【摘 要】制備施氏鱘出血性敗血癥組織漿疫苗，通過口服、注射、浸洗等方式使用組織漿疫苗后，獲得了理想的效果，施氏鱘出血性敗血癥發(fā)病率明顯減低，有的池塘甚至不再發(fā)病。

【關(guān)鍵詞】組織漿疫苗；施氏鱘；出血性敗血癥

施氏鱘（Acipenser schrenckii Brandt）原產(chǎn)于我國黑龍江和俄羅斯烏蘇里江，因其在資源保護(hù)、食用以及生產(chǎn)魚籽醬等方面具有重要科學(xué)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值而備受關(guān)注。近年來，由于過渡捕撈和生存環(huán)境的改變致使施氏鱘種群數(shù)量日趨下降。隨著施氏鱘南移馴養(yǎng)成功，施氏鱘人工養(yǎng)殖技術(shù)和規(guī)模發(fā)展迅速，全國施氏鱘年產(chǎn)量已超過數(shù)萬噸（據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)）。然而，隨著人工養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大和集約化程度的不斷提高，施氏鱘病害問題日趨嚴(yán)重，細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲等多種水產(chǎn)病原均可使施氏鱘感染而導(dǎo)致大量死亡，造成重大經(jīng)濟(jì)損失。近年來，在湖北、江西、重慶、貴州等地施氏鱘出血性敗血癥大面積暴發(fā)，該病發(fā)病率、死亡率很高，患病魚體表充血、腹部腫脹，剖檢后腹腔內(nèi)有大量腹水，腸道充血或失血，肝臟有出血點(diǎn)，脾臟發(fā)生實(shí)質(zhì)性出血病變，其致病菌為嗜水氣單胞菌，該菌廣泛存在于水環(huán)境中。嗜水氣單胞菌是一種條件致病菌，當(dāng)水體環(huán)境惡化、水溫升高或者機(jī)體對外界環(huán)境的抵抗力下降時(shí)，嗜水氣單胞菌就會(huì)乘虛而入，造成機(jī)體感染，該菌有許多毒力很強(qiáng)的因子，如氣溶素、溶血素、胞外蛋白酶、S層蛋白等，可以引起魚類出現(xiàn)敗血癥等癥狀。施氏鱘出血性敗血癥主要發(fā)生在溫度較高的5～10月份，并且以幼齡魚為主要感染對象，發(fā)病率和死亡率都很高。在夏季，由于溫度高，水體中容易富集養(yǎng)分造成水體污染，而且高溫還會(huì)使魚體抵抗力下降，尤其在當(dāng)前人工化養(yǎng)殖條件下，養(yǎng)殖密度大、養(yǎng)殖水體循環(huán)緩慢，這些都為嗜水氣單胞菌作為一種條件致病菌提供了增殖和感染的條件。

目前，對于嗜水氣單胞菌所引起出血性敗血癥的主要防治方法是集中與應(yīng)用抗生素。隨著人們對抗生素等藥物使用安全性的日益重視，人們的認(rèn)識從過去的“靶動(dòng)物安全”到“人類食品安全”乃至“環(huán)境安全”，為此開展對水產(chǎn)品藥物殘留隱患的抗病技術(shù)研究已顯得尤為重要，急需水產(chǎn)疫苗的開發(fā)應(yīng)用。采取免疫方法對施氏鱘出血性敗血癥的預(yù)防控制是十分有效的，因此，黑龍江生物科技職業(yè)學(xué)院開展此課題的研究是有非常重要的現(xiàn)實(shí)意義的。

魚類組織漿疫苗的應(yīng)用研究是一項(xiàng)制備技術(shù)簡單、成本便宜、效果顯著、操作方便、容易推廣、不污染環(huán)境、深受群眾歡迎的實(shí)用性防病方法，免疫防病法在生產(chǎn)實(shí)踐中發(fā)揮了極其重要的作用，大大減少了抗菌素等化學(xué)藥物在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的為害，節(jié)約了生產(chǎn)的成本，提高了水產(chǎn)品的質(zhì)量，更有利于水環(huán)境的保護(hù)和人類的健康。

1 研究方法

（1）文獻(xiàn)法：查閱魚類免疫相關(guān)資料，掌握組織漿疫苗制備技術(shù)，為課題研究做好準(zhǔn)備。

（2）實(shí)驗(yàn)法：采用組織漿疫苗對不同的魚病進(jìn)行防控療效實(shí)驗(yàn)。

（3）對比法：免疫組織漿疫苗不同的使用方法對各類魚類疾病療效對比分析。

（4）分析法：分析試驗(yàn)組與對照組水環(huán)境理化因素的影響。

2 實(shí)驗(yàn)方案

（1）魚病收集、保存，為制備組織漿疫苗做準(zhǔn)備。收集大量的施氏鱘出血性敗血癥病魚標(biāo)本，保存?zhèn)溆谩?/p>

（2）組織漿疫苗的制備。按不同病原的魚病，分別制成各自的組織漿疫苗。

（3）病原分離、菌種培養(yǎng)保存。從病魚體上分離病原，并培養(yǎng)保存。

（4）測定最小抑菌濃度。按藥物稀釋法進(jìn)行測定。

（5）組織漿疫苗的使用對比分析。用注射法、浸洗法和口服法進(jìn)行疫苗接種，健康魚體試驗(yàn)。

技術(shù)關(guān)鍵：①確定合適的注射劑量與部位；②掌握高滲浸洗的濃度與時(shí)間；③確定口服藥餌比例

（6）試驗(yàn)組魚體與對照組魚體，人工感染試驗(yàn)分析對比結(jié)果。

（7）綜合分析，確定最佳疫苗的使用方法。

3 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線

（1）免疫組織漿疫苗的制備：病魚組織取樣→清洗→研磨→過濾→離心→取上清液→水浴滅活→保存?zhèn)溆谩?/p>

技術(shù)關(guān)鍵：①在恰當(dāng)?shù)臅r(shí)間獲取病魚的病變組織；②組織漿濾液的制備；③確定水浴滅活的時(shí)間與溫度。

（2）最小抑菌濃度（MIC）測定的藥物稀釋法。

（3）免疫組織漿疫苗的使用對比分析：①注射：找出合適的部位與劑量；②口服：確定口服藥餌的配比比例；③浸洗：確定浸洗藥液的濃度與時(shí)間。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

通過對施氏鱘出血性敗血癥組織漿疫苗應(yīng)用的研究，獲得了理想的效果，通過口服、注射、浸洗等方式使用組織漿疫苗后，施氏鱘出血性敗血癥發(fā)病率明顯減低，甚至有的池塘不發(fā)病。通過此課題的研究，為魚類的疑難雜癥的預(yù)防與治療進(jìn)行了探索，有較好的借鑒作用。

作者簡介：

翟秀梅（1979-），女，講師，主要從事魚類養(yǎng)殖、疾病防治方面的研究

【基金項(xiàng)目】

黑龍江省教育廳2012年度科學(xué)技術(shù)研究（指導(dǎo)）項(xiàng)目技術(shù)，項(xiàng)目編號（12525091）