摘要：SRAP分子標(biāo)記作為近年來研發(fā)的一種分子標(biāo)記技術(shù)，因其簡便、穩(wěn)定、中等產(chǎn)率、高共顯性、易于測序等優(yōu)點(diǎn)，在種質(zhì)資源鑒定、遺傳圖譜構(gòu)建、重要性狀標(biāo)記和基因克隆等方面得到了廣泛的應(yīng)用，但該技術(shù)在水生動物中的應(yīng)用尚較少。對SRAP分子標(biāo)記技術(shù)及其在水生動物的遺傳多樣性、分子輔助育種、遺傳圖譜構(gòu)建等方面的應(yīng)用進(jìn)行了簡要概述，并對其應(yīng)用前景進(jìn)行了展望。

關(guān)鍵詞：SRAP；分子標(biāo)記；水生動物；應(yīng)用

中圖分類號：Q812；S917 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）17-4038-03

Application of SRAP Molecular Marker in Aquatic Animal Research

ZHOU Jian-hong1，ZHENG Jin-juan1，YANG Shou-bao1，WU Jian-xin1，YU Qin-qin1，WEI Min1，2， HU Feng1

（1.College of Life Sciences， Shaoxing College， Shaoxing 312000，Zhejiang，China；

2.College of Animal Sciences， Anhui Agricultural University，Hefei 230036，China）

Abstract： As a new molecular marker developed over the past decade， SRAP was widely used in germplasm identification， genetic map construction， tagging of important traits and gene cloning because of its convenience， stability， moderate yield， high codominance and easy-to-sequencing. But little is known about its application in aquatic animals. In this paper a summary was made on SRAP marker and its application including analysis of genetic diversity， molecular marker assisted selection and genetic map construction in aquatic animals， and the prospect of SRAP application was also put forward.

Key words： SRAP； molecular marker； aquatic animal； application

隨著分子標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展，包括RFLP、RAPD、AFLP、SSR和SNP在內(nèi)的越來越多的分子標(biāo)記技術(shù)為人們所熟識。這些分子標(biāo)記技術(shù)各有其特點(diǎn)，但都在遺傳多樣性研究、遺傳圖譜構(gòu)建、基因定位與克隆等方面得到了十分廣泛的應(yīng)用[1-5]。近年來，一種新的分子標(biāo)記技術(shù)——序列相關(guān)擴(kuò)增多態(tài)性（Sequence-related amplified polymorphism， SRAP），因其操作簡便、穩(wěn)定性好、產(chǎn)率中等、成本低廉等特點(diǎn)逐漸引起國內(nèi)外學(xué)者的重視[6，7]，被廣泛應(yīng)用于植物的遺傳多樣性分析、重要性狀基因克隆、標(biāo)記、定位以及遺傳圖譜構(gòu)建等方面的研究[6-9]。但SRAP分子標(biāo)記技術(shù)在動物，尤其是水生動物中的研究與應(yīng)用方面的報(bào)道目前尚不多見。本文根據(jù)近年來的文獻(xiàn)報(bào)道，對其在魚類等水生動物遺傳育種研究中的應(yīng)用進(jìn)行了簡要綜述，以便為該標(biāo)記的進(jìn)一步推廣應(yīng)用提供依據(jù)。

1 SRAP分子標(biāo)記技術(shù)

序列相關(guān)擴(kuò)增多態(tài)性又稱基于序列擴(kuò)增多態(tài)性（Sequence-based amplified polymorphism，SBAP），由美國加州大學(xué)Li等[6]于2001年首次提出，是一種基于PCR擴(kuò)增的新型分子標(biāo)記技術(shù)，具有簡單、高效、高共顯性、高重復(fù)率、易分離條帶、易測序等優(yōu)點(diǎn)，適合于遺傳多樣性、基因的克隆與定位等研究。

SRAP分子標(biāo)記技術(shù)的原理是針對基因外顯子富含GC，而啟動子、內(nèi)含子富含AT的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)1對由核心序列和3個選擇性堿基組成的引物對基因的開放閱讀框進(jìn)行PCR擴(kuò)增[6]。該標(biāo)記的上游和下游1對引物可以分別對基因的外顯子、啟動子和內(nèi)含子區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增。由于啟動子、內(nèi)含子和間隔序列的長度在不同物種、甚至同一物種不同個體間通常不等，因而SRAP分子標(biāo)記可擴(kuò)增出基于外顯子與內(nèi)含子和啟動子等序列的多態(tài)性標(biāo)記。SRAP分子標(biāo)記的擴(kuò)增產(chǎn)物可用常規(guī)的聚丙烯酰胺凝膠電泳或瓊脂糖凝膠電泳分離，檢測其多態(tài)性[5，9]。

2 SRAP分子標(biāo)記技術(shù)在水生動物中的應(yīng)用

2.1 遺傳多樣性分析

周勁松等[10]首次將SRAP分子標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用于羅氏沼蝦中，分析了6個群體間的遺傳差異，所得多態(tài)性位點(diǎn)比例和遺傳多樣性指數(shù)表明羅氏沼蝦緬甸引進(jìn)種的遺傳多樣性高于浙江本地種，且雜交會提高浙江本地種的遺傳多樣性。張志偉等[11]在研究解決草魚養(yǎng)殖性狀退化的問題時，也首次成功地將SRAP分子標(biāo)記應(yīng)用于1個草魚野生群體和2個人工繁殖群體的遺傳結(jié)構(gòu)差異的比較中，其中相對于人工繁殖群體，野生群體較多的低頻多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)和更高的基因雜合度都表明草魚野生群體的遺傳多樣性高于人工繁殖群體，遺傳距離的比較同樣說明了草魚的人工繁殖群體遺傳分化較為嚴(yán)重，遺傳多樣性下降。隨后，越來越多的學(xué)者將SRAP分子標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用于水生動物遺傳多樣性的研究，如冉瑋等[12]對3個團(tuán)頭魴自然群體、傅洪拓等[13]對5個海南沼蝦群體、徐汗福等[14]對烏蘇里擬鲿野生群體和人工養(yǎng)殖群體、趙麗媛等[15]對10個中華白海豚個體的遺傳多樣性進(jìn)行了研究，上述研究都肯定了SRAP分子標(biāo)記技術(shù)是遺傳多樣性評價(jià)、品種鑒定和系統(tǒng)發(fā)生的有效工具。

2.2 分子輔助育種

程寧寧等[16]首次應(yīng)用SRAP分子標(biāo)記技術(shù)對櫛孔扇貝與蝦夷扇貝雜交子一代及其雙親的遺傳結(jié)構(gòu)和雜種優(yōu)勢進(jìn)行了分析，在其檢測得到的107條多態(tài)性條帶中，分析得到雜交子代多態(tài)位點(diǎn)的比例，Nei’s基因多樣性指數(shù)（h）和Shannon信息指數(shù)（I）均表明其遺傳多樣性高于雙親，得出理論上櫛孔扇貝（♀）×蝦夷扇貝（♂）的遠(yuǎn)緣雜交可以產(chǎn)生雜種優(yōu)勢，從分子水平上為扇貝雜種優(yōu)勢研究提供了理論依據(jù)。賈永義等[17]也將該技術(shù)最先應(yīng)用于翹嘴紅鲌（♀）×團(tuán)頭魴（♂）雜種F1及其雙親的遺傳變異分析，表明了SRAP分子標(biāo)記系統(tǒng)的可靠性和用于魚類屬間雜種真實(shí)性鑒定的可行性，為重要經(jīng)濟(jì)魚類雜種優(yōu)勢的開發(fā)利用提供了依據(jù)。此外，許凌雪等[18]對哲羅鮭、細(xì)鱗鮭及雜交種（哲羅鮭♀×細(xì)鱗鮭♂）遺傳結(jié)構(gòu)的SRAP分析結(jié)果也表明了該標(biāo)記技術(shù)在雜種鑒定和雜種優(yōu)勢分析方面的適用性。

但目前將SRAP分子標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用于動物相關(guān)基因標(biāo)定的研究尚不多見。丁煒東等[19]將SRAP分子標(biāo)記運(yùn)用于分析野生草魚和家養(yǎng)草魚，篩選出了與草魚種質(zhì)退化相關(guān)的分子遺傳標(biāo)記，再經(jīng)克隆和測序，發(fā)現(xiàn)8個基因的序列和GenBank中的功能性基因有較高的相似性。隨后，丁煒東等[20]進(jìn)一步利用SRAP和SCAR技術(shù)對草魚種質(zhì)退化相關(guān)的分子遺傳標(biāo)記進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)SCAR分子標(biāo)記技術(shù)可應(yīng)用于野生草魚和人工草魚的種群鑒定，其研究成果為了解草魚的種質(zhì)退化、種質(zhì)資源保護(hù)以及分子輔助育種等方面都提供了理論依據(jù)。辛文婷等[21]又將該標(biāo)記運(yùn)用于性別表達(dá)特征性序列的篩選研究，得到黃顙魚的性別特征性DNA序列。結(jié)果表明此特征序列相對表達(dá)量（10%）可作為鑒別雌雄黃顙魚的界定參考指標(biāo)，低于10%判定為雌魚，高于10%判定為雄魚，使SRAP分子標(biāo)記技術(shù)從分子水平上為黃顙魚的性別鑒定提供了有效手段，有助于黃顙魚的單性育種研究。呂耀平等[22]也利用SRAP與SCAR技術(shù)結(jié)合篩選出了與甌江彩鯉體色相關(guān)的分子遺傳標(biāo)記SC-3標(biāo)記，并發(fā)現(xiàn)該片段與甌江彩鯉“全紅”體色相關(guān)，為開發(fā)和選育體色艷麗、觀賞性強(qiáng)的穩(wěn)定遺傳性狀奠定了基礎(chǔ)。

以上研究都表明SRAP分子標(biāo)記系統(tǒng)為水生動物的種質(zhì)鑒定、種質(zhì)資源開發(fā)和保護(hù)、分子輔助育種等方面的研究提供了一定的技術(shù)支撐。

2.3 構(gòu)建遺傳圖譜

SRAP標(biāo)記具有操作簡便、穩(wěn)定、多態(tài)性高等特點(diǎn)，在構(gòu)建遺傳圖譜方面具有很高的應(yīng)用價(jià)值[9]。但利用SRAP分子標(biāo)記技術(shù)構(gòu)建動物遺傳圖譜尤其是水生動物遺傳圖譜目前報(bào)道甚少，張紅玉等[23]將SRAP分子標(biāo)記技術(shù)用于馬氏珠母貝紅色殼家系F1代中分離方式的研究，統(tǒng)計(jì)了符合孟德爾分離定律的多態(tài)位點(diǎn)數(shù)比例，驗(yàn)證了SRAP標(biāo)記用于遺傳分析的適用性，為馬氏珠母貝紅色殼家系的遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建及分子標(biāo)記輔助選育等方面的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。葛學(xué)亮等[24]利用SRAP與SSR及TRAP 3種DNA分子標(biāo)記技術(shù)構(gòu)建了黃顙魚的遺傳連鎖圖譜，共有51個標(biāo)記定位于框架圖譜上，并得到了16個連鎖群，圖譜的長度為585.5 cM，連鎖群的長度為8.2～127.4 cM，每個連鎖群的標(biāo)記個數(shù)為2～8個，再次驗(yàn)證了該思路的可行性。

3 問題與展望

綜上所述，SRAP分子標(biāo)記技術(shù)因其具有高多態(tài)性、高共顯性、操作簡便等特點(diǎn)，已成為目前遺傳多樣性、目的基因標(biāo)定、遺傳圖譜構(gòu)建等眾多研究領(lǐng)域的重要技術(shù)手段之一。但在實(shí)際應(yīng)用過程中，SRAP分子標(biāo)記技術(shù)也顯示出了一定的局限性，主要包括：①該標(biāo)記技術(shù)僅能對基因的開放閱讀框序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增，而對端粒等其他區(qū)域的擴(kuò)增不足；②針對不同的物種需要開發(fā)不同的SRAP引物；③SRAP-PCR的標(biāo)準(zhǔn)化問題。作為一項(xiàng)基于PCR擴(kuò)增的分子標(biāo)記技術(shù)，SRAP分子標(biāo)記技術(shù)以其顯著的特點(diǎn)和優(yōu)勢已經(jīng)成功應(yīng)用于多種動植物的遺傳多樣性等研究中，具有十分廣闊的發(fā)展空間，必將在包括水生動物在內(nèi)的生命科學(xué)研究與應(yīng)用中發(fā)揮更為重要的作用。

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（責(zé)任編輯 昌炎新）