王超鋒，王遠(yuǎn)微

（1.河南省商丘市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 商丘 476000；2.西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川 成都 610041）

多糖是黃芪的重要活性成分之一，具有免疫調(diào)節(jié)、 抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、抗輻射、抗衰老、抗應(yīng)激等多種生物學(xué)活性。其中，黃芪多糖（APS）能全面提高機(jī)體的免疫力，已為大量研究所證實(shí)。本研究旨在探討黃芪多糖對豬瘟弱毒疫苗的免疫增強(qiáng)作用。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 黃芪多糖粉（批號：1101091；規(guī)格：100g/袋），由北京某生物科技有限公司生產(chǎn)；豬瘟活疫苗（脾淋源，批號：1105032），由山東某生物科技有限公司生產(chǎn)；鼠抗豬 CD3（批號：E2509）、CD4（批號：F4711）、CD8熒光標(biāo)記單克隆抗體（批號：D6809），均購自美國Southern Biotech公司；豬瘟正向間接血凝抗體檢測試劑盒（批號：20110922），購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物分組及用藥 由某商品豬場購回22日齡三元雜交豬 40 頭，體重（7.2±1.01）kg，隔離飼養(yǎng)觀察7d，未見異常。隨機(jī)等分為4組，1組仔豬的飼料中不添加任何藥物，作為對照組；2～4組飼料中分別按2×10-4、3×10-4、4×10-4劑量加入黃芪多糖，作為試驗(yàn)組。連續(xù)給藥7d。

1.3 免疫接種 給藥結(jié)束當(dāng)天，所有仔豬頸部肌肉注射豬瘟疫苗1頭份/只。

1.4 免疫效果評價(jià)

1.4.1 豬瘟抗體水平的測定 分別于免疫接種當(dāng)天及第1、3、5周采集各組仔豬的前腔靜脈血，分離血清，按試劑盒說明書檢測血清中的豬瘟抗體水平。

1.4.2 T淋巴細(xì)胞亞群檢測 分別于免疫接種當(dāng)天及1、3、5周采集各組仔豬的前腔靜脈血，用肝素抗凝，取抗凝血100μL，分別加入2 μL鼠抗豬熒光標(biāo)記CD3、CD4、CD8單克隆抗體，避光孵育30min，然后加入10μL紅細(xì)胞裂解液，輕輕混勻，避光孵育15min，1800r/min離心5min，棄上清；再加2mL PBS液清洗2次，1200r/min離心5min，棄上清；然后加500μL PBS液重懸，采用流式細(xì)胞儀檢測，每個(gè)標(biāo)本檢測10000個(gè)細(xì)胞，記錄熒光標(biāo)記陽性細(xì)胞數(shù)。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，結(jié)果用均值（）±標(biāo)準(zhǔn)差（SD）表示。

2 結(jié)果

2.1 豬瘟疫苗和口蹄疫疫苗的抗體水平 抗體檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該受試仔豬的豬瘟母源抗體水平較低，均在2以下，且組間抗體水平差異顯著。免疫后從第1周起，飼喂不同劑量黃芪多糖后，抗體水平均顯著高于對照組1個(gè)滴度以上，見表1。說明黃芪多糖能明顯提高豬瘟弱毒疫苗的免疫抗體水平。

表1 免疫接種后不同時(shí)間的豬瘟抗體（2n，SD）

表1 免疫接種后不同時(shí)間的豬瘟抗體（2n，SD）

注：表中*表示與對照組相比差異顯著（P＜0.05）。

組別 免疫接種時(shí)間（周）0 1 3 5 1 1.40±0.35 2.25±0.67 3.49±0.48 5.67±1.10 2 1.70±0.82 3.97±0.77* 5.10±0.22* 6.95±1.05*3 1.80±0.75 3.76±0.69* 5.38±0.67* 7.29±0.98*4 1.65±0.64 3.95±0.97* 5.23±0.86* 7.32±1.01*

2.2 T細(xì)胞亞群的動(dòng)態(tài)變化 流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)，不同劑量的黃芪多糖具有提高豬CD3+和CD4+T淋巴細(xì)胞亞群百分含量的趨勢，但給藥組與對照組差異不顯著（P＞0.05），見表 2。

表2 免疫后不同時(shí)間各組T細(xì)胞亞群的測定結(jié)果（SD）%

表2 免疫后不同時(shí)間各組T細(xì)胞亞群的測定結(jié)果（SD）%

項(xiàng)目 免疫時(shí)間（周）0 1 3 5 CD3+ 對照組 48.90±8.14 49.04±5.64 48.81±5.35 50.04±16.00 2×10-4 47.64±12.30 53.15±3.41 50.62±4.10 51.74±17.63 3×10-4 48.24±5.45 52.61±4.46 51.10±8.15 52.48±11.30 4×10-4 46.62±5.36 52.38±8.31 49.88±6.77 52.43±13.52 CD4+ 對照組 28.63±9.63 26.16±4.34 27.98±5.53 26.52±6.04 2×10-4 27.86±8.51 28.65±8.13 30.24±4.84 28.50±4.45 3×10-4 29.93±6.13 29.10±6.47 31.87±6.84 29.87±4.90 4×10-4 30.51±8.64 28.51±5.14 31.48±6.70 28.21±5.89 CD8+ 對照組 20.83±8.15 22.64±7.03 23.21±6.25 25.36±8.33 2×10-4 18.10±9.29 21.36±5.75 22.70±8.76 23.47±6.24 3×10-4 19.31±4.54 21.88±8.16 23.76±9.35 24.40±6.27 4×10-4 20.79±6.30 20.03±6.52 23.64±9.46 23.93±8.41

3 結(jié)論及分析

我國商品豬群豬瘟弱毒疫苗的接種普遍在20～28d，但抗體效價(jià)和抗體陽轉(zhuǎn)率一直不盡人意，提高豬瘟疫苗的免疫效果一直是臨床實(shí)踐中亟待解決的問題。有研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖注射液能顯著提高豬瘟弱毒疫苗免疫仔豬血清中的豬瘟抗體阻斷率，顯著提高仔豬血清中的IgG含量。本研究結(jié)果也證實(shí)黃芪多糖能顯著增強(qiáng)豬瘟弱毒疫苗誘導(dǎo)的抗體水平，可以作為免疫增強(qiáng)劑提高疫苗的體液免疫水平。

CD3存在于全部T細(xì)胞上，基于CD抗原的差異，T淋巴細(xì)胞又分為CD4+和CD8+兩大亞群，CD4+和CD8+及CD4+T/CD8+是評價(jià)機(jī)體免疫功能的重要指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，黃芪多糖能提高免疫仔豬CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，進(jìn)而有了提高CD4+T/CD8+值的趨勢，但與不用藥的對照組相比無顯著差異。有研究顯示，給21日齡仔豬注射黃芪多糖，不僅可以提高其CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，而且受試仔豬的腹瀉率也顯著低于不用藥的空白對照組，這進(jìn)一步說明黃芪多糖能提高機(jī)體的抵抗力。大量研究證實(shí)，黃芪多糖不僅是良好的疫苗增效劑，而且是良好的仔豬保健添加劑，值得推廣。

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