摘要：對(duì)皖北地區(qū)所采集的134例禽病料進(jìn)行禽源性沙門(mén)氏菌（Salmonella）分離鑒定和耐藥性分析。經(jīng)生化試驗(yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其中125株為沙門(mén)氏菌，其血清型主要為雞白痢沙門(mén)氏菌（Salmonella pullorum）、腸炎沙門(mén)氏菌（Salmonella enteritidis）和鼠傷寒沙門(mén)氏菌（Salmonella typhimurium）。利用藥敏試驗(yàn)對(duì)125株分離株進(jìn)行了10種常用抗生素的耐藥性檢測(cè)分析，結(jié)果表明，125株沙門(mén)氏菌均對(duì)頭孢克肟、丁胺卡那霉素最為敏感；而對(duì)利福平、慶大霉素、多粘菌素、鏈霉素、恩諾沙星等表現(xiàn)出不同程度的耐藥性。

關(guān)鍵詞：皖北地區(qū)；禽；沙門(mén)氏菌（Salmonella）；分離鑒定；耐藥性

中圖分類(lèi)號(hào)：S855.1+2；S858.31 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）17-4161-03

Isolation， Identification and Drug Resistance of Fowl Salmonella in Northern Anhui

CHEN Pei-rong1，LIU Jin-ni1，HE Bin2

（1.Xinyang Agricultural College，Xinyang 464000，Henan，China；2.Wuhan Institute of Animal and Veterinary Science，Wuhan 430070，China）

Abstract： The fowl Salmonella were isolated and identified from 134 suspected samples in northern Anhui by biochemical tests， serological tests and then taken to drug resistance analysis. The results showed that the Salmonella were total 125 strains， and the main serotype were Salmonella pullorum， Salmonella enteritidis and Salmonella typhimurium. The antibiotics sensitivity results showed that most of the isolated Salmonella had high sensitivity to Cefixime and amikacin， even had drug resistance to Streptomycin， Gentamicin， Polymyxin， Rifampicin and Enrofloxacin

Key words： Northern Anhui； fowl； Salmonella； isolation and identification； drug resistance

收稿日期：2013-03-29

作者簡(jiǎn)介：陳培榮（1977-），男，陜西西安人，講師，主要從事獸藥檢測(cè)與分析工作，（電話(huà)）0376-6698010（電子信箱）haigang413@sohu.com；

通訊作者，何 斌（1986-），男，四川廣安人，碩士，主要從事獸藥藥理與毒理學(xué)研究，（電話(huà)）027-87282787（電子信箱）953355126@qq.com。

沙門(mén)氏菌病又名副傷寒（Paratyphoid），是一種常見(jiàn)的人畜共患傳染病，是由沙門(mén)氏菌屬（Salmonella）中的不同血清型感染各種動(dòng)物而引起的多種疾病的總稱(chēng)，尤以禽類(lèi)易感。該病不僅給畜牧業(yè)生產(chǎn)尤其是養(yǎng)禽業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)也嚴(yán)重威脅著人類(lèi)自身的健康。近年來(lái)，由于藥物在農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)和臨床治療中的廣泛使用，在預(yù)防和控制人類(lèi)及畜禽的沙門(mén)氏菌病方面發(fā)揮了巨大的作用。但是隨著抗菌藥物的廣泛、持續(xù)和不合理使用，沙門(mén)氏菌對(duì)抗菌藥物的耐藥性日趨普遍，其耐藥性問(wèn)題已經(jīng)引起廣泛重視，成為全球關(guān)注的焦點(diǎn)[1]。本試驗(yàn)對(duì)2011年3～11月期間在安徽省北部地區(qū)采集的134例疑似沙門(mén)氏菌感染的禽病料進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定，對(duì)其致病性及藥物敏感性等進(jìn)行了初步研究，旨在為禽沙門(mén)氏菌病的預(yù)防和治療提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料 病料為2011年3～11月期間從皖北地區(qū)界首、阜南、太和、亳州等10個(gè)縣的42家肉種雞場(chǎng)、肉仔雞飼養(yǎng)場(chǎng)、蛋種雞場(chǎng)、蛋雞場(chǎng)采集的134例疑似沙門(mén)氏菌感染的禽病料。

1.1.2 儀器 組織切片機(jī)[創(chuàng)博環(huán)球（北京）生物科技有限公司]；恒溫培養(yǎng)箱（上海恒勤儀器設(shè)備有限公司）；光學(xué)顯微鏡（奧林巴斯CX21BIM-SET5）。

1.1.3 主要試劑及培養(yǎng)基 本試驗(yàn)中采用的培養(yǎng)基、生化鑒定管、藥敏紙片均購(gòu)于杭州天和微生物試劑有限公司；試劑購(gòu)于上海國(guó)藥集團(tuán)；沙門(mén)氏菌屬診斷血清購(gòu)于成都生物制品研究所。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)菌的分離培養(yǎng) 無(wú)菌采取待檢病雞的肝臟接種普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察其生長(zhǎng)情況。在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取單個(gè)可疑菌落接種在麥康凱瓊脂平板上，37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察結(jié)果，并對(duì)可疑菌落進(jìn)行涂片，革蘭氏染色后鏡檢。

1.2.2 生化試驗(yàn) 將分離純化的細(xì)菌在無(wú)菌條件下接種在細(xì)菌微量生化反應(yīng)管中，放入恒溫箱中，37 ℃培養(yǎng)24～48 h，觀察結(jié)果。

1.2.3 血清學(xué)鑒定 在載玻片上加少量沙門(mén)氏菌屬診斷血清，將分離到的沙門(mén)氏菌加到少量滅菌生理鹽水中制成濃菌液，然后取少量滴加到血清中，2 min內(nèi)觀察結(jié)果。同時(shí)設(shè)生理鹽水為空白對(duì)照。

1.2.4 病理組織學(xué)觀察 取病雞的脾臟、肝臟、肺臟、小腸等組織進(jìn)行病理組織學(xué)觀察。

1.2.5 藥敏試驗(yàn) 采用紙片瓊脂擴(kuò)散法，將純化菌落均勻涂布在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，將含有定量抗菌藥物的紙片貼在培養(yǎng)基的表面，37 ℃培養(yǎng)12～16 h，觀察現(xiàn)象并記錄。

1.2.6 致病性試驗(yàn) 將分離菌株活化后接種在肉湯培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)18～24 h后，稀釋至菌液濃度為1.5×108 CFU/mL。取5日齡健康雛雞40只，隨機(jī)分成4個(gè)組，每組10只，其中3個(gè)試驗(yàn)組分別肌肉注射不同血清型的沙門(mén)氏菌肉湯培養(yǎng)物0.3 mL/只，對(duì)照組用同樣方法接種滅菌生理鹽水。觀察各組發(fā)病、死亡情況及剖檢變化，并進(jìn)行細(xì)菌分離。

2 結(jié)果與分析

2.1 分離物培養(yǎng)特征

所分離菌株經(jīng)革蘭氏染色、鏡檢可見(jiàn)到大量短小、兩端鈍圓、多數(shù)單個(gè)存在的革蘭氏陰性小桿菌，無(wú)莢膜，無(wú)芽孢。菌株在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)出無(wú)色、表面光滑、邊緣整齊、透明、水滴樣菌落；在麥康凱平板上呈細(xì)小、無(wú)色半透明、光滑、圓形菌落。以上特征均與沙門(mén)氏菌特征相符。

2.2 生化特征

分離菌株生化鑒定結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，所分離的134株細(xì)菌中的125株能分解葡萄糖、甘露醇、麥芽糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣；不利用乳糖和蔗糖；能利用檸檬酸鹽；不分解尿素；M-R試驗(yàn)呈現(xiàn)陽(yáng)性；V-P試驗(yàn)為陰性；吲哚試驗(yàn)為陰性；硫化氫試驗(yàn)可產(chǎn)生H2S，其生化特性符合沙門(mén)氏菌特性。另有7株生化試驗(yàn)結(jié)果不確定，2株M-R試驗(yàn)呈現(xiàn)陰性。

2.3 血清學(xué)反應(yīng)

對(duì)125株分離的陽(yáng)性菌株進(jìn)行血清學(xué)鑒定，其血清型見(jiàn)表2。從表2可以看出，皖北地區(qū)禽感染沙門(mén)氏菌的血清型主要為雞白痢沙門(mén)氏菌，占57.6%；其次為腸炎沙門(mén)氏菌，占36.0%；鼠傷寒沙門(mén)氏菌最少，占6.4%。

2.4 病理組織學(xué)觀察

肺臟：可見(jiàn)許多肉芽腫性壞死灶，大量淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、異嗜性白細(xì)胞浸潤(rùn)。脾臟：淋巴細(xì)胞壞死，單核巨噬細(xì)胞灶狀或彌漫性浸潤(rùn)、增生，異嗜性白細(xì)胞浸潤(rùn)。肝臟：肝組織充血、出血及大面積灶狀壞死，壞死灶內(nèi)見(jiàn)大量單核巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)、增生，淋巴細(xì)胞、異嗜性白細(xì)胞浸潤(rùn)（圖1）。小腸：黏膜上皮細(xì)胞壞死脫落，有肉芽腫（圖2），固有層充血、水腫，單核細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。

2.5 致病性試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)組雛雞感染后第二天雞群全部發(fā)病，開(kāi)始出現(xiàn)臨床癥狀，表現(xiàn)為精神沉郁、怕冷、拉白色石灰樣糞便。第五天出現(xiàn)死亡高峰，剖檢可見(jiàn)雞肝臟色黃、腫大，嚴(yán)重的出現(xiàn)肝包炎、心包炎，脾臟腫大，氣囊炎。取病死雞肝臟進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定，其生化特性與接種菌一致。對(duì)照組雞正常。

2.6 耐藥性分析

本試驗(yàn)中所分離125株禽沙門(mén)氏菌對(duì)10種常見(jiàn)抗菌藥物的耐藥性見(jiàn)表3。由表3可見(jiàn)，125株沙門(mén)氏菌均對(duì)頭孢克肟、丁胺卡那霉素最為敏感；對(duì)利福平、慶大霉素、多粘菌素、鏈霉素、恩諾沙星等表現(xiàn)出不同程度的耐藥性，耐藥率最高的為利福平（94.4%），其次為慶大霉素（83.2%）；對(duì)氟苯尼考、強(qiáng)力霉素呈現(xiàn)輕度的耐藥性，耐藥率分別為4.8%和8.8%。

3 小結(jié)與討論

本試驗(yàn)中所采集的134例疑似樣品中有125例分離到沙門(mén)氏菌，表明在皖北地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)廣泛存在沙門(mén)氏菌，這為我們的疾病預(yù)防工作提供了參考依據(jù)。同時(shí)從所分離的沙門(mén)氏菌血清型說(shuō)明危害皖北地區(qū)養(yǎng)殖業(yè)的沙門(mén)氏菌主要是雞白痢沙門(mén)氏菌、腸炎沙門(mén)氏菌和鼠傷寒沙門(mén)氏菌，其中雞白痢沙門(mén)氏菌占57.6%，腸炎沙門(mén)氏菌占36.0%。這與文獻(xiàn)報(bào)道的其他地區(qū)沙門(mén)氏菌的血清型有一定差異[2-4]，筆者認(rèn)為可能與沙門(mén)氏菌區(qū)域流行性有一定關(guān)系。

本試驗(yàn)中所分離125株沙門(mén)氏菌均對(duì)頭孢克肟、丁胺卡那霉素最為敏感。而對(duì)利福平、慶大霉素、多粘菌素、鏈霉素、恩諾沙星等表現(xiàn)出不同程度的耐藥性。此外藥敏試驗(yàn)結(jié)果還顯示所分離的菌株表現(xiàn)出多重耐藥性，其中以五耐、六耐、七耐、八耐為主，分別有17、22、31和13株，耐藥率分別為13.6%、17.6%、24.8%和10.4%，這與文獻(xiàn)報(bào)道的沙門(mén)氏菌存在多重耐藥性相似[5-7]。本試驗(yàn)結(jié)果表明沙門(mén)氏菌對(duì)抗生素的耐藥性已普遍出現(xiàn)，這與抗生素的濫用以及沙門(mén)氏菌自身的基因突變可能都有關(guān)系[8]，這為今后我們?cè)谂R床上指導(dǎo)正確及時(shí)用藥以降低養(yǎng)禽業(yè)的損失有極大的指導(dǎo)意義。

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（責(zé)任編輯 曾德芳）