王 建

前列腺癌(prostate cancer,PCa)多發(fā)于歐美國家，居男性癌癥死因的第二位[1]。在我國，隨著人均壽命的延長、膳食結(jié)構(gòu)的改變及診斷技術(shù)的進(jìn)步，PCa發(fā)病率在逐年提高，已躍居為男性泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的第三位[2]。前列腺癌患者早期無明顯癥狀，死亡的主要原因是癌細(xì)胞的浸潤與轉(zhuǎn)移。探尋新的有價(jià)值的前列腺癌特異分子對于PCa診斷、治療及預(yù)后都有重要意義。大量研究表明，1個(gè)Fox基因家族的成員FoxM1,在細(xì)胞增殖、凋亡、DNA損傷和腫瘤形成等許多生理過程中均發(fā)揮作用[3]。利用芯片技術(shù)檢測前列腺癌組織的基因表達(dá)譜顯示，F(xiàn)oxM1在轉(zhuǎn)移性前列腺癌的表達(dá)顯著增高[4]。本研究采用免疫組化方法檢測前列腺癌組織中FoxM1蛋白的表達(dá)情況，并分析其與前列腺癌不同臨床病理特征之間的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 一般資料

118例前列腺癌患者，中位年齡是69歲(平均年齡71歲，年齡范圍42～82歲)。其中<70歲45例，≥70歲73例。按照Gleason評分標(biāo)準(zhǔn)：4～6分42例，7～10分76例。按照TNM分期：T1～T2期56例，T3～T4期62例；N0期104例，N1期14例；M0期102例，M1期16例。另取22例前列腺良性增生組織(BPH)作為對照。

試劑:兔抗人FoxM1多克隆抗體購自美國santa公司；生物素標(biāo)記二抗、DAB顯色試劑盒、檸檬酸鹽、PBS等均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

免疫組化采用SP法：切片脫蠟、水化；PBS洗2～3次各5 min；3% H2O2滴加在切片組織上，室溫靜置10 min；PBS洗2～3次各5 min；抗原修復(fù)；PBS洗2～3次各5 min；滴加封閉液(1%BSA),37℃恒溫孵育20 min；甩去多余液體；滴加兔抗人FoxM1多克隆抗體50 μl(1∶50)，37℃恒溫孵育1 h；PBS洗3次各5 min；滴加生物素標(biāo)記二抗50 μl(1∶200)，37℃恒溫孵育1 h；PBS洗3次各5 min；DAB顯色5～10 min，在顯微鏡下掌握染色程度；PBS或自來水沖洗10 min；蘇木精復(fù)染2 min，鹽酸酒精分化；自來水沖洗10～15 min；脫水、透明、封片、鏡檢。

1.3 結(jié)果判斷

參照Carcangiu的雙記分法，根據(jù)細(xì)胞陽性染色強(qiáng)度記分為3分(深棕色)、2分(棕色)、1分(淡棕色)和0分(陰性)；根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)量多少記分為3分(60%以上)、2分(20%～60%)、1分(20%以下)和0分(陰性)。2種記分的乘積為各檢測指標(biāo)的表達(dá)狀況，總分≥4分為高表達(dá)，≤3分為低表達(dá)或陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，兩因素間差異的比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher檢驗(yàn)法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

前列腺癌組織FoxM1蛋白的高表達(dá)率(63.6%)顯著高于良性增生組織(27.3%)(P<0.05)；FoxM1蛋白表達(dá)水平與前列腺癌患者的年齡無顯著相關(guān)性(P>0.05)，與Gleason評分和TNM分期顯著相關(guān)(P<0.05)。前列腺癌患者Gleason評分和TNM分期越高，F(xiàn)oxM1蛋白表達(dá)水平也越高，見表1。

表1 FoxM1蛋白表達(dá)與前列腺癌臨床特征的關(guān)系(例，%)

3 討論

腫瘤形成是多基因突變、多步驟的過程，受到促癌及抑癌相互拮抗信號通路的調(diào)控，導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控、分化受阻。FoxM1過度表達(dá)對于腫瘤細(xì)胞的無限增殖或長期生存以及其侵襲、轉(zhuǎn)移等有重要意義。FoxM1可以使細(xì)胞周期依賴性的Cdk/cyclins/Ckis異常時(shí)相性激活而致腫瘤細(xì)胞過度增殖[5]。異常表達(dá)的FoxM1還能協(xié)同致癌物如烏拉坦、甲基膽蒽或丁羥甲苯促進(jìn)癌癥的發(fā)生，是細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)變的重要分子基礎(chǔ)[6]。凋亡抑制是腫瘤維持惡性特征的重要因素，F(xiàn)oxM1的存在可以保護(hù)具有高水平凋亡誘導(dǎo)因子ROS的增殖細(xì)胞免于發(fā)生衰老及細(xì)胞凋亡[7]。研究顯示，F(xiàn)oxM1還參與EMT、腫瘤細(xì)胞運(yùn)動、侵襲及轉(zhuǎn)移前靶器官小環(huán)境的形成等，并通過活化Akt-Snail信號途徑，激活Stathmin、LOX、LOXL2及其他參與轉(zhuǎn)移的靶基因，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[8]。此外，在胰腺癌細(xì)胞系A(chǔ)sPC-1中過表達(dá)FoxM1，可通過miR-200b的調(diào)節(jié)使其表面的間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物ZEB1、ZEB2及E-cadherin等活化，獲得EMT細(xì)胞表型，同時(shí)也提高了胰腺癌細(xì)胞微球體形成能力，獲得CSC的表型。說明FoxM1促使細(xì)胞經(jīng)歷EMT，誘導(dǎo)具有CSC表型的產(chǎn)生，在腫瘤的發(fā)生、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等過程中起作用[9，10]。

本研究結(jié)果表明，前列腺癌FoxM1蛋白的表達(dá)水平顯著高于前列腺良性增生組織。在前列腺癌中，隨著TNM分期、Gleason評分的增高，F(xiàn)oxM1蛋白表達(dá)強(qiáng)度也明顯增加。可提示FoxM1可能與前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，即FoxM1的表達(dá)增高通過抑制凋亡、促進(jìn)增殖，增強(qiáng)細(xì)胞侵襲和遷移能力，進(jìn)而促進(jìn)前列腺癌變和惡性演進(jìn)。因此，F(xiàn)oxM1蛋白有可能成為前列腺癌的早期診斷的實(shí)驗(yàn)室參考指標(biāo)，同時(shí)，通過檢測FoxM1蛋白的表達(dá)情況還可以了解前列腺癌患者腫瘤的惡性程度及初步判斷預(yù)后，并且還有望成為前列腺癌治療的新的分子靶點(diǎn)。

[1] Siegel R,Naishadham D,Jemal A.Cancer statistics,2012〔J〕.CA Cancer J Clin,2012，62(1):10.

[2] 王 尉，胡衛(wèi)列，呂 軍，等.Me1-18在前列腺癌中的臨床意義〔J〕.實(shí)用癌癥雜志,2011,26(2)：115.

[3] 余琪琪,孟 蕾,譚擁軍.轉(zhuǎn)錄因子FoxM1--癌癥治療新靶點(diǎn)〔J〕.分子診斷與治療雜志，2011,3(5):339.

[4] Chandran UR,Ma C,Dhir R,et al.Gene expression profiles of prostate cancer reveal involvement of multiple molecular pathways in the metastatic process〔J〕.BMC Cancer,2007,12(7):64.

[5] Tan Y,Raychaudhuri P,Costa RH.Chk2 mediates stabilization of the FoxM1 transcription factor to stimulate expression of DNA repair genes〔J〕.Mol Cell Biol,2007,27(3):1007.

[6] Wang IC,Meliton L,Ren X，et al.Deletion of Forkhead Box M1 transcription factor from respiratory epithelial cells inhibits pulmonary tumorigenesis〔J〕.PLoS One,2009 4(8):e6609.

[7] Park HJ,Carr JR,Wang Z,et al.FoxM1,a critical regulator of oxidative stress during oncogenesis〔J〕.EMBO J,2009,28(19):2908.

[8] Park HJ,Gusarova G,Wang Z,et al.Deregulation of FoxM1b leads to tumour metastasis〔J〕.EMBO Mol Med,2011,3(1):21.

[9] Bao B,Wang Z,Ali S,et al.Over-expression of FoxM1 leads to epithelial- mesenchymal transition and cancer stem cell phenotype in pancreatic cancer cells〔J〕.J Cell Biochem,2011,112(9):2296.

[10] 公小迪,姜 斌.FoxM1轉(zhuǎn)錄因子在腫瘤研究中的新進(jìn)展〔J〕.現(xiàn)代腫瘤學(xué)，2012,20(1)：165.