張靜艷 孫玉榮

CD151是四次跨膜蛋白家族的重要成員，其具有四次跨膜蛋白的一般特征，參與調(diào)控細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖及移行等過程。研究證實(shí)， CD151在多種腫瘤中存在過表達(dá)，參與了腫瘤的遷移、侵襲，并與腫瘤的預(yù)后呈正相關(guān)[1]。CD151有可能成為腫瘤治療的新靶點(diǎn)。本研究采用S-P免疫組化方法檢測子宮頸癌組織中的CD151的表達(dá)，并結(jié)合臨床病理資料進(jìn)行分析，以探討其與子宮頸癌分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 100例標(biāo)本取自齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腫瘤外科2008-2011年間行根治性切除子宮頸癌患者，且術(shù)后經(jīng)病理學(xué)證實(shí)診斷。按UICC標(biāo)準(zhǔn)分級及TNM分期。所有患者術(shù)前均未接受放、化療。同時選取同一手術(shù)切除標(biāo)本遠(yuǎn)端的正常宮頸黏膜組織24例作為對照。標(biāo)本均在手術(shù)切除后15 min內(nèi)采集。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 鼠抗人CD151單克隆抗體，由美國ABCAM公司生產(chǎn)，免疫組織化學(xué)SP試劑盒和 DAB 顯色試劑盒由上海長島生物技術(shù)公司生產(chǎn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 切片制作 新鮮標(biāo)本于10%中性甲醛溶液固定并過夜，常規(guī)乙醇梯度脫水后，二甲苯透明及石蠟包埋，以 5 μm厚度切片，制成玻片。

1.3.2 免疫組化學(xué)染色 免疫組化主要染色步驟：（1）切片二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化；（2）3%雙氧水甲醇滅活內(nèi)源性過氧化物酶；（3）枸櫞酸緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)；（4）滴加一抗、二抗和三抗并進(jìn)行DAB顯色；（5）蘇木素復(fù)染；（6）常規(guī)脫水、透明、封片。使用PBS代替一抗進(jìn)行陰性對照。

1.3.3 染色結(jié)果判斷 以細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)見棕褐色顆粒為CD151表達(dá)陽性細(xì)胞。每例切片選5個高倍視野，按陽性細(xì)胞總數(shù)占同類計數(shù)細(xì)胞總數(shù)的百分比，將染色結(jié)果分為陰性與陽性，陽性細(xì)胞總面積<50%為陰性、≥50%為陽性[2]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，正態(tài)性檢驗(yàn)用Kolmogorov-Smirnov法，方差齊性檢驗(yàn)用Levene法。參數(shù)檢驗(yàn)用單因素方差分析，組間兩兩比較運(yùn)用SNK檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組化檢測子宮頸癌中CD151蛋白表達(dá) CD151蛋白的陽性信號主要表達(dá)于細(xì)胞膜，呈棕黃色或棕褐色顆粒樣表現(xiàn)。（圖1）。24例正常組織中，CD151陽性表達(dá)3例，陽性率為12.5%（3/24）。100例子宮頸癌患者中，CD151陽性表達(dá)為63例，陽性率為63%。腫瘤組織中CD151陽性表達(dá)率明顯高于正常宮頸組織（P<0.01）。

圖1 CD151在宮頸組織中的表達(dá)（DAB，×400）

2.2 CD151蛋白在子宮頸癌中表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 CD151蛋白表達(dá)與子宮頸癌患者年齡無關(guān)（P>0.05），而與腫瘤TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）。見表1。

表1 CD151蛋白表達(dá)與子宮頸癌患者臨床病理特征間關(guān)系 例（%）

低級別和高級別子宮頸癌中CD151蛋白表達(dá)陽性率分別為31.3%、65.0%（P<0.01）。早期及中晚期子宮頸癌CD151蛋白表達(dá)陽性率分別為45.5%和76.8%（P=0.005）。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組CD151蛋白表達(dá)陽性率分別為76.6%和39.0%，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。

3 討論

子宮頸癌是婦女發(fā)病率最高的惡性腫瘤，在所有惡性腫瘤中所占比例為35%～72%，但由于部分患者發(fā)現(xiàn)較晚，失去治療機(jī)會[3]。

四跨膜蛋白超家族（ transmenbrane 4 super family，TM4SF）可以與自身或其他細(xì)胞表面的整合素、生長因子受體結(jié)合形成四跨膜網(wǎng)絡(luò)，并對后者的生物學(xué)功能產(chǎn)生重要影響[4]，在細(xì)胞的增殖、融合，腫瘤生長、遷移及血管生成中起重要作用[5-6]。四跨膜蛋白超家族已檢出30多個成員，例如CD9、CD82等絕大多數(shù)被認(rèn)為是抑癌基因，其產(chǎn)物與腫瘤發(fā)展、預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。而新近發(fā)現(xiàn)的CD151卻與腫瘤發(fā)生及預(yù)后呈正相關(guān)[7]，并且是該家族成員中唯一的癌基因[8]。

作為四跨膜蛋白家族的重要成員，CD151最早在血小板表面被發(fā)現(xiàn)。其不僅具有四跨膜蛋白的一般特征，如參與細(xì)胞黏附、增殖及血管生成，研究證實(shí)，CD151在多種腫瘤中存在過表達(dá)，并且參與腫瘤細(xì)胞的浸潤、侵襲與轉(zhuǎn)移[9]。鑒于CD151與腫瘤發(fā)展的正相關(guān)性，在腫瘤惡性進(jìn)展中的重要作用，本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)法檢測CD151在子宮頸癌的表達(dá)，并探討其與腫瘤的分化、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

本研究結(jié)果表明，CD151蛋白在子宮頸癌組織中的表達(dá)水平明顯高于正常組織，提示 CD151蛋白與子宮頸癌的發(fā)生呈正相關(guān)。研究結(jié)果表明，CD151在子宮頸癌組織中過表達(dá)與腫瘤的分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等惡性表型明顯有關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)CD151的過表達(dá)參與子宮頸癌的浸潤及轉(zhuǎn)移。因此CD151的檢測可作為子宮頸癌的早期篩查、臨床診斷的指標(biāo)。已有體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)抗CD151抗體可抑制腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移[10]，CD151的檢測有望為子宮頸癌的預(yù)后評價提供一種新的分子生物學(xué)指標(biāo)。

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