趙 丹 龔光偉 李勝文 楊 坤 鄭威強 魏 俊

胃癌是我國較常見惡性消化道腫瘤之一，浸潤和轉移是影響胃癌患者預后的關鍵因素?；|金屬蛋白酶 ( matrix metalloproteinases,MMPs)家族中的基質金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)和基質金屬蛋白酶9(MMP-9)與腫瘤的浸潤與轉移的關系最為密切。本研究采用免疫組化SP法檢測胃癌組織與正常胃黏膜組織中MMP-2和MMP-9的表達情況,探討MMP-2和MMP-9的表達與胃癌生物學行為之間的關系及其兩者在胃癌組織中表達的相關性。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集本院2009年9月-2012年9月手術切除的經(jīng)病理明確診斷為胃腺癌標本65例,其中男性49例,女性16例,年齡35～78歲,平均年齡58.3歲。組織學分型:高分化癌7例，中分化癌11例,低/未分化癌47例；有淋巴結轉移者48例,無淋巴結轉移者17例。TNM分期:Ⅰ期8例,Ⅱ期13例,Ⅲ期32例,Ⅳ期12例。另取胃潰瘍或十二指腸潰瘍手術切除標本中的正常胃黏膜組織20例作對照,并經(jīng)病理明確診斷證實且排除重度不典型增生，其中男性16例,女性4例,年齡42～79歲,平均年齡57.6歲。所有患者術前均未使用非甾體抗炎藥物及無放、化療治療史,且有完整的臨床和病理資料。

1.2 方法

1.2.1 試劑來源 采用免疫組化(SP)染色法,即用型兔抗人MMP-2單克隆抗體和MMP-9單克隆抗體，購自SantaCruz公司。S-P試劑盒及DAB顯色試劑盒均購自上海生研生化試劑有限公司，并以該公司提供的標準陽性切片作為陽性對照。PBS代替一抗作為陰性對照,操作步驟嚴格按照SP免疫組化試劑盒說明書進行。

1.2.2 結果判定 MMP-2和MMP-9陽性表達主要位于細胞膜和細胞質，為棕黃色或棕褐色顆粒狀著色。高倍鏡下(×400)隨機選擇5個視野,計算陽性細胞占視野總細胞數(shù)的百分比，取平均值。MMP-2和MMP-9陽性細胞數(shù)<25%為陰性表達,≥25%為陽性表達。染色結果由2名有經(jīng)驗的病理科醫(yī)師根據(jù)雙盲原則進行評定。

1.3 統(tǒng)計學處理

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行分析。采用χ2檢驗及Fisher精確概率法統(tǒng)計MMP-2和MMP-9與不同臨床病理特征的差異性比較和兩者表達的相關性分析，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 胃組織中MMP-2和MMP-9的表達

胃癌組織中的MMP-2、MMP-9陽性率分別為67.7%(44/65)、72.3%(47/65)，均高于其在正常胃組織中的陽性率15.0%(3/20)、25.0%(5/20),差異均有統(tǒng)計學意義(χ2=17.178、14.411，P均<0.001)。

2.2 MMP-2和MMP-9表達與胃癌臨床病理學特征的關系

MMP-2、MMP-9的陽性率與患者年齡、性別、腫瘤大小無明顯相關性(P>0.05),而與腫瘤的浸潤深度、組織學分化程度、胃癌的淋巴結轉移及TNM分期有顯著相關性(P<0.05),見表1。

表1 MMP-2、MMP-9表達與胃癌臨床病理學特征的關系

2.3 胃癌組織中MMP-2和MMP-9表達的相關性

相關性分析表明胃癌組織中的MMP-2和MMP-9表達具有相關性，且呈正相關(P<0.001,γ=0.599),見表2。

表2 胃癌組織中MMP-2和MMP-9表達的相關性

3 討論

近年來國內外許多學者做了大量有關人類腫瘤細胞的侵襲轉移與MMPs表達之間的關系的研究，研究證實了在神經(jīng)膠質瘤、食管癌、胃癌、乳腺癌、宮頸癌、子宮內膜癌、喉癌等多種惡性腫瘤中均有MMP-2和MMP-9表達,且與臨床分期、病理組織學分級及淋巴結轉移等有關[1-7]。

本實驗也證實了MMP-2和MMP-9在胃癌組織中的陽性表達率分別為67.7%(44/65)和72.3%(47/65)，明顯高于在正常胃黏膜組織中的陽性表達率15%(3/20)和25%(5/20),二者的差異具有顯著統(tǒng)計學意義(χ2=17.178，14.411；P均<0.001)。且MMP-2和MMP-9的陽性率與患者年齡、性別、腫瘤大小無明顯相關性(P>0.05)，而與腫瘤的浸潤深度、組織學分化程度、胃癌的淋巴結轉移及TNM分期有顯著相關性(P<0.05)。隨著腫瘤細胞浸潤深度，淋巴結轉移以及TNM分期的增加，兩者的表達陽性率也明顯升高，但組織學分化程度越低，兩者陽性表達率越高。這些實驗結果都與上述學者的研究結果相符合。雖然MMP-2及MMP-9被不少實驗研究證實了與腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉移密切相關，但它們之間的具體作用機制及相互調控關系仍未完全明了，有待我們進一步研究探討。Lekstan等研究證明在胰腺癌中MMP-2和MMP-9具有高陽性率，且兩者表達高度一致性，共同作用使胰腺癌具有高侵襲性[8]。Hu等認為MMP-2和MMP-9的協(xié)同作用增加了肺癌轉移的風險[9]。本次實驗也證實了MMP-2和MMP-9 在胃癌組織中的表達具有正相關性，這與上述學者的報道結果相符。

這些結果提示在胃癌浸潤和轉移的過程中MMP-2和MMP-9兩者可能存在著協(xié)同作用，共同影響著胃癌相關的生物學行為及胃癌患者的預后。 綜上所述，在胃癌組織中MMP-2 和MMP-9的陽性率顯著增高，且兩者表達呈正相關，推斷其可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用。臨床上對MMP-2 和MMP-9的檢測具有預后價值。

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[9] Hu C,Wang J,Xu Y,et al.Current evidence on the relationship between five polymorphisms in the matrix metalloproteinases (MMP) gene and lung cancer risk: a meta-analysis〔J〕.Gene,2013,517(1):65.