唐甜，張子寧，傅雅靜，王亞男，姜擁軍，耿文清，郭曉臨，尚紅

（中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院檢驗科，衛(wèi)生部艾滋病免疫學重點實驗室，沈陽 110001）

T淋巴細胞亞群是免疫系統(tǒng)重要組成部分，在免疫應答過程中發(fā)揮中樞作用。T淋巴細胞亞群通常分為2類：一類是CD4+CD8-T細胞表面僅表達CD4，具有輔助細胞免疫應答和體液免疫應答的作用；另一類是CD4-CD8+T細胞，表面表達CD8，具有細胞毒作用，可特異性殺傷靶細胞。正常人外周血中大部分為CD4或CD8單陽性T細胞，CD4+CD8+雙陽性（double positive，DP）T細胞一般＆lt;5%［1］。通常認為，CD4+CD8+DP T細胞的形成是胸腺中尚未成熟的細胞釋放到外周循環(huán)的結果。但近年的研究顯示，相當數(shù)量的CD4+CD8+DP T細胞存在于人和動物的外周血循環(huán)中。尤其在某些病毒感染性疾病、腫瘤、自身免疫病中，CD4+CD8+DP T細胞顯著增加。但這群細胞對于臨床疾病輔助診斷的意義還不明確。我們通過調查中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院2 939例內科患者以及2 722例健康對照T淋巴細胞亞群檢測結果，分析CD4+CD8+DP T細胞在不同疾病和年齡患者中的變化情況，為進一步明確這類外周血淋巴細胞亞群對疾病的輔助診斷提供基礎資料。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對象：2012年1月至2012年9月首次來我院檢測T淋巴細胞亞群的內科2 939例患者的全血樣本以及健康對照2 722例全血樣本。

1.1.2 試劑和儀器：試劑均購自BD Biosciences公司，包括CD4/CD8/CD3三色試劑、TruCount絕對計數(shù)管、10倍免洗溶血素。BD FACSCalibur流式細胞儀。

1.2 方法

將20 μL CD4/CD8/CD3 TriTEST試劑加入CD4絕對計數(shù)管中，采用反向加樣的方法加入50 μL抗凝全血，室溫避光15 min，加入免洗溶血素450 μL，室溫避光15 min，應用BD FACSCalibur流式細胞儀，F(xiàn)ACS MΜLTISET軟件檢測并進行自動分析，計算DP T細胞的百分含量（CD4+CD8+DP T細胞百分含量＆lt;5%判定為正常，反之判定為異常）［1］。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件包處理，組間差異比較采用Pearson χ2檢驗，P＆lt;0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 全部CD4+CD8+DP T細胞檢測患者的疾病分布

2 939例臨床患者中，腎臟疾病患者1 020例（34.7%），呼吸疾病患者556例（18.9%）、腫瘤患者479例（16.2%）、皮膚病患者294例（10.0%）、風濕免疫病患者262例（8.9%），感染疾病患者171例（5.8%），神經系統(tǒng)疾病患者91例（3.0%）和血液病患者66例（2.2%）。在這些患者中DP T細胞百分含量異常者共141例（4.8%），健康對照組中CD4+CD8+DP T細胞異常者共49例（1.8%），臨床患者與健康對照比較CD4+CD8+DP T細胞異常顯著升高（P＆lt;0.001）。

2.2 不同疾病中CD4+CD8+DP T細胞異常的比例比較

不同疾病中CD4+CD8+DP T細胞異常的例數(shù)與檢測總數(shù)的比率由高到低依次為呼吸疾病、風濕免疫病、腫瘤、感染疾病、腎臟疾病和皮膚病。其中呼吸疾病的CD4+CD8+DP T細胞異常病例數(shù)量占檢測總數(shù)百分比最高，為6.1%（34/556）；風濕免疫病為5.7%（15/262）；腫瘤為5.2%（25/479）；感染疾病為4.7%（8/171）；腎臟疾病為4.3%（44/1020）；皮膚病為3.7%（11/294）；神經系統(tǒng)疾病為3.3%（3/91）；血液病為1.5%（1/66）。呼吸疾病、風濕免疫病、腫瘤和腎臟疾病DP T細胞異?；颊弑壤@著高于健康對照（P＆lt;0.001），感染性疾病和皮膚病DP T細胞異常患者比例也高于健康對照（P分別＆lt;0.01和＆lt;0.05）。神經系統(tǒng)疾病和血液病DP T細胞異?；颊弑壤c健康對照組比較沒有統(tǒng)計學差異（P＆gt;0.05）。

2.3 不同疾病各年齡組CD4+CD8+DP T細胞異常的比例比較

不同疾病CD4+CD8+DP T細胞檢測結果異常的患者根據(jù)年齡分為2組：低年齡組（≤65歲）和高年齡組（＆gt;65歲）。由于感染疾病、神經系統(tǒng)疾病和血液病DP T細胞異常的病例數(shù)＆lt;10，因此未列入統(tǒng)計分析，僅把其余的6組進行分組比較。其中，總體患者高年齡組DP T細胞異常的比例與低年齡組比較差異有統(tǒng)計學意義（8.6%和3.9%，P＆lt;0.001），呼吸系統(tǒng)疾病患者、腫瘤患者的2個年齡組比較高年齡組DP T細胞異常比例也顯著升高（分別為10.0%和3.8%；9.9%和3.8%，P＆lt;0.05），而健康對照高低年齡組間沒有統(tǒng)計學差異（P＆gt;0.05），見表1。

表1 不同疾病中各年齡組CD4+CD8+DP T細胞異常患者比較Tab.1 Abnormal proportion of CD4+CD8+DP T cells among different age groups with different diseases

3 討論

外周血CD4+CD8+DP T細胞是一種CD4和CD8共同表達的雙陽性T淋巴細胞。關于這群細胞的來源尚不明確，以往認為此類細胞屬于發(fā)育未完全的幼稚細胞進入到人體血液中。但是在一些動物研究中顯示，此類細胞具有抗原特異性記憶的功能，能夠產生疫苗誘導的記憶免疫應答［2，3］。此外，DP T細胞對于MHCⅠ和Ⅱ類抗原作用，可以分泌Th1和Th2類細胞因子，對疫苗和自限性病毒感染抗原產生快速免疫應答［4］。Suni等［5］研究使用特異性抗原（CMV和HIV）刺激DP T細胞，結果顯示，DP T細胞具有抗原特異性和增殖活性，在特異性抗原刺激下分泌的細胞因子是CD4+T細胞的8倍。Nam等［3］研究獼猴外周血DP T細胞具有輔助型和細胞毒性兩方面的功能，其細胞毒性活力與CD8+T細胞相當，機制主要是通過穿孔素—顆粒酶途徑殺傷靶細胞。而人類DP T細胞的來源及功能特點尚不清楚，還需要進一步深入研究。

研究發(fā)現(xiàn)，自體免疫病（重癥肌無力、類風濕性關節(jié)炎、多發(fā)性硬化［6］、特發(fā)性血小板減少性紫癜和過敏性皮炎［7］等）以及特殊感染性疾病（HIV［8，9］、EBV［10］和腫瘤［11～13］）DP T百分含量升高。本研究分析發(fā)現(xiàn)，DP T細胞百分含量升高的疾?。ê粑膊?、風濕免疫病、腫瘤、感染疾病、腎臟疾病和皮膚?。┚c各種感染或免疫系統(tǒng)病變密切相關。這些疾病與健康對照比較，DP T細胞百分含量升高尤為明顯，這與以前研究結果基本一致，即主要在感染性疾病、自體免疫病和腫瘤中DP T細胞的百分含量增高。

肺部感染性疾病在臨床十分常見，特別是在免疫力相對低下的老年患者中，粗略判斷感染的大致類型：細菌性感染、病毒性感染、細菌與病毒的混合性感染及寄生蟲感染等。胡莉娜等［14］研究發(fā)現(xiàn)，71例患者中3例肺部感染患者只有雙陽性T細胞絕對含量發(fā)生了改變，而其他指標均無變化，這些能有效提示患者出現(xiàn)了免疫系統(tǒng)的改變，有感染發(fā)生，提示檢測DP T細胞對于急性呼吸系統(tǒng)感染性疾病的診斷具有重要意義。我們研究中發(fā)現(xiàn)34例DP T細胞比例異常的呼吸疾病患者中，肺部感染或合并感染占62%和17%，非感染類疾病僅占15%，可提示感染類疾病中DP T細胞百分含量顯著增加。此外，這些患者中有4例平均年齡70歲的肺部感染患者只有雙陽性T細胞絕對含量發(fā)生了改變，血常規(guī)檢測白細胞、粒細胞和淋巴細胞比率均無增高。這可以有效提示患者出現(xiàn)了免疫系統(tǒng)的改變。老年肺部感染患者臨床表現(xiàn)不典型，常不引起發(fā)熱，1/3老年患者外周血白細胞計數(shù)無明顯升高。由此也提示我們可通過檢測淋巴細胞亞群DP T細胞百分含量升高預示肺部感染發(fā)生。另外，在一些呼吸系統(tǒng)疾病中，腎上腺糖皮質激素作為首選治療或輔助治療藥物，這些藥物可造成白細胞總數(shù)增高，淋巴細胞及嗜酸性粒細胞減少，因此檢測DP T細胞有助于與細菌感染所致白細胞增高進行鑒別。因此認為此檢測對疾病鑒別、治療療效和預后有著重要的臨床意義。

還有些研究表明某些動物胸腺外DP T細胞的數(shù)量與年齡有關，如豬外周DP T細胞［15］、獼猴外周血DP T細胞［16］、鼠小腸DP T細胞都隨年齡增長而增加［17］。Ghia等［18］研究提示隨年齡增長，外周血DP T淋巴細胞不斷累積，可能與免疫衰老的機制和淋巴細胞增殖紊亂相關。而在本研究中我們發(fā)現(xiàn)健康人群中DP T百分含量隨年齡的增長升高不顯著，但是在內科患者中（尤其是呼吸內科及腫瘤內科），DP T百分含量升高的比例隨著年齡的增長明顯。我們推測患者的DP T細胞具有一定的記憶功能和細胞毒性功能，這類細胞隨著年齡的增長以及感染性疾病不斷的累積顯著升高。而在健康人中，缺乏對感染反應的免疫記憶細胞累積，因此升高不明顯，也間接提示了DP T細胞的免疫記憶和細胞殺傷功能。

綜上所述，CD4+CD8+DP T細胞作為一類免疫細胞，在各種感染性疾病患者中，其百分含量有一定程度的升高，提示其可能具有重要的免疫學功能。因此，還需要深入研究CD4+CD8+DP T細胞對疾病診斷的價值，以明確其與疾病發(fā)生和發(fā)展的關系。

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