李艷敏，臧憲朋，王榮洲，林云彪，周曉紅

(1.浙江省植物保護(hù)檢疫局，浙江杭州 310020;2.寧波出入境檢驗(yàn)檢疫局，浙江寧波 315000;3.衢州市柯城區(qū)植物保護(hù)與檢疫站，浙江衢州 324000)

黃瓜綠斑駁花葉病毒 (cucumber green mosaic mottle virus，CGMMV)為煙草花葉病毒屬，是我國(guó)進(jìn)境植物檢疫性有害生物，也是全國(guó)農(nóng)業(yè)植物檢疫性有害生物［1］，其危害嚴(yán)重、致病性強(qiáng)、防治難度大，嚴(yán)重威脅西瓜、黃瓜、南瓜等葫蘆科作物生產(chǎn)［2］。感病作物一旦染病不但減產(chǎn)，而且因果實(shí)味苦不能食用，一般損失可達(dá)15% ～30%，嚴(yán)重的甚至絕收。我國(guó)于2002年從入境的植物種子中截獲該病毒，此病于2006年在遼寧省蓋州市首次發(fā)生，至2012年已在我國(guó)遼寧、上海、江蘇、浙江、安徽、湖北、湖南、廣東、廣西、海南等10省 (市)發(fā)生。浙江省2011年7月首次在溫嶺、樂(lè)清兩地發(fā)現(xiàn)并確診，之后浙江省連續(xù)3年開(kāi)展疫情普查，并對(duì)各地采集疑似樣品送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行室內(nèi)檢測(cè)，以便及時(shí)確診，及早防控。

1 材料與方法

1.1 材料

病毒檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)安德珍 (Adgen)生物公司，送檢樣品包括西瓜種子、砧木種子、西瓜和甜瓜葉片等，為浙江省內(nèi)各地區(qū)送檢的疑似樣品。

1.2 方法

采用酶聯(lián)免疫雙抗體夾心 (DAS-ELISA)法，按照試劑盒說(shuō)明用包被緩沖液稀釋包被抗體，每孔100μL，置入一個(gè)有潮濕紙巾的塑料盒中，37℃孵育1 h;用PBST洗板3～4次，最后將孔板在干紙巾上拍干。提取1 g待測(cè)樣品加5 mL常規(guī)提取緩沖液研缽中研磨，沉淀后取上清液作為待檢測(cè)樣品。分別將陰性、陽(yáng)性對(duì)照和待檢樣品各100μL加入已包被孔中，4℃過(guò)夜培養(yǎng) (至少16 h)，洗板3～4次，每孔加入100μL稀釋好的酶標(biāo)抗體，37℃溫育1 h，再次洗板4～5次，每孔加入100μL濃度為1 mg·mL-1pNPP(對(duì)硝基苯磷酸鈉)底物溶液，室溫下避光培養(yǎng)1 h。用酶標(biāo)儀在405 nm讀取吸光度，吸光度大于陰性對(duì)照則為陽(yáng)性。

2 結(jié)果和分析

2012年4-9月共檢測(cè)樣品249份，以西瓜葉片為主，有少量西瓜及砧木種子。其中陽(yáng)性樣品124個(gè)，占49.8%，溫嶺送檢的148份樣品中，陽(yáng)性樣品52個(gè)，檢出率達(dá)35.1%。從樣品類型看，葉片214份，陽(yáng)性114份;種子28份，陽(yáng)性6份;土壤9份，陽(yáng)性4份，說(shuō)明土壤帶毒，但關(guān)于土壤能否用此方法檢測(cè)尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。2013年1-7月共檢測(cè)樣品98份，除西瓜嫁接苗、砧木種子外，還有葫蘆、甜瓜、長(zhǎng)瓜、蔓瓜、黃瓜等一些其他葫蘆科作物葉片和種子，共檢出陽(yáng)性樣品37份，檢出率37.8%。其中砧木種子樣品8份，陽(yáng)性樣品3份，檢出率37.5%;西瓜嫁接苗樣品39份，陽(yáng)性樣品16份，檢出率41%。詳見(jiàn)表1。

表1 2012-2013年浙江省CGMMV檢測(cè)樣品結(jié)果分布

2012年浙江省檢出黃瓜綠斑駁花葉病毒病的縣 (市、區(qū))有14個(gè)，分別是溫州樂(lè)清，杭州建德、蕭山，嘉興南湖，金華武義，麗水青田，舟山普陀、定海，臺(tái)州溫嶺、路橋、黃巖、三門、臨海、椒江。其中，溫嶺情況最為嚴(yán)重，發(fā)病植株的接穗品種有綠豐牌早佳8424、好利得牌早佳8424、天山牌早佳8424，砧木有京研牌京欣砧王、京研牌京欣砧1號(hào)、京研牌京欣砧冠、甬禾牌甬砧1號(hào)、神通力、京域牌威力砧2號(hào)、昌砧牌韓砧1號(hào)。帶毒的瓜苗葉片多是嫁接而來(lái)。2013年的檢出地中又新增了金華的浦江、磐安、東陽(yáng)3地，其種植的浙蜜5號(hào)嫁接苗帶病，而這些嫁接苗均來(lái)自磐安育苗場(chǎng)。2012年蕭山、路橋、臨海、樂(lè)清、南湖等一些疫點(diǎn)經(jīng)過(guò)合理輪作、不再種植西瓜等措施，在普查過(guò)程中未再檢測(cè)到發(fā)病。

3 討論與防控建議

3.1 發(fā)病原因

溫嶺市種植西瓜最多，從2012-2013年檢測(cè)結(jié)果看，其送檢樣品也最多，檢出率較高，具有代表性。對(duì)照2011年中國(guó)檢科院植檢所檢測(cè)鑒定結(jié)果，溫嶺市送檢的19份西瓜種子樣品全部為陰性，而18份砧木種子有9份呈陽(yáng)性，品種為京欣砧王、京欣砧冠、京欣砧1號(hào)、神通力、韓砧1號(hào)、甬砧1號(hào)、威力砧2號(hào)等，因此，嫁接西瓜植株發(fā)病主要由砧木 (蒲瓜)種子帶毒引起［3］。建德市更樓街道石嶺村2012年發(fā)病面積2.4 hm2，2013年繼續(xù)種植西瓜，送檢樣品檢出率很高，這主要是由于在發(fā)病田不采取換茬輪作所致，在發(fā)病地繼續(xù)種植葫蘆科作物，發(fā)病概率將會(huì)提高。3.2 防控建議

對(duì)所有西瓜及砧木種子，首先應(yīng)加強(qiáng)產(chǎn)地檢疫，確保生產(chǎn)地土壤無(wú)毒，種子也必須經(jīng)過(guò)高溫等消毒處理，再經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)安全后才可流通市場(chǎng)。在西瓜及砧木種子、瓜苗銷售旺季開(kāi)展市場(chǎng)檢查和抽檢，檢查有無(wú)檢疫證，還要取樣帶回實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，對(duì)檢測(cè)出帶毒的種子一律禁止銷售，確保市場(chǎng)銷售的種子安全無(wú)疫病。其次做好定點(diǎn)監(jiān)測(cè)，在西瓜種植較多的地方設(shè)置黃瓜綠斑駁花葉病毒病疫情監(jiān)測(cè)點(diǎn)，抓好田間監(jiān)控，做到“早發(fā)現(xiàn)、早防控”。加大宣傳力度，通過(guò)科技下鄉(xiāng)，知識(shí)入戶等方式，增加農(nóng)戶的防控意識(shí)。再次要做好農(nóng)業(yè)防治，合理輪作倒茬。對(duì)種子要及時(shí)進(jìn)行消毒處理，如干熱處理或藥劑消毒，也可將二者結(jié)合。干熱處理的方法是，把砧木種子放入40℃恒溫箱中處理24 h，再72℃處理72 h，然后用清水浸泡種子4 h催芽播種。藥劑消毒即將砧木種子放到10%磷酸三鈉溶液中浸泡20～30 min，然后用清水洗凈催芽播種。對(duì)已經(jīng)發(fā)生黃瓜綠斑駁花葉病毒病的土地，第2年改種其他非寄主作物，連續(xù)2年不得再種植西瓜。黃瓜綠斑駁花葉病毒極易通過(guò)汁液摩擦、葉片接觸、嫁接、農(nóng)事操作等非介體傳播，一旦田間出現(xiàn)病苗，即使比例很低，也會(huì)以此為初侵染源傳播開(kāi)來(lái)［4］。因此對(duì)染病植株應(yīng)及早拔除并銷毀，防止接觸傳染。

［1］ 商明清，張永江，趙文軍，等.山東省黃瓜綠斑駁花葉病毒病田間調(diào)查與檢測(cè)鑒定［J］.中國(guó)植保導(dǎo)刊，2012，32(3):50-52.

［2］ 蔡明，江冬，張麗英，等.黃瓜綠斑花葉病毒病種子處理試驗(yàn)研究［J］.植物檢疫，2011(1):62-63.

［3］ 李云明，顧云琴，項(xiàng)順堯，等.黃瓜綠斑駁花葉病毒病危害西瓜特點(diǎn)及防治技術(shù) ［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2012(7):175.

［4］ 秦碧霞，蔡健和，陸秀紅，等.葫蘆種子傳黃瓜綠斑駁花葉病毒的檢測(cè)［J］.植物保護(hù)，2011，37(3):109-112.