陳海蓮 杜連平 王金霞 賀世娟

(青海阿如拉藏醫(yī)藥研究開發(fā)有限公司，青海 西寧 810003)

藏藥前列寧膠囊由菥蓂子、石韋、蒲公英、刺柏、訶子、刀豆等13味中藥組成，具有清熱解毒，化瘀通淋等功效，用于熱毒瘀阻所引起的尿頻、尿急、尿痛屬中醫(yī)淋證者。本文采用高效液相色譜法，測定了前列寧膠囊中沒食子酸含量，方法簡便、快速，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

LC－10AT高效液相色譜儀;SPD－M10A vp型紫外檢測器;CLASS－VP工作站;電子天平;沒食子酸對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，純度99%以上，供含量測定用，批號110831－200302);甲醇、四氫呋喃為色譜純，水為重蒸餾水;其余試劑為分析純。前列寧膠囊 批號為:20110216。

2 試驗方法與結(jié)果

2.1 分析溶液的制備

2.1.1 對照品溶液制備:精密稱取沒食子酸對照品0.0109g，置10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻;精密量取上述沒食子酸溶液1mL，置50mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1mL含沒食子酸21.8μg)。

2.1.2 供試品溶液制備:取本品裝量差異項下的內(nèi)容物，混勻，取1g，精密稱定，加甲醇30mL，超聲處理60min，濾過，用少量甲醇分次洗滌濾渣及濾器，洗液并入濾液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，取上清液用微孔濾膜(0.45μm)濾過，作為供試品溶液。

2.1.3 陰性對照液的制備:按處方比例稱取除訶子以外的其他藥材適量，依照前列寧膠囊的制備工藝和供試品溶液的制備方法，制得陰性對照溶液。

2.2 分析方法學(xué)驗證

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:色譜柱:Shim－pack C18柱(150×4.6mm)。流動相:甲醇－四氫呋喃－冰乙酸－水(0.08:0.64:2:97.28)為流動相。檢測波長:273nm;柱溫:35℃;流速為1mL/min。理論板數(shù)按沒食子酸峰計算不低于1500。

2.2.2 陰性干擾實驗:按照處方比例，取除去訶子的陰性樣品溶液，按樣品測試條件進(jìn)行測定，結(jié)果陰性樣品在與對照品色譜峰相應(yīng)的位置上無吸收峰。說明處方中其它成分對測定結(jié)果無影響(見圖1)，專屬性好。

圖1 :陰性干擾實驗液相色譜圖(上:沒食子酸對照品圖譜中:前列寧膠囊樣品圖譜下:前列寧膠囊陰性對中樣品圖譜)

2.2.3 線性范圍考察:分別精密吸取沒食子酸對照品溶液4、8、12、16、20μL 注入液相色譜儀，在上述色譜條件下，測定峰面積積分值，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)上述測定數(shù)據(jù)，求得回歸方程:沒食子酸:Y=67562X －2963 r=0.999，表明沒食子酸在 0.0872 ～0.436μg之間進(jìn)樣量與峰面積呈良好線性關(guān)系。結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系考察

2.2.4 精密度試驗:精密吸取沒食子酸對照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測得沒食子酸峰面積積分值，結(jié)果見表2。

表2 精密度試驗

2.2.5 重現(xiàn)性試驗:按擬定的含量測定方法，取同一批號(20110216)的樣品5份，按2.1.2項下方法制成供試品溶液，在上述色譜條件下測定，計算沒食子酸的含量，結(jié)果見表3。

表3 重現(xiàn)性試驗

2.2.6 穩(wěn)定性試驗:精密吸取沒食子酸對照品溶液及同一供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，每隔一定的時間測定各峰面積值，結(jié)果見表4。表明沒食子酸及供試品溶液均在8h內(nèi)以沒食子酸峰面積積分值穩(wěn)定。

表4 穩(wěn)定性試驗

2.2.7 加樣回收試驗:精密稱取已知沒食子酸含量的樣品3份(批號20110216，沒食子酸含量0.20mg/粒)適量，分別加入3種不同量的沒食子酸對照品，揮去溶劑后按2.1.2項下的方法制成供試品溶液，并按上述色譜條件測定沒食子酸的含量，計算回收率，結(jié)果見表5。

表5 加樣回收試驗結(jié)果

2.2.8 樣品測定:取3個批號的樣品，按2.1.2項下的方法制成供試品溶液，精密吸取該溶液10μL，注入液相色譜儀按上述色譜條件測定，計算沒食子酸的含量，測定結(jié)果見表6。

表6 樣品測定結(jié)果

3 討論

曾采用乙腈 －0.01 mol/L 磷酸溶液(5∶100)［1］、甲醇－0.1%磷酸(6:94)［2］為流動相，結(jié)果分離效果欠佳，分離度不好。經(jīng)實驗確定采用以甲醇－四氫呋喃－冰醋酸－水(0.08:0.64:2:97.28)為流動相，結(jié)果顯示，此流動相分離度好，陰性無干擾。曾采用HPLC法對方中訶子中的β－谷甾醇［3］的含量進(jìn)行測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，有干擾，最終確定了以甲醇 －四氫呋喃 －冰醋酸 － 水(0.08:0.64:2:97.28)為流動相測定沒食子酸的含量，結(jié)果分離度好、方法準(zhǔn)確快速能夠有效控制制劑的質(zhì)量。

［1］孫立立，江波，袁振海，等.HPLC測定地榆飲片中沒食子酸的含量［J］.中成藥，2006，(8);57 －60.

［2］聶少平，王遠(yuǎn)興，謝明勇，等.高效液相色譜法測定猴耳環(huán)消炎膠囊中沒食子酸的含量［J］.實用中西醫(yī)結(jié)合臨床，2003，(2);3 －4.

［3］付煜萊，張萬明，陳桂敏，等.景天三七中沒食子酸和總酚酸含量測定［J］.中成藥，2006，(7):85－87.