田春雨 薄海美 喇孝瑾 李繼安 韓 剛 江春花 董玉山 杜晨光

(河北聯(lián)合大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，①臨床醫(yī)學(xué)院 河北唐山 063000)

糖尿病發(fā)病率高、并發(fā)癥多、危害較大，為當(dāng)今中外醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)。其屬于中醫(yī)消渴病范疇。特別是2型糖尿病肥胖者早期與中醫(yī)的脾癉相類(lèi)似。根據(jù)古今文獻(xiàn)研究，歷代醫(yī)家非常重視脾腎二臟虛弱及飲食所傷在消渴發(fā)病中的作用。我們參考了李東垣《脾胃論》治療消渴的“升陽(yáng)降火湯”［1］組方原則及《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》滋膵飲的藥物配伍，自擬了雙益降糖方(由黃連、黃芪、葛根、山茱萸等藥組成)，在臨床上取得了良好的療效。本實(shí)驗(yàn)研究以該方中小檗堿為質(zhì)量控制指標(biāo)之一，優(yōu)選提取工藝，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 高效液相色譜儀(Waters 1210);BS224S精密電子天平。鹽酸小檗堿(購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110713-200208)，流動(dòng)相所用試劑均為色譜純。黃連、黃芪、葛根、山茱萸等藥物購(gòu)于唐山市北京同仁堂藥店。

1.2 方法 含量測(cè)定方法。色譜柱為HypersilODS5μm(4.6mm×100mm)，流動(dòng)相為乙腈:0.05mol磷酸二氫鉀=22:78，流速:1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng):345nm。對(duì)照品溶液制備:精密稱(chēng)取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，用甲醇制成每1mL含0.01mg的溶液。供試品溶液制備:取雙益降糖復(fù)方醇提干膏0.05g，加鹽酸-乙醇溶液(1→100)100mL，超聲提取，濾過(guò)，取濾液即得［2］。分別配制不同濃度的鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，以所得峰面積A為縱坐標(biāo)、鹽酸小檗堿含量C為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，回歸方程為:A=100.15C-115.67，r=0.9984，結(jié)果進(jìn)樣量在0.105～40.305μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。精密吸取同一對(duì)照品溶液20μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果鹽酸小檗堿對(duì)照品峰面積值的RSD=1.31%(n=6)，表明儀器精密度良好;按照供試溶液的制備方法操作，考察同一供試品溶液12h內(nèi)測(cè)定穩(wěn)定性，結(jié)果RSD=1.18%(n=6)，表明本品在12h內(nèi)測(cè)定穩(wěn)定性良好。按照供試溶液的制備方法操作，對(duì)同一樣品依法測(cè)定6次，結(jié)果RSD=1.34%(n=6)，表明本法重復(fù)性良好。平均回收率為99.45%，RSD=1.28%(n=6)。

2 結(jié)果

2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 對(duì)主要因素乙醇濃度、溶劑量、回流提取時(shí)間及提取次數(shù)進(jìn)行L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，對(duì)提取的干膏進(jìn)行小檗堿含量測(cè)定。以小檗堿含量為指標(biāo)，正交因素水平表及結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

表2 提取工藝L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果

2.2 方差分析 按小檗堿的含量進(jìn)行方差分析，A有顯著影響，影響因素A＞C＞B＞D，最優(yōu)組合A2B1C3D2，即乙醇濃度為30%，加醇量為6倍，提取2次，每次1.5h。

表3 小檗堿含量方差分析

2.3 驗(yàn)證試驗(yàn) 為驗(yàn)證制備工藝的可靠性，在A2B1C3D2條件下對(duì)6個(gè)批次的樣品進(jìn)行了試驗(yàn)，結(jié)果小檗堿含量分別為3.1925%、3.1863%、3.1902%、3.1878%、3.1701%、3.1705%，RSD為0.31%(n=6)。表明本試驗(yàn)優(yōu)選的工藝合理。

3 討論

3.1 古今文獻(xiàn)研究 歷代醫(yī)家非常重視脾腎二臟虛弱及飲食所傷在消渴發(fā)病中的作用。如《靈樞·本臟篇》認(rèn)為:“脾脆則善病消癉易傷，腎脆則善病消癉易傷?！贝苏f(shuō)明脾腎虧虛是糖尿病易發(fā)病的基礎(chǔ)?！端貑?wèn)·奇病論》又曰:“脾癉，此肥美之所發(fā)也，此人必?cái)?shù)食甘美而多肥也，肥者令人內(nèi)熱，甘者令人中滿(mǎn)，故其氣上溢，轉(zhuǎn)為消渴”。這說(shuō)明古人已經(jīng)清楚認(rèn)識(shí)到飲食不節(jié)是糖尿病發(fā)病的重要誘因。脾虧運(yùn)化力弱，肥甘太過(guò)容易困脾，水谷精微無(wú)法上輸于肺，肺津干涸，化燥生熱則口渴喜飲;肺津不足，則不能濡養(yǎng)胃陰致胃火亢盛，腐熟水谷力強(qiáng)，故多食易饑。腎虧則“下焦命門(mén)火不歸元，游于肺則為上消，游于胃則為中消?！边@說(shuō)明脾腎虧虛是導(dǎo)致消渴之本，肺胃有熱則是消渴之標(biāo)，肥甘厚味是致病之因。根據(jù)此病因病機(jī)特點(diǎn)，我們參考了李東垣《脾胃論》治療消渴的“升陽(yáng)降火湯”［1］組方原則及《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》滋膵飲的藥物配伍，自擬了雙益降糖方，方中黃連清熱燥濕，瀉火解毒，以治其標(biāo);黃芪益氣健脾，山萸肉補(bǔ)腎澀精，葛根升發(fā)脾胃之陽(yáng)氣，生津止渴，以固其本，在臨床使用中取得了良好的療效。

3.2 前期研究 表明雙益降糖方對(duì)2型糖尿病大鼠具有降糖、降脂的作用，其作用機(jī)制可能與胰島細(xì)胞保護(hù)和改善胰島素抵抗有關(guān)［3］。小檗堿為該方中黃連的有效成分，可明顯降低糖尿病大鼠血糖水平，改善2型糖尿病大鼠的糖耐量，提高胰島素的敏感性［4］，因此我們將其作為制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)之一，進(jìn)行正交篩選。

3.3 小檗堿 為一種季銨生物堿，具有水溶性，但其鹽類(lèi)在水中的溶解度較小，本實(shí)驗(yàn)選用不同濃度乙醇回流提取，對(duì)提取工藝參數(shù)進(jìn)行了正交試驗(yàn)優(yōu)選，乙醇濃度對(duì)小檗堿的提取有顯著影響，正交試驗(yàn)優(yōu)選得到的工藝穩(wěn)定、可行。因此本實(shí)驗(yàn)的研究可為雙益降糖方制劑工藝及質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的制定奠定基礎(chǔ)。

［1］李步滿(mǎn)，吳深濤.李東垣陰火理論與消渴病治療思路［J］.河北中醫(yī)，2007，29(5):451

［2］徐 媛，張 琰，劉新友，等.正交試驗(yàn)法優(yōu)選黃連中小檗堿提取工藝［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2011，18(5):60

［3］薄海美，田春雨，李繼安.單味中藥中有效成分對(duì)糖尿病的治療作用［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2010，37(7):432

［4］劉志霞，張艷平，吳范武，等.雙益方改善2型糖尿病大鼠糖、脂代謝及作用機(jī)制的初步研究［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2012，39(2):221