任一帆，賈國存，鄒旭鳳，趙 瑞，呂艷琦

(鄭州市兒童醫(yī)院血液科 河南鄭州 450003)

噬血細(xì)胞綜合征(HPS)，又稱噬血細(xì)胞性淋巴組織細(xì)胞增多癥(HLH)，由 Farquhar等［1］于1952年首次報道，可見多臟器受損，病情進(jìn)展迅猛，延誤診治病死率高的臨床特點。該病是由多種致病因素引起的淋巴細(xì)胞和組織細(xì)胞過度增殖、活化，產(chǎn)生大量炎癥因子，從而引起的一種可危及生命的過度炎癥反應(yīng)［2］。本研究對收治的HLH患兒血清細(xì)胞因子IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ 及新碟呤進(jìn)行檢測，觀察其變化，并探討其在HLH發(fā)病機(jī)制中的作用和臨床意義，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以2011年1月至2012年5月在鄭州市兒童醫(yī)院血液腫瘤科收治的16例HLH患兒為研究對象，其中男9例，女7例，年齡3.2個月～5.6歲。病例診斷均符合HLH-2004診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］，確診前無糖皮質(zhì)激素應(yīng)用史。10例健康對照組為鄭州市兒童醫(yī)院同期門診體檢健康兒童，男6例，女4例;年齡5個月～8歲，無心、肝、腎臟疾病及遺傳代謝性疾病，健康對照組家長均知情同意。各組資料具有可比性。

1.2 試劑和儀器 ELISA試劑盒購自美國RB公司，酶標(biāo)儀購自上海熱電儀器有限公司，高精度加樣器及槍頭購自德國BRAVD公司，恒溫水箱購自北京市醫(yī)療設(shè)備廠，離心機(jī)購自安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司。

1.3 細(xì)胞因子測定 抽取患兒及健康對照組兒童空腹靜脈血2 ml，3 000 r/min離心10 min后分離血清，按一次用量分裝，凍存于－20°冰箱備用。檢測之前室溫下溶解標(biāo)本，并提前20 min取出試劑盒，平衡至室溫。嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書步驟檢測IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ 及新碟呤水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0軟件，數(shù)據(jù)±s表示，HLH組與健康兒童組之間采用t檢驗比較，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。HLH組各細(xì)胞因子間相關(guān)性分析采用Spearman rank相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

HLH組IL-18、IL-10、IL-12、NF-Kβ、TNF-α及新碟呤水平均升高，與健康對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。其中IL-10、新碟呤水平明顯升高，與健康對照組比較差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。TNF-α升高不明顯，與健康組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，這與報道相符［3］。見表1。

表1 HLH患兒與健康對照組兒童細(xì)胞因子水平比較(±s)

表1 HLH患兒與健康對照組兒童細(xì)胞因子水平比較(±s)

新碟呤HLH組 10 420.9±31.0 223.2±123.0 298.2±237.9 17.0±組別 n IL-18 IL-10 IL-12 NF-Kβ TNF-α 4.5 3.1±1.2 57.8±28.3健康組 16 168.7±14.9 2.3±0.6 74.1±15.9 5.8±1.6 2.8±1.1 7.7±3.2 t 23.89 4.90 2.95 7.46 0.804 5.53 P＜0.05＜0.01＜0.05＜0.05 ＞0.05＜0.01

IL-10與NF-Kβ 及新碟呤均呈正相關(guān)(r=0.747P＜0.05，r=0.567P＜0.05)，IL-18與IL-12、TNF-α也呈明顯正相關(guān)(r=0.542P＜0.05，r=0.686P＜0.05)。見表2。

表2 HLH患兒細(xì)胞因子水平相關(guān)性分析

3 討論

本研究的16例HLH患兒均符合HLH-2004診斷標(biāo)準(zhǔn)，該標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)為只要符合HLH的分子診斷和8條臨床診斷中的5條，即能確診HLH。但是由于技術(shù)水平限制，目前國內(nèi)尚不能完成所有與HLH相關(guān)的染色體基因缺陷的檢測。而且，臨床觀察發(fā)現(xiàn)，很多HLH患兒病程初期很難同時滿足5條診斷標(biāo)準(zhǔn)，隨著病程進(jìn)展，各種癥狀逐一出現(xiàn)，最終確診為HLH。但是HLH病情進(jìn)展十分迅速，延誤診斷和治療可導(dǎo)致患兒病情無法控制而死亡，因此，HLH的早期診斷十分必要，而HLH-2004方案仍需進(jìn)一步完善。

HLH分為原發(fā)性或遺傳性HLH和繼發(fā)性HLH兩類，其中原發(fā)性HLH又分為家族性HLH和免疫缺陷病兩類。原發(fā)性HLH患者多有噬血家族史或被證明有明確的基因突變，多于1歲之前發(fā)病，偶見青少年和成年患者［4］。繼發(fā)性HLH分為感染相關(guān)性 HLH(IAHS)，腫瘤相關(guān)性HLH(MAHS)、自身免疫相關(guān)性HLH(MAS)、藥物相關(guān)性 HLH、移植后 HLH 等［2］。該病具體發(fā)病機(jī)制不明，但多數(shù)認(rèn)為免疫系統(tǒng)參與了該病的發(fā)病過程。該觀點認(rèn)為，基因缺陷、感染及腫瘤等病因引起機(jī)體免疫系統(tǒng)紊亂，使T細(xì)胞持續(xù)增殖，產(chǎn)生大量的IFN-，導(dǎo)致巨噬細(xì)胞大量活化，活化的巨噬細(xì)胞又分泌大量的細(xì)胞因子，如:IL-12、IL-10、IL-18、TNF-α及其他白介素類，其中IL-12能誘導(dǎo)分泌Th1細(xì)胞因子的細(xì)胞發(fā)展并促進(jìn)這些細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生IFN-，形成惡性循環(huán)［5］，這就是所謂的“細(xì)胞因子風(fēng)暴”學(xué)說。

在本研究中，HLH患兒確診時 IL-18、IL-10、IL-12、NF-Kβ及新碟呤水平與健康對照組相比均升高，尤其IL-10、新碟呤水平明顯升高，再一次證實了細(xì)胞因子確實參與了HLH的病理生理作用。與健康組相比，HLH患兒確診時血清TNF-α升高不明顯。TNF-α是造血干細(xì)胞增殖的抑制性因子，能使骨髓粒系、紅系及巨核細(xì)胞進(jìn)行性減少，HLH患兒確診時血清TNF-α升高不明顯，但是卻有明顯的外周血兩系以上減少，考慮與骨髓中的噬血細(xì)胞對血細(xì)胞的破壞有關(guān)。

NF-Kβ幾乎存在于機(jī)體的各種細(xì)胞中，它是具有基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用的核因子，是急性炎癥反應(yīng)的中樞環(huán)節(jié)，在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞增殖分化以及凋亡方面均起關(guān)鍵作用，能在氧化期上調(diào)有關(guān)炎癥因子基因的轉(zhuǎn)錄。本研究證實，IL-10與NF-Kβ呈明顯正相關(guān)，可能與NF-Kβ上調(diào)了IL-10的基因轉(zhuǎn)錄有關(guān)。IL-10主要有單核/巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞分泌，能促進(jìn)B細(xì)胞增殖、分化及抗體產(chǎn)生。新碟呤主要由活化的巨噬細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生，是參與機(jī)體炎癥反應(yīng)的一個重要因子，本研究提示，IL-10與新碟呤呈明顯正相關(guān)，但具體作用機(jī)制仍待進(jìn)一步研究。

IL-18是IL家族中的重要成員之一，主要由Th1細(xì)胞產(chǎn)生。IL-18在caspase-1的催化下成為有活性的細(xì)胞因子，可被單核吞噬細(xì)胞連續(xù)表達(dá)。IL-18與IL-12共同維持Th1的免疫活性，可促進(jìn)T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生IFN-和TNF-α以及在淋巴細(xì)胞中誘發(fā)Fas配基的表達(dá)，本研究顯示IL-18與IL-12、TNF-α呈明顯正相關(guān)，與上述理論吻合，提示以上病理機(jī)制可能參與了HLH病理生理過程。

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