潘自紅，趙曉軍，康都羨,2，劉喜芳

(1. 平頂山學(xué)院 化學(xué)化工學(xué)院，河南 平頂山 467000； 2. 中國平煤神馬能源化工集團(tuán)，河南 平頂山 467000)

阿魏酸哌嗪(piperazine ferulate，PF)，原名保腎康，是傳統(tǒng)中藥川芎的有效成份阿魏酸經(jīng)化學(xué)方法合成的藥物[1]，具有抗凝、擴(kuò)張微血管、增加冠脈流量、解除血管痙攣、抑制ADP誘導(dǎo)的血小板聚集等作用，臨床研究也表明阿魏酸哌嗪具有減少蛋白尿，改善腎功能綜合癥等[2]作用. 目前已報(bào)道測定阿魏酸哌嗪的方法有高效液相色譜法[3-5]，分光光度法[6]等. 分光光度法因具有運(yùn)行成本低，設(shè)備操作簡單、便于常規(guī)實(shí)驗(yàn)室普遍使用等特點(diǎn)，而受到重視. 用荷移分光光度法測定阿魏酸哌嗪的方法尚未見文獻(xiàn)報(bào)道. 實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，阿魏酸哌嗪分子中的仲胺基(-NH-)上的氮原子的孤對電子具有一定活性，而茜素紅分子結(jié)構(gòu)中含有醌基，兩者在水溶液中可發(fā)生荷移反應(yīng)形成紫紅色1∶1復(fù)合物，其在524 nm處有特征吸收，據(jù)此，建立了荷移光度法測定藥物制劑中阿魏酸哌嗪含量的新方法.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

UV-2550雙光束紫外-可見分光光度計(jì)(日本島津公司)；722s/723可見分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；CS-501超級(jí)恒溫儀(重慶實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠).

3.0×10-3mol·L-1茜素紅水溶液；阿魏酸哌嗪純品(湖南千金湘江藥業(yè)有限公司提供)，配置成400 mg·L-1的水溶液. 所有其他試劑均為試劑純，實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

準(zhǔn)確移取適量阿魏酸哌嗪對照品或試樣溶液適量加入25.00 mL容量瓶中，然后加入4.00 mL濃度為3.0×10-3mol·L-1的茜素紅溶液；用水稀釋至刻度，搖勻；以試劑空白作參比，用1 cm比色皿，在524 nm處測體系的吸光度.

2 結(jié)果與討論

2.1 吸收光譜

按分析步驟配制溶液，以水為參比掃描阿魏酸哌嗪(曲線1)和茜素紅溶液(曲線2)的吸收光譜和以試劑空白為參比掃描體系的吸收光譜(曲線3)，結(jié)果見圖1. 阿魏酸哌嗪在380～700 nm范圍內(nèi)基本無吸收，而茜素紅溶液在423 nm處有強(qiáng)吸收. 當(dāng)向茜素紅溶液中加入少量的阿魏酸哌嗪溶液后溶液呈現(xiàn)紫紅色，說明二者發(fā)生顯色反應(yīng)，并有新產(chǎn)物生成，其在524 nm處有最大吸收. 為消除試劑干擾，以試劑空白為參比，于524 nm處測定生成物的吸光度.

2.2 反應(yīng)時(shí)間及穩(wěn)定性的影響

按實(shí)驗(yàn)方法測量反應(yīng)時(shí)間對體系吸光度的影響，結(jié)果如圖2所示. 由圖2可見，該荷移反應(yīng)迅速，在試劑加入同時(shí)反應(yīng)基本完成，且吸光度值在1 h內(nèi)基本不隨時(shí)間的變化而變化，滿足定量測定的要求.

圖1 體系的吸收光譜Fig.1 Absorption spectra of the system

圖2 反應(yīng)時(shí)間對體系吸光度的影響Fig.2 Effect of the time on the absorption

2.3 茜素紅用量的影響

按實(shí)驗(yàn)方法考察了3.0×10-3mol·L-1茜素紅水溶液的加入量對體系吸光度的影響，結(jié)果如圖3所示. 由圖可見，當(dāng)茜素紅的用量低于3.50 mL時(shí)，體系的吸光度較低；當(dāng)茜素紅的加入量在3.50～7.00 mL之間變化時(shí)，體系的吸光度基本不變. 實(shí)驗(yàn)選用茜素紅的用量為 4.00 mL.

2.4 溫度的影響

按照實(shí)驗(yàn)方法配置5份相同濃度的阿魏酸哌嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別放置在15 ℃、20 ℃(室溫)、30 ℃、40 ℃、50 ℃恒溫水槽中加熱10 min，然后冷卻至室溫條件下測定其吸光度，結(jié)果如圖4所示. 實(shí)驗(yàn)表明：溫度較低時(shí)，體系的吸光度較低；溫度在室溫及以上時(shí)，體系吸光度無明顯的增加，說明短時(shí)間加熱對體系的吸光度無明顯影響，故實(shí)驗(yàn)選擇室溫以簡化實(shí)驗(yàn)操作.

圖3 茜素紅用量對體系吸光度的影響Fig.3 Effect of volume of alizarin red on the absorption

圖4 溫度對體系吸光度的影響Fig.4 Effect of temperature on the absorption

2.5 工作曲線、檢出限及精密度

按照分析步驟配制阿魏酸哌嗪系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，并根據(jù)吸光度繪制工作曲線. 實(shí)驗(yàn)表明，阿魏酸哌嗪溶液的濃度在1.60～48.0 mg·L-1范圍內(nèi)時(shí)，濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為A= 0.021 07+0.003 93c(mg·L-1)，線性相關(guān)系數(shù)R= 0.999 2，表觀摩爾吸光系數(shù)為1.86×103L·mol-1·cm-1.

平行測定11份試劑空白溶液，以測得吸光度的標(biāo)準(zhǔn)偏差的三倍除以工作曲線擬合方程的斜率，求出阿魏酸哌嗪的檢出限為1.19 mg·L-1. 對含量為32.0 mg·L-1的阿魏酸哌嗪平行測定11次，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.5%.

2.6 復(fù)合物組成的測定

應(yīng)用飽和法和等摩爾連續(xù)變化法測定復(fù)合物的組成. 兩種方法測定結(jié)果表明荷移反應(yīng)生成物中阿魏酸哌嗪與茜素紅的組成比均為1∶1.

2.7 分析應(yīng)用

按照實(shí)驗(yàn)步驟測定了市售藥物制劑中阿魏酸哌嗪的含量. 按照實(shí)驗(yàn)方法對樣品進(jìn)行測定，并做了加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)(表1). 由表可知，該實(shí)驗(yàn)所得的加標(biāo)回收率在97.5%～100.9%之間.

表1 樣品及回收率測定Table 1 The determination of the samples and recoveries

3 結(jié)論

利用阿魏酸哌嗪與茜素紅荷移的顯色反應(yīng)，建立了測定藥物中阿魏酸哌嗪新的分光光度法. 考察了分光光度法測定阿魏酸哌嗪的影響因素、適宜的反應(yīng)條件等，并應(yīng)用該法測定了藥物制劑中阿魏酸哌嗪的含量. 所建立的方法具有簡單、快速等特點(diǎn).

參考文獻(xiàn)：

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