于豐彥 遲宏罡，2 鄒 穎，2 呂汝西，2 鄭學(xué)寶

（1.廣東醫(yī)學(xué)院中醫(yī)研究室 廣東 湛江 524023；2.南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院 廣東 廣州 510515）

腸易激綜合征是臨床常見(jiàn)的胃腸功能性疾病，是一組包括腹痛、腹脹伴排便習(xí)慣改變、糞便性狀異常等臨床表現(xiàn)的癥候群，持續(xù)存在或間歇發(fā)作，但無(wú)器質(zhì)性疾病的證據(jù)。IBS已成為全球性的胃腸功能性疾病。其發(fā)病機(jī)制目前仍未明了，本文旨在探討肝郁脾虛型IBS患者的結(jié)腸肥大細(xì)胞密度及肥大細(xì)胞脫顆粒密度變化和P物質(zhì)和血管活性腸肽及觀察中藥康泰方對(duì)其影響，初步探討疏肝健脾安神和胃法治療IBS的可能機(jī)制。現(xiàn)將有關(guān)研究結(jié)果報(bào)告如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 研究對(duì)象和治療分組

1.1.1 診斷標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)：病例選擇符合IBS診斷標(biāo)準(zhǔn)（羅馬III標(biāo)準(zhǔn)）和中醫(yī)肝郁脾虛辨證標(biāo)準(zhǔn)及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（衛(wèi)生部1993年頒布的《中藥新藥臨床指導(dǎo)原則》及國(guó)家中醫(yī)藥管理局1994 年頒布《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》）［1］的受試對(duì)象。排除以下情況：①年齡在18歲以下或65歲以上；②妊娠或哺乳期婦女；③腸道器質(zhì)性疾病；④?chē)?yán)重的心腦血管系統(tǒng)、肝、腎、造血系統(tǒng)疾病以及腫瘤等患者；⑤有消化道手術(shù)記錄報(bào)告；⑥嚴(yán)重原發(fā)性疾病及精神病患者；⑦應(yīng)用可能影響胃腸道功能及內(nèi)臟敏感性的藥物的患者；⑧有過(guò)敏史及受試期間有藥物及食物過(guò)敏者；⑨未按規(guī)定用藥，無(wú)法判斷療效或資料不全等影響療效或安全性判斷者。

1.1.2 分組方法：2009年1月至2011年12月期間廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院門(mén)診及住院患者按符合上述標(biāo)準(zhǔn)的合格受試者，共收集合格病例70例，按照隨機(jī)、對(duì)照的原則，從入選合格受試者的聯(lián)系電話末位數(shù)，偶數(shù)為康泰方治療組（37例），奇數(shù)為對(duì)照組（33例）；同時(shí)設(shè)立健康對(duì)照組（15例）。治療組中有5位患者失訪，對(duì)照組中有2位患者失訪，最終完成療程的合格病例共63例，治療組32例，對(duì)照組31例。治療組完成療程后再次結(jié)腸鏡取標(biāo)本的病例共17例，對(duì)照組完成療程后再次結(jié)腸鏡取標(biāo)本的病例16例，健康對(duì)照組收集到結(jié)腸粘膜標(biāo)本的共15例。臨床資料兩組患者按性別、年齡、病程等情況進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩組具有可比性。

1.1.3 治療：治療組：康泰方（主要由白術(shù)、白芍、元胡、夜交藤等中藥組成，廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑），200mL，2次／d。對(duì)照組：得舒特（匹維溴銨片，法國(guó)蘇威藥廠出品），50mg，3 次／d；兩組療程均為8周。

1.2 標(biāo)本來(lái)源：受檢者取回盲部結(jié)腸黏膜各3塊，行SP、VIP免疫組化染色以及MC特殊化學(xué)染色。

1.3 主要試劑：SP、VIP兔抗人單克隆抗體和SABC 試劑盒由上海長(zhǎng)嘉生物科技有限公司提供。MC染色試劑由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品提供。

1.4 方法：受檢者活檢黏膜以4% 甲醛溶液固定。常規(guī)石蠟包埋。按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作步驟行免疫組化染色，MC 染色采用改良甲苯胺藍(lán)染色法。

1.5 染色結(jié)果分析：細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)棕色顆粒為SP和VIP表達(dá)陽(yáng)性隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)腺體的SP或VIP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)?？倲?shù)＜1個(gè)為陰性（一），記1分；2～25個(gè)為（＋），記2 分；26－49 個(gè)為（＋＋），記3 分；＞50 個(gè)為（＋＋＋），記4分。Olympus－CH 光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)高倍視野（×400）內(nèi)的MC數(shù)取均值。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前后主要癥狀比較，見(jiàn)表1。

2.2 各組治療前后回盲部肥大細(xì)胞密度及肥大細(xì)胞脫顆粒密度，見(jiàn)表2、3。

表1 兩組治療前后主要癥狀比較（Mean±SD）

表2 各組回盲部肥大細(xì)胞密度及肥大細(xì)胞脫顆粒密度

表3 各組治療前后回盲部肥大細(xì)胞密度及肥大細(xì)胞脫顆粒密度

2.3 SP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)／VIP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)免疫組化檢測(cè)結(jié)果，見(jiàn)表4：治療組治療前、對(duì)照組治療前與健康對(duì)照組SP 免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)／VIP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)之間比較，P＜0.05；治療組治療前、后SP免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)／VIP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)之間比較，P＜0.05；治療組治療前與對(duì)照組治療前的SP免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)／VIP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)之間比較，P＞0.05。

表4 各組回盲部SP免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)／VIP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)

2.4 肝郁脾虛型D－IBS主要臨床癥狀與回盲部肥大細(xì)胞密度、SP、VIP的相關(guān)性研究，見(jiàn)表5。

2.5 肝郁脾虛型D－IBS結(jié)腸粘膜回盲部肥大細(xì)胞密度、SP、VIP之間的相關(guān)性研究，表6。

3 討論

腸易激綜合征（IBS）是一種常見(jiàn)的以腸功能紊亂為主的胃腸功能性疾病，其癥狀主要包括腹痛、腹脹及排便習(xí)慣改變等。IBS的病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。

肥大細(xì)胞（MC）在胃腸道有廣泛的分布，近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)MC 在IBS的發(fā)病中起重要作用。SLlllivall等［2］發(fā)現(xiàn)IBS患者盲腸的MC 數(shù)目明顯高于對(duì)照組。MC是人體具有重要免疫活性的細(xì)胞，可以分泌多種抗炎遞質(zhì)和神經(jīng)遞質(zhì)如5－HT、組胺等。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)：67% 腸肥大細(xì)胞接觸上皮下神經(jīng)，而還有20%在2um 之間，這為肥大細(xì)胞與神經(jīng)系統(tǒng)交流信息提供結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。肥大細(xì)胞表面有P物質(zhì)等肽類(lèi)受體［3］，微量P物質(zhì)能改變肥大細(xì)胞的興奮性；同時(shí)動(dòng)物試驗(yàn)已表明：肥大細(xì)胞介導(dǎo)腸神經(jīng)元興奮性增加［4］，提示肥大細(xì)胞和神經(jīng)之間的信息交流是雙向的。我們的研究也發(fā)現(xiàn)肝郁脾虛型腹瀉型IBS結(jié)腸粘膜肥大細(xì)胞表達(dá)脫顆粒與SP、VIP表達(dá)呈正相關(guān)。

表5

表6

P物質(zhì)（SP）是由l1個(gè)氨基酸組成的多肽，其分泌細(xì)胞分布于全部胃腸道，其生理作用為促進(jìn)胃腸平滑肌和括約肌收縮、胃腸蠕動(dòng)，參與內(nèi)臟痛覺(jué)反射及擴(kuò)張內(nèi)臟血管等。國(guó)外Wheatley等［5］發(fā)現(xiàn)，80%的便秘患者結(jié)腸平滑肌中缺乏SP；Dong［6］等研究發(fā)現(xiàn)IBS患者結(jié)腸末端中SP能神經(jīng)纖維和肥大細(xì)胞明顯多于對(duì)照組，認(rèn)為腸粘膜中SP能神經(jīng)纖維和肥大細(xì)胞的改變是IBS患者內(nèi)臟高敏感性的重要因素。我們的研究發(fā)現(xiàn)肝郁脾虛型腹瀉型IBS治療前結(jié)腸粘膜SP表達(dá)明顯高于健康對(duì)照組，康泰方治療后SP表達(dá)下降與治療前呈顯著性差異，對(duì)照藥物治療后也明顯下降，說(shuō)明了結(jié)腸粘膜SP表達(dá)確實(shí)與腹瀉型IBS致病有關(guān)，與以往的研究結(jié)果相似。

血管活性腸肽（VIP）是一種含28個(gè)氨基酸殘基的堿基多肽，國(guó)外相關(guān)研究［7］認(rèn)為VIP與IBS患者的腹痛、腹瀉等癥狀關(guān)系密切。國(guó)內(nèi)陳芝蕓等研究也發(fā)現(xiàn)腹瀉型IBS患者VIP含量高于正常對(duì)照組，便秘型則與對(duì)照組無(wú)明顯差異。本研究發(fā)現(xiàn)肝郁脾虛型腹瀉型IBS結(jié)腸粘膜肥大細(xì)胞密度、肥大細(xì)胞脫顆粒密度及SP、VIP 的表達(dá)較正常健康對(duì)照組明顯增高，通過(guò)多因素相關(guān)因素分析發(fā)現(xiàn)結(jié)腸粘膜肥大細(xì)胞密度、肥大細(xì)胞脫顆粒密度及SP、VIP的表達(dá)之間存在明顯的相關(guān)關(guān)系，同時(shí)主要癥狀與結(jié)腸粘膜肥大細(xì)胞密度、肥大細(xì)胞脫顆粒密度及SP、VIP 的表達(dá)成明顯正相關(guān)，并隨著中藥康泰方的應(yīng)用肝郁脾虛型腹瀉型IBS的主要癥狀的改善也同時(shí)伴有結(jié)腸粘膜肥大細(xì)胞密度、肥大細(xì)胞脫顆粒密度及SP、VIP的表達(dá)的明顯下降，并也成正相關(guān)關(guān)系。說(shuō)明了結(jié)腸粘膜的肥大細(xì)胞密度、肥大細(xì)胞脫顆粒密度及SP、VIP的表達(dá)是其臨床表現(xiàn)的致病機(jī)理，康泰方可能是通過(guò)上述機(jī)理改善臨床癥狀。

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