【摘 要】為了更好地了解豬口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果，筆者選擇了3個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場進(jìn)行試驗(yàn)，每個(gè)豬場實(shí)驗(yàn)豬分為2組，分別采用免疫豬口蹄疫O型合成肽疫苗和豬口蹄疫O型高效滅活疫苗，用豬口蹄疫O型VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA試劑盒（VP1-ELISA）和正向間接血凝試驗(yàn)對免疫不同口蹄疫疫苗21d的豬血清進(jìn)行檢測。結(jié)果表明，免疫豬口蹄疫O型合成肽疫苗用VP1-ELISA檢測，抗體陽性率達(dá)到91.66%；免疫口蹄疫O型高效滅活疫苗用正向間接血凝試驗(yàn)檢測，免疫合格率為57.5%。由此可見，豬口蹄疫O型合成肽疫苗接種后的免疫效果要優(yōu)于傳統(tǒng)滅活疫苗。

【關(guān)鍵詞】豬；口蹄疫；O型合成肽疫苗；VP1-ELISA；正向間接血凝試驗(yàn)

1 前言

口蹄疫是偶蹄動(dòng)物的一種急性、高度接觸性、發(fā)熱性傳染病[1]，給世界畜牧業(yè)造成了很大的損失。1974年，國際獸疫局（OIE）將該病列為國際動(dòng)物衛(wèi)生法典中18個(gè)A類疾病之首，在許多國家和地區(qū)都有該病的發(fā)生與流行[2，3] 。目前對該病的防制主要是采取禁運(yùn)、緊急屠宰和強(qiáng)制性免疫接種措施，而疫苗免疫是最主要的也是最經(jīng)濟(jì)的手段。細(xì)胞滅活苗一直作為控制口蹄疫發(fā)生與流行的常規(guī)疫苗[4]，雖然細(xì)胞疫苗具有較好的免疫效力，但由于細(xì)胞苗的抗原生產(chǎn)難以準(zhǔn)確定量，而且該產(chǎn)品的自身缺陷使之無法克服過敏等疫苗引起的不良反應(yīng)和生物安全隱患問題[5]，同時(shí)，疫苗的使用也會(huì)嚴(yán)重干擾口蹄疫的診斷，故許多科學(xué)家把尋找安全性好、免疫力高和抗原覆蓋廣的新型疫苗作為現(xiàn)在口蹄疫疫苗研究的主要方向。口蹄疫病毒的衣殼蛋白VP1是其最主要的抗原蛋白，具有很強(qiáng)的抗原性，是誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體的主要成分[6]。豬口蹄疫O型合成肽疫苗采用固相多肽合成技術(shù)，在體外人工合成口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白中最主要抗原位點(diǎn)（合成肽），并連接人工T細(xì)胞位點(diǎn)，以此作為免疫原與進(jìn)口佐劑混合配制成油乳劑疫苗，這種疫苗能夠很好地預(yù)防豬O型口蹄疫的發(fā)生。

本試驗(yàn)選擇了資興市的3個(gè)規(guī)模化養(yǎng)豬場，應(yīng)用豬口蹄疫O型合成肽疫苗、豬口蹄疫O型滅活疫苗進(jìn)行免疫試驗(yàn)。通過觀察免疫后臨床反應(yīng)和測定免疫前和首次免疫后21d的抗體效價(jià)水平，對豬口蹄疫O型普通滅活疫苗與豬口蹄疫O型合成肽疫苗免疫家畜后的免疫反應(yīng)情況以及抗體水平進(jìn)行比較?，F(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下：

2 材料和方法

2.1 材料

2.1.1 試驗(yàn)豬場

資興市的3個(gè)規(guī)模化養(yǎng)豬場，分別是資興市白廊鄉(xiāng)的歐克亮養(yǎng)殖場（A場）、歐全春養(yǎng)殖場（B場）和歐植亮養(yǎng)殖場（C場）。

2.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

選用品種、來源相同的同一批仔豬（60日齡左右），共240頭。

2.1.3 試驗(yàn)疫苗

豬口蹄疫O型合成肽疫苗，中牧實(shí)業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為1012005；豬口蹄疫O型滅活疫苗，國內(nèi)某知名企業(yè)生產(chǎn)，批號(hào)為1012002。

2.1.4 檢測試劑盒

豬口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA診斷試劑盒，批號(hào)為201012004，上海優(yōu)耐特生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)；口蹄疫O型正向間接血凝試驗(yàn)診斷液，批號(hào)為1101008，中國科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)。

2.2 方法

2.2.1 試驗(yàn)分組

每個(gè)豬場試驗(yàn)豬分為2組，每組40頭，分別接種豬口蹄疫滅活疫苗與豬口蹄疫O型多肽苗。

2.2.2 免疫時(shí)間與劑量

試驗(yàn)從2011年2月開始，即開始60日齡首免，免疫劑量按說明書使用。

2.2.3 血樣采集

首免前采血檢測母源抗體水平，免疫后21d采血檢測抗體水平。

2.2.4 檢測方法

母源抗體和滅活疫苗的抗體使用豬口蹄疫O型正向間接血凝試驗(yàn)檢測，按照NY/SY 150-2000操作；免疫合成肽疫苗的抗體使用豬O型口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA試劑盒檢測。

2.2.5 判定標(biāo)準(zhǔn)

按農(nóng)業(yè)部《2011年國家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃》進(jìn)行，豬O型口蹄疫抗體正向間接血凝試驗(yàn)的抗體效價(jià)達(dá)到1∶32即為合格，VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA檢測結(jié)果根據(jù)試劑盒規(guī)定判定。

3 結(jié)果

3.1 接種疫苗后的豬群反應(yīng)

免疫口蹄疫O型傳統(tǒng)滅活疫苗的A場、C場分別有2頭仔豬出現(xiàn)過敏反應(yīng)，其他豬無明顯的反應(yīng)，采食量在免疫后前3d稍有點(diǎn)下降。免疫口蹄疫O型合成肽疫苗的豬未出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，免疫后的采食量無明顯的變化。

3.2 母源抗體正向間接血凝試驗(yàn)檢測結(jié)果

檢測未免疫的240份血清，抗體效價(jià)達(dá)到1∶32的為0份。

3.3 免疫傳統(tǒng)滅活疫苗后的抗體檢測結(jié)果

檢測的120份血清中，效價(jià)達(dá)到1∶32的有69份，免疫合格率為57.5%。其中A場的40份血清中，有25份的抗體效價(jià)達(dá)到1∶32，免疫合格率為63%；B場的40份中，有20份血清的抗體效價(jià)達(dá)到1∶32，免疫合格率為50%；C場的40份中，有23份血清的抗體效價(jià)達(dá)到1∶32，免疫合格率為58%（結(jié)果詳見表1）。

3.4 VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA檢測結(jié)果

4 討論

（1）從此次試驗(yàn)的整體結(jié)果來看，A場和B場的試驗(yàn)結(jié)果無顯著差異。接種疫苗21d后，免疫口蹄疫合成肽疫苗的總體合格率（91.67%）明顯要高于傳統(tǒng)的滅活疫苗的合格率（57.5%），同安徽[7]、上海[8]等動(dòng)物疫控中心所得到的試驗(yàn)結(jié)果基本一致，表現(xiàn)出了合成肽苗良好的免疫原性。此次試驗(yàn)只選取了3個(gè)場地進(jìn)行試驗(yàn)，口蹄疫合成肽疫苗還有待進(jìn)一步推廣，以積累更多的數(shù)據(jù)評(píng)價(jià)合成肽疫苗的效果。

（2）從接種后的臨床反應(yīng)來看，接種合成肽疫苗的豬均未出現(xiàn)過敏反應(yīng)，免疫后的采食量無明顯的變化，這說明接種合成肽疫苗對豬群基本無副反應(yīng)，其主要原因是合成肽疫苗的核心抗原為人工合成的多肽，無細(xì)胞碎片等雜質(zhì)，更無小牛血清等異體蛋白。從其他地方使用的情況來看，免疫合成肽疫苗后也很少出現(xiàn)大的不良反應(yīng)，對妊娠母豬也沒有導(dǎo)致流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎和木乃伊胎等情況出現(xiàn)，對產(chǎn)仔成長也沒有影響[9]。

（3）試驗(yàn)同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA診斷試劑盒比較適合用于豬口蹄疫O型合成肽疫苗的抗體檢測，不適合傳統(tǒng)全病毒滅活疫苗的檢測，而正向間接血凝診斷試劑對合成肽疫苗的檢測沒有一定的規(guī)律性。這是因?yàn)檎蜷g接血凝診斷試劑的致敏抗原非純凈病毒粒子，而是含大量的細(xì)胞蛋白，故而特異性不好；同時(shí)，其致敏抗原是全病毒粒子，檢測的抗體是全病毒結(jié)構(gòu)的多克隆抗體，通過它們檢測結(jié)構(gòu)蛋白中微小的多肽抗體的敏感性顯然遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。因此，合成肽疫苗的抗體檢測必須使用VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行檢測。

（4）口蹄疫作為世界關(guān)注的A類動(dòng)物傳染病，其最主要的防治措施就是進(jìn)行疫苗免疫，免疫接種后的抗體監(jiān)測也尤為重要。傳統(tǒng)滅活疫苗很難通過首次、二次免疫檢測到中和抗體，但可以產(chǎn)生有效的保護(hù)力，而免疫群體抗體的有無和高低與保護(hù)力之間缺乏相關(guān)性，目前還無法對滅活疫苗免疫質(zhì)量進(jìn)行有效評(píng)價(jià)，這是目前豬口蹄疫免疫的一個(gè)難點(diǎn)[10]。豬口蹄疫O型合成肽疫苗可用專用的試劑檢測出免疫抗體，可以通過抗體檢測評(píng)價(jià)免疫密度和免疫質(zhì)量，與傳統(tǒng)滅活疫苗相比，在免疫血清抗體監(jiān)測方面顯然更有意義。

5 小結(jié)

免疫豬口蹄疫O型合成肽疫苗可用VP1-ELISA檢測，抗體陽性率達(dá)到91.67%；免疫口蹄疫O型高效滅活疫苗用正向間接血凝試驗(yàn)檢測，免疫合格率為57.5%。由此可見，豬口蹄疫O型合成肽疫苗接種后的免疫效果要優(yōu)于傳統(tǒng)滅活疫苗。

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作者簡介：

曹任輝 1982年，男，漢族，畜牧獸醫(yī)專業(yè)本科學(xué)歷，現(xiàn)就職于湖南省資興市畜牧獸醫(yī)水產(chǎn)局，為助理畜牧師職稱，QQ及郵箱：8351895@qq.com。