李冀，何增芬，馬育軒，王艷麗，付殷，黃艷霞，高彥宇

(黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

在前期的實驗研究中，本課題組的研究結果表明烏腺金絲桃單味藥提取物具有顯著的抗心律失常［1］、抗心肌缺血作用［2］。另有研究結果表明，相同條件下烏腺金絲桃與丹參按一定比例配伍提取物對實驗動物心肌缺血的保護作用優(yōu)于單味藥組［3］。但未見丹參與烏腺金絲桃配伍應用預防和治療心律失常的報道。因此，本實驗分別建立氯仿引起小鼠心室顫動模型和氯化鈣誘發(fā)大鼠心律失常模型，觀察和統(tǒng)計烏腺金絲桃與丹參不同比例配伍對心律失常模型動物的影響，為進一步研究提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料

1．1 動物 SPF級昆明種小鼠，84只，雌雄各半，體質量(35±2)g，由黑龍江中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供;SPF級Wistar大鼠，64只，雌雄各半，體質量(200±10)g，由黑龍江中醫(yī)藥大學實驗動物中心代購，許可證號:SCXK(京)2012－0001。均給予標準飼料，自由飲食水。

1．2 藥品與試劑 烏腺金絲桃提取物，丹參提取物，烏腺金絲桃與丹參1∶1(按生藥質量比，下同)提取物，烏腺金絲桃與丹參1∶2提取物，烏腺金絲桃與丹參2∶1提取物。烏腺金絲桃、丹參均由黑龍江中醫(yī)藥大學方劑學實驗室提供。

藥品的制備:將烏腺金絲桃植株剪段，與丹參的生藥飲片按既定質量比分組混勻，每組生藥先以蒸餾水提取2次，第1次加8倍量水浸泡15min，冷凝回流提取60min，第2次加6倍量蒸餾水，冷凝回流提取40min;再以95%乙醇提取2次，煎煮方法、時間分別與兩次水提相同。將4次所得藥液混合，減壓濃縮至所需體積，即得各組提取物。

鹽酸普萘洛爾片(規(guī)格:10mg/片，大同市云崗制藥有限公司，國藥準字H14020563，批號111021);鹽酸維拉帕米片(規(guī)格:40mg/片，天津市中央藥業(yè)有限公司，國藥準字H12020051，批號120402);注射用生理鹽水(哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司，批號120723A6);氯仿(分析純，天津市富宇精細化工有限公司，批號101206);無水氯化鈣(分析純，汕頭市西隴化工廠有限公司，批號0903122);烏來糖(化學純，上海山浦化工有限公司，批號20080110);碘伏(山東利爾康消毒科技股份有限公司，批號120311A)。

1．3 儀器 98－1－B型電子調溫電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司);SZKW－D－1型電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器廠);SHB－Ⅲ型循環(huán)水真空泵(鄭州長盛實驗儀器有限公司);R－201型旋轉蒸發(fā)器(上海申勝生物技術有限公司);BL－420S型BL系列生物機能實驗系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)。

2 實驗方法

2．1 實驗動物的篩選 昆明種小鼠、Wistar大鼠分別適應性喂養(yǎng)7天后，選取健康小鼠、大鼠，再以Ⅱ導聯(lián)心電圖篩選出心電圖正常的小鼠84只、大鼠64只，進行實驗。

2．2 氯仿引起小鼠心室顫動實驗 把經(jīng)過篩選的84只小鼠按體質量隨機分為7組，每組12只(雌雄各半)，即烏腺金絲桃提取物組(以下簡稱烏提組)、丹參提取物組(以下簡稱丹提組)、烏腺金絲桃與丹參1∶1提取物組(以下簡稱1∶1組)、烏腺金絲桃與丹參1∶2提取物組(以下簡稱1∶2組)、烏腺金絲桃與丹參2∶1提取物組(以下簡稱2∶1組)、鹽酸普萘洛爾組即陽性藥物對照組(以下稱簡陽對組)、模型對照組(以下簡稱模型組)。烏提組、丹提組、1∶1 組、1∶2 組、2∶1 組分別給予相應提取物，烏腺金絲桃給藥劑量8．32g/kg(按生藥，下同)，丹參給藥劑量8．32g/kg，陽對組給予鹽酸普萘洛爾3．90mg/kg，模型組給予生理鹽水，各組實驗動物均經(jīng)灌胃給藥，灌胃體積為0．2ml/10g，1次/天，連續(xù)灌胃14天。末次給藥1h后，依次將小鼠放入含有3～4ml氯仿的棉球(更換小鼠時以氯仿飽和棉球)倒置的600ml燒杯內，至呼吸停止立即取出剖開胸腔，肉眼檢查心律，統(tǒng)計心室顫動發(fā)生率［4］。

2．3 氯化鈣誘發(fā)大鼠心律失常實驗 將篩選后的64只大鼠按體質量隨機分為8組，每組8只(雌雄各4只)，即烏提組、丹提組、1∶1 組、1∶2 組、2∶1 組、鹽酸維拉帕米組即陽性藥物對照組(以下簡稱陽對組)、模型組、空白對照組(以下簡稱空白組)。烏提組、丹提組、1:1組、1:2組、2:1組分別給予相應提取物，烏腺金絲桃給藥劑量為5．76g/kg，丹參給藥劑量為5．76g/kg，陽對組給予鹽酸維拉帕米片43．2mg/kg，模型組和空白組均給以相應體積的生理鹽水，灌胃體積為1ml/100g，1次/天，連續(xù)灌胃14天。末次給藥1小時后，20%烏拉坦 0．6ml/100g(1．2g/kg)［5］腹腔麻醉，仰位固定，碘伏棉球消毒手術部位，暴露一側股靜脈以備給藥。按使用說明連接BL系列生物機能實驗系統(tǒng)，記錄標準正常Ⅱ導聯(lián)心電圖，10min后，烏提組、丹提組、1∶1 組、1∶2 組、2∶1 組、陽對組、模型組以2．5%氯化鈣0．4ml/100g(100mg/kg)［6］，空白組以生理鹽水 0．4ml/100g，10s內勻速推注，并記錄心電圖Ⅱ導聯(lián)，觀察其心律失常情況，實驗結果以心律失常潛伏時間、心律失常持續(xù)時間、死亡率做指標統(tǒng)計受試藥物抗心律失常作用。

3 實驗結果

3．1 實驗各組小鼠心室顫動發(fā)生率比較 表1提示各給藥組小鼠心室顫動發(fā)生率分別為:模型組91.67%、陽對組 16．67%、烏提組 50．0%、丹提組58.33%、1∶1 組 41．67%、1∶2 組 25．0%、2∶1 組66.67%，與模型組比較，1∶1組、1∶2組均有非常顯著性差異(P ＜0．01)，烏提組有顯著性差異(P ＜0．05)。說明烏腺金絲桃提取物、1∶1提取物、1∶2提取物、2∶1提取物均能不同程度降低氯仿誘發(fā)的小鼠心室顫動發(fā)生率，對小鼠心臟均有一定保護作用，其中1∶1提取物、1∶2提取物對心室顫動小鼠心臟保護作用尤為顯著。

表1 各實驗組小鼠氯仿誘發(fā)心室顫動發(fā)生率比較

圖1 正常心電圖

圖2 注射氯化鈣溶液后心電圖

圖3 恢復正常節(jié)律后心電圖

3．2 實驗各組大鼠心律失常潛伏時間、持續(xù)時間比較 經(jīng)股靜脈注射氯化鈣溶液前后大鼠心電圖如圖1、2和3，圖1為注藥前正常心電圖，圖2為注射氯化鈣溶液后心電圖，圖3為恢復正常節(jié)律后心電圖。表2表明，各給藥組心律失常潛伏時間與模型組比較，烏提組、丹提組、1∶1 組均有顯著性差異(P ＜0．05)，陽對組、1∶2組有非常顯著性差異(P＜0．01)。與模型組比較，各給藥組大鼠心律失常持續(xù)時間，烏提組、1∶1組有顯著性差異(P＜0．05)，陽對組、1∶2組有非常顯著性差異(P＜0．01)。說明烏腺金絲桃提取物、丹參提取物、1∶1提取物、1∶2提取物均能延長大鼠心律失常潛伏時間、縮短心律失常持續(xù)時間，具有抗氯化鈣引起的大鼠心律失常作用，其中1∶2提取物對氯化鈣引起心律失常大鼠心臟保護作用優(yōu)于其他提取物。

表2 各實驗組大鼠氯化鈣引起心律失常潛伏時間、持續(xù)時間比較(±s)

表2 各實驗組大鼠氯化鈣引起心律失常潛伏時間、持續(xù)時間比較(±s)

注:與模型組比較，*P ＜0．05，＊＊P ＜0．01。

組別 數(shù)量(只)心律失常潛伏時間(s)心律失常持續(xù)時間(s)空白組8－－模型組 8 7．75 ±1．76 113．80 ±3．81陽對組 8 15．10±2．58＊＊ 84．95±4．84＊＊烏提組 8 11．42 ±1．96* 104．02 ±3．202*丹提組 8 11．38 ±1．77* 104．99 ±7．061∶1 組 8 11．97 ±2．28* 102．55 ±4．44*1∶2 組 8 13．35 ±2．09＊＊ 93．13 ±2．94＊＊2∶1 組9．52 ±2．18 108．38 ±5．068

3．3 各實驗組氯化鈣引起心律失常大鼠死亡率比較

由表3可見，陽對組死亡率為12．5%，烏提組死亡率為37．5%，丹提組死亡率為 50．0%，1∶1組死亡率為25．0%，1∶2 組死亡率為12．5%，2∶1 組死亡率為75.0%。與模型組比較，陽對組、1∶2有非常顯著性差異(P ＜0．01)，烏提組、1∶1組有顯著性差異(P ＜0.05)，說明烏腺金絲桃提取物、烏腺金絲桃與丹參1∶1提取物、烏腺金絲桃與丹參1∶2提取物能降低氯化鈣引起心律失常大鼠死亡率，對心臟有保護作用，且烏腺金絲桃與丹參1∶2提取物抗心律失常作用優(yōu)于其他提取物。

表3 各實驗組大鼠死亡率比較

4 討論

心律失常(cardiac arrhythmia)是指心臟沖動的頻率、節(jié)律、起源部位、傳導速度或激動次序的異常［7］。心律失常是疾病名，可作為臨床診斷單獨發(fā)生，也是癥狀，作為合并癥、并發(fā)癥存在。心律失常在冠心病、擴張性心肌病等心血管疾病中發(fā)病廣，是危害較為嚴重的疾病之一。心律失常的造模方法有多種且導致心律失常的機制各異。本實驗選取氯仿和氯化鈣建立心律失常模型。氯仿誘發(fā)的小鼠心室纖顫與植物神經(jīng)紊亂及遞質釋放有關［8］。氯化鈣誘發(fā)心律失常的作用機制較復雜，不僅是鈣離子對心臟的直接作用，而且與腎上腺素能神經(jīng)對心臟的作用也有關。本實驗研究結果表明，烏腺金絲桃與丹參1:2配伍提取物組能明顯降低氯仿引起小鼠心室顫動發(fā)生率、延長氯化鈣誘發(fā)大鼠心律失常潛伏時間、縮短氯化鈣誘發(fā)大鼠心律失常持續(xù)時間。且在相同實驗條件下，對實驗動物心臟的保護作用優(yōu)于單味藥組和其他配伍組，本實驗結果將為后續(xù)研究提供實驗基礎。

［1］ 李冀，滕林，高彥宇．烏腺金絲桃抗心律失常作用的研究［J］．中醫(yī)藥信息，2008，25(6):32－33．

［2］ 李冀，滕林，高彥宇．烏腺金絲桃提取物對小鼠心肌缺血的保護作用［J］．中國中醫(yī)藥信息雜志，2009，16(1):38－39．

［3］ 李冀，曹明明，高彥宇．烏腺金絲桃與丹參配伍對心肌缺血模型動物影響的研究［J］．中醫(yī)藥學報，2012，40(1):17－19．

［4］ 魏偉，吳希美，李元建．藥理實驗方法學［M］．北京:人民衛(wèi)生出版社，2010:978－982．

［5］ 胡久略，黃顯章．炙甘草湯抗心律失常作用的實驗研究［J］．時珍國醫(yī)國藥，2008，19(5):1189－1190．

［6］ 劉演波，劉苗苗，毛飛鵬，等．牛磺酸對氯化鈣引起的大鼠心律失常的保護作用［J］．廣東藥學院學報，1998，14(4):331－332．

［7］ 葉任高，陸再英．內科學［M］．北京:人民衛(wèi)生出版社，2007:178．

［8］ 李敏，朱靜，王祥．充血性心力衰竭患者血漿腦鈉素水平與其心功能關系的研究［J］．心血管康復醫(yī)學雜志，2007，16(1):30－32．