李軼輝

（中國(guó)人民解放軍第163醫(yī)院普外科，長(zhǎng)沙 410003）

癌胚抗原（CEA）和甲胎蛋白（AFP）等多種指標(biāo)在腫瘤患者的預(yù)后評(píng)價(jià)中發(fā)揮重要作用［1］，多種腫瘤患者血清中存在CEA增高的現(xiàn)象。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，有學(xué)者［2－4］發(fā)現(xiàn)大腸癌患者外周血中有高水平CEA mRNA的表達(dá)，較CEA檢測(cè)具有更高的敏感性。CK19為上皮細(xì)胞角蛋白，由于CK19mRNA在細(xì)胞外環(huán)境中的不穩(wěn)定性，患者血中CK19mRNA的檢測(cè)有助于腫瘤患者的診斷。本研究旨在探討大腸癌患者血清中CEA、CEA mRNA和CK19 mRNA檢測(cè)的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

2008年9月～2011年8月期間本院收治的大腸癌患者48例，其中男30例，女18例，年齡29～78歲，平均（56.9±7.1）歲 。組織學(xué)類型：管狀腺癌19例、乳頭狀癌16例、黏液腺癌13例。Dukes分期：A期14例，B期17例，C期12例，D期5例。腫瘤部位：結(jié)腸癌26例，直腸癌22例。

1.2 方法

清晨空腹抽取肘靜脈血3mL，3 000r／min離心5min，分離血清，放射免疫分析法檢測(cè)血清中CEA水平；反轉(zhuǎn)錄酶－聚合酶鏈鎖反應(yīng)（RT－PCR）法檢測(cè)血清中CEA mRNA和CK19mRNA 水平。CEA＞5ng／mL為陽(yáng)性；CEA mRNA陽(yáng)性擴(kuò)增條帶為199bp；CK19mRNA陽(yáng)性擴(kuò)增條帶為200bp。分析血清CEA、CEA mRNA、CK19mRNA水平與大腸癌患者病理因素關(guān)系，比較CEA、CEA mRNA、CK19mRNA單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件，兩組均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清CEA、CEA mRNA、CK19mRNA水平與大腸癌患者病理因素關(guān)系

大腸癌患者血清中CEA、CEA mRNA、CK19mRNA水平檢測(cè)顯示，上述各指標(biāo)Duckes C＋D期表達(dá)率明顯高于Duckes A＋B期患者（P＜0.05）（見(jiàn)表1）。

表1 血清CEA、CEA mRNA、CK19mRNA水平與大腸癌患者病理因素關(guān)系（n）

2.2 血清CEA、CEA mRNA、CK19mRNA聯(lián)合檢測(cè)

CEA＋CEA mRNA＋CK19mRNA聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率為87.5%，明顯高于CEA、CEA mRNA、CK19mRNA任何1項(xiàng)檢測(cè)的陽(yáng)性率（P＜0.01），也明顯高于CEA＋CEA mRNA、CEA＋CK19mRNA、CEA mRNA＋CK19mRNA任何2項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率（P＜0.05）（見(jiàn)表2）。

3 討論

腫瘤原發(fā)灶生長(zhǎng)到一定程度時(shí)，腫瘤細(xì)胞脫落，通過(guò)血液循環(huán)侵襲其它組織器官，其中大部分的腫瘤細(xì)胞被機(jī)體免疫系統(tǒng)清除，少數(shù)腫瘤細(xì)胞惡性程度較高，最終形成轉(zhuǎn)移灶，即發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移［5－7］。血液循環(huán)中的腫瘤細(xì)胞數(shù)量較少，PCR技術(shù)具有較高的敏感性和特異性，在腫瘤細(xì)胞血清學(xué)檢測(cè)方面發(fā)揮了重要的作用［8，9］。

表2 血清CEA、CEA mRNA、CK19mRNA聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果

CEA為特異性較高的腫瘤相關(guān)抗原，正常人體內(nèi)表達(dá)極少；CK19為上皮細(xì)胞角蛋白，是檢測(cè)大腸癌的有效標(biāo)記物；由于以上兩者表達(dá)的不穩(wěn)定性，因此其在血清中的表達(dá)水平可有助于對(duì)腫瘤的診斷。而對(duì)腫瘤早期轉(zhuǎn)移的準(zhǔn)確診斷，有助于為是否術(shù)后進(jìn)行化療、判斷療效等提供一定的指導(dǎo)意義。RT－PCR法檢測(cè)外周血中 CEA mRNA、CK19 mRNA具有較高的敏感性，國(guó)外學(xué)者［10－13］很早以前就利用此法檢測(cè)血中CEA mRNA、CK19mRNA水平，也報(bào)道了各組織中CEA mRNA、CK19mRNA表達(dá)的敏感性和特異性。

本研究用RT－PCR法檢測(cè)了大腸癌患者血清中CEA mRNA、CK19mRNA水平，并用放射免疫法測(cè)定了CEA的水平。結(jié)果顯示，CEA mRNA、CK19mRNA的陽(yáng)性率為62.5%，與其他學(xué)者［14，15］的研究相近。腫瘤病理學(xué)與外周血中CEA、CEA mRNA、CK19mRNA關(guān)系的研究發(fā)現(xiàn)，其與腫瘤大體分型無(wú)明顯相關(guān)，但與Dukes分期有明顯相關(guān)性，可見(jiàn)以上三者可反映病情的嚴(yán)重程度及預(yù)后情況。外周血CEA、CEA mRNA、CK19mRNA的檢出陽(yáng)性率分別為45.8%、62.5%、62.5%，聯(lián)合檢測(cè)分析時(shí)，3項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率明顯高于雙項(xiàng)及單項(xiàng)檢測(cè)的陽(yáng)性率，可見(jiàn)多指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)能提高陽(yáng)性率，對(duì)預(yù)后判斷具有重要價(jià)值。

綜上所述，基因水平的檢測(cè)比蛋白水平檢測(cè)更為敏感，大腸癌外周血中CEA mRNA、CK19mRNA的檢測(cè)有助于疾病的預(yù)后判斷，聯(lián)合檢測(cè)大腸癌患者血清中CEA、CEA mRNA、CK19mRNA的陽(yáng)性率高于單一指標(biāo)，增大預(yù)后判斷價(jià)值。

［1］魏敏，魯懷偉，程義壯.腫瘤標(biāo)志物 CEA、CA19－9和CA242聯(lián)合檢測(cè)在診斷老年胃癌患者中的臨床意義［J］.中外醫(yī)學(xué)研究，2012，10（17）：82－83.

［2］秦海春，劉俊，杜廷義，等.大腸癌手術(shù)前后外周血CEA蛋白、CEA mRNA的變化及臨床意義［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2012，32（3）：499－500.

［3］秦海春，劉俊，杜廷義，等.CEA蛋白、CEA mRNA在大腸癌診斷 中 的 應(yīng) 用 價(jià) 值 ［J］.現(xiàn) 代 預(yù) 防 醫(yī) 學(xué)，2012，39（9）：2255－2256.

［4］費(fèi)建東，聶雙發(fā)，胡曉峰，等.胃癌患者外周血微轉(zhuǎn)移指標(biāo)的檢測(cè)及意義［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2011，31（22）：4319－4321.

［5］Iwasaki T，Yamakawa M，Asaoka A，et al.Anti－angiogenesis activities of novel peptide complexes：mitochondria－disruptive 9mer peptides conjugated with the integrin alpha V beta 3－h(huán)oming cyclic RGD motif［J］.Biosci Biotechnol Biochem，2012，76（11）：2044－2048.

［6］Yamatodani T，Holmqvist B，Kjellén E，et al.Using intravital microscopy to observe bevacizumab－mediated antiangiogenesis in human head and neck squamous cell carcinoma xenografts［J］.Acta Otolaryngol，2012，132（12）：1324－1333.

［7］Wang JB，Wang MD，Li EX，et al.Advances and prospects of anginex as a promising anti－angiogenesis and anti－tumor agent［J］.Peptides，2012，38（2）：457－462.

［8］Seo Y，Aparici CM，Cooperberg MR，et al.In vivo tumor grading of prostate cancer using quantitative 111In－capromab pendetide SPECT／CT［J］.J Nucl Med，2010，51（1）：31－36.

［9］Hautmann S，Beitz S，Naumann M，et al.Extended sentinel lymph node dissection in radical prostatectomy for prostate cancer：a study in the Kiel risk population［J］.Urologe A，2008，47（3）：299－303.

［10］Liefers GJ，Cleton－Jansen AM，van de Velde CJ，et al.Micrometastases and survival in stage II colorectal cancer［J］.N Engl J Med，1998，339（4）：223－228.

［11］Wong IH，Yeo W，Chan AT，et al.Quantitative relationship of the circulating tumor burden assessed by reverse transcription－polymerase chainreaction for cytokeratin 19 mRNA in peripheral blood of colorectal cancer patients with Dukes＇stage，serumcarcinoembryonic antigen level and tumor progression［J］.Cancer Lett，2001，162（1）：65－73.

［12］Hermunen K，Haglund C，Osterlund P.CEA fluctuation during a single fluorouracil－based chemotherapy cycle for metastatic colorectal cancer［J］.Anticancer Res，2013，33（1）：253－260.

［13］Oloomi M，Bouzari S，Mohagheghi MA，et al.Molecular Markers in Peripheral Blood of Iranian Women with Breast Cancer［J］.Cancer Microenviron，2013，6（1）：109－116.

［14］Guo Y，Wang J，Huang P.Clinical Significance of CK20，CK19，CEA mRNAs in Peripheral Blood from Lung Cancer Patients［J］.Zhongguo Fei Ai Za Zhi，2009，12（9）：1013－1017.

［15］Zheng HY，Chen Q，Ye YB，et al.mRNA expression of CK19 and CEA in peripheral blood of patients with breast cancer detected by real－time quantitative PCR［J］.Zhonghua Yi Xue Za Zhi，2008，88（32）：2267－2270.