【摘要】建立氣相色譜法分析雷替曲塞中有機溶劑殘留。雷替曲塞中有機溶劑主要有甲醇、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿和二甲基甲酰胺等有機溶劑殘留。方法采用B-1石英毛細管柱，采用程序升溫，氣化室：200℃，檢測器：250℃，恒溫載氣N2。七種有機溶劑的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r>0.999。七種溶劑殘留的加樣回收RS分別為94.25%，98.81%，110.24%，105.34%，101.57%，92.57%和94.55%。本方法簡單、準確、靈敏度高、重現(xiàn)性好。

【關(guān)鍵詞】氣相色譜法；有機溶劑殘留；雷替曲塞；抗腫瘤藥

雷替曲塞是一種新一代水溶性胸腺合成酶抑制劑，屬于一種喹唑啉葉酸鹽類似物。該藥通過細胞膜外還原型葉酸鹽載體系統(tǒng)將本品主動攝入細胞內(nèi)，而后迅速代謝為多谷氨酸類化合物抑制胸苷酸合酶的活性，從而抑制細胞NA的合成，并能在細胞內(nèi)潴留，長時間發(fā)揮作用。它對結(jié)腸直腸癌細胞系的抑制作用強于5-氟尿嘧啶，且雷替曲塞（圖1的副反應發(fā)生率低，方法簡便，患者易于接受。雷替曲塞特點：①作用機制獨特：本品特異性亦自胸腺嘧啶核苷的合成，而對RNA不起作用，避免了因?qū)NA有影響而產(chǎn)生的副作用。②耐受性好，副作用少：出現(xiàn)白細胞減少、黏膜炎、潰瘍等副作用的比例減小，大大提高了完成全部治療的病人比例。③給藥方式簡便、節(jié)約總體費用：本品的給藥方式為每三周一次，每次約15分鐘靜脈輸注；而以5-氟尿嘧啶為主的聯(lián)合化療需每4周給藥一次，每次連續(xù)5天給藥。因此本品從整體上大大減少住戶李、支持治療等多方面的費用。④療效確切：對于進展性結(jié)腸癌，本品的反應率為14-26%，本品的合成工藝分為3部分，第1部分為噻吩-2-甲酸中羧基的酰氯化、N-?；?、硝基還原、N-甲基化，得到中間體Ⅰ；第2部分為5-甲基-2-氨基-苯甲酸與硫代乙酰胺的環(huán)合、芳環(huán)側(cè)鏈的鹵代反應，得到中間體Ⅱ；第3部分Ⅰ+Ⅱ的N-烷基化反應及酯的水解反應，得到終產(chǎn)物。在該藥的制備過程中，使用了甲醇、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿和二甲基甲酰胺等有機溶劑，本文建立了氣相色譜法測定其溶劑殘留，方法簡單、準確、靈敏度高、重現(xiàn)性好。

1儀器與試劑

儀器：ShimadzuGC-14B，F(xiàn)I檢測器，N-2000色譜工作站（浙江大學信息工程研究所。

試劑：甲醇（色譜純，美國Fisher Scientific公司；乙醚（分析純，濟南元通化工有限公司；石油醚（60-90℃，分析純，濟南元通化工有限公司；乙酸乙酯（分析純，上海試劑-廠；氯仿（分析純，上海試劑-廠；二甲基甲酰胺（分析純，江蘇漢邦科技有限公司；二甲亞砜（分析純，上海久意化學試劑有限公司；水為雙重蒸餾水。

樣品：雷替曲塞對照品（河南天方藥業(yè)股份有限公司藥物研究所，批號為120752，含量100.0%和注射用雷替曲塞（江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司，批號為130319。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：B-1石英毛細管柱（30m×0.53mmI..×1.0m；柱溫：起始30℃，3min，再以20℃min-1升至80℃，隨后以30℃min-1降至20℃，最后以50℃min-1升至200℃并停留4min；氣化室：200℃；檢測器：250℃；恒溫載氣N2；進樣量：2l（不分流進樣。其理論塔板數(shù)不得低于4000，分離度應大于1.0。

2.2標準儲備液制備分別精密稱取甲醇0.1491g、乙醚0.1503g、石油醚0.1519g、乙酸乙酯0.1488g、二氯甲烷0.1528g、氯仿0.1533g和二甲基甲酰胺0.1478g、置同一25ml量瓶中，加二甲亞砜溶解定容至刻度，搖勻，精密吸取此溶液5.0ml置50ml量瓶中，加二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3線性范圍精密量取標準儲備液0.3、0.6、1.0、2.5、4.0ml，分別置10ml量瓶中，用二甲亞砜稀釋，充分搖勻，分別吸取上述標準溶液2.0l進樣，記錄色譜圖，得到各待結(jié)果表明，在所測定的濃度范圍內(nèi)，待測溶劑的濃度和峰面積比值間有良好的線性關(guān)系（相關(guān)系數(shù)>0.999。

2.4最低檢測限試驗取標準曲線項下1號溶液，用二甲亞砜稀釋1000倍，當信噪比SN=3時，得到本法對各待測溶劑的最低檢測限：甲醇9.35ng、乙醚10.12ng、石油醚9.57ng、乙酸乙酯9.29ng、二氯甲烷10.28ng、氯仿10.86ng和二甲基甲酰胺10.17ng。

2.5精密度試驗取標準曲線項下的第3號溶液，精密吸取2l，進樣6次，計算得甲醇、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿和二甲基甲酰胺峰面積的RS%值分別為：，2.38，2.26，7.69，6.94，5.88，6.27，5.46。

2.6加樣回收率試驗精密測定雷替曲塞樣品約30mg，精密加入標準儲備液1.0ml，混勻，進樣2l，計算得甲醇、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿和二甲基甲酰胺的平均回收率（n=3分別為：94.25%，98.81%，110.24%，105.34%，101.57%，92.57%和94.55%。

2.7樣品測定精密稱取雷替曲塞對照品及樣品各約30mg，置10ml量瓶中加二甲亞砜溶解，精密吸取2l進樣，記錄峰面積，結(jié)果表明樣品中有極少量殘留，均在標準曲線最低點以下，說明樣品符合要求。

3討論

人用藥品注冊技術(shù)規(guī)范國際協(xié)調(diào)（ICH在關(guān)于有機溶劑殘留量的指導原則中將二氯甲烷列為第二類必須控制的毒性試劑，將乙醚列為第三類低毒性的溶劑^[1]。甲醇、乙醚、石油醚、氯仿易對黏膜產(chǎn)生刺激，使鼻黏膜出血，喉頭發(fā)炎，嗅覺喪失，或因皮膚敏感產(chǎn)生紅腫、發(fā)癢、紅斑、壞疽病等。本品合成所用的七種有機溶劑在測定時，由于柱長有限，互相之間易產(chǎn)生干擾，因而需考慮結(jié)合極性與沸點的差異將其分離。根據(jù)《化學藥物殘留溶劑研究的技術(shù)指導原則》^[2]本品及殘留的有機溶劑能在二甲亞砜中溶解，并且溶解性好、沸點高、出峰晚的二甲亞砜為溶劑。考慮到乙酸乙酯與甲醇機型相似，故測定樣品時采用降溫（30℃min-1降至20℃改善其分離^[3]，以保證分離度大于1。有機溶劑基本上按照極性的順序出峰，測定時色譜體系采用程序升溫的方法，加快出峰和改善峰形。測定的結(jié)果表明樣品中乙酸乙酯和二甲基甲酰胺有少量殘留（遠低于限量。故該法用于有機溶劑的含量測定準確，可信。

參考文獻

[1]周海均.藥品注冊的國際技術(shù)要求質(zhì)量部分.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：79.

[2]國家藥品審評中心.化學藥物殘留溶劑研究的技術(shù)指導原則[Z].2005.

[3]沙云菲，蔡磊，黃滔敏，段更利.雷替曲塞中有機溶劑殘留量的毛細管氣相色譜法測定[J].中國新藥與臨床雜志，2004，23（10：674-676.