陳義 蘇偉

（南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬無錫中醫(yī)醫(yī)院，江蘇 無錫 214000）

心絞痛是冠心病的常見類型，冠狀動脈內(nèi)易損斑塊纖維帽破裂、局部血栓形成是引起心絞痛病情進展的主要發(fā)病機制。目前認為斑塊纖維帽破裂是由于纖維帽細胞外基質(zhì)合成和崩解失去平衡的結(jié)果，即崩解多于合成。研究發(fā)現(xiàn)在正常內(nèi)膜，細胞外基質(zhì)（ECM）的合成和降解是平衡的，而在動脈粥樣硬化的內(nèi)膜，特別是易損斑塊，基質(zhì)的降解占優(yōu)勢［1］?；|(zhì)金屬蛋白酶（MMP）特別是基質(zhì)金屬蛋白酶－9（MMP－9），在降解細胞外基質(zhì)，使斑塊纖維帽的崩解和隨后的斑塊破裂中起重要作用。研究表明，易損斑塊局部MMPs主要來源是單核－巨噬細胞，而 MMPs主要成分是 MMP－9［2－3］。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2011年02月至2011年10月本院心血管內(nèi)科門診和住院患者125名，其中28名為健康體檢者，97名為心絞痛患者。入選者均除外各種急慢性炎癥、結(jié)締組織病、腫瘤、風(fēng)濕性心臟病、肝腎疾病等。穩(wěn)定型心絞痛診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會2007年中國慢性穩(wěn)定性心絞痛診斷與治療指南，不穩(wěn)定型心絞痛診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2007年中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會不穩(wěn)定性心絞痛和非ST段抬高心肌梗死診斷與治療指南。心絞痛分級參照加拿大心血管病學(xué)會（CCS）的心絞痛分級，不穩(wěn)定型心絞痛危險度分層參照ACC/AHA非ST段抬高型ACS危險性分層評判標(biāo)準(zhǔn)。將125名研究對象分為健康體檢組28例，穩(wěn)定型心絞痛組20例，不穩(wěn)定型心絞痛組77例。入院初對其危險因素進行評估，并對心絞痛組進行嚴重程度分級、危險度分層。治療前分別抽晨血，測定MMP－9 mRNA。3組臨床資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 研究方法 （1）MMP－9基因表達的測定方法。①全血總RNA抽提：取入組者晨空腹血2 mL，經(jīng)EDTA·Na2抗凝，全血0.3 mL采用3S柱離心式血液總RNA抽提試劑盒（K3620上海博彩生物科技有限公司）抽提RNA，RNA提取物－80℃保存。②MMP－9 mRNA表達水平測定：通過實時熒光定量PCR技術(shù)進行相對定量檢測。全血總RNA合成cDNA使用TAKARA反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)試劑盒（DRR037S大連寶生物工程有限公司）。實時熒光定量PCR反應(yīng)體系為20 μL，包括2×SYBR?Premix Ex TaqTM，1～100 ng cDNA，50 pmol/μL 引物。兩步法PCR循環(huán)條件：預(yù)變性95℃ 30 s為1個循環(huán)，變性95℃ 5 s，退火/延伸60℃ 20 s共40個循環(huán)。溶解曲線分析95℃ 1 s，65℃ 15 s，95℃ 1 s。③相對定量分析：采用Light Cycler Relative Quantification（Version1.5）軟件，標(biāo)準(zhǔn)化比值計算公式采用2－△△CT法，△CT（患者樣本）＝CT目的基因－CT內(nèi)參基因，△CT（校正品）＝CT目的基因－CT內(nèi)參基因，△△CT＝△CT（患者樣本）－△CT（校正品）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（）表示；兩組間比較采用t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組治療初期MMP－9基因表達水平比較 見表1。不穩(wěn)定型心絞痛組MMP－9 mRNA表達水平高于健康體檢組、穩(wěn)定型心絞痛組（P＜0.01）

表1 各組治療初期MMP－9基因表達水平比較（）

表1 各組治療初期MMP－9基因表達水平比較（）

與不穩(wěn)定型心絞痛組比較，△P＜0.01。

2.2 心絞痛不同分級初期MMP－9基因表達水平比較見表2。Ⅳ級患者的MMP－9 mRNA水平明顯高于其他各級（P＜0.01）；Ⅲ級 MMP－9 mRNA 水平明顯高于Ⅱ級、Ⅰ級（P<0.01）。

表2 心絞痛不同分級間初期MMP－9 mRNA水平比較（）

表2 心絞痛不同分級間初期MMP－9 mRNA水平比較（）

與Ⅳ級比較，*P＜0.01；與Ⅲ級比較，△P＜0.01。

2.3 不同危險度分級初期MMP－9基因表達水平比較見表3。高?；颊叩腗MP－9基因表達水平明顯高于中危、低危（P<0.01）。

表3 不同危險度分級初期MMP－9 mRNA水平比較（）

表3 不同危險度分級初期MMP－9 mRNA水平比較（）

與高危比較，*P＜0.01。

3 討 論

心絞痛病情進展與冠狀動脈內(nèi)粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定密切相關(guān)，炎癥反應(yīng)是斑塊不穩(wěn)定的重要機制之一，其在斑塊發(fā)生、演變及破裂過程中起著重要作用，而且研究表明心絞痛，尤其是不穩(wěn)定型心絞痛的炎癥反應(yīng)并非局限于單個破裂斑塊局部，而是遍布全身系統(tǒng)［4］。單核細胞作為炎性細胞中的一種，在心絞痛的發(fā)病過程中起著重要作用，研究發(fā)現(xiàn)心絞痛患者外周血單核細胞處于活化狀態(tài)，并且其活化發(fā)生于臨床癥狀之前，提示單核細胞活化可能直接參與心絞痛的發(fā)病過程［5］。

MMPs是鋅離子依賴性蛋白酶家族，其中MMP－9，主要降解Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型膠原、眀膠、纖維連接蛋白等，通過降解斑塊纖維帽在心絞痛的發(fā)病機制中起關(guān)鍵作用。目前大量研究已證實心絞痛，尤其是不穩(wěn)定型心絞痛患者外周血MMP－9水平明顯增高，而且MMP－9在易損斑塊局部表達明顯增加，提示MMP－9參與了不穩(wěn)定斑塊的形成。

本研究顯示健康體檢組、穩(wěn)定型心絞痛組、不穩(wěn)定型心絞痛組外周血單核細胞MMP－9 mRNA表達水平依次升高，并且隨著心絞痛分級升高，單核細胞MMP－9 mRNA表達水平依次升高，其中Ⅳ級＞Ⅲ級、Ⅱ級、Ⅰ級，Ⅲ級＞Ⅱ級、Ⅰ級。由于健康體檢組、穩(wěn)定型心絞痛、不穩(wěn)定型心絞痛之間差別在于冠狀動脈內(nèi)粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性。穩(wěn)定型心絞痛患者可能多數(shù)不存在易損斑塊，MMP－9只是生理水平的表達，故其MMP－9mRNA表達水平與健康體檢組差異無顯著性［8］。一項基于63列急性冠脈綜合征的研究顯示［6］，不穩(wěn)定型心絞痛組血清MMP－9表達水平顯著高于正常對照組。同時隨著心絞痛分級逐步增加，冠狀動脈內(nèi)粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性逐步變差，因此其MMP－9基因表達逐步增加，尤其當(dāng)心絞痛分級處于Ⅳ級、Ⅲ級時，冠狀動脈內(nèi)粥樣硬化斑塊尤其不穩(wěn)定，故其MMP－9表達水平較其他等級明顯升高。本研究顯示不穩(wěn)定型心絞痛初期外周血單核細胞MMP－9 mRNA表達水平：高危組＞中危組、低危組，并且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。心絞痛低危、中危、高危之間的區(qū)別在于冠狀動脈內(nèi)動脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性，危險度分層越高，冠狀動脈內(nèi)粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性越差，則越容易發(fā)生心血管事件。鄭衛(wèi)星、羅助榮等［7］對161例冠心病患者研究表明MMP－9高水平組，終點事件的發(fā)生率遠大于MMP－9低水平組。

因此，治療初外周血單核細MMP－9mRNA表達增加反映了斑塊的活動性，其表達產(chǎn)物MMP－9水平可作為冠狀動脈內(nèi)粥樣硬化斑塊易損性的標(biāo)志，并且在心絞痛患者危險度分層上可能是一個重要的生物學(xué)指標(biāo)［8］。

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