劉 銘，魏小蘭，陳婷梅，姜 蓉，張 健

(1.安康職業(yè)技術(shù)學(xué)院附屬醫(yī)院，陜西 安康725000；2.重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)系 臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 重慶400016； 3.重慶醫(yī)科大學(xué)干細(xì)胞與組織工程研究室免疫組織化學(xué)室，重慶400016； 4.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院骨科，重慶400016)

鹽溶法構(gòu)建磨損顆粒誘導(dǎo)小鼠顱骨溶解模型方法的建立及評(píng)價(jià)

劉 銘1，魏小蘭1，陳婷梅2，姜 蓉3，張 健4

(1.安康職業(yè)技術(shù)學(xué)院附屬醫(yī)院，陜西 安康725000；2.重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)系 臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 重慶400016； 3.重慶醫(yī)科大學(xué)干細(xì)胞與組織工程研究室免疫組織化學(xué)室，重慶400016； 4.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院骨科，重慶400016)

目的：探討構(gòu)建新型磨損顆粒誘導(dǎo)的骨溶解模型，為研究人工關(guān)節(jié)無(wú)菌性松動(dòng)提供簡(jiǎn)單、方便的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。方法：制備無(wú)菌鹽包埋磨損顆粒；采用隨機(jī)數(shù)字表法將50只BALB/c小鼠分為空白對(duì)照組、純鹽組、氣囊植骨組和鹽包埋磨損顆粒組，其中氣囊植骨組20只，其他各組10只；氣囊植骨組小鼠術(shù)后21 d，余3組術(shù)后14 d獲取小鼠顱骨組織標(biāo)本，HE染色觀察炎細(xì)胞滲出量和骨溶解面積；掃描電鏡觀測(cè)骨片吸收陷窩面積百分比；抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色檢測(cè)破骨細(xì)胞增殖分化。結(jié)果：HE染色，與空白對(duì)照組和純鹽組比較，氣囊植骨組和鹽包埋磨損顆粒組小鼠的炎性細(xì)胞滲出量、骨溶解面積明顯增大(Plt;0.01)；與氣囊植骨組比較，鹽包埋磨損顆粒組小鼠TRAP染色破骨細(xì)胞數(shù)量明顯增多(Plt;0.01)；掃描電鏡觀察，鹽包埋磨損顆粒組小鼠骨片吸收陷窩面積百分比顯著高于氣囊植骨組(Plt;0.01)。結(jié)論：鹽溶法是一種簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、快速準(zhǔn)確的構(gòu)建小鼠顱骨溶解模型方法，能夠真實(shí)模擬人工關(guān)節(jié)松動(dòng)發(fā)生的病理過(guò)程。

磨損顆粒；顱骨溶解；無(wú)菌松動(dòng)；氣囊植骨；小鼠，近交BALBc

人工關(guān)節(jié)置換術(shù)是治療嚴(yán)重關(guān)節(jié)疾患、重塑關(guān)節(jié)功能的重要手段。隨著關(guān)節(jié)置換例數(shù)的增多，假體無(wú)菌松動(dòng)的問(wèn)題日趨嚴(yán)重，二次翻修治療給廣大患者帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)和精神創(chuàng)傷[1]。任何通過(guò)有效的非手術(shù)方式來(lái)預(yù)防和治療人工關(guān)節(jié)無(wú)菌性松動(dòng)一直是關(guān)節(jié)外科的研究熱點(diǎn)。目前研究[2]顯示：導(dǎo)致無(wú)菌性關(guān)節(jié)松動(dòng)的主要原因是磨損顆粒誘導(dǎo)假體周?chē)侨芙?。無(wú)論目前使用藥物還是靶向干預(yù)磨損顆粒誘導(dǎo)假體周?chē)侨芙猬F(xiàn)象，首先需建立簡(jiǎn)單、快捷、經(jīng)濟(jì)、方便、實(shí)用性強(qiáng)的動(dòng)物模型。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者使用最多的是氣囊植骨模型，該造模缺少神經(jīng)血供營(yíng)養(yǎng)支持，不能真實(shí)模擬磨損顆粒在體內(nèi)誘導(dǎo)溶骨的真實(shí)環(huán)境，也不能真實(shí)反映骨組織在重建過(guò)程中成骨細(xì)胞的修復(fù)和破骨細(xì)胞的溶骨的動(dòng)態(tài)平衡。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)鹽溶解理化特性，首次采用鹽結(jié)晶攜帶聚乙烯磨損顆粒置入部分祛除小鼠顱骨外膜的顱頂處，建立無(wú)菌松動(dòng)病理模型。通過(guò)2種建模方法的比較，探討其可行性，為人工關(guān)節(jié)松動(dòng)的研究提供簡(jiǎn)潔的動(dòng)物模型。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、主要試劑和儀器 實(shí)驗(yàn)選用50只近交系雌性 BALB/c 小鼠， 年齡 8～10 周，體質(zhì)量18～20 g，由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(渝)2007-0001，使用許可證號(hào)：SYXK(渝)2007-0001。 TRAP 試劑盒購(gòu)于南京建成公司；聚乙烯微粒購(gòu)于美國(guó) Zimmer 公司， 微粒直徑為2～3 μm。BX-50光學(xué)顯微鏡購(gòu)于日本Olympus公司，S-3000N掃描電鏡購(gòu)于日本日立公司，LEICA RM2135石蠟切片機(jī)購(gòu)于德國(guó)Leica公司。

1.2 鹽結(jié)晶攜帶聚乙烯磨損顆粒的制備 5%的氯化鈉溶液2 mL，加入20 mg高分子聚乙烯顆粒，充分混合，制成10 g·L-1濃度的鹽溶液。在常溫?zé)o菌環(huán)境下(超凈臺(tái))自然蒸發(fā)5～7 d，鹽溶液結(jié)晶。搗碎后制成鹽包埋磨損顆粒結(jié)晶體,在電子秤上分別稱(chēng)出10包(51 mg/包)鹽包埋聚乙烯磨損顆粒和純鹽晶體待置。

1.3 小鼠顱骨溶解模型的制備 30只清潔無(wú)菌小鼠隨即分為空白對(duì)照組、純鹽組和鹽包埋磨損顆粒組，每組10只，稱(chēng)取質(zhì)量并標(biāo)記。制備4%水合氯醛，按照100 g·L-1體質(zhì)量進(jìn)行腹腔麻醉，麻醉成功后，小鼠頭部用脫毛劑充分脫毛后碘伏常規(guī)消毒，鋪一次性無(wú)菌巾，在小鼠顱頂矢狀線 (垂直于小鼠雙側(cè)外耳道連線，并經(jīng)過(guò)該連線的中點(diǎn))用15號(hào)小圓刀或者小剪刀切開(kāi)1 cm左右皮膚及皮下組織。在助手成功對(duì)小鼠頭部皮膚牽引下，充分暴露小鼠顱頂約1 cm×1 cm范圍完整骨膜。在顱頂處，用小圓刀輕輕剝離或者15號(hào)小鑷子輕輕撕脫小鼠顱骨外膜，形成0.2 cm×0.2 cm骨膜缺損區(qū)(一般無(wú)出血，有少量出血時(shí)，用無(wú)菌紗布輕拭即可)。其中空白對(duì)照組用消毒微量取樣槍吸取5%生理鹽水50 μL，滴入骨膜缺損區(qū)即可；純鹽組放入無(wú)菌鹽顆粒51 mg，鹽包埋磨損顆粒組放入51 mg鹽包埋磨損顆粒結(jié)晶體。各組在放置鹽結(jié)晶物或者純鹽顆粒時(shí)，應(yīng)盡量均勻放置在骨膜缺損區(qū)，然后用無(wú)菌、無(wú)損傷線縫合傷口。在整個(gè)手術(shù)過(guò)程中，小鼠眼睛用無(wú)菌紅霉素眼膏保護(hù)。模型構(gòu)建成功，待小鼠麻醉清醒后分籠飼養(yǎng)。術(shù)后常規(guī)給予青霉素抗炎2 d，預(yù)防感染。術(shù)后14 d分別處死各組小鼠，無(wú)菌環(huán)境下取顱骨頂處骨組織(此項(xiàng)操作中要求取出的顱頂骨以正中矢狀線為中心的環(huán)形區(qū)域)。取出的標(biāo)本用PBS液沖洗，10%中性甲醛固定24 h， 10%中性EDTA脫鈣液脫鈣 14 d，蒸餾水沖洗，70%酒精固定、石蠟包埋，切片機(jī)連續(xù)3層切片， 層厚6 μm用于HE、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色。電鏡掃描：小鼠顱骨標(biāo)本用生理鹽水沖洗3次，4%戊二醛固定送入電鏡室專(zhuān)業(yè)處理。氣囊植骨模型按照文獻(xiàn)[3]步驟構(gòu)建，術(shù)后第21天用頸椎脫位法處死小鼠，將氣囊完整摘除，原位采集氣囊和顱骨余組織，保護(hù)軟組織和顱骨界面不受破壞，其他步驟同前。

1.4 HE染色檢測(cè)骨溶解面積和骨膜炎性反應(yīng)細(xì)胞 選定切片，行常規(guī)HE染色，在 10×、20×和40× 條件下觀察顱頂骨膜炎性反應(yīng)和顱骨的表面侵蝕情況， 每組選用 3個(gè)標(biāo)本進(jìn)行觀察，每個(gè)標(biāo)本采集 5個(gè)不同的視野，采用 Image ProPlus 6.0(IPP) 圖像分析軟件測(cè)量正中矢狀線區(qū)域骨吸收溶解面積和骨外膜炎性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)。

1.5 TRAP染色檢測(cè)破骨細(xì)胞增殖分化 按照試劑盒要求對(duì)切片進(jìn)行染色,染色后破骨樣細(xì)胞呈特異性棕紅色。Olympus光學(xué)顯微鏡 10×、20×和40×條件下觀察， 20×條件下攝像計(jì)算正中矢狀線區(qū)域的TRAP+細(xì)胞數(shù)量，每張片子中隨機(jī)選取 5個(gè)高倍視野，求平均數(shù)。

1.6 骨片掃描電鏡檢查 取材后按電鏡掃描要求準(zhǔn)備，在日立S-3000N 掃描電鏡下觀察小鼠顱骨表面的骨質(zhì)吸收情況，采用 IPP 圖像分析軟件計(jì)算各組吸收陷窩面積，統(tǒng)計(jì)各組 3個(gè)標(biāo)本，每個(gè)標(biāo)本在200倍視野下取5個(gè)不同視野進(jìn)行陷窩面積計(jì)算， 取平均值， 計(jì)算其占視野面積的百分?jǐn)?shù)。

2 結(jié) 果

2.1 HE染色檢測(cè)各組骨溶解面積和骨膜炎性反應(yīng)細(xì)胞 空白對(duì)照組和純鹽組小鼠骨表面溶解面積和骨膜炎性反應(yīng)細(xì)胞無(wú)明顯增加，純鹽組骨膜炎性反應(yīng)細(xì)胞略增高(圖1A和B，見(jiàn)插頁(yè)四)。鹽包埋磨損顆粒組和氣囊植骨組小鼠骨溶解面積和骨膜炎性反應(yīng)細(xì)胞明顯增多(圖1 C和D，見(jiàn)插頁(yè)四)。IPP圖像分析軟件統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：與氣囊植骨組、空白對(duì)照組和純鹽組比較，鹽包埋磨損顆粒組骨膜反應(yīng)細(xì)胞數(shù)和小鼠顱骨破壞溶解面積均明顯增加(Plt;0.01)。見(jiàn)表1。

2.2 TRAP 染色檢測(cè)各組TRAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù) 空白對(duì)照組和純鹽組小鼠陽(yáng)性染色區(qū)域不明顯，紅染色面積小，計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量少；鹽包埋磨損顆粒組和氣囊植骨組小鼠陽(yáng)性染色面積區(qū)域大，細(xì)胞數(shù)量明顯增多；鹽包埋磨損顆粒組TRAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與其他3組比較明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.01)。TRAP 染色陽(yáng)性細(xì)胞統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表2和圖2(插頁(yè)四)。

表1 各組小鼠骨膜炎性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)與骨表面溶解面積

Tab.1 Number of inflammatory cells and bone surface dissolved area of mice in various groups

GroupnNumberofinflammatorycellsDissolvedbonearea(A/mm2)Blankcontrol101540±368?0．069±0．024?Puresalt101610±535?0．073±0．012?Airbagbonegraft203163±147?0．225±0．021?Wearparticle103478±376 0．301±0．014

*Plt;0.01 compared with wear particle group.

表2 TRAP 染色陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)

Tab.2 TRAP staining positive cell count

GroupnNumberofosteoclastsBlankcontrol103．8427±1．1821?Puresalt104．0261±1．3720?Airbagbonegraft2012．5490±1．3724?Wearparticle1017．3250±4．2107

*Plt;0.01 compared with wear particle group.

2.3 電鏡下各組小鼠骨吸收區(qū)域形態(tài)表現(xiàn)和視野面積的百分比 空白對(duì)照組和純鹽組:骨纖維組織結(jié)構(gòu)緊密，鈣丟失較少，未見(jiàn)明顯吸收陷窩(圖3A和B)。氣囊植骨組和鹽包埋磨損顆粒組: 陷窩形態(tài)多樣，以圓形、橢圓形多見(jiàn)，同時(shí)可見(jiàn)臘腸型復(fù)合不規(guī)則性，骨吸收區(qū)凹陷形成巖溶現(xiàn)象；陷窩深淺不一，有些深的陷窩邊界清晰、底面粗糙，在陷窩中央可見(jiàn)片絮狀物黏附，周?chē)暗撞靠梢?jiàn)纖維紋路；有些陷窩較淺，僅有斑點(diǎn)狀骨質(zhì)吸收區(qū)域，骨片表面粗糙、鈣丟失明顯，骨質(zhì)疏松嚴(yán)重；鹽包埋磨損顆粒組陷窩大小及深度、鈣丟失和骨質(zhì)疏松程度明顯強(qiáng)于氣囊植骨組。IPP圖像軟件分析骨吸收區(qū)域與視野面積的百分比：空白對(duì)照組為(3.09±0.62)%，純鹽組為(3.25±0.78)%，氣囊植骨組為(10.27±3.17)%，鹽包埋磨損顆粒組為(14.58±2.68)%。鹽包埋磨損顆粒組骨吸收區(qū)域與視野面積的百分比高于氣囊植骨組、空白組和純鹽組(Plt;0.01)。

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建體內(nèi)急性骨溶解無(wú)菌松動(dòng)病理模型[4]，觀察到鹽溶法構(gòu)建小鼠顱骨溶解模型在HE染色、電鏡掃描、TRAP染色以及骨膜炎性細(xì)胞滲出、骨破壞面積及破骨細(xì)胞數(shù)目變化明顯優(yōu)于小鼠背部皮下氣囊植骨模型。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者多采用小鼠背部皮下氣囊植骨建立的假體無(wú)菌松動(dòng)急性骨溶解病理模型[5-6]。該動(dòng)物模型在建模時(shí)，一方面需要使用大量?jī)r(jià)格昂貴的磨損顆粒，投入資金較多；另一方面由于該建模無(wú)血供和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)支持、無(wú)骨組織的參與[7]，不能真實(shí)模擬磨損顆粒在體內(nèi)誘導(dǎo)溶骨的真實(shí)環(huán)境，亦不能真實(shí)反映骨組織在重建中成骨細(xì)胞的修復(fù)和破骨細(xì)胞的溶骨的動(dòng)態(tài)平衡[8]。同樣，對(duì)于溶骨現(xiàn)象，這種制模也無(wú)法考慮骨自身的修復(fù)作用，不能準(zhǔn)確做出溶骨定量測(cè)定。鹽溶法在磨損顆粒(直徑為2～3 μm )[9]符合誘導(dǎo)溶骨條件的基礎(chǔ)上，把鹽磨損顆?；旌辖Y(jié)晶體放置在去部分顱骨外膜處。通過(guò)鹽晶體溶解時(shí)的理化特性和顱骨黏附較為緊密，在鹽溶解過(guò)程中逐漸把適量的磨損顆粒釋放出來(lái)，較為均勻的分布在顱骨外，達(dá)到直接放置磨損顆粒的目的；另外，由于鹽溶解周?chē)母邼B狀態(tài)不利于細(xì)菌的生長(zhǎng)，便于傷口修復(fù)，刺激周?chē)B骨外膜迅速長(zhǎng)入，把磨損顆粒完全包埋在骨膜下，不會(huì)出現(xiàn)磨損顆粒向周?chē)?。該法一方面繼承皮膚縫合包埋法[10]和磨損顆粒懸浮液顱骨外膜膜下注射法[11-12]傳統(tǒng)優(yōu)點(diǎn)，即磨損顆粒直接和骨面接觸，符合模擬假體松動(dòng)體內(nèi)骨溶解環(huán)境[13]；另一方面也克服傳統(tǒng)建模時(shí)需要磨損顆粒多、投入資金量大、制模效果不佳、取材不易和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物易死亡等缺點(diǎn)。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)很少使用這2種方法。鹽溶法與上述模型一樣，同樣沒(méi)有置入真正人工假體,仍然屬于急性溶骨病理模型范疇。因此在研究假體松動(dòng)的過(guò)程中并沒(méi)有考慮機(jī)械應(yīng)力對(duì)松動(dòng)的影響，這與人工關(guān)節(jié)松動(dòng)發(fā)生的慢性溶骨過(guò)程是有差別的[14]。總之，該實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷脑O(shè)計(jì)克服了上述各種建模的不足，更加簡(jiǎn)潔方便、易操作，過(guò)程嚴(yán)謹(jǐn)可靠， 結(jié)果合理有效， 可信度高，是值得推廣的一種基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)方法 。

圖3 掃描電鏡觀察各組骨吸收情況

[1] Keener JD,Callaghan JJ,Goetz DD,et al.Twenty - five -year results after chambly total hip arthroplasty in patients less than fifty years old: a concise follow-up of a previous report [J].Bone Joint Surge Am,2003,85(6):1066-1072.

[2] Harris WH.Wear and perprosthetic osteolysis: the problem[J].Cline Orthop Relate Res,2001,39(3):66-70.

[3] Ren W，Yang SY，Wooley PH．A novel marine model of orthopedic wear debris associated osteolysis[J]．Scand J Rheumatol，2004,33(5):349-357．

[4] 閆韻飛，王 瑞,趙建寧.人工關(guān)節(jié)無(wú)菌性松動(dòng)動(dòng)物模型的研究進(jìn)展[J]．醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2012，4(25)：410-413.

[5] 賈慶衛(wèi)，戴尅戎，湯亭亭，等． 改良大鼠氣囊模型在人工關(guān)節(jié)假動(dòng)松動(dòng)研究中的應(yīng)用[J].中國(guó)矯形外科雜志，2008，16(2):127-130.

[6] Ren W,Wu B,Peng X,et al.Erythromycin inhibits wear debris induced inflammatory osteolysis in a mourner mode [J].J Or hop Re，2006,24(2):280-290.

[7] Blair HC,Robinson LJ,Zaidi M,et al.Osteoclast signaling path ways [J].Biochem Biophys Res Commun,2005,3(28)：728-738.

[8] Woolley PH，Morren R，Andary J，et al． Inflammatory responses to or-thopaedic biomaterials in the marine air pouch[J]． Biomaterials，2002，23(2): 517-526．

[9] 張 亮，陳志榮，吳興臨，等.一種磨損顆粒誘導(dǎo)的骨溶解模型的制作[J].寧夏醫(yī)學(xué)雜志,2008，30(4):138-140.

[10]von Knocha M， Wedemeyer C ． The decrease of particle-induced osteolysis after a single dose of bisphosphonate[J].Biomaterials,2005,26(8):1803-1808.

[11]金 忠，戴 閩，凌義龍，等.破骨細(xì)胞在 UHMWPE磨損顆粒誘導(dǎo)的骨溶解中作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究實(shí)用[J].臨床醫(yī)學(xué),2008，9(11):245-246.

[12]Zhang C,Tang T,Ren W,et al.Influence of mouse genetic background on wears particle-inducedinvivoinflammatory osteolysis[J].Iflamm Res,2008,57(5):211-215.

[13]Tatro JM,Taki N,Islam AS,et al.The balance between end toxin accumulation and clearance during particle-induced osteolysis in marine calvarias[J].Orthop Res,2007,25(3):361-369.

[14]丁 悅,黃健斌,秦礎(chǔ)強(qiáng).人工關(guān)節(jié)無(wú)菌性松動(dòng)動(dòng)物模型的建立[J] 實(shí)用骨科雜志，2010,16(7):234-236 .

Establishmentandevaluationofmouseskulldissolvementmodelinducedbywearparticleswithsaltsolutionmethod

LIU Ming1，WEI Xiao-lan1，CHEN Ting-mei2，JIANG Rong3，ZHANG Jian4

(1.Affiliated Hospital,Ankang Vocational Technical College,Ankang 725000,China;2.Key Laboratory of Clinical Laboratory and Diagnostics,Ministry of Education，Department of Laboratory，Chongqing Medical University,Chongqing 400016,China;3.Department of Immunohistochemistry，Stem Cells and Tissue Engineering Laboratory,Chongqing Medical University,Changqing 400016,China; 4.Department of Orthopedics， First Affiliated Hospital,Chongqing Medical University，Chongqing 400016,China)

ObjectiveTo build a new type of wear particle induced bone dissolution model,and to provide a simple and convenient aseptic loosening experimental animal model for the study of artificial joints.MethodsA total of 50 BALB/c mice were randomly divided into blank control group,pure salt group(n=10),airbag bone graft group(n=10),and salt embedding wear particle group(n=10).The skull bone samples of mice in airbag bone graft group and other groups were obtained 21 and 14 d after operation,respectively.The number of inflammatory cells and osteolysis area were observed by HE staining.The percentage of bone absorption lacuna area was detected by scanning electron microscope.The proliferation and differentiation of osteoclasts were observed by TRAP stainingResultsThe HE staining results showed that compared with airbag bone graft group and black group, the efflux of inflammatory cells and osteolysis areas in pure salt group and wear particle group were increased significantly (Plt;0.01). The TRAP staining results showed that the number of osteoclasts in airbag bone graft group was significantly lower than that in wear particle group (Plt;0.01).The scanning electron microscope results showed that the percentage of bone absorption lacuna area in wear particle group was significantly higher than that in airbag bone graft group (Plt;0.01).ConclusionSalt solution method is a simple,economic,and fast method to build myuse skull dissolvement models,and it can accurately simulate the pathological process of aseptic loosening after artificial joint replacement.

wear particle; skull dissolution; aseptic loosening;air pouch model；mice,inbred BALBc

1671-587Ⅹ(2013)05-1041-04

10.7694/jldxyxb20130537

2013-03-28

重慶市科委研究專(zhuān)題資助課題(CSTC,2010AB5094)；重慶市科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目資助課題(CSTC2010AB5094)

劉 銘(1976-)，男， 陜西省安康市人，主治醫(yī)師，在讀醫(yī)學(xué)碩士，主要從事人工關(guān)節(jié)感染與松動(dòng)研究。

張 健(Tel:023-89011202，E-mail:68733235@sohu.com)

R-332

A