，分別精密稱取0.4 g丙酮和異丙醇，置于盛有約50 mL溶劑的100 mL容量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，混勻，成儲(chǔ)備液(4 mg/mL).再各吸取5.0 μL丙酮、異丙醇儲(chǔ)備液，置于100 mL的容量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，混勻，制成分析標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.2 μg/mL).精密量取5.0 mL于頂空瓶中，備用.

1.3 方法探究與優(yōu)化

據(jù)已有文獻(xiàn)［14-15］，確定分析條件為:進(jìn)樣口溫度150℃;柱箱采用程序升溫，初始溫度40℃，保持10 min，再以30℃/min的升溫速率上升至240℃，維持5 min;檢測(cè)器溫度250℃;載氣(99.999%的高純N2)流量 2.0 mL/min;燃燒氣為 99.999%的高純 H2，流量 4.0 mL/min;助燃?xì)鉃楦稍锟諝?，流?00 mL/min;尾吹氣為99.999%的高純 N2，流量30 mL/min;頂空條件:瓶平衡溫度70℃，瓶平衡時(shí)間20 min，震蕩速率250 rpm;分流進(jìn)樣，分流比20∶1;進(jìn)樣量為10 μL.檢測(cè)分析譜圖見(jiàn)圖1.由圖1可見(jiàn)，丙酮和異丙醇保留時(shí)間長(zhǎng)且接近，出峰晚，分離效果不太理想;峰面積小，定量化誤差大.為了提高分析效果，嘗試通過(guò)調(diào)節(jié)分流比、進(jìn)樣溫度、載氣流速等優(yōu)化分析條件:減小分流比為10∶1，以增大響應(yīng)值，以利于藥品中微量殘留溶劑的檢測(cè);適度增大流量，調(diào)節(jié)載氣流速為5.0 mL/min，以縮短分析組分的保留時(shí)間;降低進(jìn)樣口溫度至120℃，以提高分離效率.優(yōu)化后的分析譜圖見(jiàn)圖2.對(duì)比圖1、圖2可見(jiàn):丙酮、異丙醇的保留時(shí)間縮短;分離效果明顯改善;峰面積增大，分析信號(hào)增強(qiáng).

圖1 MPS標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

圖2 條件優(yōu)化后的MPS色譜圖

圖2的相關(guān)參數(shù)見(jiàn)表1.從表1中可明顯看出，優(yōu)化后的響應(yīng)值(Area)、理論塔板數(shù)(NTP)、拖尾因子(Tailing F.)和分離度(Resolution)都達(dá)到了更為理想的效果.

表1 MPS圖譜相關(guān)參數(shù)表

2 結(jié)果與討論

2.1 方法檢出限與定量限的確定

檢出限是指試樣中被測(cè)物能被檢出的最低量.定量限是指試樣中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量.本文使用信噪比法，用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，即S/N值，算出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度［15］.本實(shí)驗(yàn)以信噪比S/N=3對(duì)應(yīng)濃度為檢出限濃度LOD，S/N=11對(duì)應(yīng)濃度為定量限濃度LOQ.

操作時(shí)逐級(jí)稀釋儲(chǔ)備溶液，再藉此稀釋溶液，記錄所得圖譜信噪比S/N值.將丙酮和異丙醇儲(chǔ)備液各稀釋20倍，進(jìn)樣分析，記錄S/N值，與LOD和LOQ比較，初步確定稀釋倍數(shù)M，再分別配制M±50倍溶液共3組梯度溶液，進(jìn)樣分析，記錄S/N值分析得出最終LOD和LOQ.結(jié)果見(jiàn)表2.

表2 方法檢出限與定量限實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 工作曲線

按樣品分析濃度范圍，以標(biāo)準(zhǔn)液(0.2 μg/mL)濃度為基準(zhǔn)，用水作稀釋劑，分別配制相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度5%、10%、30%、50%、100%和150%線性系列濃度的丙酮和異丙醇溶液，包括實(shí)際樣品殘留溶劑濃度的最高點(diǎn)和最低點(diǎn)以及標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)，每個(gè)濃度配制3份，以上述優(yōu)化的分析條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖數(shù)據(jù).以峰面積A對(duì)濃度C得到回歸方程和相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表3.表3數(shù)據(jù)顯示線性關(guān)系良好，說(shuō)明該方法適用于MPS中微量殘留溶劑的定量分析.

表3 線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 方法的準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確度是指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或者參考值接近的程度，一般用回收率(%)表示.在配制MPS 試樣溶液時(shí)，分別加入標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 0.25 μL、0.5 μL、1.5 μL、2.5 μL、5.0 μL、7.5 μL，即得分別相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)溶液5%、10%、30%、50%、100%和150%的加標(biāo)試液，以MPS標(biāo)準(zhǔn)品為空白，按1.3優(yōu)化方法進(jìn)行加標(biāo)回收率測(cè)量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4.

表4 方法回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=5)

2.4 精密度測(cè)定

精密稱取0.2 g供試品6份，置于頂空瓶中，加標(biāo)準(zhǔn)溶液5.0 mL，加蓋密封，搖勻后放入樣品盤中，在1天內(nèi)重復(fù)測(cè)定6次;在1周內(nèi)由不同分析人員操作重復(fù)測(cè)定3次，分別記錄峰面積和保留時(shí)間，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，異丙醇和丙酮的峰面積的RSD分別為6.92和5.73，保留時(shí)間的RSD分別為2.31和2.01.說(shuō)明該方法可靠且有較高的精密度.

3 結(jié)語(yǔ)

在確定的分析條件下，采用頂空-氣相色譜法測(cè)定MPS中殘留丙酮和異丙醇含量，峰形對(duì)稱，分離效果好，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，滿足常規(guī)分析要求，對(duì)MPS生產(chǎn)過(guò)程控制及質(zhì)量檢測(cè)有實(shí)用價(jià)值.

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