韓 亮 劉 勇

胸苷激酶1(thymidine kinase 1,TK1)是1種存在于細(xì)胞質(zhì)中的激酶，含量高低與細(xì)胞的增殖程度相關(guān)[1]。健康人群血清中TK1濃度極其微量或檢測不到，而惡性腫瘤患者血清中TK1水平顯著升高，可達2～100倍[2]。我們采用免疫印記增強化學(xué)發(fā)光法檢測惡性腫瘤患者化療前后血清中TK1表達水平，并與健康人群進行對比，以探討其在對惡性腫瘤診斷及療效評價中的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2011年6月至2012年6月徐州市中心醫(yī)院收治的，有明確細(xì)胞學(xué)或病理學(xué)診斷證實的100例惡性腫瘤患者血清。100例中肺癌35例，大腸癌10例，胃癌10例，乳腺癌15例，卵巢癌10例，惡性淋巴瘤5例，軟組織肉瘤5例，其他腫瘤10例。患者年齡40～70歲，平均年齡(56.7±11.6)歲。門診健康體檢者20例，年齡30～65歲，平均年齡(46.8±10.7)歲。所有入選者排除黃疸、急性感染、胃潰瘍或出血、女性月經(jīng)期及脂血、溶血等因素；惡性腫瘤患者均有臨床或影像學(xué)可測量病灶，健康體檢者排除腫瘤。

1.2 方法

空腹采靜脈血2 ml，3 h內(nèi)以4000 r/min離心8～10 min分離血清，-20°冰箱保存?zhèn)錂z。TK1濃度測定采用免疫印記增強化學(xué)發(fā)光法，具體操作按照試劑盒說明書進行。TK1測定值以2.0 pmol/L為標(biāo)準(zhǔn)閾值，>2.0 pmol/L為異常。

1.3 療效評定

化療2個周期后，按WHO標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一評價[3]，分完全緩解、部分緩解、穩(wěn)定和進展

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 不同實驗組間TK1濃度測定結(jié)果比較

惡性腫瘤組血清TK1濃度顯著高于健康人群組，2個周期化療后，部分緩解組的TK1濃度明顯下降，與化療前及化療后進展組比較有統(tǒng)計學(xué)差異，見表1。

表1 各組TK1濃度比較

2.2 不同實驗組間TK1陽性檢出率比較

惡性腫瘤患者化療前TK1的陽性檢出率明顯高于健康人群組，與2周期化療后進展組及部分緩解組間差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

表2 各組TK1陽性檢測率比較(例,%)

2.3 ROC曲線分析血清TK1濃度在惡性腫瘤早期診斷中的價值

本實驗中，TK1檢測惡性腫瘤的靈敏度為74%，特異度為95%。經(jīng)ROC分析，其曲線下面積為0.943，95%可信區(qū)間為(0.891，0.994)，經(jīng)檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。結(jié)果表明：TK1對惡性腫瘤的早期診斷具有較高的準(zhǔn)確性，見圖1。

圖1 TK1診斷惡性腫瘤的ROC曲線分析

3 討論

早在上個世紀(jì)60年代，Weissman等已證實TK是胸腺嘧啶核苷合成DNA的關(guān)鍵酶[4]。后期的研究表明，TK有TK1和TK2二種同工酶，其中，TK1的水平與細(xì)胞周期中的S期(DNA合成期)的DNA合成密切相關(guān)，被稱為是DNA合成期的特殊酶。TK1參與細(xì)胞周期的調(diào)控，并與細(xì)胞分裂密切相關(guān)。在1個完整細(xì)胞增殖周期中，TK1在G1期(DNA合成前期)時含量比較低，到S期以后逐漸升高，至G2期(DNA合成后期)時達到最高[5,6]。TK1水平與細(xì)胞增殖狀態(tài)密切相關(guān)，可以作為細(xì)胞增殖標(biāo)記物來檢測細(xì)胞的增殖活性[7]。同時，基于惡性腫瘤細(xì)胞的高增殖特點，TK1還可作為1種敏感特異的腫瘤標(biāo)記物來反映惡性腫瘤的增殖狀態(tài)[8～10]。目前，TK1不僅作為惡性腫瘤的療效判斷和預(yù)后指標(biāo)，同時也是惡性腫瘤篩查和診斷的良好標(biāo)志物[11,12]，在肺癌、乳腺癌、膀胱癌、大腸癌等惡性腫瘤中已有相關(guān)報道[13,14]。

本實驗表明，TK1在惡性腫瘤患者中的濃度是(3.65±2.31)pmol/L，與健康人群組相比，其差異有顯著性(P<0.01)；其作為惡性腫瘤的輔助篩查指標(biāo)，特異度為74%，靈敏度為95%，ROC曲線下面積為0.943，可信度較高。與本實驗結(jié)果相近，國內(nèi)一項納入35000例患者的大宗研究結(jié)果同樣顯示，血清TK1可以作為1個可靠的指標(biāo)，對惡性腫瘤有著預(yù)測及早期診斷的意義[15]。同時，在化療過程中，TK1的表達水平變化與腫瘤的控制率有一定的關(guān)系，表現(xiàn)為，腫瘤部分緩解組的TK1水平下降，而進展組的TK1水平升高，其原因與腫瘤細(xì)胞的增殖程度高低有關(guān)。本實驗結(jié)果與相關(guān)文獻的報道一致[16～18]。

TK1的表達水平與某些腫瘤的預(yù)后存在密切聯(lián)系。Sergej等的研究證實，在慢性淋巴細(xì)胞白血病患者中，血清高TK1濃度提示患者預(yù)后不佳，部分患者發(fā)展為大B細(xì)胞淋巴瘤[19]。Yan Xu等的研究證實，組織中TK1表達強度與病理學(xué)基質(zhì)侵犯程度有一定相關(guān)，兩者聯(lián)合，可以更好的判斷分期為T1的肺腺癌患者的預(yù)后，高TK1表達的患者提示預(yù)后不佳[20]。在本實驗中，可以發(fā)現(xiàn)，隨著腫瘤病期的發(fā)展，血清TK1濃度有升高趨勢，但因為入組病例數(shù)不足，且大部分病例均為中晚期患者，因而不能夠進行統(tǒng)計學(xué)分析。今后的研究可以通過納入足夠的病例數(shù)，判定分析兩者間的關(guān)系。

綜上所述，血清TK1表達水平對惡性腫瘤的診斷及療效評價具有重要的參考價值，在臨床上可以作為惡性腫瘤患者常規(guī)的血清學(xué)標(biāo)志物檢查指標(biāo)。

[1] Munch -Petersen B.Enzymatic regulation of cytosolic thymidine kinase 1 and mitochondrial thymidine kinase 2：a mini review〔J〕.Nucleo-sides Nucleotides Nucleic Acids，2010，29(4～6)：363.

[2] He Q，Skog S，Wang N，et al.Characterization of a peptide antibody against a C-terminal part of human and mouse cytosolic thymidine kinase.which is a marker for celI proliferation 〔J〕.Eur J C Biol，1996，70(2)：117.

[3] 周際昌.實用腫瘤內(nèi)科學(xué)〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，1999：33～34.

[4] Weissman SM，Smellie RMS，Paul J.Studies on the biosynthesis of deoxyribonucleic acid by extracts of mammalian cells.IV The phosphorylation of thymidine〔J〕.Bioehim Biophys Acta，1960，45(4)：101.

[5] 吳怡春，徐笑紅，張毅敏，等.血清TK1水平變化在惡性腫瘤診療轉(zhuǎn)歸過程的監(jiān)測作用〔J〕.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2008，18(6)：1122.

[6] He Q，F(xiàn)ornander T，Johansson H，et al.Thymidine kinase 1 in serum predicts increased risk of distant or loco-regional recurrence following surgery in patients with early breast cancer〔J〕.Anticancer Res，2006，26(6C)：4753.

[7] WOLBERG W H.Alternative pathways for DNA-thymine synthesis in stimulated leucocytes〔J〕.Clin Exp Immunol，1971，8(2)：177.

[8] HE Q，ZOU L，ZHANG PG，et al.The clinical significance of thymidine kinase 1 measurement in patients with breast cancer using anti-TK1 antibody 〔J〕.J Biol Marker，2000，15(2)：139.

[9] VON EULER H，EINARSSON R，OLSSON U，et al.Serum thymidine kinase activity in dogs with malignant lymphoma，a potent marker for prognosis and monitoring the disease〔J〕.J Vet Int Med，2004，18(5)：696.

[10] OHRVIK A，LINDH M，EINARSSON R，et al.Sensitive nonradiometric method for determining thymidine kinase 1 activity〔J〕.Clin Chem，2004，50(9)：1597.

[11] 李清茹，桑士標(biāo)，袁 航，等.血清胸苷激酶1檢測對惡性腫瘤診斷及療效評估的意義〔J〕.中華核醫(yī)學(xué)雜志，2009，28(4)：271.

[12] Zhang J，Jia Q，Zou S，et al.Thymidino kinase 1：a proliferation marker for determining prognosis and monitoring the surgical outcome of primary bladder carcinoma patients〔J〕.Oncology Rep，2006，15(2)：455.

[13] Karl-Heinz Kurth，Richard Sylvester J.Prognostic factors in non muscle-invasive bladder tumors〔J〕.European urology supplements，2007，6(14)：789.

[14] Namiko Kuroiwa，Masao Nakayama，Tamotsu Fukuda，et al.Specific recognition of cytosolic thymidine kinase in the human lung tumor by monoelonal antibodies raised against recombinant human thymidine kinase〔J〕.Journal of Immunological Methods，2001，253(1-2)：1.

[15] Zhi Heng Chen，Shou Qing Huang，Yande Wang，et al. Serological thymidine kinase 1 is a biomarker for early detection of tumours-a health screening study on 35,365 people,using a sensitive chemiluminescent dot blot assay〔J〕.Sensors 2011,11(12),11064.

[16] 焦健華，黃霞玥，施瑞華，等.細(xì)胞質(zhì)胸苷激酶TK1對結(jié)直腸癌術(shù)前診斷及術(shù)后隨訪價值的研究〔J〕.實用臨床醫(yī)藥雜志，2011,15(3)：21.

[17] 陳曲波，劉瑞萍，黃 慧，等.血清胸苷激酶1檢測及其在腫瘤治療監(jiān)測和預(yù)后中的作用〔J〕.廣東醫(yī)學(xué)，2008,29(6)：1022.

[18] 潘竹林 ，季興英，石延敏，等.血清胸苷激酶水平變化在非霍奇金淋巴瘤化療過程的臨床意義〔J〕.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2008,29(11)：1384.

[19] Sergej N Konoplev，Herbert A Fritsche，Susan O'Brien，et al. High serum thymidine kinase 1 level predicts poorer survival in patients with chronic lymphocytic leukemia〔J〕.Am J Clin Pathol,2010,134(3):472.

[20] Yan Xu，Qun-Li Shi,Henghui Ma，et al.High thymidine kinase 1 (TK1) expression is a predictor of poor survival in patients with pT1 of lung adenocarcinoma〔J〕.Tumor Biol,2012,33(2):475.