韓 亮 劉 勇

胸苷激酶1(thymidine kinase 1,TK1)是1種存在于細(xì)胞質(zhì)中的激酶，含量高低與細(xì)胞的增殖程度相關(guān)[1]。健康人群血清中TK1濃度極其微量或檢測(cè)不到，而惡性腫瘤患者血清中TK1水平顯著升高，可達(dá)2～100倍[2]。我們采用免疫印記增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)惡性腫瘤患者化療前后血清中TK1表達(dá)水平，并與健康人群進(jìn)行對(duì)比，以探討其在對(duì)惡性腫瘤診斷及療效評(píng)價(jià)中的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2011年6月至2012年6月徐州市中心醫(yī)院收治的，有明確細(xì)胞學(xué)或病理學(xué)診斷證實(shí)的100例惡性腫瘤患者血清。100例中肺癌35例，大腸癌10例，胃癌10例，乳腺癌15例，卵巢癌10例，惡性淋巴瘤5例，軟組織肉瘤5例，其他腫瘤10例。患者年齡40～70歲，平均年齡(56.7±11.6)歲。門診健康體檢者20例，年齡30～65歲，平均年齡(46.8±10.7)歲。所有入選者排除黃疸、急性感染、胃潰瘍或出血、女性月經(jīng)期及脂血、溶血等因素；惡性腫瘤患者均有臨床或影像學(xué)可測(cè)量病灶，健康體檢者排除腫瘤。

1.2 方法

空腹采靜脈血2 ml，3 h內(nèi)以4000 r/min離心8～10 min分離血清，-20°冰箱保存?zhèn)錂z。TK1濃度測(cè)定采用免疫印記增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法，具體操作按照試劑盒說明書進(jìn)行。TK1測(cè)定值以2.0 pmol/L為標(biāo)準(zhǔn)閾值，>2.0 pmol/L為異常。

1.3 療效評(píng)定

化療2個(gè)周期后，按WHO標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一評(píng)價(jià)[3]，分完全緩解、部分緩解、穩(wěn)定和進(jìn)展

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 不同實(shí)驗(yàn)組間TK1濃度測(cè)定結(jié)果比較

惡性腫瘤組血清TK1濃度顯著高于健康人群組，2個(gè)周期化療后，部分緩解組的TK1濃度明顯下降，與化療前及化療后進(jìn)展組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表1。

表1 各組TK1濃度比較

2.2 不同實(shí)驗(yàn)組間TK1陽(yáng)性檢出率比較

惡性腫瘤患者化療前TK1的陽(yáng)性檢出率明顯高于健康人群組，與2周期化療后進(jìn)展組及部分緩解組間差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表2 各組TK1陽(yáng)性檢測(cè)率比較(例,%)

2.3 ROC曲線分析血清TK1濃度在惡性腫瘤早期診斷中的價(jià)值

本實(shí)驗(yàn)中，TK1檢測(cè)惡性腫瘤的靈敏度為74%，特異度為95%。經(jīng)ROC分析，其曲線下面積為0.943，95%可信區(qū)間為(0.891，0.994)，經(jīng)檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。結(jié)果表明：TK1對(duì)惡性腫瘤的早期診斷具有較高的準(zhǔn)確性，見圖1。

圖1 TK1診斷惡性腫瘤的ROC曲線分析

3 討論

早在上個(gè)世紀(jì)60年代，Weissman等已證實(shí)TK是胸腺嘧啶核苷合成DNA的關(guān)鍵酶[4]。后期的研究表明，TK有TK1和TK2二種同工酶，其中，TK1的水平與細(xì)胞周期中的S期(DNA合成期)的DNA合成密切相關(guān)，被稱為是DNA合成期的特殊酶。TK1參與細(xì)胞周期的調(diào)控，并與細(xì)胞分裂密切相關(guān)。在1個(gè)完整細(xì)胞增殖周期中，TK1在G1期(DNA合成前期)時(shí)含量比較低，到S期以后逐漸升高，至G2期(DNA合成后期)時(shí)達(dá)到最高[5,6]。TK1水平與細(xì)胞增殖狀態(tài)密切相關(guān)，可以作為細(xì)胞增殖標(biāo)記物來檢測(cè)細(xì)胞的增殖活性[7]。同時(shí)，基于惡性腫瘤細(xì)胞的高增殖特點(diǎn)，TK1還可作為1種敏感特異的腫瘤標(biāo)記物來反映惡性腫瘤的增殖狀態(tài)[8～10]。目前，TK1不僅作為惡性腫瘤的療效判斷和預(yù)后指標(biāo)，同時(shí)也是惡性腫瘤篩查和診斷的良好標(biāo)志物[11,12]，在肺癌、乳腺癌、膀胱癌、大腸癌等惡性腫瘤中已有相關(guān)報(bào)道[13,14]。

本實(shí)驗(yàn)表明，TK1在惡性腫瘤患者中的濃度是(3.65±2.31)pmol/L，與健康人群組相比，其差異有顯著性(P<0.01)；其作為惡性腫瘤的輔助篩查指標(biāo)，特異度為74%，靈敏度為95%，ROC曲線下面積為0.943，可信度較高。與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相近，國(guó)內(nèi)一項(xiàng)納入35000例患者的大宗研究結(jié)果同樣顯示，血清TK1可以作為1個(gè)可靠的指標(biāo)，對(duì)惡性腫瘤有著預(yù)測(cè)及早期診斷的意義[15]。同時(shí)，在化療過程中，TK1的表達(dá)水平變化與腫瘤的控制率有一定的關(guān)系，表現(xiàn)為，腫瘤部分緩解組的TK1水平下降，而進(jìn)展組的TK1水平升高，其原因與腫瘤細(xì)胞的增殖程度高低有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)的報(bào)道一致[16～18]。

TK1的表達(dá)水平與某些腫瘤的預(yù)后存在密切聯(lián)系。Sergej等的研究證實(shí)，在慢性淋巴細(xì)胞白血病患者中，血清高TK1濃度提示患者預(yù)后不佳，部分患者發(fā)展為大B細(xì)胞淋巴瘤[19]。Yan Xu等的研究證實(shí)，組織中TK1表達(dá)強(qiáng)度與病理學(xué)基質(zhì)侵犯程度有一定相關(guān)，兩者聯(lián)合，可以更好的判斷分期為T1的肺腺癌患者的預(yù)后，高TK1表達(dá)的患者提示預(yù)后不佳[20]。在本實(shí)驗(yàn)中，可以發(fā)現(xiàn)，隨著腫瘤病期的發(fā)展，血清TK1濃度有升高趨勢(shì)，但因?yàn)槿虢M病例數(shù)不足，且大部分病例均為中晚期患者，因而不能夠進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。今后的研究可以通過納入足夠的病例數(shù)，判定分析兩者間的關(guān)系。

綜上所述，血清TK1表達(dá)水平對(duì)惡性腫瘤的診斷及療效評(píng)價(jià)具有重要的參考價(jià)值，在臨床上可以作為惡性腫瘤患者常規(guī)的血清學(xué)標(biāo)志物檢查指標(biāo)。

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