尹相叢，閆麗萍，楊頡，侯方，邵長(zhǎng)峰

（青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山東 青島 266003 1 附屬醫(yī)院血液病研究室； 2 附屬醫(yī)院婦科； 3 血液病學(xué)教研室）

淋巴瘤是由淋巴器官或組織中的淋巴細(xì)胞發(fā)生惡性克隆性增生所形成的腫瘤，是兒童和年輕人中最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，分為霍奇金淋巴瘤（HL）和非霍奇金淋巴瘤（NHL）兩大類。多種實(shí)驗(yàn)證實(shí)，n m23基因是一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，該基因能抑制腫瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，與多種腫瘤的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)［1］。但對(duì)造血系統(tǒng)腫瘤研究顯示，n m23蛋白能抑制造血細(xì)胞的分化成熟，可能與造血系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生和預(yù)后有關(guān)［2］。本文分別采用免疫組織化學(xué)方法和雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA法）檢測(cè)淋巴瘤組織和血清中n m23表達(dá)，旨在探討其對(duì)惡性淋巴瘤預(yù)后判斷價(jià)值?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

2011年2月—2012年8月，收集我院住院的淋巴瘤病人60例，病人年齡7～75歲，中位年齡40歲。病理分類和惡性程度分級(jí)參照1994年REAL標(biāo)準(zhǔn)［3］，其中 HL者9例，NHL者51例，NHL中B細(xì)胞型35例，T細(xì)胞型16例；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)淋巴瘤分別為26、17、10、7例。選取我院體檢健康者20例作為血清中n m23檢測(cè)的對(duì)照組，男12例，女8例，年齡為22～51歲；另選20例正常淋巴結(jié)組織作為n m23免疫組化檢測(cè)的對(duì)照，其中男11例，女9例；年齡為17～53歲。

1.2 試劑

人n m23的ELISA試劑盒購(gòu)自上海迪奧試劑公司?？筺 m23單抗、SP試劑盒、DAB顯色劑均購(gòu)自福州邁新公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果判斷

分別采集病人治療前和對(duì)照組不抗凝靜脈血2 mL，置于室溫下自然凝固，離心后將血清凍存于－80℃低溫冰箱備用。通過(guò)全自動(dòng)生化分析儀，應(yīng)用ELISA法測(cè)定血清中n m23濃度。在標(biāo)準(zhǔn)坐標(biāo)紙上手工繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作為橫坐標(biāo)，吸光度（A）值作為縱坐標(biāo)，以平滑線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點(diǎn)，通過(guò)測(cè)定的D值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出對(duì)應(yīng)的n m23濃度。按照S－P免疫組化試劑盒說(shuō)明分別檢測(cè)淋巴瘤病人和對(duì)照組淋巴結(jié)組織中n m23的表達(dá)。每次實(shí)驗(yàn)用已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。淋巴瘤組織中n m23陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞漿，高表達(dá)者其陽(yáng)性顆粒不僅表達(dá)在胞漿中，在胞膜和胞核也能見(jiàn)到表達(dá)。計(jì)數(shù)500～1000個(gè)細(xì)胞，計(jì)算n m23陽(yáng)性細(xì)胞百分率。陽(yáng)性率0～5%、6%～25%、26%～50%、＞50%分別定為（－）、（＋）、（?）、（?）。參照Fromowitz方法，將（－）、（＋）定為低水平表達(dá)，（?）、（?）定為高水平表達(dá)。

2 結(jié) 果

2.1 nm23表達(dá)的比較

淋巴瘤組織中n m23低水平、高水平表達(dá)分別為39、21例，對(duì)照組組織中分別為20、0例，兩組比較差異有顯著性（χ2＝9.49，P＜0.01）。淋巴瘤病人血清中n m23的水平為（363.42±145.26）μg／L，對(duì)照組為（122.88±92.13）μg／L，兩組比較差異有顯著性（t＝7.21，P＜0.01）。

2.2 淋巴瘤病人n m23的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

n m23的表達(dá)水平與病人性別無(wú)關(guān)（P＞0.05），而與病人年齡、淋巴瘤惡性程度、臨床分期、骨髓浸潤(rùn)、B癥狀及LDH水平有關(guān)（χ2＝8.86～15.25，t＝3.03～9.48，P＜0.01）。見(jiàn)表1。

表1 淋巴瘤組織中n m23的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

3 討 論

腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因n m23基因是1988年由美國(guó)國(guó)立癌癥研究所的STEEG等［4］應(yīng)用消減雜交法，從7株具有不同轉(zhuǎn)移潛能的鼠黑色素瘤細(xì)胞系c DNA文庫(kù)中克隆出來(lái)的。到目前為止，在人類已發(fā)現(xiàn)6個(gè)n m23異構(gòu)體，其中n m23－H1在腫瘤轉(zhuǎn)移中起更大的作用，該基因編碼蛋白主要位于細(xì)胞漿和細(xì)胞核，具有多種生物學(xué)功能，參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、增殖與分化和腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程，與癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛能密切相關(guān)。在黑色素瘤、乳癌和胃癌等多種實(shí)體瘤中，n m23蛋白的表達(dá)可抑制腫瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和植入，與病人的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)［5］。然而在造血系統(tǒng)的研究中顯示，n m23蛋白在正常淋巴細(xì)胞發(fā)育早期表達(dá)明顯增多，能抑制造血細(xì)胞分化［6］，由此推測(cè)n m23蛋白的過(guò)度表達(dá)與造血細(xì)胞腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后有關(guān)。NIISTU等［7］應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)淋巴瘤病人n m23蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示隨著淋巴瘤惡性程度的增高，該蛋白水平也顯著增高，而且還與病人的年齡、淋巴瘤臨床分期、淋巴結(jié)外病變部位數(shù)及是否伴有發(fā)熱、消瘦、盜汗以及血清LDH水平等有明顯相關(guān)性。n m23高表達(dá)組緩解率、無(wú)進(jìn)展生存期和總生存期均低于低表達(dá)組。另外，LEE等［8］對(duì)150例 NHL病人研究亦顯示，n m23的表達(dá)水平隨腫瘤惡性程度的升高相應(yīng)升高。國(guó)內(nèi)藍(lán)建平等［9］對(duì)107例淋巴瘤病人研究證實(shí)，n m23蛋白在惡性淋巴瘤組織中表達(dá)明顯高于對(duì)照組，而且表達(dá)強(qiáng)度隨著淋巴瘤惡性程度的增高而增高。本研究采用免疫組化方法和ELISA法分別檢測(cè)60例淋巴瘤組織和血清中n m23蛋白的表達(dá)水平，研究結(jié)果與上述文獻(xiàn)報(bào)道相似。

總而言之，聯(lián)合檢測(cè)淋巴瘤組織和病人血清中n m23的表達(dá)，能更精確地判定淋巴瘤的惡性程度，有利于臨床評(píng)價(jià)預(yù)后。

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