“生物技術(shù)實(shí)踐”考查的知識(shí)點(diǎn)需要大量記憶，注意與生活聯(lián)系，學(xué)會(huì)應(yīng)用是關(guān)鍵，對(duì)微生物的考查頻率較高。對(duì)考查的規(guī)律進(jìn)行分析，有利于提高復(fù)習(xí)和解題效率。

1 考查一：傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用

【例1】 （2013·全國課標(biāo)卷Ⅰ）回答下列有關(guān)泡菜制作的習(xí)題：

（1） 制作泡菜是，所用鹽水煮沸，其目的是

。為了縮短制作時(shí)間，有人還會(huì)在冷卻后的鹽水中加入少量陳泡菜液，加入陳泡菜液的目的是 。

（2） 泡菜制作過程中，乳酸發(fā)酵過程即為乳酸菌進(jìn)行 的過程。該過程發(fā)生在乳酸菌的 中。

（3） 泡菜制作過程中影響亞硝酸鹽含量的因素有 、 和 等。

（4） 從開始制作到泡菜質(zhì)量最佳這段時(shí)間內(nèi)，泡菜液逐漸變酸，這段時(shí)間內(nèi)泡菜壇中乳酸菌和其他雜菌的消長規(guī)律是 ，原因是

。

答案：（1） 消滅雜菌 增加乳酸菌含量 （2） 無氧呼吸 細(xì)胞質(zhì) （3） 溫度 食鹽用量 腌制時(shí)間 （4） 乳酸菌數(shù)量增加，雜菌數(shù)量較少 乳酸菌比雜菌更為耐酸

解析：（1） 鹽水中可能含有雜菌，制作泡菜時(shí)，所用鹽水需要煮沸，以便殺死鹽水中的雜菌。陳泡菜中含有現(xiàn)成的乳酸菌，加入后，可以縮短制作時(shí)間。（2） 乳酸發(fā)酵的過程即為乳酸菌進(jìn)行無氧呼吸的過程。該過程發(fā)生在乳酸菌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中。（3） 都泡菜的制作過程中，影響亞硝酸鹽含量的因素有溫度過高、食鹽用量不足、腌制時(shí)間等。（4） 從開始制作到泡菜品質(zhì)最佳這段時(shí)間內(nèi)，泡菜液逐漸發(fā)酸，這段時(shí)間內(nèi)泡菜壇中乳酸菌數(shù)量增加，其他雜菌較少；原因是酸性條件下，不利于雜菌生存，增加乳酸菌的數(shù)量。

點(diǎn)評(píng)：本題通過考查泡菜制作的相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)，主要考查識(shí)記能力和對(duì)相關(guān)知識(shí)的判斷能力。復(fù)習(xí)中要對(duì)制作果酒、果醋、腐乳和泡菜使用的微生物代謝特點(diǎn)、制作過程和目的等記憶清楚。

2 考查二：微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用

【例2】 （2013·全國課標(biāo)卷Ⅱ）臨床試用抗生素前，有時(shí)需要做細(xì)菌耐藥實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實(shí)驗(yàn)步驟操作，以確定某致病菌對(duì)不同抗生素的敏感性?；卮鹣铝袉栴}：

（1） 為了從樣本中獲取致病菌菌落，可用

法或 法將樣本借種于固體培養(yǎng)基表面，經(jīng)過選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。

（2） 取該單菌落適當(dāng)稀釋，用 法接種于固體培養(yǎng)基表面，在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，使其均勻生長，布滿平板。

（3） 為了檢測(cè)該致病菌對(duì)于抗生素的敏感性，將分別含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，培養(yǎng)一段時(shí)間后，含A的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對(duì)抗生素A ；含B的濾紙片周圍沒有出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對(duì)抗生素B ；含C的濾紙片周圍的透明圈比含A的小，說明 ；含D的濾紙片周圍的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個(gè)菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素D的 。

（4） 根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為達(dá)到抗菌目的，最好應(yīng)選擇抗生素 。

答案：（1） 劃線 稀釋涂布（或涂布） （2） 涂布 （3） 敏感 不敏感 該致病菌對(duì)C的敏感性比對(duì)A弱 耐藥菌 （4） A

解析：考查微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用。（1） 分離菌落常用稀釋涂布平板法或劃線涂布法。

（2） 取該單菌落適當(dāng)稀釋，用涂布法接種于固體培養(yǎng)基表面，適宜溫度培養(yǎng)。

（3） 含抗生素的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對(duì)該抗生素有敏感性，周圍沒有透明圈的說明該抗生素不具有敏感性。透明圈越大的敏感性越強(qiáng)。

（4） 實(shí)驗(yàn)結(jié)果抗生素A對(duì)該致病菌的作用最好。

點(diǎn)評(píng)：要熟悉微生物培養(yǎng)的基本方法、消毒和滅菌的不同應(yīng)用、提純和分離微生物的常用方法等。

3 考查三：植物組織培養(yǎng)技術(shù)

【例3】 （2013·重慶卷）某興趣小組擬用組織培養(yǎng)繁殖一種名貴花卉，其技術(shù)路線為“取材→消毒→愈傷組織培養(yǎng)→出芽→生根→移栽”。下列有關(guān)敘述，錯(cuò)誤的是（ ）

A. 消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害

B. 在愈傷組織培培養(yǎng)中加入細(xì)胞融合的誘導(dǎo)劑，可獲得染色體加倍的細(xì)胞

C. 出芽是細(xì)胞再分化的結(jié)果，受基因選擇性表達(dá)的調(diào)控

D. 生根時(shí)，培養(yǎng)基通常應(yīng)含 α-萘乙酸等生長素類調(diào)節(jié)劑

解析：選B。消毒劑的使用既要?dú)⑺辣砻嫖⑸铮蟹乐箓M織細(xì)胞，影響組織培養(yǎng)，A項(xiàng)正確；植物細(xì)胞融合是指經(jīng)纖維素酶和果膠酶處理后得到的原生質(zhì)體的誘導(dǎo)融合，帶有細(xì)胞壁的愈傷組織細(xì)胞不能誘導(dǎo)融合形成染色體加倍的細(xì)胞，B項(xiàng)錯(cuò)誤；出芽和生根都是細(xì)胞再分化的結(jié)果，其實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)，C項(xiàng)正確；α-萘乙酸為生長素類似物，可誘導(dǎo)愈傷組織生根，D項(xiàng)正確。

試題評(píng)價(jià)：考查植物組織培養(yǎng)相關(guān)知識(shí)和考生的理解能力，涉及外植體的消毒、植物體細(xì)胞雜交、細(xì)胞分化及植物生長調(diào)節(jié)劑對(duì)組織培養(yǎng)的影響等內(nèi)容。

4 考查四：酶的研究與應(yīng)用

【例4】 （2013·江蘇卷）下列有關(guān)固定化酶和固定化細(xì)胞的敘述，正確的是（ ）

A. 可用包埋法制備固定化酵母細(xì)胞

B. 反應(yīng)產(chǎn)物對(duì)固定化酶的活性沒有影響

C. 葡萄糖異構(gòu)酶固定前后專一性不同

D. 固定化細(xì)胞可以催化各種反應(yīng)底物的一系列反應(yīng)

解析：選A。固定化技術(shù)包括包埋法、物理吸附法和化學(xué)結(jié)合法（交聯(lián)法），由于細(xì)胞相對(duì)于酶來說更大，難以被吸附或結(jié)合，因此多采用包埋法，A正確；某些反應(yīng)產(chǎn)物可能與酶結(jié)合，致使酶的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生變化，從而改變酶的催化活性，B錯(cuò)誤；固定化酶實(shí)質(zhì)上是將相應(yīng)酶固定在不溶于水的載體上，實(shí)現(xiàn)酶的反復(fù)利用，并提高酶穩(wěn)定性，酶的各項(xiàng)特性（如高效性、專一性和作用條件的溫和性）依然保持，C錯(cuò)誤；固定化細(xì)胞在多步酶促反應(yīng)中發(fā)揮連續(xù)催化作用，但如果反應(yīng)底物是大分子物質(zhì)，則難以自由通過細(xì)胞膜，從而限制固定化細(xì)胞的催化反應(yīng)，D錯(cuò)誤。

試題評(píng)價(jià)：此題考查固定化酶和固定化細(xì)胞的相關(guān)知識(shí)，難度不大。

5 考查五：植物有效成分提取

【例5】 （2013·山東卷）胡蘿卜素是一種常用的食用色素，可分別從胡蘿卜或產(chǎn)生胡蘿卜素的微生物體中提取獲得，流程如圖1所示。

（1） 篩選產(chǎn)胡蘿卜素的酵母菌R時(shí)，可選用

或平板劃線法接種。采用平板劃線法接種時(shí)需要先灼燒接種環(huán)其目的是 。

（2） 培養(yǎng)酵母菌R時(shí)，培養(yǎng)基中的蔗糖和硝酸鹽可以分別為酵母菌R提供 和 。

（3） 從胡蘿卜中提取胡蘿卜素時(shí)，干燥過程應(yīng)控制好溫度和 以防止胡蘿卜素分解；萃取過程中宜采用 方式加熱以防止溫度過高；萃取液濃縮前需進(jìn)行過濾。其目的是 。

（4） 紙層析法可用于鑒定所提取的胡蘿卜素。鑒定過程中需要用胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品作為 。

答案：（1） 稀釋涂布平板法 滅菌（防止雜菌污染） （2） 碳源 氮源 （3） 時(shí)間 水浴 濾去不溶物 （4） （實(shí)驗(yàn)）對(duì)照

解析：（1） 接種微生物的方法主要是稀釋涂布平板法和夾板劃線法，接種過程為了避免其它雜菌的污染，要做無菌操作，所以接種前需對(duì)接種環(huán)滅菌操作。（2） 蔗糖主要提供碳源，當(dāng)然也可以作為能源物質(zhì)，硝酸鹽含氮元素，可提供氮源。（3） 溫度過高、干燥時(shí)間過長會(huì)導(dǎo)致胡蘿卜素分解；由于萃取劑往往有揮發(fā)性，直接加熱時(shí)揮發(fā)出來的有機(jī)溶劑遇明火易爆炸；萃取后需將原料中不溶于萃取劑的成分濾去。（4） 提取出來的胡蘿卜素往往不是純的，用標(biāo)準(zhǔn)樣品主要起一個(gè)對(duì)照的作用。

試題評(píng)價(jià)：本題主要考查微生物培養(yǎng)、植物中有效成分提取等有關(guān)知識(shí)，意在考查考生識(shí)記和理解應(yīng)用能力。

6 考查六：綜合考查微生物的培養(yǎng)和發(fā)酵、蛋白質(zhì)的提取和分離

【例6】 （2013·四川卷）由于酵母菌利用淀粉的能力很弱，有人將地衣芽孢桿菌的α-淀粉酶基因轉(zhuǎn)入酵母菌中經(jīng)篩選得到了可高效利用淀粉的工程菌菌種（過程如圖甲所示）。

（1） 圖甲中，過程①需要的酶有 。為達(dá)到篩選目的，平板內(nèi)的固體培養(yǎng)基應(yīng)以 作為唯一碳源。②、③過程需要重復(fù)幾次，目的是

。

（2） 某同學(xué)嘗試過程③的操作，其中一個(gè)平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖3所示。該同學(xué)的接種方法是

；推測(cè)該同學(xué)接種時(shí)可能的操作失誤是 。

（3） 以淀粉為原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的適宜條件下密閉發(fā)酵，接種 菌的發(fā)酵罐需要先排氣，其原因是 。

（4） 用凝膠色譜法分離α-淀粉酶時(shí)，在色譜柱中移動(dòng)速度較慢的蛋白質(zhì)，相對(duì)分子質(zhì)量較 。

答案：（1） 限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶 淀粉 進(jìn)一步篩選純化獲得分解淀粉能力強(qiáng)的酵母菌 （2） 稀釋涂布平板法 涂布不均勻 （3） 工程酵母 工程菌分解淀粉產(chǎn)生葡萄糖的能力強(qiáng)，導(dǎo)致酒精發(fā)酵產(chǎn)生CO2的速率更快 （4） 小

解析：（1） ①步驟為將目的基因與運(yùn)載體連接，需要先用同一種限制性核酸內(nèi)切酶分別切割質(zhì)粒和目的基因，露出相同的黏性末端，然后再用DNA連接酶連接為重組質(zhì)粒；而在以淀粉為唯一碳源的培養(yǎng)基中，其他微生物難以利用淀粉而被抑制，從而篩選高效利用淀粉的工程酵母菌；重復(fù)篩選多次可以提高目的菌的純度。（2） 圖中平板培養(yǎng)后的結(jié)果，形成了多個(gè)菌落，因此為稀釋涂布平板法，但是菌落分布不均勻，集中分布在一定區(qū)域，說明涂布不均勻。（3） 由于工程酵母菌能夠更高效的利用淀粉，因此在以淀粉為原料的培養(yǎng)條件下，可以更快地進(jìn)行增殖和發(fā)酵，酒精發(fā)酵產(chǎn)生的二氧化碳較多，所以需要先排氣。（4） 凝膠色譜法分離的原理是相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)分子不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，只能分布在顆粒之間，通過的路程較短，移動(dòng)速度較快；相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)分子比較容易進(jìn)入凝膠內(nèi)的通道，通過的路程較長，移動(dòng)速度較慢。移動(dòng)速度較慢的蛋白質(zhì)，相對(duì)分子質(zhì)量較小。

試題點(diǎn)評(píng)：以圖像信息為載體，考查基因表達(dá)載體構(gòu)建所需的酶、選擇性培養(yǎng)基、微生物接種方法、細(xì)胞代謝以及蛋白質(zhì)分離，意在考查學(xué)生基本操作能力，難度不大。針對(duì)此類題型，復(fù)習(xí)時(shí)需要對(duì)重點(diǎn)的基本操作進(jìn)行復(fù)習(xí)，或者讓學(xué)生進(jìn)行實(shí)際操作。